NGHIÊN CỨU KHẢ NĂNG TỔ HỢP CỦA CÁC CHỦNG VI SINH VẬT ĐỂ SẢN XUẤT PHÂN HỮU CƠ VI SINH ĐA CHỨC NĂNG CHO CHÈ Lê hư Kiểu, guyễn Văn Huân, Lê Thị Thanh Thủy SUMMARY Research capability combination of microorganisms strains for making multi- function micro-organic fertilizer for tea In nature, microbes do not live alone, separated. They are always reciprocal in growth and development, but are also in competing against each other, taking up the energy for growth. Microbial life in the population is very diverse, they are always in a state struggling for survival, for food, oxygen and accounted for occupancy for the development, that is to win everything needed for the existence and development of them. Therefore, studying the possibility of combination (exist together in an environment) of the microorganisms to make multifuntions micro- organic fertilizer with good quality and meet the needs of agricultural production is essential and urgent [2]. Results were isolated and selected by four strains of microorganisms A11; KT7; Pl6; DK14 (dissolve P, fixed nitrogen, stimulate growth and resistance to root rot fungal pathogens of plants) from Ha Giang. When present in a mixture of carriers in the likelihood of growth and biological activity of the strains higher than they would as single strains. Combination of four strains of microorganisms capable of shortening the time of tea buds appear in nursery garden from 10 to 14 days and reduce the death rate of 50.6% compared to control. Keywords: Microorgaganism, micro-organic fertilizer, tea I. §ÆT VÊN §Ò Việc sử dụng phân hóa học, thuốc hóa học bảo vệ thực vật quá nhiều dẫn đến ô nhiễm môi trường đất, tạo cho đất không còn độ xốp, hấp thụ và giữ nước kém. Xu hướng chung hiện nay trên thế giới là tạo ra các sn phNm phân hu cơ giàu dinh dưng có b sung vi sinh vt hu ích. Các nhà khoa hc ã kt lun: S dng phân hu cơ vi sinh s làm tăng năng sut, cht lưng cây trng, ci to t, tăng  phì nhiêu t, gim ô nhim môi trưng, áp ng nn nông nghip hu cơ bn vng, xanh sch và an toàn. Trong phân bón hu cơ vi sinh thì các chng vi sinh óng vai trò quan trng. Tuy nhiên, trong t nhiên, vi sinh vt không sng ơn c, tách bit nhau mà luôn luôn h tr nhau trong sinh trưng, phát trin và chúng cũng luôn cnh tranh ln nhau, chim năng lưng cho s phát trin. Cuc sng ca vi sinh vt trong qun th rt a dng, chúng luôn luôn trong tình trng u tranh  tn ti, kim thc ăn, chim ôxy và chim ch cho s phát trin, nghĩa là  chim tt c nhng gỡ cn cho s tn ti v phỏt trin ca chỳng. cú nhng chng vi sinh vt hu ớch v s dng hiu qu trong sn xut phõn bún hu c vi sinh vt a chc nng cú cht lng tt, ỏp ng nhu cu sn xut chố thỡ vic ỏnh giỏ kh nng chung sng cựng nhau ca cỏc chng vi sinh trong mt mụi trng l vic lm rt cn thit, cỏc chng vi sinh khụng i khỏng nhau s c tuyn chn s dng. II. VậT LIệU V PHƯƠN G PHáP N GHIÊN CứU 1. Vt liu nghiờn cu - Cỏc chng vi sinh vt s dng trong nghiờn cu c phõn lp t cỏc mu t ti tnh H Giang v lu tr ti B mụn Vi sinh vt - Vin Th nhng N ụng húa. 2. Phng phỏp nghiờn cu - Xỏc nh mt t bo cỏc chng vi sinh vt theo N guyn Lõn Dng. - Xỏc nh kh nng phõn gii lõn theo TCVN 6167 - 1996. - Xỏc nh kh nng c nh nit theo TCVN 6166 - 2002. - Xỏc nh kh nng c ch vi sinh vt gõy bnh thc vt theo 10TCN 714 - 2006. - Xỏc nh kh nng sinh tng hp IAA thụ theo phng phỏp Salkowsky ci tin. III. KếT QUả V THảO LUậN 1. Kh nng t hp ca cỏc chng vi sinh vt La chn b chng vi sinh vt hu ớch phc v cho cụng tỏc nghiờn cu sn xut phõn bún hu c vi sinh a chc nng cho cõy chố ti H Giang, tin hnh phõn lp v tuyn chn c 4 chng vi sinh vt cú hot tớnh sinh hc cao nh: phõn gii lõn, c nh nit t do, kớch thớch sinh trng v i khỏng nm gõy bnh thi r cõy trng t cỏc mu t, cõy thu c ti H Giang. c im hỡnh thỏi khuNn lc v hot tớnh sinh hc ca chỳng c tng hp ti bng 1 v hỡnh 1. Bng 1. Hỡnh thỏi khun lc cỏc chng vi sinh vt STT Ký hiu chng c im hỡnh thỏi Hot tớnh sinh hc 1 A11 Trng, nhy, trũn li C nh nit t do 2 KT7 Trũn, li, nhy, vng Kớch thớch sinh trng 3 Pl 6 Phng, nhón, trng c Phõn gii lõn 4 K14 Trũn, nhy, li, vng nht c ch nm gõy bnh thi r S liu bng 1 cho thy, c im hỡnh thỏi khuNn lc ca cỏc loi vi sinh vt hu ớch khỏc nhau l rt khỏc nhau. Qua ú cho thy qun th vi sinh vt hu ớch ti H Giang l rt a dng v l ngun vt liu phong phỳ cho sn xut phõn bún hu c vi sinh ti a phng. Hình 1. KhuNn lc ca các chng vi sinh vt Bảng 2. Hoạt tính sinh học của các chủng vi sinh vật Ký hiệu chủng Hoạt tính sinh học của các chủng vi sinh vật Cố định Nitơ (nmol etylen/ml/ngày) Sinh IAA (µ µµ µg IAA/ml) Phân giải lân (vòng phân giải D-d mm) Ức chế nấm gây bệnh thối rễ (vòng vô khuẩn D-d mm) A11 1614 - - - KT7 - 132,28 - - Pl6 - - 6 - ĐK14 - - - 20 Đánh giá sự tồn tại cùng nhau của các chủng vi sinh vật S liu bng 2 cho thy, tt c các chng A11, KT7, Pl6 và K14 u có các hot tính sinh hc cao, th hin chng A11 có kh năng c nh nitơ t 1614 nmol etylen/ml/ngày; chng KT17 to ra 132,28 µg IAA/ml; chng Pl6 có kh năng phân gii lân vi ưng kính vòng phân gii là 6 mm, c bit chng K14 có kh năng c ch nm gây bnh thi r mnh, th hin to vòng vô khuNn t 20 mm. ây là các chng vi sinh có tim năng nht  b sung vào phân bón hu cơ vi sinh a chc năng cho chè. ã tin hành la chn các t hp chng vi sinh vt hu ích theo phương pháp cy vch tip xúc gia các chng vi sinh vt trên môi trưng c hiu. Kt qu ưc tng hp  bng 3. Hình 2. Kh năng tương tác ca các chng vi sinh vt S liu bng 3 cho thy, 4 chng vi sinh vt dùng trong nghiên cu u có kh năng sinh trưng, phát trin trên cùng mt môi trưng dinh dưng và không thy có hin tưng c ch sinh trưng và phát trin ln nhau. Hin tưng c ch ch có th xy ra khi trong quá trình sinh trưng và phát trin, mt trong hai chng vi sinh vt này ã thi ra môi trưng sng các sn phNm trao i cht gây c ch s sinh trưng và phát trin ca chng kia hoc cũng có th do kh năng sinh trưng và phát trin ca mt chng vi sinh vt nào ó kém hơn các chng kia nên không th cnh tranh ưc dinh dưng và môi trưng sng nên b c ch. Kt qu trên cho thy, có th nuôi cy các chng vi sinh vt la chn trên cùng mt môi trưng. Bảng 3. Khả năng tương tác của các chủng vi sinh vật hữu ích A11 KT7 Pl6 ĐK14 A11 + + + KT7 + + + Pl6 + + + ĐK14 + + + Chú thích: (+) phát trin bình thưng; 2. Khả năng sinh trưởng và phát triển của các tổ hợp chủng vi sinh vật trong chất mang Cht lưng ca phân bón vi sinh vt ph thuc vào kh năng sinh trưng, phát trin và hot tính sinh hc ca các chng vi sinh vt trong phân bón. Do ó, vic xác nh mt  và hot tính sinh hc ca các chng vi sinh vt trong cht mang qua các khong thi gian khác nhau là cn thit,  t ó ưa ra ưc quy trình và thi gian bo qun thích hp cho phân bón. Kt qu ánh giá kh năng sinh trưng và phát trin ca các chng vi sinh vt trong cht mang  dng ơn chng và hn hp ưc tng hp  bng 4. Hình 3. S sinh trưng và phát trin ca chng vi sinh vt  dng ơn chng và hn hp Bảng 4. Khả năng sinh trưởng và phát triển của các chủng vi sinh vật sau thời gian bảo quản Ký hiệu chủng Mật độ tế bào VSV trong chất mang (x 10 8 CFU/g) 0 ngày 15 ngày 30 ngày 60 ngày 90 ngày Đơn chủng Hỗn hợp Đơn chủng Hỗn hợp Đơn chủng Hỗn hợp Đơn chủng Hỗn hợp Đơn chủng Hỗn hợp A11 8,9 8,9 5,0 7,0 4,0 4,3 1,5 1,4 0,1 0,09 KT7 20,4 20,4 15,6 19,0 12,6 15 7,5 6,2 5,4 1,4 Pl6 16,0 16,0 5,0 8,0 4,0 11,2 1,5 6,1 0,1 1,8 ĐK14 28,0 28,0 23,4 17,2 11,8 5,1 8,4 3,1 4,4 2,0 S liu bng 4 cho thy, sau 3 tháng phi trn vào trong cht mang, mt  t bào các chng vi sinh vt có hin tưng gim dn. Tuy nhiên, s gim mt  này không ln và vn t t 10 7 - 10 8 CFU/g. N u so vi Tiêu chuNn Vit N am v phân bón vi sinh vt, sn phNm vn t yêu cu v cht lưng. N goài ra, mt  t bào ca các chng vi sinh vt tuyn chn  dng ơn chng và hn hp hu như không có s khác bit nhau. N hư vy, có th s dng hn hp các chng vi sinh vt này  sn xuât phân bón hu cơ vi sinh a chc năng. 3. Hoạt tính sinh học của các chủng vi sinh vật trong chất mang sau 3 tháng bảo quản Hot tính sinh hc ca các chng vi sinh vt là yu t nh hưng trc tip n cht lưng ca phân bón. Vì vy, vic duy trì và nâng cao ưc hot tính sinh hc ca các chng vi sinh vt trong cht mang là vic làm cn thit và mang tính quyt nh. Hot tính sinh hc ca các chng vi sinh vt sau 3 tháng tn ti trong cht mang ã ưc ánh giá. Kt qu trình bày  bng 5. Hình 4. Hot tính sinh hc ca ơn chng và hn hp chng VSV sau 3 tháng trong cht mang Bảng 5. Hoạt tính sinh học của các chủng vi sinh vật sau 3 tháng trong chất mang Ký hiệu chủng Hoạt tính sinh học của các chủng vi sinh vật Cố định Nitơ (nmol etylen/ml/giờ) Sinh IAA (µ µµ µg IAA/ml) Phân giải lân (vòng phân giải D-d mm) Ức chế nấm gây bệnh thối rễ (vòng vô khuẩn D-d mm) A11 Đơn chủng 672,2 - - - Hỗn hợp 671,5 - - - KT7 Đơn chủng - 125,68 - - Hỗn hợp - 125,80 - - Pl6 Đơn chủng - - 5,5 - Hỗn hợp - - 6,0 - ĐK14 Đơn chủng - - - 14 Hỗn hợp - - - 15 Chú thích: (-) Không có hot tính S liu bng 5 cho thy, hot tính sinh hc ca các chng vi sinh vt sau 3 tháng trong cht mang tuy có gim so vi ban u, nhưng không áng k. Các chng vi sinh vt  dng hn hp trong cht mang a s u có hot tính sinh hc cao hơn so vi khi chúng  dng ơn chủng. Như vậy, chứng tỏ trong quá trình cùng tồn tại trong chất mang các chủng vi sinh vật hữu ích đã có sự kích thích sinh trưởng lẫn nhau, điều này sẽ rất có lợi cho việc sản xuất phân bón vi sinh vật đa chức năng sau này. Từ những kết quả trên cho thấy, tổ hợp vi sinh vật tuyển chọn trên có hiện tượng cộng sinh trong quá trình sống và phù hợp cho sản xuất phân bón vi sinh vật đa chức năng. 4. Ảnh hưởng của tổ hợp vi sinh vật đến sự sinh trưởng, phát triển và khả năng hạn chế bệnh thối rễ cây chè Đã tiến hành đánh giá ảnh hưởng của tổ hợp vi sinh vật tới khả năng sinh trưởng và phát triển của cây chè ở giai đoạn vườn ươm. Kết quả được trình bày tại bảng 6. Bảng 6. Ảnh hưởng của tổ hợp vi sinh vật đến sự sinh trưởng và phát triển của cây chè ở giai đoạn vườn ươm Công thức thí nghiệm Chỉ tiêu theo dõi Thời gian bật búp (ngày) Tỷ lệ bầu chết (%) Lần 1 Lần 2 Lần 3 Đối chứng 67 168 228 24,30 Tổ hợp VSV 57 158 214 12,30 T¹p chÝ khoa häc vµ c«ng nghÖ n«ng nghiÖp ViÖt Nam 8 Kt qu ánh giá nh hưng ca t hp vi sinh vt hu ích n s sinh trưng và phát trin ca cây chè  giai on vưn ươm cho thy: T hp vi sinh vt hu ích không nhng làm tăng kh năng hn ch bnh cho cây chè, làm gim t l bu cht 50,6 % so vi i chng mà còn làm tăng nhanh thi gian bt búp  các bu ươm t 10 - 14 ngày so vi i chng. S liu bng 6 cho thy, t hp vi sinh vt trên ã có nhng tác ng tích cc n s sinh trưng và phát trin ca cây chè  giai on vưn ươm. IV. KÕT LUËN - Đã phân lập, tuyển chọn và xác định được những đặc điểm cơ bản của 4 chủng vi sinh vật A11; KT7; Pl6; ĐK14 (phân giải lân, cố định nitơ tự do, kích thích sinh trưởng và đối kháng nấm gây bệnh thối rễ cây trồng) từ tỉnh Hà Giang. - Khi tồn tại trong chất mang ở dạng hỗn hợp, khả năng sinh trưởng và hoạt tính sinh học của các chủng cao hơn so với khi chúng ở dạng đơn chủng. - Tổ hợp 4 chủng vi sinh vật trên có khả năng làm tăng nhanh thời gian bật búp chè ở giai đoạn bầu ươm từ 10 - 14 ngày và làm giảm tỷ lệ bầu chết 50,6 % so với đối chứng. TÀI LIỆU THAM KHẢO 1. Nguyễn Lân Dũng. Một số phương pháp nghiên cứu vi sinh vật học. NXB Khoa học Kỹ thuật. 2. Lê Văn Khoa (1996). Phương pháp phân tích đất- nước- phân bón- cây trồng. NXB Đại học Quốc Gia. 3. TCVN 6167 - 1996; TCVN 6166 - 2002; 10TCN 714 – 2006. 4. Misra and Kaushik B.D (1989). “Growth promoting subtances of Cyanobacteria. II. Detection of amino acids, sugars and auxins”. Proc. India. Natn. Sci. Acad., 55, 499- 504. Người phản biện PGS. TS. Nguyễn Văn Viết . NGHIÊN CỨU KHẢ NĂNG TỔ HỢP CỦA CÁC CHỦNG VI SINH VẬT ĐỂ SẢN XUẤT PHÂN HỮU CƠ VI SINH ĐA CHỨC NĂNG CHO CHÈ Lê hư Kiểu, guyễn Văn Huân, Lê Thị Thanh. thấy, tổ hợp vi sinh vật tuyển chọn trên có hiện tượng cộng sinh trong quá trình sống và phù hợp cho sản xuất phân bón vi sinh vật đa chức năng. 4. Ảnh hưởng của tổ hợp vi sinh vật đến sự sinh. mang các chủng vi sinh vật hữu ích đã có sự kích thích sinh trưởng lẫn nhau, điều này sẽ rất có lợi cho vi c sản xuất phân bón vi sinh vật đa chức năng sau này. Từ những kết quả trên cho thấy,