TCNCYH 38 (5) - 2005 BƯỚC ĐẦU NGHIÊN CỨU TÁC DỤNG CỦA NẤM LINH CHI VIỆT NAM (GANODERMA LUCIDUM) QUA MỘT SỐ CHỈ SỐ LIPID MÁU Ở CHUỘT CỐNG Nguyễn Thị Mai Anh, Đào Văn Phan, Phạm Thị Vân Anh Bộ môn Dược lý – Trường Đại học Y Hà Nội . r / ỉ t NLC có nhiều công dụng như tăng cường trí nhớ, chữa viêm gan, làm tăng tuổi thọ chúng tôi giả thiết ằng NLC có thể có khả năng làm hạ lipid máu. Mục tiêu: Đánh giá tác dụng của cao lỏng nấm linh chi Việt Nam qua một số chỉ số lipid máu chuột cống. Đối tượng và phương pháp: Chuột cống được uống cholesterol liên tục trong 8 tuần để gây tăng lipid máu. Từ tuần thứ 5, chuột cống được uống đồng thời cholesterol và cao lỏng nấm linh chi với liều 2g/kg, 4g/kg liên tục trong 4 tuần. Kết quả: Cao lỏng nấm linh chi có tác dụng làm giảm các chỉ s ố cholesterol toàn phần, triglycerid và LDL - C, đồng thời làm tăng HDL - C huyết tương chuột cống trắng được gây tăng lipid máu thực nghiệm. Tác dụng của linh chi ở 2 liều là tương đương nhau và tương đương với Lipid (gemfibrozil) liều 140mg kg. Kết luận: Cao lỏng nấm linh chi liều 2g/kg và 4g/kg cân nặng có tác dụng hạ lipid máu ở chuột cống thực nghiệm. Từ khoá: nấm linh chi, lipid máu, chuột cống tăng cholesterol. I. ĐẶT VẤN ĐỀ Nấm linh chi (NLC) có tên khoa học là Ganoderma lucidum (Leyssex. Fr.) Krst, thuộc họ nấm gỗ Ganodermataceae, còn gọi là linh chi thảo, nấm trường thọ, nấm lim, thuốc thần tiên. Theo y học cổ truyền, NLC có nhiều công dụng như tăng cường trí nhớ, chữa viêm gan, làm tăng tuổi thọ… [2]. Một số tác giả nước ngoài đã cho thấy NLC tác dụng chống oxyhoá, điều hoà miễn dịch, chống khối u, bảo vệ phóng xạ, chống lão hoá [5], [6], [7]. Trong mộ t nghiên cứu trước, chúng tôi đã chứng minh tác dụng bảo vệ gan của NLC trên thực nghiệm [1]. Từ những tác dụng chống oxy hoá, bảo vệ gan của NLC; chúng tôi giả thiết rằng NLC có thể có khả năng làm hạ lipid máu. Vì vậy đề tài nhằm mục tiêu: Đánh giá tác dụng của NLC Việt Nam qua một số ch số lipid máu trên mô hình thực nghiệm gây ăng cholesterol ở chuột cống. II. CHẤT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 1. Chất liệu nghiên cứu - Thuốc: Nấm linh chi Việt Nam sau khi thu hoạch được phơi sấy khô để cả cuống và mũ nấm. Trong nghiên cứu, thuốc được bào chế ở dạng cao lỏng, có dung môi là nước, cô đặc đến tỷ lệ 1:2 (2 ml dung dịch cao lỏng chứa 1 gam nấm). - Hoá chất: + Lopid viên nang chứa gemfibrozil 300mg của Hãng Pfizer, Mỹ. + Cholesterol dạng bột của hãng Merck - Germany. + Các loại hoá chất chuẩn để định lượng cholesterol toàn ph ần, triglycerid, HDL - cholesterol, LDL - cholesterol của hãng Hospitex Diagnostics (Italy). + Xét nghiệm sinh hoá máu bằng máy Screen master của hãng Hospitex Diagnostics (Italy). 2. Súc vật thực nghiệm Chuột cống trắng, cả 2 giống, khoẻ mạnh, trọng lượng 160 - 200g, được nuôi trong điều kiện đầy đủ thức ăn và nước uống tại phòng thí nghiệm của Bộ môn Dược lý. 3. Phương pháp nghiên cứu Gây tăng cholesterol máu theo phương pháp của Trovato A. [8]. Chuột cống trắng được uống cholesterol với liều 0,5 g/kg thể trọng (dưới dạng dầu cholesterol 10%) mỗi ngày một lần, liên tục trong 8 tuần. Chuột cống trắng được chia thành 6 lô: - Lô 1 (chứng) (n = 10): Chuột được uống nước cất cùng thể tích như lô 2, liên tục trong 8 tuần. - Lô 2 (n = 10): Gây tăng cholesterol máu bằng cách hàng ngày cho chuột uống dầu cholesterol 10% (0,5 ml/100gchuột), liên tục trong 8 tuần. Bắt 1 TCNCYH 38 (5) - 2005 đầu từ tuần thứ 5, sau 2 giờ uống cholesterol, chuột được uống thêm nước cất 0,5ml/100g. - Lô 3 (n = 10): Uống dầu cholesterol 10% như lô 2, liên tục trong 8 tuần. Bắt đầu từ tuần thứ 5, sau 2 giờ uống cholesterol, chuột được uống thêm Lopid liều 140mg/kg thể trọng với thể tích như lô 2. - Lô 4 (n = 10): Uống dầu cholesterol 10% như lô 2. Bắt đầu từ tuần thứ 5, sau 2 giờ uống cholesterol, chuột được uống thêm cao lỏng NLC liều 2g /kg thể trọng với thể tích như lô 2. - Lô 5 (n = 10): Uống dầu cholesterol 10% như lô 2. Bắt đầu từ tuần thứ 5, sau 2 giờ uống cholesterol, chuột được uống thêm cao lỏng NLC liều 4g /kg thể trọng với thể tích như lô 2. Sau 4 tuần uống cholesterol nhưng chưa uống các thuốc thử, cho chuột nhịn ăn qua đêm, giết một nửa số chuột ở lô 1, ở lô 2, 3, 4, 5 giết 3 con mỗi lô (t ổng số 12 con uống cholesterol liên tục 4 tuần bị giết), lấy máu tim để định lượng cholesterol toàn phần (TC), triglycerid (TG), HDL - C, LDL - C nhằm khẳng định chuột đã bị tăng cholesterol máu. Những chuột còn lại vẫn tiếp tục được thí nghiệm theo mô hình trên. Từ tuần thứ 5, các lô chuột được uống thêm NLC và Lopid. Sau 8 tuần, cho chuột nhịn ăn qua đêm, giết toàn bộ số chuột còn lại ở các lô, lấy máu tim để định l ượng cholesterol toàn phần (TC), triglycerid (TG), HDL - C, LDL - C. 0 tuÇn 4 tuÇn 8 uÇn Sơ đồ nghiên cứu III. KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU 1. Ảnh hưởng của uống cholesterol ở chuột cống trắng qua một số chỉ số lipid máu Cho chuột cống uống cholesterol 0,5g/kg liên tục trong 4 tuần, để gây mô hình tăng lipid máu Bảng 1. Ảnh hưởng của cholesterol qua một số chỉ số lipid máu chuột sau 4 tuần uống cholesterol Các chỉ số lipid máu Lô nghiên cứu N TC (mmol/l) HDL - C (mmol/l) LDL - C (mmol/l) TG (mmol/l) Nước cất 5 1,38 ± 0,30 0,24 ± 0,05 0,91 ± 0.28 0,50 ± 0,08 Cholesterol 10% 12 2,32 ± 0,42 p < 0,01 0.38 ± 0,11 p < 0,05 1,45 ± 0,37 p < 0,01 0,93 ± 0,33 p < 0,05 Kết quả ở bảng 1 cho thấy: Tất cả các chỉ số lipid máu ở chuột uống cholesterol đều tăng lên có ý nghĩa so với nhóm chứng chỉ uống nước cất (p < 0,05 - 0,01). 2. Tác dụng của NLC hạn chế rối loạn lipid máu do uống cholesterol Bảng 2 ghi lại các chỉ số lipid ở các lô chuột sau 8 tuần uống cholesterol. Trong đó lô 2 không được điều trị, dùng làm chứng, còn các lô khác, từ tuần thứ 4 cho uống song song các thuốc điều trị Lopid (lô 3) hoặc NLC (lô 4, lô 5). t N−ícc cÊt N − ícc cÊt L« 1 Cholesterol 10% Cholesterol 10% L« 2 Cholesterol 10% Cholesterol 10% + Lo p id L« 3 Cholesterol 10% Cholesterol 10% + NLC 2 g L« 4 Cholesterol 10% Cholesterol 10% + NLC 4 g L« 5 2 TCNCYH 38 (5) - 2005 Bảng 2. Tác dụng của nấm linh chi trên lipid máu chuột cống ; , - t %: mức Ç hoặc È so với lô 2 *, **, ***: p < 0,05 ; < 0,01 ; < 0,001. Kết quả ở bảng 2 cho thấy: ở tuần thứ 8, các chỉ số lipid máu của lô 2 đều khác biệt có ý nghĩa so với lô 1. Lopid liều 140mg/kg (lô 3) và NLC với liều 2g/kg, 4g/kg (lô 4, 5) đều có tác dụng hạn chế sự rối loạn cả 4 chỉ số lipid máu, làm giảm rõ rệt sự tăng TC, TG LDL - C, đồng thời làm tăng HDL C (p < 0,05 - 0,001). Tác dụng hạn chế sự tăng lipid máu khi uố ng cholesterol của NLC ở 2 liều là ương đương nhau (p > 0,05) và tương đương với Lopid liều 140mg/kg. Tuy nhiên ở lô dùng liều 4g/kg tác dụng hạn chế sự rối loạn các chỉ số lipid có xu hướng tốt hơn. IV. BÀN LUẬN Cho chuột uống cholesterol với liều 0,5g/kg trong thời gian 4 tuần trở lên đã có tác dụng làm tăng các chỉ số lipid máu rõ rệt. Các kết quả này đã cho thấy có thể áp dụng mô hình của Trovato A. trên chuột cống trắng Việt Nam để gây tăng lipid máu. Trong nghiên cứu trước về tác dụng bảo vệ gan của NLC [1], chúng tôi đã dùng NLC với liều 4g/kg là liều gấp 2 lần liều dùng trên lâm sàng. Tuy nhiên vì điều trị tăng lipid máu sẽ phả i dùng thuốc gần như suốt đời cho nên chúng tôi đã thử đánh giá tác dụng của thuốc với liều thấp hơn một nửa. Kết quả đã cho thấy liều 2g/kg và 4g/kg có tác dụng hạ rõ rệt sự tăng TC, TG, LDL - C, đồng thời làm tăng HDL - C tương đương nhau và bằng với Lopid liều 140mg/kg. Lopid (gemfibrozil) thuộc nhóm acid fibric có tác dụng hạ lipid máu theo nhiều cơ chế: ức chế tổng hợp và làm tăng th ải trừ. Hiện nay gemfibrozil vẫn là thuốc được chọn lựa cho điều trị tăng lipid máu týp III và tăng triglycerid máu [4]. Nấm linh chi với liều thực nghiệm của chúng tôi đã có tác dụng hạ các chỉ số lipid máu tương đương với Lopid liều 140mg/kg. Các chỉ số lipid máu Lô nghiên cứu N TC (mmol/l) HDL - C (mmol/l) LDL - C (mmol/l) TG (mmol/l) 1. Lô Nước cất 5 1,38 ± 0,21 0,31 ± 0,03 0,82 ± 0,19 0,56 ± 0,04 2. Lô Cholesterol 7 2,44 ± 0,21 *** 0,36 ± 0,11 * 1,70 ± 0,26 ** 0,80 ± 0,10 * 3. Lô 3 Cholesterol + Lopid 140mg/kg 7 1,50 ± 0,14 (È38,5%) *** 0,57 ± 0,20 (Ç58,3%) * 0,70 ± 0,21 (È58,8%) *** 0,50 ± 0,04 (È 37,5%) ** 4. Lô 4 Cholesterol + NLC 2g/kg 7 1,55 ± 0,23 (È36,5%) *** 0,57 ± 0,05 (Ç 58,3%) ** 0,68 ± 0,23 (È 60%) *** 0,60 ± 0,08 (È 25%) * 5. Lô 5 Cholesterol + NLC 4g/kg 7 1,46 ± 0,10 (È40,2%) *** 0,57 ± 0,04 (Ç 58,3%) ** 0,67 ± 0,13 (È60,6%) *** 0,51 ± 0,10 (È 36,3%) ** Mô hình thực nghiệm tăng cholesterol trên chuột cống bằng cho uống cholesterol thường chỉ dùng cho thử các thuốc có ảnh hưởng làm giảm hấp thu, hoặc tăng giáng hoá, tăng th ải trừ cholesterol, ít có giá trị đánh giá tác dụng ngăn cản tổng hợp cholesterol [3]. Trong thực nghiệm, chúng tôi đã chọn 2 liều 2g/kg và 4g/kg, kết quả cho thấy tác dụng là tương đương nhau. Phải chăng 2g/kg là liều "trần" gây ra tác dụng "trần". Để kiểm tra, chúng tôi lặp lại 1 thí nghiệm khác với liều 6g/kg. Kết quả cho thấy: thuốc làm giảm rõ rệt sự tăng TC, TG, LDL - C, đồng thời làm tăng HDL - C, các kết quả này cũng không khác biệt so với liều 2g/kg (p > 0,05). Như vậy, liều 2g/kg đúng là liều "trần" gây ra tác dụng "trần", liều cao hơn không có tác dụng cao hơn. Các tác dụng khác như chống oxy hoá, bảo vệ gan thường dùng NLC liều 4g/kg cho nên chúng tôi không có điều kiện thử tác dụng của thuốc với liều thấp hơn 2g/kg. Từ kết quả này, chúng tôi cho rằng NLC gây hạ lipid máu theo một cơ chế hoặc là ức chế quá trình hấp thu tích cự c hoặc là tăng quá trình thải trừ tích cực cholesterol. Để làm sáng tỏ điều này cần có những nghiên cứu tiếp. Theo Sun 3 TCNCYH 38 (5) - 2005 J. [7], tác dụng chống oxy hóa, bảo vệ gan của NLC là do NLC có chứa các peptid có tác dụng chống oxy hoá, làm vững bền màng tế bào do ức chế quá trình peroxid hóa màng. V. KẾT LUẬN - Nấm linh chi với liều 2g/kg, 4g/kg có tác dụng làm giảm các chỉ số cholesterol toàn phần, triglycerid và LDL - C, đồng thời làm tăng HDL - C trong huyết tương chuột cống trắng có tăng cholesterol máu thực nghiệm. - Tác dụng hạ lipid máu của nấm linh chi ở 2 liều là tương đương nhau, tương đương với Lopid liều 140mg/kg. TÀI LIỆU THAM KHẢO 1. Đỗ Tất Lợi (1999), Những cây thuốc và vị thuốc Việt Nam, Nhà xuất bản Y học Hà Nội; tr 75 - 77. 2. Nguyễn Thị Mai Anh, Đào Văn Phan (2003), Nghiên cứu tác dụng bảo vệ gan của nấm linh chi Việt Nam trên chuột gây suy gan thực nghiệm, Tạp chí Nghiên cứu Y học, số 4, tr 29 - 34. 3. Gerhard Volgel H. (2002), Drug discovery and evaluation, Springer, pp. 1097. 4. Goodman and Gilman’s (2001), The pharmacological basic of therapeutics (10 th edition), pp. 993 - 995. 5. Kubo N. et al (2005), Protective effects of a water - soluble extracts from cultured medium of Ganoderma lucidum mycelia and Agaricus blazei murill against X - irradiation in B6C3F1 mice: increased small intestinal crypt survival and prolongation of average time to animal death, Int J Mol Med, Vol 15 (3), pp 401 - 6. 6. Lin Z. , Zhang H. (2004), Anti- tumor and immunoregulatory activities of Ganoderma lucidum and its possible mechanisms, Acta Pharmacol, Vol 25 (11), pp 1387 - 95. 7. Sun J. et al (2004), Novel antioxidant peptids from fermented mushroom Ganoderma lucidum, Agric Food Chem, Vol 52 (21), pp 6646 - 52. 8. Trovato A. et al (1996), Effects of fruit juices of Citrus sinensis L and Citrus limon L on experimental hypercholesterolemia in the rat, Phytomedicine Vol 23; pp 221 - 7. Summary EFFECT OF GANODERMA LUCIDUM ON CHOLESTEROL DRUNK- INDUCED HYPERLIPIDEMIA RATS Objectives: To evaluate the influence of Ganoderma lucidum on cholesterol drunk - induced hyperlipidemia rats. Methods: Rats were received cholesterol in the oral daily during 8 consecutive weeks in order to hyperlipidemia rats. From 5th week, extract of Ganoderma lucidum (GL) at the doses of 2g/kg, 4g/kg administered orally was investigated in cholesterol drunk - induced hyperlipidemia rats. Results: GL significantly decreased plasma triglycerid, total cholesterol, LDL - C, but increased HDL - C. The effect of GL on plasma lipid level at the oral doses of 2g/kg, 4g/kg was equal to each other and to Lopid (gemfibrozil) at the dose of 140mg/kg. Conclusions: GL have a hypolipidemia effect on rats Key words: Ganoderma lucidum, plasma lipid level, rats. 4 . TCNCYH 38 (5) - 2005 BƯỚC ĐẦU NGHIÊN CỨU TÁC DỤNG CỦA NẤM LINH CHI VIỆT NAM (GANODERMA LUCIDUM) QUA MỘT SỐ CHỈ SỐ LIPID MÁU Ở CHUỘT CỐNG Nguyễn Thị Mai Anh, Đào Văn Phan,. Đánh giá tác dụng của NLC Việt Nam qua một số ch số lipid máu trên mô hình thực nghiệm gây ăng cholesterol ở chuột cống. II. CHẤT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 1. Chất liệu nghiên cứu -. uÇn Sơ đồ nghiên cứu III. KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU 1. Ảnh hưởng của uống cholesterol ở chuột cống trắng qua một số chỉ số lipid máu Cho chuột cống uống cholesterol 0,5g/kg liên