BỘ KHOA HỌC VÀ CÔNG NGHỆ BÁO CÁO NHIỆM VỤ HỢP TÁC QUỐC TẾ THEO NGHỊ ĐỊNH THƯ VIỆT NAM - LB NGA (2007 - 2010) Tên Nhiệm vụ: “Nghiên cứu cơng nghệ vi sinh chuyển hóa phytosterol đến androstendion (AD) 9alpha-hydroxy AD sử dụng cơng nghiệp hóa- dược” Cơ quan chủ trì: Viện Hóa học Viện Khoa học Công nghệ Việt nam Chủ nhiệm: PGS.TS Lưu Đức Huy 8176 HÀ NỘI – 6/ 2010 THÔNG TIN TÓM TẮT VỀ NHIỆM VỤ 1.Tên nhiệm vụ: “Nghiên cứu cơng nghệ vi sinh chuyển hóa phytosterol đến androstendion (AD) 9alpha-hydroxy AD sử dụng cơng nghiệp hóa- dược” 2.Mã số: 3.Thời gian thực hiện: 6/2007- 6/2010 4.Cơ quan thực hiện: Phía Việt nam: Viện Hóa học, Viện Khoa học Cơng nghệ Việt nam Địa chỉ: 18- Hồng Quốc Việt- Cầu Giấy- Hà Nội Điện thoại: 84-4-37564312, 84-4-37564333/ 1058 Fax: 84-4-38361283 Email: ldhuy@netnam.vn Website: www.vienhoahoc.ac.vn Phía LB Nga: Trung tâm kỹ thuật sinh học, Viện HL KH LB Nga Địa chỉ: Prosp 60 let Oktyabrya kor.1, Moscow, 117312 Russian Federation Điện thoại: +007-095 135 7319 Fax: +007-095 1350571 Email: andryushina@biengi.ac.ru 5.Chủ nhiệm đề tài: Phía Việt nam: PGS TS Lưu Đức Huy Viện Hóa học- Viện Khoa học Cơng nghệ Việt nam Phía LB Nga: TS Andryushina V.A Trưởng phịng thí nghiệm cơng nghệ vi sinh steroid- TT kỹ thuật sinh học – Viện HL KH LB Nga 6.Mục tiêu nhiệm vụ: - Có cơng nghệ tiên tiến vài cường quốc KHCN có, cần thiết cho công nghiệp sản xuất thuốc steroid từ nguyên liệu phytosterol mà Việt Nam khơng thể tự nghiên cứu, 02 cơng nghệ vi sinh chuyển hoá phytosterol đến androstenedione (AD) từ AD đến 9alpha- OH AD - Làm cho sterol dồi mạnh Việt nam trở thành nguyên liệu số tổng hợp loại thuốc steroid thay diosgenin solasodin khơng có sức cạnh tranh phải trồng đất nông nghiệp nhiều năm mục tiêu chung -Đào tạo chuyên gia khoa học công nghệ hoá- dược steroid CNSH vi sinh steroid dược phẩm Danh sách cán khoa học tham gia chủ chốt : Phía Việt nam: Họ tên Học hàm, học vị Chuyên môn Cơ quan Lưu Đức Huy PGS TS NCVC Viện Hóa học Nguyễn Thị Diệp Ths.NCV Viện Hóa học Mai H.Th Tùng HVCH Viện Hóa học Lưu Thị Kim Nhung NCV Viện Hóa học Trương Nam Hải PGS TS NCVC Viện Công nghệ sinh học Nguyễn Thị Quý Ths.NCV Viện Cơng nghệ sinh học Phạm Thị Bích Hợp TS.NCVC Viện Cơng nghệ sinh học Phía LB Nga: Andryushina V.A TS.NCVCC TT Kỹ thật sinh học, VHL KH LB Nga Savinova T.S TS.GVC TT Kỹ thật sinh học, VHL KH LB Nga Rodina N.V NCS TT Kỹ thật sinh học, VHL KH LB Nga Voyshvillo N.E TS.NCVCC TT Kỹ thật sinh học, VHL KH LB Nga LỜI CẢM ƠN Thay mặt tập thể cán khoa học thực đề tài, xin cảm ơn chân thành Bộ Khoa học Công nghệ, Viện Khoa học Cơng nghệ Việt nam, Viện Hóa học, tất quan chức ban ngành tạo điều kiện thuận lợi cần thiết để đề tài triển khai đạt kết tốt hoàn thành hạn Xin chân thành cảm ơn Trung tâm Kỹ thuật sinh học, Viện Hàn lâm Khoa học LB Nga , đặc biệt cán khoa học TS Andryushina A.V., TS Voyshvillo N.E, TS Savinova T.S TS Rodina N.E phối hợp chặt chẽ trực tiếp với phía Việt nam để hồn thành tốt nhiệm vụ đặt Xin chân thành cảm ơn Viện CNSH, Viện KHCNVN đứng đầu PGS.TS Trương Nam Hải phối hợp chặt chẽ để hoàn thành tốt Nhiệm vụ hạn Đề tài nhận tài trợ toàn Bộ Khoa học Công nghệ Việt Nam theo dự án với LB Nga 2007-2010, Mã số………………… Ban chủ nhiệm đề tài xin ghi nhận chân thành cảm ơn! Chủ nhiệm PGS.TS Lưu Đức Huy MỤC LỤC PHẦN A: BÁO CÁO TỔNG KẾT KHOA HỌC VÀ KỸ THUẬT ĐỀ TÀI DANH MỤC CÁC KÝ HIỆU VIẾT TẮT DANH MỤC CÁC BẢNG BIỂU DANH MỤC CÁC HÌNH VẼ ĐỒ THỊ DANH MỤC CÁC SƠ ĐỒ LỜI MỞ ĐẦU…………………………………………………………………………….1 CHƯƠNG TỔNG QUAN TÀI LIỆU……………………………………………… 1.1.Vài nét sản xuất, nhu cầu tiêu thụ dược phẩm gốc steroid, giới 1.2 Giới thiệu sterol 1.3.Chuyển hóa vi sinh sterol đến 17-cetosteroid ….:……………………………… 1.3.1.Tình hình nghiên cứu ngồi nước:……………………………………………… ….6 1.3.2 Tình hình nghiên cứu nước………………………………………………… 1.4.Thu hồi, tinh chế phytosterol từ phế phụ thải cơng nghiệp:………………………… 1.4.1 Tình hình nghiên cứu ngồi nước:………………………………………………….9 1.4.2 Tình hình nghiên cứu nước liên quan đến Nhiệm vụ:……………………… 1.4.2.1.Tình hình nghiên cứu, sản xuất tiêu thụ dược phẩm steroid nước …………………………………………………………………………………………… .9 1.4.2.2.Nghiên cứu chủ nhiệm & Cs liên quan đến Nhiệm vụ:………………… 11 CHƯƠNG PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU…………………………… 13 Phương pháp nghiên cứu sterol ………………………………………… 13 2.1.1.Chiết suất sterol : 13 2.1.2.Các phương pháp phân tích sterol ………… …………………………………14 2.2.Phương pháp vi sinh phân cắt chọn lọc mạch nhánh hỗn hợp sterol đến 17cetosteroid :……………………………………………………………………………18 CHƯƠNG 3: KẾT QUẢ ĐẠT ĐƯỢC …………………………………………… 20 3.1.Tiếp nhận hồn thiện 02 cơng nghệ vi sinh sản xuất Androstendion (CN1) 9α - hydroxy Androstendion (CN2) quy mơ phịng thí nghiệm từ Trung tâm Kỹ thuật sinh học- Viện HL KH LB Nga…………………………………………………………….20 3.2.Triển khai kiểm tra CN1 CN2 fermentor 5,0 lít………………………… 28 3.3 Triển khai CN2 chuyển hoá vi sinh AD đến 9α - OH AD fermentor pilot 80 L Mỹ sản xuất:…………………………………………………………………… 39 3.4 Triển khai lặp lại CN2 chuyển hoá vi sinh AD đến 9α - OH AD lên quy mô pilot 80 L………………………………………………………………………………………44 5.Nghiên cứu lắp đặt triển khai công nghệ quy mô 50 L chiết xuất tinh chế phytosterol từ phụ thải công nghiệp tinh luyện dầu đậu tương………………………48 3.6 Phân tích giám định phổ: .63 sản phẩm phương pháp CHƯƠNG 4: KẾT QUẢ KHÁC……………………………………………………….67 KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ………………………………………………………….69 TÀI LIỆU THAM KHẢO………………………………………………………….… 72 PHẦN B:PHỤ LỤC ( Đóng thành riêng): Khơng đánh số trang, bố trí theo thứ tự • Đề cương Hợp đồng • Cơng nghệ vi sinh sản xuất Androstendion ( AD) từ hỗn hợp phytosterol • Cơng nghệ vi sinh sản xuất 9alpha- hydroxy Androstendion (9α-OH AD) từ AD • Các tài liệu kết phân tích sản phẩm phytosterol, AD 9α- OH AD • Sao lục phổ • Các báo cáo khoa học đơn vị phối hợp- Viện CNSH • Các cơng bố khoa học liên quan • Minh chứng kết đào tạo • Báo cáo thống kê kết thực đề tài • Báo cáo tóm tắt ( 02 tr.) kết thực đề tài ( tiếng Việt tiếng Anh) • Báo cáo tốn tài đề tài • Biên kiểm tra định kỳ Bộ KH & CN • Cơng văn Bộ KH & CN cho phép điều chỉnh nội dung kinh phí đề tài CÁC TÀI LIỆU KÈM THEO: -Quyết định thành lập hội đồng nghiệm thu cấp sở -Biên họp hội đồng cấp sở -Phiếu nhận xét- GS TSKH Trần Văn Sung -Phiếu nhận xét- PGS TS Lê Mai Hương -Phiếu nhận xét- PGS TS Nguyễn Văn Tuyến -Phiếu nhận xét- PGS TS Nguyễn Hải Nam -Phiếu nhận xét- PGS TS Phan Minh Giang -Phiếu nhận xét- TS Trần Văn Thanh -Phiếu nhận xét- TS Đỗ Quốc Việt -Giấy xác nhận hoàn thiện, chỉnh sửa Hồ sơ Hội đồng nghiệm thu cấp sở -Quyết định thành lập hội đồng nghiệm thu cấp nhà nước -Biên họp hội đồng cấp nhà nước -Giấy xác nhận hoàn thiện, chỉnh sửa Hồ sơ Hội đồng nghiệm thu cấp nhà nước -Giấy chứng nhận Cục trưởng cục thông tin khoa học công nghệ quốc gia…… Các tài liêu sau Bộ KH & CN lưu giữ, không yêu cầu đưa vào Hồ sơ: - Phiếu nhận xét – GS TSKH Nguyễn Thu Vân – Chủ tịch Hội đồng - Phiếu nhận xét – GS TS Phạm Thanh Kỳ- Phó chủ tịch Hội đồng -Phiếu nhận xét – GS TSKH Phan Tống Sơn- Phản biện -Phiếu nhận xét- PGS TS Nguyễn Thị Hoài Trâm- Phản biện -Phiếu nhận xét- PGS TS Lê Mai Hương -Phiếu nhận xét- PGS TS Vũ Đào Thắng -Phiếu nhận xét- TS Dương Văn Hợp -Phiếu nhận xét- DS CK2 Nguyễn Huy Văn -Phiếu nhận xét- TS Trần Khắc Vũ DANH MỤC CÁC KÝ HIỆU, CÁC CHỮ VIẾT TẮT AD: Androstenedione: Androstendion ADD: Androstadienedione : Androstadiendion 9α- OH AD: 9-alpha hydroxy androstendion Viện HL KH LB Nga: Viện Hàn lâm Khoa học Liên bang Nga Bộ KH & CN: Bộ Khoa học Công nghệ TLTK: Tài liệu tham khảo Viện KHCNVN: Viện Khoa học Công nghệ Việt nam TGĐ: Tổng giám đốc Cty: Công ty HPLC: High performance liquid chromatography: Phương pháp sắc ký lỏng cao áp TLC: Thin layer chromatography : Phương pháp sắc ký lớp mỏng Đnc : Điểm chảy NMR: Phổ cộng hưởng từ hạt nhân MS: Mass spectrometry : Phổ khối lượng IR: Infrared spectroscopy :Phổ hồng ngoại UV: Phổ tử ngoại CN: Công nghệ Ph- VN: Mẫu phytosterol Việt nam, sản phẩm Phịng thí nghiệm Hố học Steroid Alkaloid- Viện Hoá học - Viện KHCNVN Ph-No1: Mẫu phytosterol nước Ph-No2: Mẫu phytosterol nước L : Lít DANH MỤC CÁC BẢNG BIỂU Bảng 1- Mơi trường nhân giống chuyển hoá chủng Mycobacterium neoaurum ……………………………………………………………………………………………………21 Bảng 2- Mơi trường nhân giống chuyển hố chủng vi sinh Rhodococcus…erythropolis………………………………………………………………………………………22 Bảng 3- Kết định lượng sản phẩm AD sau lên men quy mô L .31 Bảng 4- Kết định lượng sản phẩm 9α-OH AD sau lên men quy mô L 36 Bảng 5- Kết định lượng sản phẩm 9α- OH AD sau lên men quy mô 80 L 41 Bảng 6- Kết định lượng sản phẩm 9α-OH AD quy mô 80 L 46 Bảng 7- Mô tả chi tiết, phận xuất xứ c reactor…………………………49 Bảng 8- Ảnh hưởng nhiệt độ thủy phân lên hiệu suất thu hồi phytosterol…….……51 Bảng 9- Ảnh hưởng thời gian thủy phân lên hiệu suất thu hồi phytosterol………52 Bảng 10- Ảnh hưởng độ kiềm lên hiệu suất thu hồi phytosterol……………………53 Bảng 11- Ảnh hưởng nhiệt độ, dung môi kết tinh lên hiệu suất kết tinh thu hồi phytosterol quy mơ phịng thí nghiệm………………………………………………………54 Bảng 12- Ảnh hưởng nhiệt độ thủy phân quy mô pilot lên hiệu suất thu hồi phytosterol…………………………………………………………………………………… 55 Bảng 13- Ảnh hưởng thời gian thủy phân lên hiệu suất thu hồi phytosterol quy mơ 50 lít……………………………………………………………………………………………56 Bảng 14- Ảnh hưởng độ kiềm lên hiệu suất thu hồi phytosterol quy mô 50 L……….57 Bảng 15- Ảnh hưởng yếu tố nhiệt độ, dung môi kết tinh lên hiệu suất tinh chế kết tinh hỗn hợp phytosterol quy m ô 50 L…………………………………………………….…59 DANH MỤC CÁC HÌNH VẼ ĐỒ THỊ Hình 1- Cấu trúc số sterol điển hình……………………………………………………5 Hình 2- Sắc đồ HPLC hỗn hợp phytosterol điển hình 15 Hình 3- Phổ HPLC sản phẩm AD độ tinh ~ 100% .27 Hình 4- Phổ HPLC sản phẩm 9α - OH AD độ tinh ~ 100% .27 Hình 5- Kết định tính sản phẩm AD nồi L bình tam giác 500 ml……… 30 Hình 6- Sắc ký đồ HPLC chất chuẩn AD .32 Hình 7- Sắc ký đồ HPLC sản phẩm AD thô mẻ lít……………………………… 33 Hình 8- Sắc ký đồ HPLC sản phẩm AD tinh chế mẻ lít………………………… 33 Hình 9- Định tính sản phẩm 9α -OH AD fermentor L bình tam giác 500 ml 35 Hình 10- Sắc ký đồ HPLC chất chuẩn 9α -OH AD .37 Hình 11- Sắc ký đồ HPLC sản phẩm thô 9α -OH AD 38 Hình 12- Sắc ký đồ sản phẩm tinh chế 9α -OH AD .38 Hình 13- Kết định tính sản phẩm 9α -OH AD nồi 80 L 41 Hình 14- Sắc ký đồ chất chuẩn 9α -OH AD 42 Hình 15- Sắc ký đồ sản phẩm thơ 9α -OH AD quy mơ 80 lít- lần 43 Hình 16- Sắc ký đồ HPLC sản phẩm 9α -OH AD quy mô 80 lít-1 43 Hình 17- Kết định tính dịch lên men nồi 80 L-2 sắc ký mỏng 45 Hình 18A- HPLC 9α -OH AD ( 128 g) sau tinh chế 99,24% 47 Hình 18B- HPLC 9α -OH AD ( 20g) sau tinh chế 96,12% 47 Hình 19- Sơ đồ thiết kế & hình ảnh nồi phản ứng 50 lít……………………………… 50 Hình 20- Phổ IR hỗn hợp phytosterol 64 Hình 21- Phổ HPLC hỗn hợp phytosterol…………………………………….65 Hình 22- Phổ MS thành phần β - Sitosterol 65 Hình23- Phổ MS thành phần Stigmasterol .66 Hình 24- Phổ MS thành phần Campesterol .66 31.Pan S.C., Semar J.,Junta B., and Principe P.A.,Biotechnol Bioeng., (1969), vol 11, No 6, pp 1183-1194 32.Voishvillo N.E., Turuta A.M.,and Kamernitsky A.V., Russ Chem Bull., (1994), vol 43, No 4, pp 515-537 33.Turuta A.M.,Kamernitsky A.V.,Bogdanov V.S., Komarova G.V., and Koshcheenko K.A., Khim.-Farm Zh, (1990), issue 6, pp 52-55 34.Bell A.M.,Boul A.D., Jones E.R.H., and Meakins G.D., J Chem Soc Perkin Trans., (1975), issue 14, pp 1364-1366 35.Sato Y.,and Hayakawa S., J Org Chem (1963), vol 28, No 10, pp 27392742 36.Sato Y., Waters Y.A., and Kaneko H., J Org Chem (1964), vol 29, No 12, pp 3732-3733 37.Atrat P.G., Koch B., Szecalla B., and Hoerhold-Schubert C., J Basic Microbiol., (1992), vol 32, No 3, pp 147-157 38 JP Patent No 80138395 (1980) 39.Ambrus G., Maderspach A., Jekkel A., A Javor A., and Ilkoy E., US Patent No 5112815 (1992) 40.Bokany J., Albrecht K., Ambrus G.,Lang T., and Szabo I.M., US Patent No 5004695 (1991) 41.Seidel L., and Hoerhold C., J Basic Microbiol., (1992), vol 32, No1, pp 4955 42.Marsheck, W.J., Jiu J., and Wang T., US Patent No 4397947 (1983) 43.Gorlich B., FRG Patent (1979), Byull Isobret., No 2226 997 44.Sih C.J., Biochim Biophys Acta, (1962), vol 62, No 3, pp 541-547 45 Smith L.L., in Terpenoids and Steroids, Overton K.H Ed., New York: Academic, (1974), pp 394-530 46.Imada Y., and Mizumo S., US Patent No 4255344 (1981) 47.Geize van der, R.Khessels G., and Deikkheizen L., RF Patent No 2268935 (2006) 48.Mahato S B., Banerjee S et al., “Steroid transformation by microorganismIII” Phytochemistry, 28, pp 7-40, (1989) 49.Nippon-Oil and Fats Patent., No J01229097 “Decomposition of cholesterol in fat and oil” (1989) 50.Hesselink P G M et al., “Optimization of steroid side-chain cleavage by Mycobacterium sp In the presence of cyclodextrins” Enzyme Microb Technol, 11, pp 398-404, (1989) 51.Sedlaczek L., “Biotransformation of steroids” Crit Rev Biotechnol, 7, pp 187-236, (1988) 52.Nes W D et al., “Enzymology of phytosterol transformation” In: Parish EJ, Nes W D, editors “Biochemistry and function of steroids” Boca Raton, FL: CRC Press, pp 111-22, (1987) 53.Samantha T B., Ghosh D K., “Characterisation of progesterone 11alphahydroxylase of Aspergillus achraceus TS: a cytochrome linked monoxygenase” J Steroid Biochem., 28, pp 327-32, (1987) 54.Mahato S B., Banerjee S , “Steroid transformation by microorganism-II” Phytochemistry, 24, pp 1403-21, (1985) 55.Kieslich K., “Microbial side-chain degradation of sterols J Basic Microbio.l, 25, pp 461-74, (1985) 56.Alfred Struve et al., Patent No 4,451,564 “Transformation of sterols by fermentation” (29/05/1984) 57.Goswami P C et al., “ Factors limiting the microbial conversion of sterols to 17-KS in the presence of metal chelate inhibitors” Folia Microbiol, 29, pp 209-16, (1984) 58.Mahato S B., Mukherjee A., “Steroid transformation by microorganism” Phytochemistry, 23, pp 21317-54, (1984) 59.Beaton J M., US Patent No 4,124,607 “Preparation of sterol substrates for bioconversion” (1978) 60.Berg A et al., “Characterisation of a cytochrome P450-dependent steroid hydroxylase system present in Bacillus megaterium” J Biol Chem., 251, pp .2831-8, (1976) 61.Marshek W J et al., “Microbial degradation of sterols” Appl Microbiol, 23, pp 72-7, (1972) 62.Arthur Nobile Patent No 3,134,718 “Pregna-1,4-dienes and compositions containing same”, (26/05/1964) 63.Arthur Nobile Patent No 2,837,464 “Process for production of dienes by corynebacteria”, 03/06/1958) 64 Andryushina V.A et al Strain of Mycobacterium smegmatis bacterium, used for oxidation of sterols of a vegetative and animal origin up to AD Ru Patent No 2126837 (27.02.99) 65 Andryushina V.A et al Strain of Mycobacterium neoaurum bacterium and the way of its use for AD obtaining from sterols of a vegetative and animal origin Ru Patent No 2231553 (27.06.2004) 66 Ru Patent No 2205224 "The way of AD obtaining from sterols of a vegetative and animal origin or their derivative " ( 27.05.2003) 67 Andryushina V.A et al Identification of a new steroid transforming strain of mycobacteria as Mycobacterium neoaurum J Appl biochemistry and microbiology , (2003), vol 39, No 2, pp 173-179 68 Andryushina V.A et al " Transformation AD and ADD by sterol transforming bacteria", J Applied biochemistry and microbiology.(2004), vol 40, No 5, pp 536- 543 69 Andryushina V.A et al "Intensification of the process for phytosterol side chain cleavage with mycobacterium mutant strain», Report on the International Forum " Biotechnology and the Present ", Abstracts of reports, pp 32-33, 2004 70.Andryushina V.A et al "Cleavage of phytosterol side chain using Mycobacterium neoaurum at the presence of synthetic Polymers" The Theses of the report on All Russia scientific and technical Conferences - exhibition " Highly effective food technologies, Methods and means for their realization", pp 153-157, 2004 71 Rodina N.V., Molchanova М.А., Voishvillo N.Е., Аndryushina V.А., Stytsenko Т.S., Savinova Т.S The use of the Mycobacterium neoaurum cell culture for production of androstenedione and androstadienedione from sterols Third Moscow International Congress “Biotecnology: State of the Art and Prospects of Development ", (2005), March, 14-18 Congress Procedings, part 1, pp 84-85 2005 72.Rodina N.V Formation of AD from phytosterol mixture by strain Mycobacterium neoaurum in the medium with the high contents of glucose Materials of the International school - Conference of the young scientists " System biology and bioengineering ", p 205 Moscow, ( 2005) 73 Rodina N.V., Molchanova М.А., Voishvillo N.Е., Аndryushina V.А., Stytsenko Т.S., Savinova Т.S.The use of Mycobacterium neoaurum cell culture for production of androstenedione and androstadienedione from sterols Magazine Nova Science Publishers, Inc., New York, (2006) The collection of clauses " Biothechnology, agriculture and the food industry " Editor G.E Zaiikov, Pub date: 2006, ISBN: 1-60021-040, рр 145-155 74 Rodina N.V., Stitsenko Molchanova M.A., Voishvillo N.E., Andryushina V.A., T.S.Conversion of phytosterols into androstenedione by Mycobacterium neoaurum Applied Biochemistry and Microbiology vol 44, No 1, pp 48-54, (2008) 75.Andryushina V.A., Luu Duc Huy, Rodina N.V., Truong Nam Hai, Nguyen Thi Quy, Nguyen T Diep, Voishvillo N.E Synthesis hydroxyandrostenedione with a new strain of of 9α- actinobacteria Rhodococcus erythropolis Inter Scient Conf on ”Chemistry for Development and Intergration”, Hanoi, (2008), pp 191-194 76 Rodina N.V., Andryushina V.A., Stitsenko T.S., Turova T.P., Baslerov R.V., Panteleeva A.N., Voishvillo N.E The introduction hydroxygroup into androst-4-en-3,17-dione using of the 9α- a new actinobacterium strain J Appl Biochemistry and Microbiology vol 45, No 4, pp 395-400, ( 2009) 77 Voishvillo N.E., Rodina N.V., Andryushina V.A., Skryabin K.G The strain of Rhodococcus erythropolis Stitsenko T.S., for obtaining of 9α- hydroxysteroids Ru Patent No 2351645 78 Andryushina V.A., Rodina N.V., Stitsenko T.S., Luu Duc H., Andryushina A.V., Voishvillo N.E.Conversion of soybean sterols into 3,17diketosteroids using actinobacteria Mycobacterium neoaurum, Pimelobacter simplex and Rhodococcus erythropolis Appl Biochemistry and Microbiology (In press) ………… 79.EpPatent 1081156 A2 ; 80.US Patent 2499430 ; 81.US Patent 2528025; 82.US Patent.2536753; 83 US Patent.2568202; 84 US Patent.2573265; 85 US Patent.2573891; 86 US Patent.2585954; 87 US Patent 2697503; 88 US Patent 2715639; 89 US Patent 2729656; 90.US Patent 2866797 91.US Patent 3108120; 92.US Patent 3691211; 93.US Patent 4044031; 94.US Patent 4076700; 95.Chilean Patent.8598; 96.US Patent 4153622 …………………… 97.Fadeeva T.M., Turuta A.M., Kamernitsky A.V., Luu Duc Huy, Korobov A.A Phương pháp xây dựng mạch bên cocticoit tổng hợp 17α-thế-20xetosteroit Hội nghị tồn Liên Xơ lần thứ Tổng hợp hữu tinh vi, Matxcơva, Tr.110-111, (1988) 98 Turuta A.M., Fadeeva T.M.,Kamernitsky A.V., Luu Duc Huy Các đường chuyển hoá 17α-etynyl-17β-oxyanđrosten đến ∆16-21-oxy-20-xeto pregnen J Izv Akad Nauk SSSR Ser Khim., No 12, Tr.2810-2815, (1989) CA.1990.vol.113 A3.59669e ( Translated into Engl.) 99 Turuta A.M., Fadeeva T.M., Kamernitsky A.V., Luu Duc Huy Phương pháp xây dựng mạch bên cocticoit tổng hợp 17α-thế-20-xetosteroit.Hội nghị Xô-ấn lần thứ 100 Turuta A.M., Hoá học các HCTN, Riga, LB Nga, (1989) Fadeeva T.M.,Kamernitsky A.V.,Korobov A.A.,TrerepanovaE.G., Luu Duc Huy Chuyển hoá đặc thù lập thể 17β-oxy17α-etynylsteroit đến 17α-thế-17β-etynylsteroit J Izv Akad Nauk SSSR Ser Khim., No 3, Tr.675-681, (1990) CA.1991.Vol.114 A3.6927b 101 Turuta A.M., Fadeeva T.M., Kamernitsky A.V., Luu Duc Huy Các đường sử dụng 17α-pregn-4,9-đien-3-on-17β-ol-20-yn tổng hợp pregnan có hai nhóm vị trí &11 J Izv Akad Nauk SSSR Ser Khim., No 3, Tr.724-729, (1991) CA.1991.vol.115 A3.114860d 102 Turuta A.M.,Kamernitsky A.V., Luu Duc Huy, Fadeeva T.M ứng dụng phản ứng Nicholas để chuyển hoá đặc thù lập thể vùng 16α,17α-epoxy-17βetynylanđrostan đến steroit có chứa hai nhóm vị trí 16α,17α-cis J Izv Akad Nauk SSSR Ser Khim., No 5, Tr.1180-1184, (1991) CA.1992.vol 116 A3.129366s 103 Turuta A.M., Kamernitsky A.V., Luu Duc Huy, Bogdanov V.S ảnh hưởng tạo phức cobalt lên phản ứng mở vòng oxit 17β-etynyl-16α,17αepoxy-anđrost-4-en-3-on Py.HF, Py.HCl Py.HSCN J Izv Akad Nauk SSSR Ser Khim., No 11, Tr.2661-2666, (1992) CA.1992.vol.117A3.70117b 104 Turuta A.M., Kamernitsky A.V., Fadeeva T.M., Luu Duc Huy Chuyển hoá anđros-4,9-đien-3,17-đion đến 16α,17α-epoxy cocticosteron Mendeleev Comm (Anh-Nga), No 2, Tr.47-48, (1992) 105 Lưu Đức Huy Tổng hợp 17α-thế-17β-etynylsteroit Hội nghị Hố họctồn quốc lần thứ 2,Hà Nội, Tr.269, (1993) 106 Lưu Đức Huy Phương pháp xây dựng mạch bên cocticoid Hội nghị Hố học tồn quốc lần thứ 2, Hà Nội, Tr.270, (1993) 107 Lưu Đức Huy Nghiên cứu phản ứng mở vòng oxit tự tạo phức DCHC 16α, 17α-epoxy-17β-etynylanđrost-4-en-3-on tác nhân nucleophil Hội nghị Hố học tồn quốc lần thứ 2, Hà Nội, Tr.271, (1993) 108 Lưu Đức Huy Những nghiên cứu đã, triển khai lĩnh vực tổng hợp hữu Hội thảo công nghệ tổng hợp hữu cơ, Viện Hố học cơng nghiệp, Hà nội, Tr.30-31, (1995) 109 Lưu Đức Huy, Ng Tr Sơn Tổng hợp 4ξ,5ξ; 16α,17α-điepoxy-17βetynylanđrost-3-on 4-clo-16α,17α-epoxy-17β- etynylanđrost-4-en-3-on Phản ứng DCHC 4ξ,5ξ; 16α,17α-điepoxy-17β-etynylanđrost-3-on với Py.HF Hội nghị châu lần thứ thuốc sản phẩm tự nhiên (IX – ASOMPS), Hà nội, Tr.116-117, (1998) 110 Lưu Đức Huy Con đường tổng hợp chất S Reichstein từ pregnyne Hội nghị châu lần thứ thuốc sản phẩm tự nhiên (IX – ASOMPS), Hà nội, Tr.194, (1998) 111 Lưu Đức Huy, Ng Tr Sơn Tổng hợp số dẫn xuất từ pregnyne Hội nghị châu lần thứ thuốc sản phẩm tự nhiên (IX – ASOMPS), Hà nội, PA38, (1998) 112 Lưu Đức Huy Cần thu hồi sterol từ phế thải nhà máy giấy chế biến đậu tương Hội nghị mơi trường tồn quốc lần thứ nhất, Hà nội, Tr.109-110, (1998) 113 Lưu Đức Huy, Ng Tr Sơn Tổng hợp 3-xicloetylen xetal, 3-oxim pregnyne dẫn xuất ∆16-,16α,17α-epoxit Hội nghị Hố học tồn quốc lần thứ 3, Hà nội, Tr.115-117, (1998) 114 Lưu Đức Huy, Ng Tr Sơn Ảnh hưởng yếu tố điện tử cấu trúc vòng A lên phản ứng mở vòng epoxit phức DCHC 16α,17α-epoxy-17βetynylsteroit với Py.HF Hội nghị Hố học tồn quốc lần thứ 3,Hà nội, Tr.118121, (1998) 115 Lưu Đức Huy, L T Duyên Tổng hợp số dẫn xuất 4-bromopregn-4-en-3-on từ pregnyne Phản ứng dicobalthexacacbonyl 4-bromo16α,17α-epoxy-pregn-4-en-3-on với Py.HF Tuyển tập kết nghiên cứu khoa học Viện Hoá học, Tr.30-33, (1998) 116 Lưu Đức Huy, Ng T Diệp Epime hoá 17α-etynylcacbinolsteroit.Hội nghị KH & CN Hoá hữu toàn quốc lần thứ nhất, Quy nhơn, Tr.146-148, (1999) 117 Ch Đ Kính, Lưu Đức Huy, H Ph Thư Đặc điểm phổ khối lượng vài dẫn xuất hợp chất pregnyne Hội nghị KH & CN Hoá hữu toàn quốc lần thứ nhất, Quy nhơn, Tr.240-243, (1999) 118 Lưu Đức Huy, Ng Th Diệp Phương pháp chung tổng hợp hợp chất 17α-hyđroxy-17β-etynylsteroit từ dẫn xuất 17β-hyđroxy tương ứng chúng Tuyển tập kết nghiên cứu khoa học Viện Hoá học, Tr.37-42, (1999) 119 Lưu Đức Huy, L T Duyên Tổng hợp số dẫn xuất 4-bromopregn-4-en-3-on 20-yne từ pregnyne Phản ứng dicobalthexacacbonyl 4bromo-16α,17α-epoxy-pregn-4-en-3-on-20yne với Py.HF Tạp chí Hố học, T.38, No 1, Tr.43-47, (2000) 120 Lưu Đức Huy, Ng T Diệp Phương pháp chung tổng hợp hợp chất 17α-hyđroxy-17β-etynylsteroit từ dẫn xuất 17β-hyđroxy tương ứng chúng Tạp chí Hoá học, T.38, No 2, Tr.40-44, (2000) 121 Lưu Đức Huy, A.M Turuta, A.V Kamernitsky Một số quy tắc vật lý thực nghiệm xác định hoá lập thể trung tâm C(17) hợp chất 17-X-thế-17etynylsteroit Tạp chí Phân tích hoá, lý sinh học,T.5, No 2, Tr.37-40, (2000) 122 Lưu Đức Huy & CS Sơ đồ chuyển hoá sterol-một nguyên liệu đến cocticoit.Hội nghị KH, Viện Hố học cơng nghiệp, Hà nội,Tr.105-109, (2000) 123 Ch Đ Kính, Lưu Đức Huy, H Ph Thư, Ng T Ph Chi.Nghiên cứu phá mảnh phổ MS số dẫn xuất pregnyne.Hội nghị Hoá học Pháp, (2000) 124 Lưu Đức Huy, Ng T Hương Nghiên cứu epime hoá 17α-etynylestradiol Tuyển tập kết nghiên cứu khoa học Viện Hoá học, Tr.51-54, (2000) 125 Lưu Đức Huy, Ng T Hương Nghiên cứu epime hố 17α-etynylestradiol Tạp chí Hố học,T.39, No 4, Tr.78-80&89, (2001) 126 Lưu Đức Huy Sơ đồ chung chuyển hoá sterol, nguyên liệu đến cocticoit.Hội nghị KH & CN Hoá hữu toàn quốc lần thứ 2, Hà nội, Tr.249-253, (2001) 127 Lưu Đức Huy Phương pháp chung đề hyđrat hoá 17β-hyđroxy anđrosten Hội nghị KH &CN Hoá hữu toàn quốc lần thứ 2, Hà nội, Tr.254259, (2001) 128 Lưu Đức Huy, Ng T Diệp, Ng T Hương, Lưu T H An.Nghiên cứu phương pháp hai giai đoạn chuyển hoá 17-etynylsteroit đến cocticoit sử dụng Phenyl iot điaxetat Tuyển tập kết nghiên cứu khoa học Viện Hoá học, Tr.48-52, (2001) 129 Lưu Đức Huy Phương pháp tổng hợp chất S Reichstein từ pregnyn.Tạp chí Dược học, vol.42, No 9, Tr.23-25, (2002) 130 Lưu Đức Huy, Ng T Diệp α-Hyđroxyl hoá trực tiếp số 17βaxetylsteroit tác nhân oxy hoá PhI(OAc)2 J Advances in Natural Sciences (in Engl.), vol.3, No 2, Tr.179-184, (2002) 131 Lưu Đức Huy, Ng T Diệp Epime hoá trực tiếp 19-nor-pregn-4-en-3-on17β-ol-20-yn (Norethindrone) Tạp chí Hố học, T.41, No ĐB, Tr.78-83, (2003) 132 Lưu Đức Huy Tổng hợp đề hyđro pregnenolon axetat (DPA) từ 3βaxetoxy-pregn-5-en-17β-ol-20-yne Hội nghị Hoá học toàn quốc lần thứ tư,Hà nội, Tr.25, (2003) 133 Lưu Đức Huy, Ng T Diệp α-Hyđroxyl hoá trực tiếp 17β-axetylsterroit tác nhân oxy hoá PhI(OAc)2 Hội nghị Hoá học á-âu, Hà nội, Tr.273, (2003) 134 Lưu Đức Huy Tổng hợp, nghiên cứu tính chất, cấu trúc hố lập thể trung tâm C(17) cặp epime phức cobalt 16-xeto-17α/β-etynylsteroit Tạp chí Phân tích hố, lý sinh học, T.9, No 1, Tr.24-29, (2004) 135 Lưu Đức Huy Một phản ứng mới: chuyển hố phức DCHC 16α17αepoxy-17β-etynylsteroit đến steroit có chứa vịng E lacton khơng no cạnh Tạp chí Hoá học, T.42, No 3, Tr.275-279, (2004) 136 Lưu Đức Huy Nghiên cứu tổng hợp 17α-pregn-11β,17β-điol-4-en-3-on20-yn từ 11β-hyđroxyanđrostenđion-3,17 Tạp chí Dược học, vol.44, No 11, Tr.19-21, (2004) 137 Nguyễn T D, Ph T H Nhung, Lưu Đức Huy Nghiên cứu tổng hợp chiral vài 17α-hydroxy-17β-etynyl steroit từ dẫn xuất 17β-hyđroxy tương ứng Hội nghị Khoa học Thanh niên Viện Hoá học-Viện KH&CNVN, Tr.91-95, (2004) 138 Lưu Đức Huy Phương pháp tổng hợp 4-clo-pregn-4-en-3-on-16α-ol17α-flo-20-in, Etynylsteroid chứa Flo vị trí 17α Tạp chí Hố học, T.43, No 1, Tr.85-89,(2005) 139.Lưu Đức Huy Nghiên cứu phương pháp tổng hợp ∆16-eninsteroit từ dẫn xuất 17β-hyđroxy-17α-etynylsteroit tương ứng Tạp chí Khoa học ĐHQGHN, T.21, No 2,Tr.10-15, (2005) 140 Lưu Đức Huy Tổng hợp đề hyđropregnenolon axetat từ 3β-axetoxypregn-5-en-17β-ol-20-in Tạp chí Dược học,T.45,No 4,Tr.11-14 (2005) 141 Lưu Đức Huy Tổng hợp số dẫn xuất vòng C Steroid Tạp chí Hố học ,T.43,No2,Tr 250-252(2005) 142 Lưu Đức Huy, A.V.Kamernitsky, Turuta A.M., Ng T Diep Hoàn thiện số phương pháp tổng hợp corticoid từ phytosterols thông qua 17xêtosteroid Hội nghị Khoa học Quốc tế 14, Havana, CuBa,( 2005) 143 Ng.T Diệp, Lưu Đức Huy.Nghiên cứu đường gián tiếp epime hố số dẫn xuất vịng A ethisterone Ibid.Tr.261-264 144.Luu Duc Huy, Nguyen T Diep, Mai H T.Tung et al, “Recovery of phytosterols from by-product of soybean oil production”, Hanoi International Scientific Conference on “Chemistry for Development and Integration”, Full Sc Report, pp 485-490, Ha Noi (9, 2008) 145.Lưu Đức Huy, Nguyễn T Diệp et al “Nghiên cứu chiết xuất phytosterol từ phụ thải công nghiệp dầu đậu tương”, Tạp chí Hóa học ,(2010) T 48 (2), Tr 203-210 146.Triệu Thị Thúy, Góp phần nghiên cứu quy trình phịng thí nghiệm chiết tách phytosterol từ phụ thải cơng nghiệp dầu đậu tương, Khóa luận tốt nghiệp đại học quy, Trường đại học KHTN, Hà Nội, 2008 147.B E Caldwell, H W Johnson, R W Judd, Soybeans: improvement, production and uses American society of agronomy, INC, publisher madison, wisconsin, USA, 1973, Tr 622, 632 148.Charles W Shoppee, Chemmistry of the steroids, London buttetworths scientific publications, 1958, Tr 35, 68 149.J W Copius Peereboom, Chromatographic sterol analysis as applied to the investigation of milk fat and other oils and fats, Centrum voor landbouwpublkaties en landbouwdocumentatie, 1963, Tr 38,127 150.Louis F Fieser, Mary Fieser, Steroids, Reinhold publishing corpo ration, New York, 1867, Tr 341,363 151.L John Goad, Analysis of sterols, Blackie academic & professional, 1992, Tr 91, 140 152.Perez C., Falero A., H Luu Duc, Balcinde, Hung B.R., J Ind Microbiol Biotechnol (2006), 148: pp 719-723 BỘ KHOA HỌC VÀ CÔNG NGHỆ VIỆN KHOA HỌC VÀ CÔNG NGHỆ VIỆT NAM VIỆN HÓA HỌC PHỤ LỤC BÁO CÁO TỔNG KẾT NHIỆM VỤ HỢP TÁC QUỐC TẾ THEO NGHỊ ĐỊNH THƯ VIỆT NAM - LB NGA (2007-2010) Nghiên cứu cơng nghệ vi sinh chuyển hóa phytosterol đến Androstendion (AD) 9alpha- hydroxy AD sử dụng cơng nghiệp hóa- dược Study on microbiotechnology for transforming phytosterols to Androstenedione (AD) and 9alpha- hydroxy AD used in pharma chemical industry Cơ quan chủ trì đề tài: Viện HóaHọc Viện Khoa học Công nghệ Việt Nam Chủ nhiệm đề tài : PGS TS Lưu Đức Huy Hà Nội-2010 PHỤ LỤC Không đánh số trang, bố trí theo thứ tự • Đề cương Hợp đồng • Cơng nghệ vi sinh sản xuất Androstendion ( AD) từ hỗn hợp phytosterol • Công nghệ vi sinh sản xuất 9alpha- hydroxy Androstendion (9α-OH AD) từ AD • Các tài liệu kết phân tích sản phẩm phytosterol, AD 9α- OH AD • Sao lục phổ • Các báo cáo khoa học đơn vị phối hợp- Viện CNSH • Các cơng bố khoa học liên quan • Minh chứng kết đào tạo • Báo cáo thống kê kết thực đề tài • Báo cáo tóm tắt ( 02 tr.) kết thực đề tài ( tiếng Việt tiếng Anh) • Báo cáo tốn tài đề tài • Biên kiểm tra định kỳ Bộ KH & CN • Công văn Bộ KH & CN cho phép điều chỉnh nội dung kinh phí đề tài • Báo cáo Đề tài nhánh Viện CNSDH CÁC TÀI LIỆU KÈM THEO: -Quyết định thành lập hội đồng nghiệm thu cấp sở -Biên họp hội đồng cấp sở -Phiếu nhận xét- GS TSKH Trần Văn Sung -Phiếu nhận xét- PGS TS Lê Mai Hương -Phiếu nhận xét- PGS TS Nguyễn Văn Tuyến -Phiếu nhận xét- PGS TS Nguyễn Hải Nam -Phiếu nhận xét- PGS TS Phan Minh Giang -Phiếu nhận xét- TS Trần Văn Thanh -Phiếu nhận xét- TS Đỗ Quốc Việt -Giấy xác nhận hoàn thiện, chỉnh sửa Hồ sơ Hội đồng nghiệm thu cấp sở -Quyết định thành lập hội đồng nghiệm thu cấp nhà nước -Biên họp hội đồng cấp nhà nước -Giấy xác nhận hoàn thiện, chỉnh sửa Hồ sơ Hội đồng nghiệm thu cấp nhà nướ Các tài liêu sau Bộ KH & CN lưu giữ, không yêu cầu đưa vào Hồ sơ: - Phiếu nhận xét – GS TSKH Nguyễn Thu Vân – Chủ tịch Hội đồng - Phiếu nhận xét – GS TS Phạm Thanh Kỳ- Phó chủ tịch Hội đồng -Phiếu nhận xét – GS TSKH Phan Tống Sơn- Phản biện -Phiếu nhận xét- PGS TS Nguyễn Thị Hoài Trâm- Phản biện -Phiếu nhận xét- PGS TS Lê Mai Hương -Phiếu nhận xét- PGS TS Vũ Đào Thắng -Phiếu nhận xét- TS Dương Văn Hợp -Phiếu nhận xét- DS CK2 Nguyễn Huy Văn -Phiếu nhận xét- TS Trần Khắc Vũ ` ... TĨM TẮT VỀ NHIỆM VỤ 1.Tên nhiệm vụ: ? ?Nghiên cứu cơng nghệ vi sinh chuyển hóa phytosterol đến androstendion (AD) 9alpha- hydroxy AD sử dụng công nghiệp hóa- dược? ?? 2.Mã số: 3.Thời gian thực hiện:... nguyên liệu phytosterol mà Vi? ??t Nam khơng thể tự nghiên cứu, 02 cơng nghệ vi sinh chuyển hố phytosterol đến androstenedione (AD) từ AD đến 9alpha- OH AD - Làm cho sterol dồi mạnh Vi? ??t nam trở... vi sinh sản xuất Androstendion ( AD) từ hỗn hợp phytosterol • Cơng nghệ vi sinh sản xuất 9alpha- hydroxy Androstendion (9? ?-OH AD) từ AD • Các tài liệu kết phân tích sản phẩm phytosterol, AD 9? ?-