Đang tải... (xem toàn văn)
II ĐỊNH LƯỢNG TỔNG SỐ VI KHUẨN HIẾU KHÍ TRONG SỮA ĐẬU NÀNH 1 DỤNG CỤ, THIẾT BỊ 1 1 DỤNG CỤ Đĩa petri vô trùng Ống đong Erlen Ống nghiệm Pipet và đầu tip vô trùng Que cấy mẫu Bình hoặc lọ có nắp vặn 1.
II ĐỊNH LƯỢNG TỔNG SỐ VI KHUẨN HIẾU KHÍ TRONG SỮA ĐẬU NÀNH DỤNG CỤ, THIẾT BỊ: 1.1 DỤNG CỤ: - Đĩa petri vô trùng - Ống đong - Erlen - Ống nghiệm - Pipet đầu tip vô trùng - Que cấy mẫu - Bình lọ có nắp vặn 1.2 THIẾT BỊ: - Tủ sấy để khử trùng khô - Nồi hấp áp lực để khử trùng ướt - Tủ ấm trì nhiệt độ từ 37 °C đến 55 °C - Tủ cấy vi sinh - Máy đo pH, có độ xác đến ± 0,1 đơn vị pH 25 °C - Thiết bị đếm khuẩn lạc - Máy khuấy - Thiết bị cấy xoắn HÓA CHẤT 2.1 CÁC DUNG DỊCH PHA LOÃNG MẪU a) Dịch muối peptone THÀNH PHẦN G/ML Pepton từ casein 1,0g Natriclorua 8,5 g Nước 1000ml Hòa tan thành phần nước, đun nóng cần Chỉnh pH cho sau khử trùng, pH ± 0,2 25oC, cần b) Dung dịch đệm peptone THÀNH PHẦN G/ML Pepton từ mô động vật 10g Natri clorua 5g Dinatri hydro phosphat ngậm 12 phân tử nước (Na2HPO4.12H2O) 9g Kali dihydro phosphat (KH2PO4) 1,5g Nước 1000ml Hòa tan thành phần nước, đun nóng cần Chỉnh pH cho sau khử trùng, pH ± 0,2 25oC, cần 2.2 MƠI TRƯỜNG THẠCH PCA a) Thành phần mơi trường: THÀNH PHẦN G/ML Sản phẩm thủy phân casein enzym 5.0g Chất chiết nấm men 2,5g Glucose khan (C6H12O6) 1,0g Thạch agar Nước 9g đến 18g 1000 ml b) Cách pha mơi trường: - Hịa tan thành phần mơi trường hồn chỉnh khơ vào nước, đun nóng cần Trộn kỹ để yên vài phút - Chỉnh pH cho sau khử trùng 7,0 ± 0,2 25 °C, sử dụng máy đo pH (6.5), cần - Phân phối môi trường vào bình chai (6.9) có dung tích thích hợp Khử trùng nồi hấp áp lực (6.1) 121 °C 15 - Nếu sử dụng làm nguội mơi trường nồi cách thủy trì nhiệt độ từ 47 °C đến 50 °C trước sử dụng Nếu không, để môi trường đông đặc lại bình chai Trước sử dụng, làm tan chảy hồn tồn mơi trường nồi cách thủy đun sơi, để nguội nồi cách thủy trì nhiệt độ từ 47 °C đến 50 °C c) Chuẩn bị đĩa thạch: - Rót từ 15 ml đến 20 ml môi trường vào dãy đĩa Petri vô trùng đơng đặc - Các đĩa bảo quản nhiệt độ (5 ± 3) °C đến tuần QUY TRÌNH THỰC HIỆN: 3.1 PHA LOÃNG MẪU: a Phần mẫu thử huyền phù ban đầu (dung dịch pha loãng ban đầu) - Cân lượng m g với sai số cho phép ± 5% đong thể tích V ml với sai số cho phép ± 5% (tối thiểu 10 g 10 ml, trừ có qui định khác), phần mẫu thử đại diện (xem điều 8) cho vào chén đựng vô trùng túi chất dẻo vô trùng - Cho lượng dịch pha loãng x m g x V ml Lượng thêm cân đong với sai số cho phép ± 5% b Các dung dịch pha loãng thập phân - Dùng pipet vô trùng lấy ml huyền phù ban đầu với sai số cho phép ± 5% cho vào ống nghiệm chứa ml dung dịch pha lỗng vơ trùng nhiệt độ thích hợp Chú thích: Nếu cần thể tích lớn hơn, thêm thể tích xác định (lớn ml) huyền phù ban đầu với sai số đo ± 5%, vào ống nghiệm chứa thể tích dịch pha lỗng vơ trùng lớn gấp lần Để có độ xác tối ưu, khơng nhúng pipet vào huyền phù ban đầu sâu cm Không để pipet chứa chất cấy tiếp xúc với dịch pha lỗng vơ trùng Trộn kỹ, tốt dùng máy khuấy (6.3) để trộn giây đến 10 giây để thu dung dịch pha loãng 10-2 - Nếu cần, lặp lại thao tác sử dụng dung dịch pha loãng 10-2 dung dịch pha lỗng tiếp theo, dùng pipet vơ trùng độ pha lỗng để thu dung dịch pha loãng 10-3, 10-4.v.v thu số lượng vi sinh vật thích hợp c Thời gian tiến hành pha loãng mẫu: - Thời gian tính từ lúc chuẩn bị xong huyền phù ban đầu chất cấy tiếp xúc với môi trường không vượt 45 phút thời gian kể từ chuẩn bị huyền phù ban đầu đến bắt đầu chuẩn bị dung dịch pha loãng thập phân không vượt 30 phút 3.2 3.3 CẤY VÀ Ủ: Bước 1: Dùng pipet vô trùng chuyển 0,1 ml mẫu thử sản phẩm dạng lỏng huyền phù ban đầu (độ pha loãng 10-1) vào tâm hai đĩa thạch Nếu chuẩn bị đĩa từ nhiều độ pha lỗng giảm xuống thành đĩa Bước 2: Lấy đĩa thạch khác Dùng pipet vô trùng khác phân phối 0,1 ml dịch pha loãng 10-1 (sản phẩm dạng lỏng) 0,1 ml dịch pha loãng 10-2 (các sản phẩm dạng khác) Bước 3: Nếu cần, lặp lại quy trình với dịch pha lỗng thập phân tiếp theo, dùng pipet vơ trùng với độ pha loãng thập phân Bước 4: Cẩn thận dàn chất cấy nhanh tốt lên khắp bề mặt đĩa thạch, không để dàn mẫu chạm vào thành đĩa Nếu có thể, sử dụng dàn mẫu cho tất độ pha lỗng từ mẫu có độ pha lỗng cao nhất, Bước 5: Để đĩa đậy nắp khoảng 15 nhiệt độ môi trường để chất cấy hấp thụ vào thạch Bước 6: Lật úp đĩa chuẩn bị đặt vào tủ ấm 30 °C (72 ±3)h ĐẾM KHUẨN LẠC: - Sau giai đoạn ủ, giữ lại đĩa có 300 khuẩn lạc, Đếm khuẩn lạc đĩa, sử dụng thiết bị đếm khuẩn lạc, cần Phải đếm khuẩn lạc, tránh đếm nhầm hạt thực phẩm với khuẩn lạc - Các khuẩn lạc mọc lan coi khuẩn lạc đơn lẻ Nếu dự kiến có khuẩn lạc mọc lan kiểm tra đĩa sau 24 h 48 h đánh dấu khuẩn lạc nhìn thấy Nếu khuẩn lạc mọc lan phần tư đĩa, đếm khuẩn lạc phần đĩa cịn lại tính số tương ứng cho đĩa Nếu khuẩn lạc mọc lan nhiều phần tư đĩa loại khơng đếm đĩa Nếu tất đĩa có khuẩn lạc mọc lan đếm đĩa thích hợp ghi vào báo cáo kết kết bị ảnh hưởng khuẩn lạc mọc lan