LỜI CẢM ƠN œ¯• Để hoàn thành luận văn tốt nghiệp này em xin chân thành cảm ơn: Quý thầy cô trong bộ môn Dinh Dưỡng và Chế Biến Thủy Sản cùng quí thầy cô Trường Đại học Cần Thơ đã trang bị cho em những kiến thức vô cùng quý giá trong suốt quá trình học tập. Qua thời gian thực hiện đề tài em xin gởi lời cảm ơn sâu sắc đến anh Hoàng Bá Nghị, chị Phạm Bích Kiểu và các anh chị khác ở phòng kiểm nghiệm Intertek đã tạo điều kiện thuận lợi cho em thực tập trong thời gian qua. Em xin gởi lời cảm ơn đến thầy Vương Thanh Tùng, giáo viên hướng dẫn đã tận tình chỉ dạy cho em phương pháp thực hiện đề tài, cung cấp cho em nhưng tư liệu quí giá. Cuối cùng, em xin cảm ơn gia đình, bạn bè và người thân đã luôn động viên, giúp đỡ em trong suốt quá trình làm đề tài. Cần Thơ, tháng 05 năm 2009 Sinh viên thực hiện DƯƠNG THỊ CẨM TRÚC NHẬN XÉT CỦA GIÁO VIÊN HƯỚNG DẪN @&? Cần thơ, ngày……tháng……năm 2009 iv NHẬN XÉT CỦA GIÁO VIÊN PHẢN BIỆN @&? Cần thơ, ngày……tháng……năm 2009 v TÓM LƯỢC –&— Trong tình hình hiện nay, việc xuất khẩu thuỷ sản của nước ta đang phải đối mặt với một vấn đề khó khăn rất lớn, đó là vấn đề dư lượng thuốc kháng sinh, hóa chất, kim loại nặng trong thủy sản và sản phẩm thủy sản. Sự tồn lưu kháng sinh, hóa chất trong mặt hàng thủy sản khi xuất khẩu nếu không được kiểm soát chặt chẽ sẽ gây ra những thiệt hại nặng nề cho doanh nghiệp chế biến thủy sản và cho uy tín của nước nhà. Trước tình hình xuất khẩu ngày càng nghiêm ngặt đòi hỏi sản phẩm xuất đi phải được kiểm định bởi các cơ quan kiểm nghiệm chất lượng có uy tín cao cả trong nước và trên quốc tế, đảm bảo sản phẩm được an toàn để có thể giải quyết được vấn đề rào cản an toàn vệ sinh thực phẩm của các nước nhập khẩu. Vì vậy, đề tài “Tìm hiểu phương pháp kiểm nghiệm sản phẩm thủy sản tại phòng kiểm nghiệm Intertek – Cần Thơ” có thể giúp ta tìm hiểu được phương pháp tối ưu để định lượng sự tồn lưu của nhóm kháng sinh, kim loại nặng … trong sản phẩm thủy sản. Qua quá trình tìm hiểu đã ghi nhận được một số phương pháp định lượng kháng sinh, hóa chất, kim loại nặng…còn tồn lưu trong thủy sản và sản phẩm thủy sản. - Một số phương pháp kiểm kháng sinh Định lượng Cloramphenicol trong thủy sản và sản phẩm thủy sản bằng sắc ký lỏng ghép khối phổ LC/MS/MS Phương pháp xác định hàm lượng Leucomalachite Green bằng sắc ký lỏng ghép khối phổ LC/MS/MS Định lượng Nitrofuran trong thủy sản và sản phẩm thủy sản bằng sắc ký lỏng ghép khối phổ LC/MS/MS - Phương pháp kiểm thuốc trừ sâu: Định lượng thuốc trừ sâu họ Chlor bằng sắc ký khí ghép khối phổ (GCMS) - Một số phương pháp kiểm kim loại nặng Phương pháp định lượng Cadmium (Cd) trong thủy sản và sản phẩm thủy sản bằng máy quang phổ hấp thu nguyên tử (AAS) Phương pháp định lượng thủy ngân (Hg) trong thủy sản và sản phẩm thủy sản bằng máy quang phổ hấp thu nguyên tử (AAS) Phương pháp định lượng chì (Pb) trong thủy sản và sản phẩm thủy sản bằng máy quang phổ hấp thu nguyên tử (AAS) vi Phương pháp định lượng Arsenic (As) trong thủy sản và sản phẩm thủy sản bằng máy quang phổ hấp thu nguyên tử (AAS) vii NHỮNG CHỮ VIẾT TẮT –&— Những chữ viết tắt sau đây đã được sử dụng trong đề tài luận văn: HACCP Hazard Analysis Critical Control Point HPLC High pressure Liquid chromatography UV – VIS Ultraviolet-visible spectroscopy AAS Atomic Absorption Spectroscopy AES Atomic Emission Spectroscopy MS Mass spectrometry MP Mobile phase API Atmospheric Pressure Ionization APCI Atmospheric Pressure Chemical Ionization LC-MS Liquid chromatography - Mass spectrometry ESI Electrospray Ionization FAAS Flame atomic absorption spectrometry). ET Electrothermal GFA Graphite Furnace Atomizer HGAAS Hydride generation atomic absorption spectrometry CV-AAS Cold Vapour Atomic Absorption Spectroscopy CAP Cloramphenicol m – CAP meta – cloramphenicol ACN Acetonitrile EtOAC Ethyl acetate MeOH Methanol MG Malachite green LMG Leucomalachite green AOZ 3-amino-2-oxazolidinon AMOZ 5-metylmorfolino-3-amino-2-oxazolidinon AHD 1-amino-hyđantoin hyđroclorit SEM Semicarbazit NPAOZ 3-((2-nitrophenyl)metylen)-amino-2-oxazolidinon NPAMOZ 5-metylmorfolino-3-((2-nitrophenyl)metylen)-3- amino-2-oxazolidinon NPAHD 1-(2-nitrophenyl)metylen-amino-hyđantoin NPSEM (2-nitrophenyl) metylen-semicarbazit 2 – NBA 2-nitrobezaldehyd GCMS Gas chromatography mass spectrometry ppm Parts per million viii ppb Parts per billion mm Micrometer ng Nanogram HA Hydroxylamine.HCl TSA p-toluen sulfonic acid monohydrate Đệm:ACN Dung dịch đệm : Acetonitrile ix DANH SÁCH HÌNH –&— Hình 2.1 Sơ đồ hệ thống máy HPLC 7 Hình 4.1 Đồ thị khảo sát độ tuyển tính của As trong khoảng nồng độ từ 0.5ppb đến 10ppb 50 x DANH SÁCH BẢNG –&— Bảng 4.1. Mối liên hệ giữa thể tích và nồng độ của chuẩn CAP và nội chuẩn m- CAP thêm vào để dựng đường chuẩn 16 Bảng 4.2. Chương trình pha động cho LC của phương pháp phân tích CAP 17 Bảng 4.3. Thể tích và nồng độ tương ứng khi thêm MG và LMG vào mẫu trắng để dựng đường chuẩn 21 Bảng 4.4. Chương trình pha động cho LC của phương pháp phân tích MG và LMG 22 Bảng 4.5. Chương trình pha động cho LC của phương pháp phân tích Nitrofuran27 Bảng 4.6. Điều kiện phân mảnh MS/MS của hỗn hợp dẫn xuất của các chất trong nhóm Nitrofuran 28 Bảng 4.7. Chương trình nhiệt chạy trên NCI source khi phân tích thuốc trừ sau họ Chlor 31 Bảng 4.8. Chương trình nhiệt chạy trên EI source khi phân tích thuốc trừ sau họ Chlor 32 Bảng 4.9. Thể tích và nồng độ tương ứng khi thêm Hg vào mẫu trắng để dựng đường chuẩn 35 Bảng 4.10. Chương trình cài đặt đối với lò graphit khi phân tích Cd bằng quang phổ hấp thu nguyên tử AAS 39 Bảng 4.11. Chương trình cài đặt đối với lò graphit khi phân tích Cd bằng quang phổ hấp thu nguyên tử AAS 42 Bảng 4.12. Các thông số cài đặt trên máy phá mẫu Multiwave 3000 46 Bảng 4.13. Thể tích chuẩn As 100ppb thêm vào để dựng đường chuẩn As 46 Bảng 4.14. Mối liện hệ giữa nồng độ và độ hấp thu của As khi chạy chuẩn 48 Bảng 4.15. Độ thu hồi của As trên mẫu spike 20ppb và mẫu spike 100ppb 49 Bảng 4.16. Độ tái lặp trên các nền mẫu khác nhau tại 20ppb 49 Bảng 4.17. Độ lặp lại trên mẫu tôm spike 1ppb ở 3 ngày khác nhau 50 Bảng 4.18. Độ hấp thu của As khi chạy 20 mẫu spike 20ppb và 20 mẫu blank 50 xi MỤC LỤC –&— LỜI CẢM ƠN ii NHẬN XÉT CỦA GIÁO VIÊN HƯỚNG DẪN iii NHẬN XÉT CỦA GIÁO VIÊN PHẢN BIỆN iv TÓM LƯỢC v NHỮNG CHỮ VIẾT TẮT vii DANH SÁCH HÌNH ix DANH SÁCH BẢNG x MỤC LỤC xi CHƯƠNG I: ĐẶT VẤN ĐỀ 1 CHƯƠNG II: TỔNG QUAN TÀI LIỆU 2 2.1 Giới thiệu về phòng kiểm nghiệm Intertek 2 2.2 Kháng sinh và vệ sinh an toàn thực phẩm thủy sản 2 2.2.1 Khái niệm về thuốc kháng sinh 2 2.2.2 Những nguyên nhân tồn dư kháng sinh trong thực phẩm thủy sản 2 2.2.3 Ảnh hưởng bất lợi của thuốc kháng sinh 3 2.3 Quyết định của Bộ Thủy Sản 3 2.4 Giới thiệu về phương pháp sắc ký 4 2.4.1 Giới thiệu về sắc kí khí 5 2.4.2 Sắc kí lỏng cao áp_ hệ thống HPLC 6 2.4. 3 Giới thiệu hệ thống AAS 11 CHƯƠNG III: PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 13 3.1 Các phương pháp và phương tiện thực nghiệm 13 3.1.1 Các phương pháp 13 3.1.2 Phương tiện thực hiện 13 3.2 Các bước thực hiện đề tài 13 3.3 Thời gian thực hiện đề tài 13 CHƯƠNG IV: KẾT QUẢ 14 4.1 Một số phương pháp kiểm các nhóm kháng sinh 14 4.1.1 Nhóm kháng sinh Cloramphenicol 14 4.1.2 Nhóm kháng sinh Malachite Green và Leucomalachite Green 18 [...]... nit N EVAP Húa cht 23 - Ethyl acetate (EtOAc) dựng trong HPLC - Acid hydrocloric (HCl) m c - Aicd formic 90% - Sodium Chloride (NaCl) - Dipotassium hydrogen phosphate trihydrate (K2HPO4) - NaOH tinh th - 2-Nitrobenzaldehyde - Methnol (MeOH) dựng trong HPLC - Nc ct - NP-SEM, NP-AHD, NP-AMOZ v NP-AOZ (dn xut 2-NBA ca SEM, AHD, AMOZ, AOZ) 5 Dung dch, thuc th 5.1 Thuc th 5.1.1 HCl 0.125M Cho 5,2ml acid... 2,3-dichloro-5,6-dicyano-1,4-benzoquinone Mu phõn tớch c lm sch hn bng s chit vi pha rn gm alumina v propylsulfonic acid Cui cựng, dch chit c phõn tớch bng LC vi bc súng phỏt hin 618 nm 3 Thit b, dng c 3.1 Thit b - H thng LC-MS bao gm: LC 1100 Agilent MS vi ngun ESI hoc APCI Phn mm iu khin Xcaliber ( Version 1.3) Mỏy ng nht mu Mỏy ly tõm Vortex 3.2 Dng c - ng ly tõm 50ml - Bỡnh nh mc - Pipettes - Bỡnh... tin thc nghim 3.1.1 Cỏc phng phỏp ỉ Phng phỏp tng kt kinh nghim: - Nhn ti - Su tm v c ti liu - Xõy dng c s lý thuyt - Vit bi ỉ Phng phỏp thc nghim: - Chun b + Nhn ti v a im thc tp + c trc lý thuyt v chun b nhng kin thc cn thit thc tp - Thc tp ti cụng ty v vit bi 3.1.2 Phng tin thc hin - Cỏc ti liu cú liờn quan - Cỏc giỏo trỡnh thc tp - Húa cht, dng c thớ nghim, cựng mt s phng tin khỏc cú liờn quan,... dng c - H thng sc ký lng gm: bm v b tiờm mu t ng - u dũ MS (ThermoQuest Finnigan TSQ Quantum) - Phn mm iu khin: Xcalibur Version 1.3 - Ct LC: Waters brand Xterra C18 kớch thc 2.1 x 150mm, kớch thc ht 3.5mm - Mỏy Vortex, mỏy lc - B thi khớ nit N EVAP - Ct SPE: C18 Varian Bond Elul 6cc/500mg - Mt s húa cht s dng cho HPLC nh: acetonitrile, ethyl acetate, ammonium hydroxide (NH3 30%), axit acetic - Mng... nc trong bỡnh nh mc 1L v nh mc n vch bng nc 5.1.6 2-NBA 50mM Hũa tan 0.07555g 2-NBA trong 10ml MeOH 5.1.7 Hn hp MeOH/nc = 50:50 Cho 50ml MeOH vo 50ml nc 5.2 Dung dch chun 24 5.2.1 Hũa tan 43, 56, 46 v 33mg NBA-AHD, NBA-SEM, NBA-AOZ v NBA-AMOZ trong 100ml MeOH theo th t Hn hp gc cha 430 ng/ml, 560 ng/ml, 460 ng/ml, 330 ng/ml ca NBA-AHD, NBA-SEM, NBA-AOZ v NBAAMOZ theo th t, nng ca cỏc cht khụng dn... ammonium acetate v 5ml ptoluene sulfonic acid (p-TSA) trong nc, u chnh pH v 4.5 bng acid acetic, thờm nc c 1 lớt 4.2.3 Dung dch 2,3-dichloro-5,6-dicyano-1,4-benzoquinone (DDQ): t dung dch chun DDQ c pha loóng trong acetonitrile c dung dch lm vic DDQ 0.001M 4.2.4 Mt s dung dch khỏc - Diethylene glycol Alumina Hydroxyamine hydrochloride 0.25g/ml Dung dch p-TSA 1M trong nc 4.2.5 Dung dch chun gc Malachite... 2-nitrobezaldehyd to thnh NPAOZ, NP-AMOZ, NP-AHD, NP-SEM Xỏc nh v nh lng cỏc cht dn xut bng LC/MS/MS 3 Thit b, dng c 4 H thng sc ký lng gm: bm v b tiờm mu t ng u dũ MS (ThermoQuest Finnigan TSQ Quantum) Phn mm iu khin: Xcalibur Version 1.3 Ct LC: Inertsil ODS-3 5m 130 x 2.0mm Tin ct: ODS-3 5m 130 x 2.0mm Mỏy Vortex, mỏy lc B thi khớ nit N EVAP Húa cht 23 - Ethyl acetate (EtOAc) dựng trong HPLC -. .. thớ nghim ca cụng ty 3.2 Cỏc bc thc hin ti - Nhn ti - Su tm ti liu - Nghiờn cu cỏc ti liu cú liờn quan - Thc tp ti cụng ty tỡm hiu cỏc phng phỏp kim khỏng sinh, kim loi nng - Rỳt ra qui trỡnh phõn tớch - Vit bi bỏo cỏo 3.3 Thi gian thc hin ti: t thỏng 02/2009 n 05/2009 13 Chng IV: KT QU Qua quỏ trỡnh tỡm hiu cỏc phng phỏp kim nghim ti phũng kim nghim Intertek Cn Th trờn mu thy sn v sn phm thy... Bỡnh nh mc - Pipettes - Bỡnh qu lờ 150ml - Bỡnh chit 250ml - Ct chit pha rn SPE: Ct Alumina (ALN-SPE), Bakerbond alumina SPE, 6ml, 500mg, acid propylsulfonic (PRS-SPE),500mg - Vial 2ml v mt s dng c khỏc 4 Húa cht, thuc th 4.1 Húa cht - Nc ct, HPLC Methanol, HPLC Acetonitrile, HPLC Methylene chloride 19 4.2 Dung dch, thuc th 4.2.1 Acid formic 0.1% (pha ng cho LC-MS): Hỳt 1ml acid formic cho vo bỡnh nh... kin phõn mnh MS/MS Product ion m/z CAP : m-CAP: 257, 152 207 10 Tớnh toỏn kt qu H s tớnh hiu ca tng mu phõn tớch theo tng nng cht chun: XxCxW RF = -YxV Trong ú: - X l t s trung bỡnh din tớch pic (CAP/m-CAP) cho dung dch mu th - C l hm lng ca CAP trong dung dch cỏc chun, tớnh theo ng/g W l khi lng mu th, tớnh theo g Y l t s din tớch trung bỡnh CAP/m-CAP trong dung dch cỏc chun V l th tớch cui . sinh thực phẩm của các nước nhập khẩu. Vì vậy, đề tài Tìm hiểu phương pháp kiểm nghiệm sản phẩm thủy sản tại phòng kiểm nghiệm Intertek – Cần Thơ” có thể giúp ta tìm hiểu được phương pháp tối. chuẩn ISO 17025:2005. Vì vậy, đề tài Tìm hiểu phương pháp kiểm nghiệm sản phẩm thủy sản tại phòng kiểm nghiệm Intertek – Cần Thơ” có thể giúp ta tìm hiểu được phương pháp tối ưu để định lượng. AOZ 3-amino-2-oxazolidinon AMOZ 5-metylmorfolino-3-amino-2-oxazolidinon AHD 1-amino-hyđantoin hyđroclorit SEM Semicarbazit NPAOZ 3-( (2-nitrophenyl)metylen)-amino-2-oxazolidinon NPAMOZ 5-metylmorfolino- 3-( (2-nitrophenyl)metylen )-3 - amino-2-oxazolidinon