 BÁO CÁO THỰC HÀNH VI SINH BÀI 1: KHẢO SÁT HỆ SINH VẬT TRONG NƯỚC THẢI Ngày thực hành 31/5/2010 I. DỤNG CỤ-MÔI TRƯỜNG-HÓA CHẤT: 1. Dụng cụ: Kính hiển vi quang học Phiến kính, lá kính Hộp Petri Ống nghiệm Que cấy đầu tròn, đầu nhọn Pipet Đèn cồn Bình tia 2. Môi trường- hóa chất: Nước muối sinh lý 0,9% Mẫu nước thải Nước cất vô trùng Cồn 96 0  Môi trường nuôi cấy vi khuẩn: Môi trường cao thịt – peptone: Cao thịt: 0,6g Peptone: 2g NaCl: 1g Agar: 4g Thêm nước cất đủ 200ml Lắc đều, điều chỉnh pH=7,0±0,2 Nấu sôi nhẹ, phân phối môi trường vào dụng cụ để khử trùng ở 121 0 C trong 30 phút.  .Môi trường nuôi cấy nấm men: Môi trường Hasen: Glucose, maltose (hoặc đường kính):10g Peptone: 2g K 2 HPO 4 : 0,6g MgSO 4 .7H 2 O: 0,4-1g Agar: 4g Thêm nước cất đủ: 200ml Lắc đều, điều chỉnh pH= 6,0±0,2 Nấu sôi nhẹ, phân phối môi trường vào các dụng cụ để khử trùng ở 121 0 C trong 30 phút.  Môi trường nuôi cấy nấm mốc: Môi trường czapek: Saccarose: 6g NaNO 3 : 6g K 2 HPO 4 : 0,2g MgSO 4 : 0,1g FeSO 4 : 0,1g Agar: 4g pH= 6,0±0,2 khử trùng 1atm/30 phút  Môi trường nuôi cấy xạ khuẩn: Môi trường Gause1: Tinh bột tan: 4g K 2 HPO 4 : 0,1g MgSO 4 .7H2O: 0,1g KNO 3 : 0,2g NaCl: 0,1g FeSO 4 : 0,02g Agar: 4g Thêm nước cất đủ: 200ml pH= 7,2 ÷ 7,4 khử trùng 1atm/30 phút  Môi trường nuôi cấy tảo: Môi trường Tamiya: KNO 3 : 1g MgSO 4 : 0,5g K 2 HPO 4 : 0,25g FeSO 4 .7H 2 O : 0,006g EDTA: 0,0074g Agar: 4g Thêm nước cất đủ: 200ml II. TIẾN HÀNH THÍ NGHIỆM:  Chuẩn bị một loạt các ống nghiệm chứa sẵn 9ml nước muối sinh lí vô trùng.  Hút 1ml mẫu nước ao, hồ, tiến hành pha loãng đến nồng độ 10 -6  Lấy 3 nồng độ pha loãng cuối cùng để cấy.  Hút 0.1ml mẫu ở mỗi nồng độ nhỏ lên bề mặt môi trường nuôi cấy trong các đĩa petri. cấy ria 3 đĩa ở nồng độ 10 -1 để phân lập.  Dùng que trang, trải đều mẫu lên khắp bề mặt thạch.  Để khô rồi lật úp đĩa lại, gói đem ủ. Riêng những đĩa Petri nuôi cấy tảo thì đem ra ngoài sáng, không cần ủ.  Sau 3-5 ngày xem kết quả. III. KẾT QUẢ: Khuẩn lạc số Hình dạng Đường kính (mm) Độ sáng,độ trong Màu sắc Bề mặt mép Vẽ hình 1 Hình cầu 5 Đục Trắng Phẳng Không đều 2 elip 3 Đục Trắng Phẳng Không đều 3 10 Trắng trong Trắng Lồi Không đều 4 elip 3 Trắng đục Trắng lõm Đều 5 Hoa 5 Trắng đục Trắng Không đều Hình tham khảo: BÀI 2. ĐỊNH LƯỢNG TẢO ĐƠN BÀO TRONG NƯỚC AO, HỒ BẰNG PHƯƠNG PHÁP ĐẾM TRỰC TIẾP Ngày thực hành 31/5/2010 I. DỤNG CỤ- MÔI TRƯỜNG-HÓA CHẤT: 1. Dụng cụ: khu ẩ n l ạ c n ấ m men khu ẩ n l ạ c n ấ m m ố c x ạ khu ẩ n Kính hiển vi quang học Phiến kính, lá kính Ống nghiệm Pipet 1ml Đèn cồn Bình tia 2. Môi trường-hóa chất: Nước muối sinh lý 0,9% Mẫu nước ao, hồ Nước cất vô trùng Cồn 96 0 II. TIẾN HÀNH THÍ NGHIỆM: Đặt lamelle sạch phủ lên khung đếm. Dùng ống nhỏ giọt hút dung dịch mẫu đã pha loãng, bỏ đi vài giọt đầu vào rãnh buồng đếm, dung dịch thấm vào kẽ buồng đếm và lamelle. Dung dịch chảy tràn từ từ vào các rãnh, lan tỏa lắp đầy khắp lamelle, hơi thừa một ít. Nếu bị giọt mắc lại trong lamelle thì phải làm lại. Đặt buồng đếm lên bàn kẹp của kính hiển vi, dùng kẹp cố định buồng đếm. Thao tác kính hiển vi, dùng vật kính x10 để điều chỉnh sơ bộ trước, sau đó dùng kính x40 để đếm. Đếm số tế bào trong 5 ô lớn (4 ô ở cạnh, 1 ô ở giữa), đếm lần lượt từng ô nhỏ trong 1 ô lớn. Trong tất cả các ô nhỏ cần đếm số tế bào nằm hẳn trong ô trước, sau đó đếm số tế bào nằm cạnh phía trên và cạnh bên phải ô. Đếm tất cả 80 ô nhỏ có trong 5 ô lớn (trường hợp: 1 ô lớn có 16 ô nhỏ). Hoặc đếm 125 ô nhỏ có trong 5 ô lớn (trường hợp: 1 ô lớn có 25 ô nhỏ). Công thức tính: Số tế bào/1 ml mẫu = (a x 4.000 x 1.000)/H a: Số tế bào trung bình có trong 1 ô nhỏ (V = 1/4.000 mm 3 ) 4.000 = Số qui đổi từ 1/4.000 mm 3 thành 1 mm 3 . 1.000 = Số qui đổi từ 1 mm 3 thành 1 ml (1ml = 1.000 mm 3 ) H= hệ số pha loãng ( ví dụ: H= 10 -2 ) II. KẾT QUẢ: Số tế bào/1 ml mẫu = (a x 4.000 x 1.000)/H =11×4000 ×10 3 =44×10 6 tế bào/1ml mẫu Một số loài tảo có trong nước Sunyra Chrysosphaerella Gloeobotrys Peranema Euglena Chaetoceros muelleri T ả o Chlorella T ả o Oo cystis T ả o Schroederia Một số loài tảo tiêu biểu BÀI 3. PHÂN LẬP VI SINH CỐ ĐỊNH ĐẠM TRONG ĐẤT Ngày thực hành 7/6/2010 I. DỤNG CỤ - MÔI TRƯỜNG - HÓA CHẤT: 1. Dụng cụ: Kính hiển vi quang học Phiến kính, lá kính Hộp Petri Ống nghiệm Que cấy đầu tròn, đầu nhọn Pipet 1ml, 10ml Đèn cồn Bình tia 2. Môi trường,hóa chất: Nước muối sinh lý 0,9% Mẫu đất vườn Nước cất vô trùng Cồn 96 0 Môi trường phân lập Azotobacter Môi trường asby: Glucose: 2g K 2 HPO 4 : 0,1g MgSO 4 : 0,04g NaCl: 0,04g K 2 SO 4 : 0,02g CaCO 3 : 1g Agar: 3-4g Thêm nước cất đủ 200ml Điều chỉnh pH = 7. Nấu sôi nhẹ cho tan agar. Phân phối môi trường vào bình tam giác. Hấp tiệt trùng ở 121 0 C trong 30 phút , để ấm (50-60 0 C) phân phối vào các đĩa petri. III. TIẾN HÀNH THÍ NGHIỆM: Phân lập Azotobacter: Cân 10g đất, cho vào một erlen 100ml đã có chứa sẵn 90ml nước muối sinh lý vô trùng, lắc đều 20 phút cho đất tan đều. Dùng que cấy vòng lấy dung dịch từ erlen cấy ria lên trên bề mặt môi trường Asby chứa sẵn trong đĩa petri. Các đĩa petri được lật úp và ủ ở nhiệt độ 26-28 0 C trong 2-3 ngày rồi xem kết quả. II. KẾT QUẢ: Khuẩn lạc số Hình dạng Đường kính (mm) Độ sáng,độ trong Màu sắc Bề mặt mép Vẽ hình 1 Hình cầu 5 Đục Trắng Phẳng Không đều 2 tròn 2 Đục Trắng đỏ lõm Đều 3 10 Sáng, trong Trắng trong Lồi,có màng nhầy Không đều 4 tròn 5 Sáng, trong Trắng trong Lồi, có màng nhầy Đều 5 Số tám 6 Sáng trong Có màng nhầy Đều 6 Bong hoa 10 Đục Trắng 7 tròn 5 Đục Trắng Phẳng Đều 8 tròn 4 Đục Trắng Lõm Đều 9 hoa 2 Đục Trắng Đều [...]... ngược hộp lồng petri và đưa vào tủ ấm, sau 2 đến 3 ngày xem kết quả III KẾT QUẢ: Vi sinh vật phân giải hợp chất phospho vô cơ khó tan Vi sinh vật phân giải hợp chất phospho hữu cơ khó tan Do lượng vi sinh vật quá nhiều nên không thể đếm được BÀI 12: ĐỊNH LƯỢNG COLIFORMS TRONG NƯỚC BẰNG PHƯƠNG PHÁP DÙNG PETRIFILM ngày thực hành: 02/08/2010 I DỤNG CỤ - MÔI TRƯỜNG – HÓA CHẤT: 1 Dụng cụ: Hộp petri ống nghiệm... ngày đọc kết quả  Môi trường PCA sau khi đổ xong, để nguội rồi đem ra hành lang (có thể tích 77.76m3), dở nắp hộp petri cho khong khí vào  Sau 10 phút đậy nắp lại đem ủ  Sau 3 ngày đọc kết quả III KẾT QUẢ: Vi sinh vật trong không khí Vi sinh vật trên bề mặt BÀI LÀM LẠI: ĐỊNH LƯỢNG TỔNG VI KHUẨN PHẢN NITRAT TRONG ĐẤT Ngày thực hành: 02/08/2010 III DỤNG CỤ-MÔI TRƯỜNG-HÓA CHẤT: 1 Dụng cụ: Ống nghiệm... mẫu lên khắp bề mặt thạch  Để khô rồi lật úp đĩa lại, gói đem ủ  Ủ trong 3-5 ngày III.KẾT QUẢ: Vì vi sinh vật mọc quá nhiều nên đếm không được Một số hình ảnh của nấm khuẩn lạc nấm men khuẩn lạc nấm mốc hình dạng nấm dưới kính hiển vi nấm mốc Bài 7: ĐỊNH LƯỢNG TỔNG VI SINH VẬT TRONG NƯỚC THẢI Ngày thực hành: 14/6/2010 I DỤNG CỤ - MÔI TRƯỜNG - HÓA CHẤT: 1 Dụng cụ: Ống nghiệm Pipet 1ml,10ml Erlen 250ml... Không có vsv Mật độ coliforms hiện diện trong 100ml mẫu: BÀI 16: ĐỊNH LƯỢNG TỔNG VI SINH VẬT TRONG KHÔNG KHÍ Ngày thực hành 02/08/2010 I DỤNG CỤ-MÔI TRƯỜNG-HÓA CHẤT: 1 Dụng cụ: Hộp petri Ống nghiệm Tăm bông Pipet 1 ml, 10ml Đèn cồn Bình tia 2 Môi trường-hóa chất: Nước muối sinh lý 0.9% Mẫu đất Nước cất  Môi trường kiểm tra vi sinh vật bề mặt (môi trường czapek): Môi trường czapek: Saccarose: 6g NaNO3:... thành ống nghiệm nhưng không để cho giấy quỳ đụng vào thành ống  Ủ trong 72 giờ  Môi trường thạch đã đông lại thì hút 0.1ml mẫu cho vào từng hộp Petri, dùng que trang trải đều lên bề mặt thạch  Ủ trong 72 giờ III KẾT QUẢ: Định tính vi sinh vật amon: Độ pha loãng Đục môi trường Tạo bông Tạo cặn Sinh NH3 Sinh H2S 10-5 có có có Có Có 10-6 có có có có có 10-7 có có có Không có Không có Định lượng vi. .. =160×104MPN/g Ở nồng độ 10-6:N=14×106MPN/100ml =14×105MPN/g N: mật độ vi khuẩn phản nitrat hiện diện trong MPN/100ml mẫu Định tính vi khuẩn phản nitrat: Độ pha loãng Đục môi trường Sinh khí pH môi trường 10-4 có Có Giảm 10-5 Có Không thấy Giảm 10-6 có Không thấy Giảm BÀI 10: ĐỊNH LƯỢNG TỔNG VI KHUẨN PHÂN GIẢI CÁC HỢP CHẤT KHÓ TAN TRONG ĐẤT Ngày thực hành 2/8/2010 I MÔI TRƯỜNG, HÓA CHẤT, DỤNG CỤ: 1 Dụng cụ: Hộp... 2g Nước cất đủ 200ml Nước muối sinh lý 0.9% Mẫu nước thải II TIẾN HÀNH THÍ NGHIỆM:  Nấu môi trường xong, ta phân phối môi trường vào trong ống nghiệm rồi thả ống duham vào đem đi hấp  Lấy pipet 10ml hút 2ml mẫu nước thải cho vào ống nghiệm chứa 18ml nước muối sinh lí Đảo đều ta được độ pha loãng 10-1  Tiến hành pha loãng mẫu tiếp tục theo phương pháp pha loãng bậc 10 thành các nồng độ pha loãng 10-3,... Pipet 1 ml, 10ml 2 Môi trường, hóa chất: Nước muối sinh lý 0.9%, Mẫu đất Nước cất vô trùng Môi trường nuôi cấy: + Môi trường kiểm tra vi sinh vật phân giải các hợp chất phospho vô cơ khó tan Glucoza 4g Ca3(PO4)2 2g (NH4)2SO4 0.2g KCl 0.08g MgSO4.7H2O 0.04g MnSO4 0.004g FeSO4 0.004g Nấm men 0.2g Agar 8g Nước cất đủ 400ml pH 6.8 – 7.0 + Môi trường kiểm tra vi sinh vật phân giải các hợp chất phospho hữu cơ...  Môi trường kiểm tra vi sinh vật trong không khí (môi trường PCA): Cân 4.8g pha trong 200ml nước cất.đem nấu và hấp khử trùng II TIẾN TRÌNH THÍ NGHIỆM:  Chuẩn bị 1 ống nghiệm chứa 10ml nước muối sinh lí  Trong điều kiện vô trùng nhúng tăm bông vào nước muối sinh lí để tẩm ướt  Quẹt bong lên bề mặt tủ lạnh với 1 diện tích 100 cm2  Cho bông vào ống nghiệm có sẵn nước muối sinh lí rồi khoáy đều ... N=1100×105MPN/100ml=160×104MPN/g Ở nồng độ 10-6:N=120×106MPN/100ml=14×105MPN/g N: mật độ vi khuẩn phản nitrat hiện diện trong MPN/100ml mẫu BÀI 9: ĐỊNH LƯỢNG TỔNG VI KHUẨN PHẢN NITRAT TRONG ĐẤT Ngày thực hành 28/6/2010 I DỤNG CỤ - MÔI TRƯỜNG - HÓA CHẤT: 1 Dụng cụ: Ống nghiệm Pipet 1ml,10ml Erlen 250ml Đèn cồn Bình tia 2 Môi trường-hóa chất: Nước muối sinh lý 0.9% Mẫu đất Nước cất Cồn 900 Môi trường Giltay:  Dung dịch . BÁO CÁO THỰC HÀNH VI SINH BÀI 1: KHẢO SÁT HỆ SINH VẬT TRONG NƯỚC THẢI Ngày thực hành 31/5/2010 I. DỤNG CỤ-MÔI TRƯỜNG-HÓA CHẤT: 1. Dụng cụ: Kính hiển vi quang. tính vi sinh vật amon: Độ pha loãng Đục môi trường Tạo bông Tạo cặn Sinh NH 3 Sinh H 2 S 10 -5 có có có Có Có 10 -6 có có có có có 10 -7 có có có Không có Không có Định lượng vi sinh. loài tảo tiêu biểu BÀI 3. PHÂN LẬP VI SINH CỐ ĐỊNH ĐẠM TRONG ĐẤT Ngày thực hành 7/6/2010 I. DỤNG CỤ - MÔI TRƯỜNG - HÓA CHẤT: 1. Dụng cụ: Kính hiển vi quang học Phiến kính, lá kính Hộp