NGHIÊN CỨU XÁC ĐỊNH NẤM Aspergillus SINH ĐỘC TỐ AFLATOXIN TRÊN LẠC BẰNG PHẢN ỨNG PCR ĐẶC HIỆU Trần Tuấn Tú, Đàm Quang Hiếu, Hoàng Thị Ngát, Lê Huy Hàm và Phạm Xuân Hội Summary Identification of Aspergillus flavus induced Aflatoxin in peanut in the orth of Vietnam using PCR method Aflatoxins are carcinogenic metabolites produced by several members of Aspergillus group, such as Aspergillus flavus, Aspergillus parasiticus, Aspergillus nomius.Number of methodologies have been developed for detection of aflatoxin in grain and food, including thin-layer chromatography (TLC), high-performance liquid chromatography (HPLC), overpressured chromatography, polymerase chain reaction (PCR), enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) At least, more than 20 genes have been determined to be involved in Aflatoxin biosynthesis pathway. In which, genes ver-1, omt-1 and apa-2 play an important role in the pathway. In this study, we use ver as a target gene to detect peanut contaminated aflatoxin in the North of Vietnam by employing PCR approach. Peanut samples on the field, household and market from different area have been collected for isolating Aspergillus flavus induced Aflatoxin strains using from a separate hypha. A primer pair complementing the coding portion of ver gene was generated. DNA extracted from Aspergillus flavus, Aspergillus niger strains from Nghean, Haiduong and Hanoi provinces was used as PCR template. Positive results as designed PCR products were observed only with all DNA templates of Aspergillus flavus from different sources, while no PCR products were observed with DNA templates of Aspergillus niger. The results is suggesting a posibility to use PCR as selective method for early, accurate detection of aflatoxin contaminated in peanut as well as in grains and foods. Keywords: Aflatoxin, Aspergillus flavus, peanut, PCR, identification. I. ĐẶT VẤN ĐỀ Nấm sinh độc tố là một trong những tác nhân gây bệnh phổ biến làm giảm chất lượng và giá tr sn phNm nông nghip do sinh ra các loi c t gây hi cho sc kho con ngưi và vt nuôi. Ph bin nht trong nhóm nm sinh c t là nm bnh Aspergillus spp. (A. flavus; A. parasiticus; A. fumigatus ) có kh năng sinh c t gây ung thư Aflatoxin. Các chng nm này có ph hot ng rt rng vì vy có kh năng lây nhim trên nhiu loi nông sn như ngô, lc, bông, u tương Các loi ht có du (c bit như lc) rt thích hp cho s phát trin ca nm Aspergillus spp. cũng như s hình thành c t Aflatoxin. Xut phát t thc t trên, ã có nhiu phương pháp ưc nghiên cu và áp dng trên th gii nhm phát hin sm ngun nm bnh, iu này có ý nghĩa quan trng trong vic hn ch tác hi nm bnh trên nông sn. Phương pháp PCR ã ưc s dng  phát hin các loi nm và vi khuNn gây bnh và sinh c t trên nông sn, thc phNm và các loi thc ăn gia súc, do tin li, d áp dng, có kh năng phát hin sm mm bnh k c khi chúng chưa sinh c t. Có ít nht 20 gen tham gia vào con ưng tng hp aflatoxin, mt s gen quan trng trong s ó ã xác nh ưc trt t nucleotid và chc năng như apa, omt, ver, nor Trong nghiên cu này chúng tôi s dng gen ver - mã hoá cho enzyme chuyn versicolorin thành sterigmatocystin (tin cht u tiên trong nhánh sinh tng hp Aflatoxin B 1 - cht c nht và ph bin trong nhóm Aflatoxin) làm gen ích  bưc u xác nh s có mt ca nm bnh Aspergillus sinh c t trên các mu lc thu thp  mt s tnh min Bc Vit N am. II. VT LIU VÀ PHƯƠN G PHÁP N GHIÊN CU 1. Vật liệu nghiên cứu Các ging lc thu thp trong nhà dân, trên ng rung và trên th trưng  các tnh N gh An, Hi Dương và Hà N i ưc s dng  phân lp ngun nm bnh. Cp mi c hiu cho gen ver, các hóa cht s dng trong sinh hc phân t phc v vic tách chit ADN tng s si nm và các nguyên liu cho phn ng PCR ưc mua ca hãng Sigma, Fermentas 2. Phương pháp nghiên cứu 2.1. Thu thp mu lc và thu nhn nm bnh t mu lc. Các mu lc thu v ưc bo qun trong phòng lnh  iu kin 4 - 8 0 C ti B môn Bnh hc phân t thc vt.  thu ưc nm bnh, chúng tôi tin hành theo 2 cách: (i) t ht lc trc tip trên ĩa petri có lót giy kh trùng sch, gi trong iu kin 28 0 C và  Nm khong 80%; (ii) Ct v ht lc t trên môi trưng PDA c, gi  nhit  28 0 C. Sau 3 - 5 ngày t mu, tin hành quan sát si nm mc trên lc và v ht lc, xác nh các im mc nm thích hp  tin hành cy chuyn và phân lp. 2.2. Phương pháp phân lp nm: S dng phương pháp tách si nm ơn  làm thun các isolate. Trên ĩa môi trưng c, tin hành cy chuyn bng cách ly si nm ti các im ngoài rìa ca khuNn lc  cy chuyn sang ĩa môi trưng mi. Mi khuNn lc trên ĩa môi trưng chn t 3 n 5 im  cy chuyn theo nguyên tc ngu nhiên. Tin hành phân lp nhng mu nm Aspergillus có c im hình thái in hình trên c 2 loi môi trưng PDA c (120 ml dch chit khoai tây, 12 g dextrose, 10 g agar cho 1L môi trưng - là môi trưng giàu dinh dưng) và môi trưng Czapek c (là môi trưng dinh dưng trung bình) cho n khi t ti  ng u v màu sc và tc  phát trin ca khuNn lc. Da vào các c im nhn dng mu sc khuNn lc, hình dng si nm, vt loang  li trên môi trưng quan sát trên ĩa petri và kt hp vi hình dng bào t, cung sinh bào t, th bình quan sát trên kính hin vi chúng tôi tip tc làm thun các isolate bng vic chn lc và cy chuyn các mu nm trên môi trưng c. Trên cơ s các c im nhn dng trong quá trình phân lp, các mu nm ưc phân thành các isolate A. flavus, A. paraciticus hay A. niger. Sau ó, các mu nm này ưc s dng làm nguyên liu phc v cho các thí nghim tip sau. 2.3. Tách chit ADN tng s. Các mu nm thu ưc trên môi trưng c ưc tip tc nuôi cy lc 200v/p trong môi trưng PDA và Czapek lng t 5 - 7 ngày,  28 0 C  thu sinh khi. Sau khi ưc ra bng nưc ct t 3 - 4 ln các mu nm ưc gi trong t lnh sâu - 80 0 C làm nguyên liu tách chit ADN tng s. Trong nghiên cu này, chúng tôi ã s dng phương pháp tách chit ADN tng s t nm Aspergillus theo quy trình ca Eric W. Boehm. Cho 200 - 300 mg sinh khi nm ã ưc nghin nh bng nitơ lng vào ng eppendorf 1,5 ml, b sung 500 l dung dch tách chit (100 mM Tris-pH 8.0, 10 mM EDTA, 2% SDS, 1% β-mercaptoethanol),  mu  65 0 C trong 1h, o u mu 5 phút mt ln. B sung 300 l dung dch CTAB (5M N aCl, 10% CTAB),  mu trong 30 phút. Tip ó, b sung thêm 450 l dung dch chloroform-isoamyl alcohol t l 24:1 (v/v), o u và ly tâm 12000 vòng/phút trong 15 phút. Chuyn pha dch trong phía trên sang ng mi, b sung 600 l dung dch isopropanol lnh và  mu  - 20 0 C ít nht 3 h. Sau ó, ly tâm mu  12000 vòng/phút trong 10 phút. Loi b dch phía trên và ra kt ta thu ưc bng 300 l EtOH lnh 70%, o nh và ly tâm  12000 vòng/phút trong 5 phút. Thu li và làm khô kt ta; hòa tan kt ta vi 50 l nưc ct kh ion sau ó x lý loi b ARN . Các mu ADN tng s sau ó s ưc kim tra cht lưng bng phương pháp in di trên gel agarose 1% và o quang ph hp th (OD 260/280nm )  kim tra hàm lưng và cht lưng ADN tng s thu ưc. 2.4. Thit k Primer c hiu. Trên cơ s trình t gen ver (Acession number: M91369) ã ưc ăng ký trong ngân hàng gen th gii, chúng tôi s dng chuơng trình CLC Bio 3.1  thit k cp mi VER-496F (5’- ATGTCGGATAAT CACCGTTTAGATGGC-3’) và VER-1391R (5’-ATGTCGGATAAT CACCGTTTAGATGGC-3’)  nhân phân on có kích thưc 896 bp ca gen ver-1 (Hình 1). N hng chng nm có băng ADN kích thưc 900bp ưc khuych i bng cp mi trên ưc xem là có kh năng sinh c t Aflatoxin. Hưng nghiên cu trên s là cơ s cho chúng tôi xây dng phương pháp có th chuNn oán s nhim và nh lưng ưc mc  nhim nm Aspergillus spp. sinh c t Aflatoxin t các mu lc hay các cây lương thc khác. Hình 1. Cấu trúc gen ver và vị trí cặp mồi được thiết kế trên gen. Gen ver có kích thước khoảng 1.76 kb, tận cùng đầu 5’ và đầu 3’ là vùng không phiên mã (5’UTS và 3’UTS) dài khoảng 400bp và 372bp; khung đọc mở (ORF) nằm từ vị trí 400 đến vị trí 1393, mã hoá cho 262 a.amin; trong khung đọc mở có tồn tại 3 đoạn exon và 2 đoạn intron. Cặp mồi được thiết kế nằm trọn trong khung đọc mở, có kích thước lý thuyết 896bp (~ 900bp). 2.5. Phn ng PCR c hiu. Các mu DN A ã tách chit ưc pha loãng v nng  20ng/l  làm khuôn cho phn ng PCR c hiu xác nh s tn ti ca gen ver trong genome. Phn ng PCR ưc tin hành  th tích 20 l cha 0,2 l Taq 5’UTS 5’ 3’ 3’UTS Exon 1 Exon 2 Exon 3 400 - ATG 1393 - GAT Ver –496F Ver –1391R 1765 bp 896 bp Intron polymerase (5 u/l) ca Promega, 2 l buffer 10X, 0,2 mM dNTPs và 20 pmol mỗi mồi. Phản ứng PCR được thực hiện bằng máy nhân gen Genius trong 35 chu kỳ với chương trình nhiệt được thiết lập như sau: Biến tính 94 0 C trong 45 giây, gắn mồi ở 55 0 C trong 45 giây và kéo dài ở 72 0 C trong 1 phút. Các phân đoạn sản phNm ưc in di kim tra trên gel agarose 1% và ghi nhn hình nh bng h thng máy nh N ikon. III. KT QU VÀ THO LUN 1. Phân lp nm bnh Aspergillus spp. t mt s mu lc ca Vit N am. S dng c 2 phương pháp thu thp nm: (i) t ht lc lên ĩa petri có lp giy thm kh trùng ưc làm ưt (5 - 6 ht/ĩa) và (ii) t v la ht lc lên môi trưng PDA c (5 - 6 ming v/ĩa) chúng tôi ã thu ưc các chng nm Aspergillus spp. nh vào các c im hình thái bên ngoài như màu sc và vt loang ca khuNn lc trên môi trưng (Hình 2). Kt qu nhn thy bng phương pháp t v lc trên ĩa môi trưng PDA c,  nhim khuNn và ln nhiu loi nm khác (nhim 40%) là thp hơn nhiu so vi phương pháp t c ht lc trên giy thm kh trùng (nhim 70%). Hình 2. Phương pháp thu nhận và phân lập mẫu nấm bệnh từ hạt lạc trên giấy thấm khử trùng được làm ướt (A) và từ vỏ hạt lạc trên môi trường PDA đặc (B). Qua theo dõi và thng kê chúng tôi nhn thy t l các ht lc b nhim nm là rt cao (dao ng t 80 - 100%) và không có s khác bit ln v t l nhim nm ca lc thu thp trong dân (sau khi thu hoch) so vi ngun lc trên th trưng. iu ó cho thy ngun nm bnh ã ưc lây nhim t ng rung n kho bo qun và ngưc li. Hu ht các mu lc b nhim nm A. flavus (có khuNn lc màu xanh vàng, mt sau màu vàng - Hình 3A1) và A. niger (khuNn lc màu en, mt sau màu trng hoc vàng - Hình 3A2) và không thu nhn ưc bt kỳ mu nm nào có c im hình thái ca nm A. paraciticus. iu này cho thy nm bnh Aspergillus spp. sinh c t Aflatoxin ph bin trên lc  Vit N am là chng A. flavus. Trên hai môi trưng PDA và Czapek c ưc s dng, có s khác bit v hình thái khuNn lc và tc  phát trin ca nm khi nuôi cy (Hình 3). Tc  phát trin ca nm Aspergillus spp. trên môi trưng Czapek chm hơn so vi trên môi trưng PDA. Trên môi trưng PDA, ưng kính khuNn lc nm t trung bình là 6 - 7 cm qua 7 ngày nuôi cy và t mc ti a 9 cm sau khong 20 ngày. Trên môi trưng Czapek, qua 7 ngày nuôi cy, ưng kính trung bình ca khuNn lc ch t ưc là 3,5 - 4 cm, ti a t ưc là 7 cm sau 20 ngày. Xét riêng vi 2 loài nm A. flavus và A. niger, chúng tôi nhn thy mc  nhim nm trên lc cũng như tc  phát trin ca nm loài A. flavus là cao hơn so vi loài A. niger, t ó có th thy A B nguy cơ ln ca vic nhim nm cũng như nhim c t Aflatoxin cao trên các mu lc ưc kho sát  Vit N am (Hình 3). Hình 3. Hình thái nấm Aspergillus spp. phân lập được từ mẫu lạc. A. Mẫu nấm A. flavus: trên môi trường PDA (A1) khun lạc phát triển nhanh và vùng nấm mới phát triển có màu vàng nhạt, vùng nấm bên trong có màu xanh. Trên môi trường Czapek (A2) nấm sinh trưởng chậm hơn, màu sắc đậm hơn và có xuất hiện các hạch nấm màu đen. A3: Hình ảnh thể bình và cuống sinh bào tử của nấm A.flavus quan sát dưới kính hiển vi (X 1600). A4: ấm A. flavus trong nuôi cấy lỏng. B. Mẫu nấm A. niger: Trên môi trường Czapek (B1) khun lạc phát triển chậm hơn và màu của khun lạc cũng đậm hơn và có xuất hiện một số “hạch nấm” trên khun lạc - có thể do môi trường Czapek nghèo dinh dưỡng hơn; B2: Hình ảnh sợi nấm A. niger quan sát dưới kính hiển vi (X 1600). Các mu nm Aspergillus thu ưc sau khi làm thun s ưc cy chuyn sang môi trưng PDA và Czapek lng  nuôi cy thu sinh khi. Kt qu cho thy, không có s khác bit nào áng k khi nuôi cy nm Aspergillus trên 2 môi trưng lng này, sau khong 5 ngày, s thu ưc lưng sinh khi nấm đủ để tách chiết ADN tổng số. Điều kiện tối ưu của quá trình nuôi cấy này là 200 v/p, ở 28 - 30 0 C (Hình 3A4). Chúng tôi cũng tiến hành làm các tiêu bản nấm Aspergillus phân lập được bằng hai cách, làm tiêu bản với mẫu nấm nuôi cấy trên môi trường đặc và làm tiêu bản với mẫu nấm nuôi cấy lỏng để quan sát hình dạng bào tử, cuống sinh bào tử, thể bình , so sánh để khẳng định chính xác hơn các loài nấm đã phân lập (Hình 3). 2. Kết quả tách chiết ADN. Trong thí nghiệm này chúng tôi đã khảo sát một số phương pháp tách chiết ADN tổng số ở nấm men, nấm sợi cũng như nấm Aspergillus spp. đã được công bố. Tuy nhiên, sau khi thử nghiệm chúng tôi nhận thấy phương pháp tách chiết dựa trên quy trình của Eric W. A B A1 A2 A3 A4 B1 B2 Boehm vi các mu nm nuôi cy trong môi trưng lng là hiu qu nht. Vì th chúng tôi quyt nh s dng phương pháp này  tách chit cho các mu nm ã ưc làm thun mang các c im hình thái c trưng ca nm A. flavus và nm A. niger. Kt qu chúng tôi thu ưc 15 mẫu ADN tổng số nấm A. flavus với hình ảnh điện di trên gel agarose 1% rõ nét với hàm lượng ADN trung bình từ 300 - 500 ng/µl (Hình 4) và 5 mẫu ADN tổng số nấm A. niger sử dụng làm đối chứng cho phản ứng PCR. Các mẫu ADN tổng số được sử dụng làm sợi khuôn cho phản ứng PCR đặc hiệu với cặp mồi đã thiết kế. Hình 4. Ảnh điện di AD tổng số các mẫu nấm trên gel agarose 1%. M: Marker λ HindIII; 1 - 4: ấm A. flavus ghệ An, 5 - 7: ấm A. flavus Hải Dương; 8 - 10 nấm A. flavus Hà ội; 11 - 13: ấm A. niger ghệ An; 14: ấm A. niger Hải Dương và 15: ấm A. niger chun. 3. Kt qu phân tích bng phn ng PCR c hiu. Từ 15 mẫu ADN tổng số thu được của isolate A. flavus chúng tôi chọn ra 7 mẫu ADN tổng số để làm khuôn cho thí nghiệm tối ưu hoá điều kiện phản ứng PCR đặc hiệu với cặp mồi VER. Điều kiện cho phản ứng PCR như đã trình bày ở phần vật liệu và phương pháp. Nồng độ khuôn ADN tổng số được thay đổi từ 1 ng, 2 ng, 10 ng, 20 ng, 100 ng và 200 ng cho thể tích phản ứng là 20 µl để tối ưu hoá nồng độ khuôn ADN. Kết quả phân tích cho thấy khoảng nồng độ thích hợp cho mồi VER dao động từ 2 - 20 ng, tuy nhiên ở nồng độ 20 ng các phân đoạn ADN được khuyếch đại tốt nhất và nồng độ 20 ng được chúng tôi duy trì để tối ưu hoá nhiệt độ gắn mồi. Việc tối ưu nhiệt độ gắn mồi là rất quan trọng và trong thí nghiệm này chúng tôi nhận thấy ở nhiệt độ gắn mồi 50 0 C các băng cần khuyếch đại đều xuất hiện tuy nhiên có xuất hiện những băng không đặc hiệu. Ở nhiệt độ gắn mồi 55 0 C, hiệu suất gắn mồi và khuyếch đại gen vẫn được duy trì và các băng không đặc hiệu đã biến mất. Sau khi đã thiết lập được điều kiện thích hợp cho phản ứng mồi đặc hiệu, chúng tôi đã tiến hành phản ứng PCR với tất cả các mẫu ADN tổng số của các mẫu nấm phân lập được và đối chứng được sử dụng trong thí nghiệm này là mẫu ADN tổng số của mẫu A. niger. Kết quả thu được các băng ADN khuyếch đại có kích thước xấp xỉ 900bp, tương đồng với kích thước lý thuyết đã tính toán là 896bp ở tất cả các phản ứng PCR sử dụng sợi khuôn là ADN tổng số nấm A. flavus. Các isolate A. flavus phân lập được ở các vùng sinh thái khác nhau đều cho kết quả dương tính với các mồi đặc hiệu, trong khi các chủng A. niger sử dụng làm đối chứng đều cho kết quả âm tính với các mồi đặc hiệu (Hình 5). Điều này chứng tỏ cặp mồi đã thiết kế và điều kiện phản ứng PCR chúng tôi thiết lập được là có thể sử dụng phân biệt loài A. flavus và A. niger. Điều đó cũng có nghĩa là phương pháp của chúng tôi hoàn toàn có thể nhận biết được các nấm có khả năng sinh độc tố Aflatoxin với các nấm không sinh độc tố, bởi các nấm A. flavus được coi là loài sinh độc tố Aflatoxin rất mạnh trong khi nấm A. niger là loài hoàn toàn không sinh độc tố. Hình 5. Hình ảnh điện di sản phm khuyếch đại với mồi Ver trên gel agarose 1% M: Marker; 1 - 3: A. flavus ghệ An; 4 - 6: A. flavus Hải Dương; 7: A. flavus Hà ội; C: Đối chứng A. niger chun. Các mẫu có đặc điểm hình thái điển hình của A. flavus đều cho băng đặc hiệu ~ 900bp còn mẫu đối chứng là mẫu A. niger chun không có băng đặc hiệu (Hình ảnh thu nhận bằng máy chụp ảnh ikon) IV. KẾT LUẬN Con đường sinh tổng hợp Aflatoxin ở nấm bệnh Aspergillus đã được nghiên cứu khá chi tiết ở mức độ phân tử. Ít nhất có 20 gen mã hóa cho các enzyme tham gia vào con đường này và một số gen quan trọng đã được giải trình tự và nghiên cứu chức năng đầy đủ. Trong các gen quan trọng tham gia vào quá trình sinh tổng hợp Aflatoxin, ver, omt và apa đang được quan tâm và sử dụng làm gen đích trong các nghiên cứu xác định nấm Apergillus sinh độc tố Aflatoxin bằng kỹ thuật PCR (Hình 6). Trong nghiên cứu có tính chất bước đầu thử nghiệm khả năng sử dụng phương pháp PCR đ chNn oán nm Apergillus sinh c t Aflatoxin. Chúng tôi ã thit lp ưc phương pháp ti ưu phân lp nm A. flavus, phương pháp ti ưu tách chit ADN tng s và c bit là chúng tôi ã ti ưu ưc iu kin cho phn ng PCR  có th chNn oán s có mt ca nm A. flavus vi cp mi gen ver. ây là cơ s cho phép chúng tôi tip tc M 1 2 3 4 5 6 7 M C 900bp 1500bp 1000bp 800bp hoàn thin phương pháp  có th xác nh các chng nm Apergillus có kh năng sinh c t Aflatoxin nh phn ng PCR c hiu vi các gen khác như ver, omt, apa trc tip trên các mu lc nghiên cu, to mt phương pháp b sung có hiu qu nhm chNn oán nhanh và chính xác nm bnh Aspergillus spp. sinh c t Aflatoxin trên lc cũng như các loi nông sn khác của Việt Nam Hình 6. Sơ đồ minh họa con đường sinh tổng hợp Aflatoxin B 1 ở nấm bệnh Aspergillus. Gen apa là gen điều khiển liên quan đến việc chuyển averufin thành versiconal hemiacetal acetate, dẫn đến sự tập trung acetate cần thiết trước khi bước vào con đường sinh tổng hợp Aflatoxin. Gen ver mã hoá cho enzyme chuyển hoá versicolorin A thành sterigmatocystin và gen omt mã hoá cho enzyme chuyển hoá sterigmatocystin thành O- methylsterigmatocystin là tiền chất của Aflatoxin B 1 . TÀI LIU THAM KHO 1. Kurtzman C.P., et al., 1987. Antonie Leeuwenhoek 53:147-157. 2. Yu J., et al., 2005. Rev. Iberroem.Miccil. 22:194-202. 3. Kolosova A.Y., et al., 2006. Anal. Bioanal.Chem. 384:286-94. 4. Jarvis B., D.A.L.Seiler., A.J.L.Ould and A.P.William, 1983. J.Appl.Bacteriol. 55:325-336. 5. Stroka J., Van O. R. and Anklam E, 2000. J.Chromatoqr.A. 904(2):251-6. 6. Jaimez J., Fente CA., Vazquez BI., Franco CM., Cepeda A., Mahuziez G., and Pronqnon P, 2000. J.Chromatoqr A. 882(1-2):1-10. 7. Bintvihok, A., Y. Adachi, and K. Hirano, 1992. Toxicon 30:492-497. 8. Cheng, R., J. Tsay, Y. Huang, and R. Y. Chiou, 2002. J. Food Prot., 65:840-844. 9. Farber, P., R. Geison, and W. H. Holzapfel, 1997. Int. J. Food Microbiol. 36:215-220. 10. Geisen, R, 1996. Syst. Appl. Microbiol. 19:388-392. 11. http://csm.colostate- pueblo.edu/biology/dcaprio/351L/Proje ct1351L.html 12. http://www.aspergillusflavus.org/pdfs/C TAB%20Method.pdf 13. http://www.protocol- online.org/prot/Protocols/Fungal- Genomic-DNA-Extraction-1200.html 14. http://www.upstate.edu/biochem/amber g/protocols/yeast_genomic_DNA.html 15. www.fgsc.net/fgn37/borges.html gười phản biện: gô Vĩnh Viễn T¹p chÝ khoa häc vµ c«ng nghÖ n«ng nghiÖp ViÖt Nam 10 . NGHIÊN CỨU XÁC ĐỊNH NẤM Aspergillus SINH ĐỘC TỐ AFLATOXIN TRÊN LẠC BẰNG PHẢN ỨNG PCR ĐẶC HIỆU Trần Tuấn Tú, Đàm Quang Hiếu, Hoàng Thị Ngát,. nhận biết được các nấm có khả năng sinh độc tố Aflatoxin với các nấm không sinh độc tố, bởi các nấm A. flavus được coi là loài sinh độc tố Aflatoxin rất mạnh trong khi nấm A. niger là loài. định nấm Apergillus sinh độc tố Aflatoxin bằng kỹ thuật PCR (Hình 6). Trong nghiên cứu có tính chất bước đầu thử nghiệm khả năng sử dụng phương pháp PCR đ chNn oán nm Apergillus sinh c