61 TP CHÍ KHOA HC VÀ CÔNG NGH Tp 44, s 2, 2006 Tr. 61- 64 NGHIÊN CU IN VIVO TÁC DNG NI TIT KI U OESTROGEN CA ISOFLAVONES CHIT XUT T SN DÂY PUERARIA THOMSONII BENTH.  TH! HOA VIÊN I. M U Sn dây là mt loài cây thuc lâu i  Vit Nam và c tr ng khá ph% bi'n t( vùng mi*n núi 'n  ng b,ng. T( lâu, y h0c dân gian ã coi sn dây nh mt lo3i thuc có th5 ch6a c nhi*u ch7ng bnh nh c8m st phong nhit, ki't l9 kèm theo st, gi8i nhit, Mt trong s các nhóm ch=t c ch7ng minh là có tác d>ng ch6a bnh c?a sn dây là các d@n ch=t thuc nhóm isoflavonoid có ho3t tính oestrogen, hay còn g0i là các phytoestrogen. Dây là mt nhóm ho3t ch=t a d3ng có ngu n gc t( thEc vFt mà nh6ng ch=t này có c=u trúc và ch7c nGng tHng tE nh hoocmon estrogen c?a ng vFt có vú, có kh8 nGng thay th' estrogen trong cH th5 ph> n6. Các phytoestrogen có tác d>ng ngGn ng(a các bi5u hin ri lo3n hoocmon cJng nh làm gi8m nguy cH mc các bnh v* tim m3ch, loãng xHng, ung th vú,  ph> n6 thi kì ti*n mãn kinh và còn có tác d>ng phòng chng ung th ti*n lit tuy'n  nam giMi. Vì vFy, nhi*u nghiên c7u ã xem phytoestrogen nh mt sE lEa ch0n cho gi8i pháp thay th' hoocmon (hormone replacement therapy- HRT) và gi8i pháp thay th' estrogen (estrogen replacement therapy- ERT). U Vit Nam, sn dây có 5 loài, ph% bi'n nh=t là loài Pueraria thomsonii Benth. c tr ng 5 làm thEc phXm và làm thuc. D5 góp phYn nghiên c7u và khai thác các ho3t ch=t có ho3t tính sinh h0c t( sn dây, chúng tôi ã ti'n hành nghiên c7u chi't xu=t các phytoestrogen t( sn dây và th[ nghim ho3t tính c?a chúng trên ng vFt. II. NGUYÊN LIU VÀ PHNG PHÁP NGHIÊN CU 1. Nguyên li u và #$i t&'ng nghiên c*u Nguyên liu: Cao chi't isoflavone t( c? sn dây Pueraria thomsonii Benth, huyn Lâm SHn, t^nh Hoà Bình. Ni dung nghiên cu: Tác d>ng ni ti't ki5u oestrogen c?a isoflavone chi't xu=t t( sn dây trên chut nht trng. i tng th nghim: Ch0n chut nht trng cái kho_, nhanh nh`n, lông mt, mt h ng, uôi h ng rõ tbnh m3ch có tr0ng lng t( 14 - 17 g. Dng c: Kính hi5n vi soi t' bào, lam kính, que l=y t' bào, kim tiêm, bàn m%, pince, kéo, gi=y o pH, bông, Hoá ch"t: Dung d9ch chuXn EDP (Estradiol dipropionat), thuc nhum diêm sa, c n 90 o , nMc c=t, 2. Ph&,ng pháp nghiên c*u Ti'n hành theo phHng pháp Allen- Doisy: 62 B&c 1: C 9nh chut n,m s=p trên bàn m%. B&c 2: Ct bm hai bu ng tr7ng, th? thuFt c ti'n hành  vùng hông, ct xong bu ng tr7ng ti'n hành khâu 2 lMp, lMp cH r i 'n lMp da. B&c 3: Sau khi ct bm hai bu ng tr7ng cho chut ngh^ 15 ngày. D'n ngày th7 16 ki5m tra 5 lo3i bm nh6ng con thi'n sót. B&c 4: Chut không thi'n sót c chia thành 3 lô thí nghim sau: + Lô chuXn: Tiêm EDP vMi li*u 0,05mg/con (tiêm mt lYn t3i bp ùi). + Lô ch7ng: ung nMc un sôi 5 ngui 0,5 ml / con / ngày. + Lô th[: Chut c ung cao chi't vMi li*u 150 mg / 0,5 ml nMc c=t / con / ngày. Lô ch7ng và lô th[ chut c ung li*n trong 7 ngày. Ngày nào cJng ki5m tra t' bào âm 3o, pH âm 3o 5 theo dõi sE xu=t hin các t' bào s(ng. III. K0T QU3 VÀ TH3O LU5N 1. Ch6 tiêu quan sát - T' bào âm 3o: Tiêu b8n dHng tính: là nh6ng t' bào s(ng hoá trên toàn b tiêu b8n; Tiêu b8n âm tính: không có t' bào s(ng, ch^ có b3ch cYu và mt ít t' bào nhân trên tiêu b8n. - pH âm 3o: theo dõi sE bi'n %i pH âm 3o dMi tác d>ng c?a isoflavone chi't xu=t t( sn dây. 2. K:t qu; th< nghi m B+ng 1. K't q?a th[ nghim in vivo tác d>ng ni ti't ki5u estrogen c?a cao chi't isoflavone t( c? sn dây Pueraria thomsonii Benth. pH âm 3o TrMc  Sau  Ngày có t ' bào s(ng S con có t' bào s(ng T^ l % có t' bào s(ng Ghi chú Lô ch7ng (ung n Mc un sôi 5 ngui) 6,6 6,8 4 1/27 3,7% T' bào s (ng xu=t hin r=t ít vào ngày th 7 4, ch^ có t' b ào nhân và b3ch cYu. Lô chuXn (tiêm EDP) 6,8 7,0 1 28/28 100% Có t' bào s (ng t( ngày th7 17. Lô th[ (ung cao chi't) 6,7 6,9 4 17/33 51,5% Có t' bào s (ng t( ngày th7 4 7. ( : i*u tr9) Nhn xét: - U lô chut c tiêm dung d9ch chuXn EDP, ki5m tra t' bào âm 3o cho th=y: các t' bào s(ng xu=t hin t( ngày th7 nh=t 'n ngày th7 7 trên 100% s chut th[ nghim. - U lô chut ch^ ung nMc, hYu nh không có t' bào s(ng, ch^ có t' bào nhân và b3ch cYu. Các tiêu b8n c xem là âm tính. - U lô chut cho ung cao chi't, các t' bào s(ng xu=t hin t( ngày th7 4 'n ngày th7 7 trên 51,5% s chut th[ nghim. 63 - pH môi trng âm 3o c?a các lô chut hYu nh không b9 8nh hng trong sut thi gian th[ nghim. Nh vFy, th[ nghim tác d>ng ni ti't ki5u oestrogen c?a cao chi't t( sn dây cho k't qu8 dHng tính vMi li*u 150 mg / chut / ngày, cao chi't có tác d>ng ni ti't ki5u oestrogen vMi k't qu8 là 51,5%. So sánh vMi k't qu8 th[ nghim  phòng Dông y thEc nghim, Vin y h0c c% truy*n Vit Nam thì li*u th[ nghim c?a cao chi't isoflavone t( sn dây tHng i cao ( cm ba lá là 50 mg / con / ngày,  Fu tHng là 25 mg / con / ngày). Tuy nhiên, k't qu8 th[ nghim có bi5u hin dHng tính trên 51,5% s chut cho th=y cao chi't isoflavone t( sn dây có tác d>ng ni ti't ki5u oestrogen khá rõ rt. Sau ây là hình 8nh mt s tiêu b8n v* sE xu=t hin các t' bào s(ng  các lô chut th[ nghim: Hình 1. Tiêu b8n t' bào c?a chut  lô ch7ng Hình 2. Tiêu b8n t' bào c?a chut  lô chuXn Hình 3. Tiêu b8n t' bào c?a chut  lô th[ IV. K0T LU5N Cao chi't isoflavone t( c? sn dây Pueraria thomsonii Benth. có ho3t tính ni ti't ki5u estrogen trên 51,5% chut nht trng cái vMi li*u ung 150 mg / con / ngày. Di*u này cho th=y ho3t tính estrogen c?a hun hp isoflavone chi't xu=t t( c? sn dây là khá rõ rt. 64 Li cm n. Tác gi( xin trân tr-ng c(m /n Hi0p h2i các tr34ng 56i h-c V3/ng quc B: v< h=p tác phát tri>n tr34ng 56i h-c (Flemish Interuniversity Council for University Development cooperation - VLIR UOS) 5ã tài tr= kinh phí giúp chúng tôi thSc hi0n nghiên cUu này. TÀI LIU THAM KH3O 1. Bài gi8ng dc liu - TFp 1, Trng D3i h0c Dc Hà Ni. 2. Cây thuc và ng vFt làm thuc  Vit Nam - TFp 2, Nhà xu=t b8n Khoa h0c và Kv thuFt, Hà Ni, 2004. 3. Võ VGn Chi - T( i5n cây thuc Vit Nam, Nhà xu=t b8n Y h0c, 1999. 4. Dc i5n Vit Nam - B Y t', 2002. 5. Du T=t Li - Nh6ng cây thuc và v9 thuc Vit Nam, Nhà xu=t b8n Y h0c, 2001. 6. P. Diel, S. Schumidt, and G. Vollmer - In vivo test system for quantitative and qualitative analysis of the biological activity of phytoestrogens, Journal of chromatography B, 777 (2002) 192-201. 7. Joan Garey, Maria A. Morgan and et al - Effects of the Phytoestrogen coumestrol on locomotor and fear- related behavior in female mice, Hormone and Behavior 40 (2001) 65- 76. 8. Lisa A. Henry and Diane M. Witt - Phytoestrogen effects on reproductive physiplogy and behavior in female rats, Hormone and Behavior 41 (2001) 220-228. 9. Stefan O. Mueller - Overview of in vitro tools to assess the estrogenic and antiestrogenic activity of phytoestrogens, Journal of chromatography B 777 (2002) 155-165. SUMMARY RESEARCH IN VIVO ON ESTROGEN ACTIVITY OF ISOFLAVONES FROM KUDZU PUERARIA THOMSONII BENTH. Kudzu is the popular medicinal herb in Vietnam. For a long time, Vietnamese have used Kudzu root’s powder to prepare the refreshing water in summer. In the traditional medicine, kudzu root is used alone or is combined with the others to treat many of disease. Kudzu root has not only refreshing and detoxifying effect, but it contains also isoflavones. They have a week estrogen activity (named phytoestrogens), they can function as anti-estrogens by competing with the more potent endogenous estrogens for binding to the estrogen receptor. Moreover, phytoestrogens have high antioxidant effect and can promote bone health. Phytoestrogens can prevent and treat osteoporosis, heart disease, breast cancer, prostate cancer and symptoms associated with menopause of woman. Recent studies showed that phytoestrogens specifically inhibit the activity of various growth-regulating enzymes, so that they have the cancer cell growth inhibitory effects and they can also against non-hormone related cancers, such as cancer of the colon, rectum, lung and stomach. In this paper, we study on the estrogen activity of isoflavones from kudzu root Pueraria thomsonii Benth planted in Hoabinh province of Vietnam. Research result showed that the isoflavone extract from Pueraria thomsonii Benth. have estrogen activity on 51.5% of tested white female mice with the oral dose 150 mg / mouse / day. 8a ch9: Nh:n bài ngày 22 tháng 2 n=m 2005 Trng D3i h0c Bách khoa Hà Ni. . 2, 2006 Tr. 61- 64 NGHIÊN CU IN VIVO TÁC DNG NI TIT KI U OESTROGEN CA ISOFLAVONES CHIT XUT T SN DÂY PUERARIA THOMSONII BENTH.  TH! HOA VIÊN I. M U Sn dây là mt loài cây thuc. KUDZU PUERARIA THOMSONII BENTH. Kudzu is the popular medicinal herb in Vietnam. For a long time, Vietnamese have used Kudzu root’s powder to prepare the refreshing water in summer. In the traditional. colon, rectum, lung and stomach. In this paper, we study on the estrogen activity of isoflavones from kudzu root Pueraria thomsonii Benth planted in Hoabinh province of Vietnam. Research result