TRƯỜNG ĐẠI HỌC KHOA HỌC TỰ NHIÊN PHÒNG THÍ NGHIỆM TẾ BÀO GỐC ThS. Tô Minh Quân Kỹ thuật nuôi cấy tế bào động vật Kỹ thuật nuôi cấy tế bào động vật Nuôi cấy tế bào Nuôi cấy tế bào 1. Nuôi cấy sơ cấp 2. Nuôi cấy thứ cấp – Tạo dòng 3. Nhận diện tế bào 4. Bảo quản Nuôi cấy tế bào Nuôi cấy tế bào Nuôi cấy sơ cấp Nuôi cấy sơ cấp Nuôi cấy thứ cấp Nuôi cấy thứ cấp Mô Mô Dòng tế bào Dòng tế bào Cấy chuyền Cấy chuyền Xử lý theo mục đích Xử lý theo mục đích Nuôi cấy tế bào sơ cấp Nuôi cấy tế bào sơ cấp Nuôi cấy sơ cấp (primary culture) là quá trình nuôi tế bào trực tiếp từ mô trước lần cấy chuyền đầu tiên (subculture). Sau lần cấy chuyền đầu tiên, việc nuôi cấy được gọi là thứ cấp (secondary culture) Mô Mô Tế bào Tế bào Tế bào hợp dòng Tế bào hợp dòng Cấy chuyền Cấy chuyền Nuôi cấy tế bào Nuôi cấy tế bào Nuôi cấy bám dính Nuôi cấy bám dính Nuôi cấy tế bào Nuôi cấy tế bào Nuôi cấy huyền phù Nuôi cấy huyền phù Các loại tế bào bám dính vào bề mặt đĩa nuôi - Tế bào trung mô - Tế bào nội mô - Tế bào biểu bì Các loại tế bào bám dính vào bề mặt đĩa nuôi - Tế bào trung mô - Tế bào nội mô - Tế bào biểu bì Các loại tế bào không bám vào bề mặt đĩa nuôi - Tế bào gốc tạo máu - Tế bào ung thư Các loại tế bào không bám vào bề mặt đĩa nuôi - Tế bào gốc tạo máu - Tế bào ung thư Phần 1. Nuôi cấy tế bào bám dính Phần 1. Nuôi cấy tế bào bám dính Mẫu mô Mẫu mô Xử lí mẫu Xử lí mẫu Tách tế bào từ mô (Cơ học; Hóa học) Tách tế bào từ mô (Cơ học; Hóa học) Nuôi mảnh mô Nuôi mảnh mô Nuôi tế bào đơn Nuôi tế bào đơn Nuôi cấy tế bào sơ cấp Nuôi cấy tế bào sơ cấp Cắt nhuyễn mảnh mô Cắt nhuyễn mảnh mô Nuôi mảnh mô, tế bào Nuôi mảnh mô, tế bào Người hiến Người hiến Thu nhận mô Thu nhận mô o Các nguồn mẫu: mô lỏng; mô rắn o Bảo quản mẫu trong dung dịch bảo quản có bổ sung kháng sinh (PBS, ) o Đảm bảo điều kiện bảo quản mẫu. Vd: Nếu nơi thu mẫu xa PTN → Bảo quản trong đá (4 0 C) trong 72h o Bảo đảm an toàn, đặc biệt khi thao tác với mô có nguồn gốc từ người Nuôi cấy mảnh mô Nuôi cấy mảnh mô o Là việc nuôi cấy các mảnh mô in vitro. Trong quá trình nuôi cấy, các tế bào từ mảnh mô sẽ phát triển lan ra từ vùng mô trung tâm