Đang tải... (xem toàn văn)
SIMINAR Immunohistochemistry trong chẩn đoán ung thư MỤC LỤC MỤC LỤC i DANH SÁCH HÌNH iii DANH SÁCH BẢNG iv 1 Giới thiệu 1 1 1 Sơ lược về các phương pháp chẩn đoán ung thư 1 1 1 1 Chẩn đoán qua lâm sà.
SIMINAR IMMUNOHISTOCHEMISTRY TRONG CHẨN ĐOÁN UNG THƯ MỤC LỤC DANH SÁCH HÌNH DANH SÁCH BẢNG Giới thiệu 1.1 Sơ lược phương pháp chẩn đoán ung thư 1.1.1 Chẩn đoán qua lâm sàng Ung thư loại bệnh mạn tính, trải qua nhiều giai đoạn phát triển: khởi phát, tăng trưởng thúc đẩy, chuyển tiếp, lan tràn, di Khi giai đoạn ban đầu, kích thước q nhỏ ln có biến đổi mặt dịch thể (chưa có men, chất u tiết ra),nên lâm sàng xét nghiệm chưa thể phát u Về sau kích thước khối u dần phát triển, số chất tế bào ung thư tiết đủ để phát bệnh Tuy nhiên chẩn đốn qua lâm sàng khơng phù hợp trường hợp khối u nằm vị trí khó phát hiện, bệnh giai đoạn sớm, bạn cân nhắc lựa chọn phương pháp đại chẩn đoán ung thư phần 1.1.2 Chuẩn đốn hình ảnh Các xét nghiệm chẩn đốn hình ảnh sử dụng chẩn đốn ung thư bao gồm: chụp X quang, siêu âm, chụp cắt lớp vi tính, chụp cộng hưởng từ chụp PET-CT giúp bác sĩ quan sát chi tiết phận bên thể, đồng thời phát bất thường, chẳng hạn khối u Xquang Là phương pháp điển hình chẩn đốn bệnh ung thư Chẳng hạn Xquang phổi để phát ung thư phế quản, phát di phổi Ung thư vú, ung thư xương, ung thư thận… phát nhơ phương pháp Chụp cắt lớp vi tính (CT-Scan) Một phương pháp mới, đại với kỹ thuật điện quang hoàn thiện Scanner cho phép nghiên cứu toàn thể phát khối u nhỏ, khoảng cm đường kính sâu u não, u trung thận, u tụy, u sau phúc mạc, u khung chậu Siêu âm Siêu âm có giá trị để phát khối u gan, u buồng trứng, u thận Siêu âm cho biết tính chất khối u (u đặc, u nang ) Siêu âm giúp hướng dẫn sinh thiết khối u qua da đạt hiệu cao, làm tổn thương tổ chức xung quanh PET/CT Phương pháp PET/CT thiết bị y khoa hạt nhân áp dụng công nghệ kết hợp máy PET máy CT, phát khoảng 80% loại ung thư, ung thư giai đoạn sớm sau thể có thay đổi bệnh lý chuyển hóa mà chưa hình thành tổn thương mặt cấu trúc Ngồi ra, thiết bị cịn giúp tìm kiếm bệnh nhân vị trí ung thư di căn, vị trí ung thư nguyên phát, giúp bác sĩ tiên lượng có nững phương pháp điều trị hiệu 1.1.3 Chẩn đoán qua nội soi Nội soi phương pháp thăm khám hốc tự nhiên số nội tạng thể nhờ phương tiện quang học (máy nội soi) Mỗi quan có máy nội soi riêng ngày hoàn thiện nhờ tiến kỹ nghệ quang học Nội soi đóng vai trị quan trọng chẩn đoán ung thư dày, ung thư đại tràng, ung thư thực quản, ung thư hạ họng quản, ung thư phế quản, ung thư bàng quang Trong đó, ung thư dày ung thư đại trực tràng loại ung thư gặp phổ biến bệnh lý đường tiêu hóa Phần lớn ung thư dày đại tràng phát thông qua nội soi Với phát triển khoa học kỹ thuật, nơi soi tiêu hóa khơng đáng sợ nhiều người nghĩ Hiện nay, ngồi nội soi thường (nội soi tươi) người bệnh lựa chọn hình thức soi có gây mê nhằm làm giảm bớt đau mà kết hoàn tồn xác 1.1.4 Chẩn đốn qua xét nghiệm Các xét nghiệm chẩn đoán ung thư gồm: xét nghiệm máu, xét nghiệm tủy, xét nghiệm tế bào Mỗi loại xét nghiệm lại tương thích với bệnh khác Xét nghiệm máu Phương pháp để tìm dấu ấn ung thư hay xác định lượng dấu ấn ung thư máu có giá trị định biết cách sử dụng Xét nghiệm thật hữu ích đánh giá tình trạng nặng, nhẹ dự đoán diễn tiến bệnh trình điều trị Một số xét nghiệm máu giúp hỗ trợ chẩn đoán ung thư như: Xét nghiệm kháng nguyên PSA giúp phát ung thư tuyến tiền liệt • • Xét nghiệm kháng nguyên CA 125 – dạng kháng nguyên ung thư 125 máu giúp phát ung thư buồng trứng Xét nghiệm CA 199 phát ung thư tụy, dày… Tuy nhiên, xét nghiệm máu thường phải kết hợp xét nghiệm khác để đưa kết xác nhất, kết xét nghiệm có lúc cho âm tính giả, có lúc cho dương tính giả Xét nghiệm tủy để phát ung thư máu Phương pháp giúp xác định xác khả mắc ung thư máu bệnh nhân Theo phương pháp này, chuyên gia tiến hành chọc tủy đem xét nghiệm để phân loại xác định loại tế bào máu tủy Nếu lượng Junvenile cell máu tăng cao, vượt q 5% chí 30% xác định bệnh nhân bị ung thư máu Xét nghiệm tế bào cổ tử cung Xét nghiệm tế bảo cổ tử cung (xét nghiệm Pap) dùng để phát tế bào tiền ung thư trước chúng chuyển thành ung thư xâm lấn Nếu tế bào tiền ung thư tìm thấy, tiến hành điều trị ngăn chặn trước bắt đầu ung thư 1.1.5 Chẩn đốn qua sinh thiết Sinh thiết xét nghiệm chẩn đoán ung thư áp dụng cho hầu hết tất loại ung thư, cung cấp kết xác Thông thường, bác sĩ Ung bướu cho làm sinh thiết sau loạt xét nghiệm, chẩn đoán chẳng hạn X-quang, CT,… xác định khối u Trong trình thực phương pháp này, bác sĩ phẫu thuật cắt bỏ số mơ quan sát kính hiển vi để tìm kiếm dấu hiệu ung thư 1.2 Sơ lược hóa mơ miễn dịch (Immunohistochemistry) Hóa mơ miễn dịch (IHC) trình xác định chọn lọc kháng nguyên (protein) tế bào mẫu mô nhờ nguyên tắc kháng nguyên gắn đặc hiệu với kháng thể Hóa mơ miễn dịch bắt nguồn từ "immuno" có nghĩa q trình sử dụng kháng thể, "histo: có nghĩa mô học Albert Coons lần đầu đưa thực vào năm 1941 Hóa mơ miễn dịch (IHC) kết hợp lĩnh vực: miễn dịch học mô học Kỹ thuật IHC sử dụng để xác định xem liệu mơ có bộc lộ không biểu lộ kháng nguyên riêng biệt, xác định tình trạng kháng nguyên tế bào riêng biệt mơ vị trí kháng nguyên tế bào HMMD sử dụng kháng thể để phân biệt khác kháng nguyên loại tế bào Sự khác kháng nguyên giúp nhận biết cách đặc hiệu dịng tế bào, xác định tính chất sinh học quần thể tế bào khác dòng, nhận biết khác biệt chức tế bào Hình 1: Sơ lược hóa mơ miễn dịch Ngày nay, kỹ thuật trở thành phổ biến đóng vai trị quan trọng việc đánh giá dấu ấn sinh học ung thư, phát nguồn gốc biệt hóa tế bào mơ, cơng cụ hữu ích chẩn đốn xác định bệnh ung thư, dự đoán đáp ứng điều trị tiên lượng bệnh Hiện nay, bệnh ung thư vú, việc điều trị thường phải dựa vào việc đánh giá yếu tố tiên lượng Bên cạnh yếu tố tiên lượng kinh điển kích thước u, tình trạng di hạch nách, loại mơ học, độ mơ học nhà nghiên cứu cịn sâu đánh giá yếu tố sinh học Ngoài đánh giá ER PR giúp điều trị nội tiết, người ta đánh giá số yếu tố khác Her-2/neu, Ki67, p53, tạo mạch vi di nhuộm HMMD để có phác đồ điều trị chuẩn mực tiên lượng bệnh Nhuộm hóa mô miễn dịch phương pháp áp dụng phổ biến Được thực để phát tế bào bị bệnh thể Đặc biệt tế bào ung thư Phương pháp sử dụng kết hợp hóa chất với phản ứng miễn dịch Qua quan sát tồn kháng nguyên ung thư mô bệnh phẩm Thông thường, kháng nguyên khơng thể dạng hình thái sinh học quan sát Bằng cách “nhuộm” với kỹ thuật miễn dịch huỳnh quang miễn dịch men Từ bác sĩ nhận biết chúng cách dễ dàng kính hiển vi Nhuộm hóa mô sinh học sở quan trọng để kết luận bệnh ung thư Hóa mơ miễn dịch phương pháp xác định kháng nguyên đặc hiệu có mô tế bào, dựa kết hợp kháng ngun - kháng thể Hóa mơ miễn dịch áp dụng giải phẫu bệnh phẫu thuật từ lâu giới trở thành thường quy Cách làm hóa mô miễn dịch từ mẫu mô đúc khối nến phương pháp giải phẫu bệnh thường quy, cắt mỏng nhuộm theo quy trình sau: Bộc lộ kháng nguyên - ủ với kháng thể thứ - ủ với kháng thể thứ - nhuộm với chất thị màu (DAB AEC) - nhuộm Hematoxylin đọc kính hiển vi thơng thường Phương pháp hóa mơ miễn dịch cần thiết cho việc xác định xác loại ung thư, xác định nguồn gốc tế bào bướu biệt hóa, khơng biệt hóa kháng thể đặc hiệu dịng tế bào như: Tế bào biểu mơ, tế bào trung mô, tế bào limphô, tế bào sắc tố, tế bào thần kinh nội tiết Hóa mơ miễn dịch giúp xác định loại ung thư biểu mô di không rõ nguồn gốc nguyên phát; loại ung thư trung mô (sarcoma); giúp xác định loại ung thư tế bào hệ lympho; xác định loại lympho không Hogdkin: Loại tế bào B, tế bào T phân nhóm, xác định lympho Hogdkin, xác định dấu ấn sinh học tế bào bướu số loại ung thư như: bướu tế bào mầm, bướu tế bào gan tụy Hóa mơ miễn dịch giúp xác định thụ thể nội tiết tế bào bướu như: ER (Estrogen), PR (Progesterone) ung thư vú ung thư tuyến nội mạc tử cung; xác định biểu mức gen sinh ung tế bào bướu: Her2, EGFR, ung thư vú, ung thư dày ung thư phổi; xác định số tăng sinh tế bào bướu Ki67, giúp xác định mức độ ác tính ung thư, xác định bệnh nhiễm trùng, nhiễm virus: Hepatitis B, Herpesviruses, Adenoviruses, Epstein-Barr Virus, HIV ; nhiễm vi trùng: Helicobacter Polori (HP); tổn thương dạng nhú vú; bướu tuyến nước bọt Giúp chẩn đoán phân biệt u lành hay ác tính, u quan Do hình ảnh tổn thương giống nhau, đơi khó để khẳng định tổn thương bệnh nhân lành tính hay ác tính, tổn thương quan tổn thương nằm vị trí giao thoa hay u xâm lấn hay nhiều quan kề Giúp phân loại u lympho ác tính 10 Protein c-erbB-2 sản phẩm gen Her-2/neu, có trọng lượng phân tử 185kd, biểu mức độ thấp tế bào biểu mơ biểu mơ mơ tuyến vú bình thường Bên cạnh chức thụ thể yếu tố phát triển thượng bì, Her-2/neu cịn có vai trị quan trọng chế biệt hố tế bào, kết dính di chuyển tế bào, góp phần vào khả xâm lấn di tế bào ung thư Hầu hết nghiên cứu vai trò Her-2/neu ung thư vú dựa vào mức độ biểu sản phẩm gen Her2/neu phương pháp HMMD Một số nghiên cứu khác dựa vào khuếch đại gen nhận thấy gia tăng số lượng gen Her-2/neu có liên quan với tăng mức độ biểu sản phẩm protein Có khoảng 20-30% trường hợp ung thư biểu mô tuyến vú xâm lấn có biểu mức Her-2/neu Cùng với gen p53, Her-2/neu gợi ý gen có vai trò tạo u Trong 48 nghiên cứu vai trò tiên lượng Her-2/neu thực 15.000 bệnh nhân ung thư vú, đa số nghiên cứu kết luận khuếch đại gen biểu mức Her-2/neu có liên quan với tiên lượng xấu, bệnh nhân ung thư vú có di hạch Các nghiên cứu Ravdin Chamness (1987) tóm tắt từ kết 18 nghiên cứu cho thấy bộc lộ mức Her-2/neu ung thư biểu mô tuyến vú liên quan đến tiên lượng xấu, đặc biệt nhóm bệnh nhân hạch nách dương tính, khơng phải yếu tố tiên lượng độc lập Tuy nhiên, vai trò Her-2/neu thể rõ việc điều trị ung thư vú có di hạch Nếu tế bào u có Her2/neu(-) doxorubicin phác đồ FAC (5-Fluorouracil + Doxorubicin + Cyclophosphamide) khơng có hiệu đối tế bào u, khả đáp ứng với FMC (5-Fluorouracil + Methotrexate + Cyclophosphamide) lại tốt Nếu tế bào u có Her-2/neu(+) mức độ cao tiên lượng bệnh nhân tốt điều trị Doxorubicin hay phác đồ FAC giúp kéo dài thời gian khỏi bệnh, phác đồ FMC bị kháng Hiện nhiều nơi giới, người ta thành công việc sử dụng Herceptin (trastuzumab - loại kháng thể đơn dòng kháng erbB-2 người) dùng điều trị ung thư vú giai đoạn muộn thu kết khả quan việc hạn chế phát triển khối u Để tăng thêm hiệu liệu pháp nhắm trúng đích bệnh nhân ung thư vú có biểu mức Her-2/neu làm tăng đáp ứng hóa trị, gần có số nghiên cứu đề nghị phối hợp trastuzumab paclitaxel, cisplatin, doxorubixin Điều trị cách phối hợp trastuzumab hoá trị giúp kéo dài thêm thời 37 gian sống cho bệnh nhân ung thư vú Vì vậy, Cơ quan Quản lý Thuốc thực phẩm Hoa Kỳ Ủy ban Thuốc biệt dược châu Âu chấp thuận cho sử dụng trastuzumab phối hợp với paclitaxel, để điều trị ung thư vú di mà có biểu mức Her-2/neu 4.1.3 p53 p53 gen ức chế u tìm thấy nhánh ngắn đoạn 13 thuộc nhiễm sắc thể 17 (ký hiệu 17p13), mã hoá tổng hợp protein thuộc nhân có trọng lượng phân tử 53kd vai trò yếu tố chép đảm nhận nhiều chức năng, đặc biệt chận tiến trình phân bào dừng lại Đột biến gen p53 gặp nhiều loại ung thư khác nhau, có khoảng 14- 26% ung thư vú có đột biến gen Loại đột biến phổ biến đột biến điểm đoạn gen, tạo phân tử protein khơng có chức có tính ổn định tích tụ nhân tế bào Vì vậy, khảo sát protein đột biến tương đối dễ dàng xác phương pháp HMMD với độ nhạy vào khoảng 80% nhận biết hầu hết protein đột biến khác Có khoảng 30% trường hợp ung thư vú tìm thấy protein p53 đột biến phương pháp HMMD Sự biểu mức protein p53 yếu tố liên quan với kích thước u, tương đối độc lập với tình trạng di hạch nách tuổi mắc bệnh, liên quan mạnh mẽ với độ dị bội thể DNA độ phân bào, thụ thể steroid, độ nhân tế bào u Theo Allred cộng sự, có 57 nghiên cứu thực 13.000 bệnh nhân ung thư vú nhằm xác định giá trị tiên lượng dự đoán đáp ứng với hóa trị p53 ung thư vú Đa số nghiên cứu thấy có mối liên hệ mức độ biểu p53 tiên lượng xấu Riêng với bệnh nhân ung thư vú chưa có di hạch nách khơng cần đến hóa trị hỗ trợ p53 xem yếu tố tiên lượng mạnh, độc lập với kích thước u, hạch di độ mô học Zellars cộng nghiên cứu giá trị tiên lượng p53 nguy tái phát chỗ 1.530 bệnh nhân ung thư vú điều trị cắt bỏ vú đưa kết luận: tích tụ p53 nhân tế bào ung thư yếu tố tiên lượng độc lập, tăng đáng kể nguy tái phát chỗ cho dù có hay khơng có xạ trị sau phẫu thuật cắt bỏ vú Clahsen cộng kết luận tích tụ p53 tế bào ung thư vú trước tuổi mãn kinh chưa có di hạch thường kèm theo đáp ứng với công thức FAC Berry cộng cho p53 khơng có vai trị dự đốn đáp ứng điều trị Tamoxifen bệnh nhân ung thư vú có hạch dương tính, ER(+) Một số tác giả cho bệnh nhân ung thư vú có biểu bộc lộ gen p53 kháng 38 với điều trị hoá chất doxorubicin điều trị tia xạ số loại tế bào định, bên cạnh cịn nhiều ý kiến chưa thống Nói chung, giá trị p53 tiên lượng bệnh rõ ràng dự đoán điều trị Nhiều ý kiến cho cần phải có nhiều nghiên cứu để khẳng định thêm giá trị p53 tiên đoán đáp ứng điều trị 4.1.4 Ki-67 PCNA Mức độ tăng sinh tế bào ung thư vú có liên quan trực tiếp với tiên lượng Do hầu hết phương pháp đánh giá mức độ tăng sinh có hạn chế đòi hỏi trang thiết bị đặc dụng máy đo dịng tế bào, tính an tồn dùng thymidine có tính phóng xạ, nên phương pháp đánh giá HMMD sử dụng nhiều sử dụng bệnh phẩm xử lý kỹ thuật mô học thường quy Khi so sánh phương pháp đánh giá mức độ tăng sinh kỹ thuật HMMD, Ki-67 PCNA cho dấu chứng sinh học tốt sử dụng mô xử lý thường quy, kháng thể khác không nên sử dụng Ki-67 Ki-67 kháng thể đơn dòng nhận biết đặc hiệu kháng nguyên nhân tế bào phân bào (tế bào pha G1, S, G2, kỳ pha M), sử dụng nhiều Tăng khả đột biến gen trầm trọng tế bào u lý để giải thích giá trị tiên lượng mức độ phân bào u Hệ đột biến gen trầm trọng làm cho tăng mức độ phân bào tăng tính đa dạng biệt hóa tế bào u điều dẫn đến tăng khả xâm lấn di xa Thực nghiệm cho thấy có liên quan mức độ biểu Ki-67 tỉ lệ phân bào Nghiên cứu Bouzubar cộng cho thấy tỉ lệ Ki-67 (+) cao nguy tái phát bệnh lớn Wintzer cộng nghiên cứu 47 bệnh nhân với thời gian theo dõi 37 tháng đưa kết luận: bệnh nhân có tiên lượng xấu u có dấu chứng Ki-67 biểu mức độ cao Weikel có kết luận tương tự giá trị tiên lượng Ki-67 thời gian sống khơng bệnh thời gian sống tính chung 193 bệnh nhân với thời gian theo dõi 24 tháng Một số nghiên cứu mối liên quan Ki-67 với lâm sàng tiên lượng cho thấy Ki-67 có vai trị đánh giá nguy di nhóm bệnh nhân có tiên lượng tốt hạch (-) tuổi mãn kinh ngược lại, nhóm bệnh nhân có hạch (+) chưa mãn kinh Ki-67 khơng có vai trị tiên lượng hóa trị giữ vai trò quan trọng việc kéo dài thời gian sống thêm cho nhóm bệnh nhân Đã có 14 nghiên cứu với 4.000 trường hợp ung thư vú đánh giá mối liên quan Ki-67 tiên 39 lượng Hầu hết nghiên cứu cho có mối liên quan có ý nghĩa kết nhuộm Ki- 67 tiên lượng qua phân tích thống kê đơn biến Nói chung, Ki-67 có vai trị tiên lượng chủ yếu trường hợp ung thư vú chưa có di hạch tiên lượng thời gian sống khơng bệnh (tiên lượng tái phát) Ki-67 có liên quan trực tiếp với kích thước u, độ mơ học, tình trạng xâm lấn mạch máu, di hạch Ki-67 có mối liên quan rõ rệt với dấu chứng sinh học liên quan thuận với HER-2/ neu p53 nghịch thụ thể steroid Kháng nguyên nhân tế bào tăng sinh (PCNA) PCNA phân tử protein có trọng lượng 36kDa, có chức yếu tố hỗ trợ cho hoạt động DNA polymerase pha S giai đoạn sửa chữa DNA Hầu hết nghiên cứu trước thấy PCNA có giá trị thấp tiên lượng lâm sàng bệnh nhân ung thư vú chưa có di hạch PCNA có mức độ tương quan yếu yếu tố tiên lượng lâm sàng, mô bệnh học dấu chứng sinh học khác ER, PR, HER-2/Neu, p53 Mặc dù có nghiên cứu khảo sát nguy tái phát tử vong, qua nghiên cứu cho thấy nguy tái phát tăng bệnh nhân có biểu Ki- 67 PCNA mức độ cao 4.2 Ung thơ đại trực tràng 4.2.1 CK7, CK19, CK20 Sinh học phân tử Cytokeratin (CK) CK thành phần nhóm sợi có đường kính 10 nm, thành phần cấu tạo nên khung tế bào hầu hết tế bào Eukaryote CK dịng phức hợp đa gen polypeptid, có trọng lượng phân tử (TLPT) từ 40 - 68 kDa Theo Moll cs (1992), có 20 CK phát đánh số từ CK1 - CK 20 CK chia thành nhóm: nhóm ưa acid (lớp 1- thứ họ A) gồm 12 CK (CK - 20) có TLPT 40-56,5 kDa, nhóm ưa base trung tính (lớp 2-thứ họ B) gồm CK (CK - 8) có TLPT 53-67 kDa Ln có ghép cặp CK nhóm tạo nên dị dimer Các CK nhóm ưa base trung tính thường lớn CK nhóm ưa acid tương ứng từ 7- kDa Mỗi tế bào có từ 2-10 CK khác nhau, phân bố CK tế bào khác tùy thuộc vào loại mô giai đoạn biệt hóa tế bào Ở hầu hết tế bào đơn chứa CK, sợi xếp mắt lưới bó lỏng lẻo Tuy nhiên, biểu mô vảy lát tầng, sợi CK xếp bó đặc, tơ biểu bì, gắn với cầu nối gian bào Sự biểu CK khác tế bào u, việc xác định chất biểu mô tế bào 40 u, cịn giúp ích cho việc phân biệt chắn loại mô học u biểu mô Sự xuất CK không nguồn gốc lớp mầm tế bào u, nói lên tình trạng biệt hóa tế bào * Sự biểu CK UTBM Sự bộc lộ CK phản ánh 2: typ biểu mơ tình trạng biệt hóa, có ích chẩn đốn u Ở khối u người, CK có TLPT thấp tập trung u bắt nguồn từ biểu mô trụ (UTBM tuyến dày - ruột) CK xuất thời kỳ bào thai; CK có TLPT cao thường tập trung u phát sinh từ biểu mơ lát tầng Nói chung, UTBM tuyến 31 loại biểu mô đơn bộc lộ CK 8, 18, 19 thường CK 7, u biểu mô tế bào vảy CK 5, 6, 14, 16, 17 ln ưu thế, CK 13 biểu với phạm vi Một số UTBM khả bộc lộ nhiều CK phát tổ chức giả định nguồn gốc Ví dụ: UTBM vảy không bộc lộ CK13 Các loại UTBM khác bộc lộ CK đó: CK 8, 18, 19 típ biểu mơ đơn bộc lộ UTBM vảy (song bộc lộ ưu thể loại CK CK 5) Các thay đổi tương tự, chí gặp tổn thương loạn sản, thay đổi CK xảy sau xạ trị / hóa trị * Ứng dụng kháng thể đơn dịng kháng CK chẩn đốn CK diện tất tế bào biểu mô, chúng điểm đặc hiệu cao cho UTBM Các kháng thể kháng CK giúp phát ổ di nhỏ UTBM Các kháng thể đơn dòng đặc hiệu tương ứng phát triển theo đa dạng nghiên cứu HMMD chứng tỏ vài UTBM có CK đặc hiệu • CK7: Là polypeptid có TLPT 54 kDa, phân bố rộng rãi loại biểu mô đơn Các nghiên cứu chứng minh mối liên quan bộc lộ CK7 biểu mơ bình thường mơ ung thư tổ chức Theo số nghiên cứu, tới 13% trường hợp bộc lộ CK7 tỷ lệ không phụ thuộc vào vị trí (nguyên phát so với di căn) thứ typ nhầy Theo nghiên cứu Shin CS (2010) CK7 biểu dương tính thấp (8,7%) ung thư đại trực tràng, theo tác giả CK7 kết hợp với số dấu ấn khác CK20, CK19 có giá trị chẩn đốn phân biệt ung thư di từ buồng trứng vào đại trực tràng • CK19: Là polypeptid có TLPT 40 kDa, nằm đoạn nhiễm sắc thể 17q12-q21, phân bố rộng rãi loại biểu mô đơn Các nghiên cứu cho thấy CK19 dương tính cao ung thư biểu mô đại trực tràng Đa 32 số 41 trường hợp dương tính lan toả CK19 có tỷ lệ dương tính giảm theo mức giảm độ biệt hố, điều có nghĩa bộc lộ CK19 thể biệt hoá u Như vậy, CK19 dấu ấn hóa mơ miễn dịch đặc hiệu ung thư biểu mô tuyến đại trực tràng, thường bộc lộ mức khoảng 96% Theo Zhang Zheng (2010), CK19 biểu lộ dương tính hầu hết ung thư đại trực tràng kết hợp hai dấu nấn CK7(-)/CK19(+) kiểu hình hố mơ miễn dịch đặc trưng ung thư biểu mơ đại trực tràng • CK20: Là polypeptid có TLPT 46 kDa Sự tổng hợp CK20 phát phôi tuần thứ tế bào biểu mơ đơn q trình phát triển niêm mạc ruột CK20 biểu đặc hiệu số biểu mơ đơn đặc hiệu cho tế bào biểu mô ruột dày tế bào Merkel da CK20 âm tính điển hình với UTBM tế bào vảy Để tăng độ nhạy độ đặc hiệu CK CK20 người ta thường sử dụng kết hợp hai dấu ấn với để phát vị trí gốc ung thư biểu mô Sự kết hợp keratin chẩn đoán mang lại nhiều kết phân biệt ung thư biểu mô tuyến đại tràng với ung thư biểu mô tuyến buồng trứng Shen B (2002) nghiên cứu 78 trường hợp di ung thư biểu mô tuyến đến não từ vú, phổi đại tràng, tác giả sử dụng kết hợp CK7 CK20 chẩn đoán cho kết thấy di ung thư biểu mơ tuyến có nguồn gốc từ đại tràng có kiểu hình miễn dịch CK7 -/ CK20 + (100%) Wang NP CS (1995) nghiên cứu 114 trường hợp di ung thư không rõ nguồn gốc đến xương, phổi gan, sử dụng kết hợp CK7 CK20 chẩn đoán Kết nghiên cứu tìm kiểu hình miễn dịch gợi ý nhiều đến ung thư đại tràng phổi Một nghiên cứu khác Kummar CS (2002) 102 trường hợp ung thư biểu mô tuyến nguyên phát phổi di đến phổi ung thư biểu mơ tuyến đại tràng cho thấy kiểu hình miễn dịch CK7+/CK20- ung thư biểu mô tuyến nguyên phát 33 phổi, kiểu hình CK7-/CK20+ ung thư biểu mô tuyến di đến phổi Saad RS CS (2009) nghiên cứu phân tích bộc lộ dấu ấn CK7, CK20 kỹ thuật nhuộm hố mơ miễn dịch 55 trường hợp ung thư biểu mô tuyến đại trực tràng Kết cho thấy 12/55 (22%) CK7 có biểu dương tính 48/55 (87%) CK20 có biểu dương tính Tỷ lệ CK7- /CK20+ xác định 36/55 (65%), CK7 +/CK20+ 12/55(22%) Shin JH CS (2010) nghiên cứu đánh giá biểu cytokeratin (CK7), cytokeratin 20 (CK20) ung thư đại trực tràng cú di đến buồng trứng Tỷ lệ dương tớnh CK7 82,9%; CK20 (65,9%) Trong nghiên cứu gần người ta thấy kiểu hỡnh CK(-)/CK19(+)/CDX2(+) đặc trưng cao ung thư ĐTT 4.2.2 MUC-1, MUC-2 42 Sản phẩm chế tiết hầu hết ung thư biểu mơ tuyến đường tiêu hóa (đặc biệt ung thư biểu mô typ ruột) chất nhầy acid, dễ dàng phát mucicarmine Mayer, xanh lơ Alcian nhuộm sắt keo dạng có đặc điểm giống mucin typ ruột Những thay đổi khác sialil hóa chất nhầy xảy phát hóa mơ hóa mơ miễn dịch Chất nhầy chế tiết ung thư biểu mô typ lan tỏa có bào tương tế bào nhẫn typ acid trung tính, typ trung tính chiếm ưu số trường hợp Ở mức hóa mơ miễn dịch, typ nhầy bộc lộ (với nhiều biến đổi trùng lắp MUC-1 cho typ ruột), MUC-5AC cho typ lan tỏa, MUC-2 cho typ nhầy MUC-5B cho typ khơng xếp loại Cũng có mối liên quan thú vị typ chất nhầy vị trí u, với ý nghĩa MUC-5AC phổ biến với ung thư biểu mô hang vị MUC-2 bộc lộ với khối lượng lớn với ung thư biểu mô tâm vị 4.2.3 CDX-2: CDX-2 gen homeobox typ đi, mã hố yếu tố phiên mã có vai trị quan trọng tăng sinh biệt hoá tế bào biểu mơ ruột Nó phát hố mô miễn dịch đại đa số ung thư biểu mơ đại trực tràng CDX-2 có khoảng 90% trường hợp HepPar-1 có khoảng 80% trường hợp CDX-2 xuất sớm phát triển u chứng tỏ thay đổi từ kiểu hình dày thành kiểu hình ruột CDX-2 bộc lộ với tỷ lệ cao ung thư ĐTT khoảng 76% 4.2.4 p53 Bộc lộ protein p53 liên quan tiên lượng ung thư đại trực tràng Lan CS (2007) nghiên cứu làm rõ vai trò bộc lộ mức p53 tương quan với yếu tố lâm sàng bệnh học ung thư đại trực tràng Sự bộc lộ p53 mô u đánh giá phân tích hố mơ miễn dịch sử dụng kháng thể đơn dòng chuột đặc hiệu p53 người Kết 37,6% trường hợp (n=258) có bộc lộ mức p53 mô u Sự tích lũy p53 mơ u khơng liên quan với tuổi, giới, mức CEA huyết tương trước phẫu thuật, lượng mucin, tình trạng hạch giai đoạn u Liên quan có ý nghĩa thống kê tìm thấy bộc lộ mức p53 vị trí u trực tràng (p=0,038) Những u biệt hố cao tới vừa có tỷ lệ bộc lộ mức p53 cao có ý nghĩa so với u biệt hoá (40,0% so với 20,0%, p= 0,05) Trong phân tích đa biến, tỷ lệ sống thêm đặc hiệu ung thư năm cao có ý nghĩa bệnh nhân với u bộc lộ mức p53 (82,2%) bệnh nhân khơng có bộc lộ mức Các tác giả 43 đến kết luận tích lũy protein p53 có giá trị tiên lượng thuận lợi ung thư đại trực tràng Theo y văn mức độ biểu p53 cao tính chất bệnh nghiêm trọng Đây dấu ấn hóa mơ miễn dịch quan trong việc tiên lượng bệnh 4.2.5 Ki-67 Ki-67 kháng thể đơn dòng đặc hiệu với kháng nguyên nhân Ki67 bộc lộ tế bào tăng sinh (pha G1, S, M, G2) chu kỳ tế bào Kháng nguyên phát nhuộm HMMD Những khối u có bộc lộ Ki-67 cao tiến triển nhanh Marhashemi CS tính hoạt động tăng sinh nhân nhuộm HMMD với Ki-67 Tác giả chia làm mức độ dương tính: dương tính ít: < 10% nhân tế bào bắt màu, dương tính vừa: 10 -50% nhân bắt màu dương tính mạnh >50% nhân tế bào bắt màu Nghiên cứu Petrisor CS (2008) nhằm mục đích phát triển phân tích bán định lượng hình thái hố mơ miễn dịch dấu ấn tăng sinh chết tế bào theo chương trình Kết cho thấy tất trường hợp có phản ứng hố mơ miễn dịch dương tính với Ki-67, số Ki-67 thay đổi phạm vi rộng 5% 95% Với p53 có 10 số 15 trường hợp (66%) có phản ứng hố mơ miễn dịch dương tính, với giá trị số 22% 95%, có trường hợp âm tính 38 Phân tích thống kê khơng phát khác biệt có ý nghĩa thống kê số Ki-67 ba thứ typ mô học (p=0,674), khác biệt quan trọng phát số p53 (p=0,007) Các tác giả kết luận nghiên cứu ủng hộ cho hiểu biết đắn vai trò p53 nhuộm hố mơ miễn dịch Ki-67 liên quan mật thiết với hình thái tăng trưởng tế bào, đặc biệt số phân bào độ mơ học u Những BN có thời gian sống thêm ngắn thường có tỷ lệ Ki67 cao 4.2.6 Her- 2/neu HER-2/neu thành viên họ thụ thể yếu tố phát triển biểu bì, góp phần điều hồ chức sinh học tăng sinh, biệt hoá, vận động chết theo chương trình tế bào HER-2/neu biểu lộ mức ung thư vú, dày, phổi, tuyến nước bọt, buồng trứng, đại tràng, tiền liệt tuyến tuỵ Tỷ lệ BN có biểu lộ mức protein HER- 2/neu UTĐTT khác nghiên cứu giới Mối liên quan biểu lộ mức protein HER-2/neu với đặc điểm lâm sàng tiên lượng bệnh nhiều tranh cãi 4.3 Ung thơ biểu mô phổi 4.3.1 p53 44 p53 protein quan trọng điều hòa chu kỳ tế bào - gọi gen áp chế khối u p53 Sử dụng phương pháp hố mơ miễn dịch nhằm phát sản phẩm gen kháng nguyên ung thư phổi giúp cho việc chẩn đoán phân loại bệnh xác 4.3.2 p63 Một thành phần khác họ p53 p63, có ý nghĩa phát triển mơ biểu mô ung thư biểu mô tế bào vảy Sự bộc lộ p63 đánh giá 408 trường hợp ung thư phổi vi dãy mô hai phịng thí nghiệm khác Au CS Phần lớn ung thư biểu mô tế bào vảy phổi bộc lộ p63, số lượng lớn ung thư biểu mô thần kinh nội tiết tế bào lớn ung thư biểu mô tế bào nhỏ Sự bộc lộ p63 nhận biết có ý nghĩa tiên lượng ung thư biểu mơ thần kinh nội tiết độ cao Trên quan điểm thực hành, tác giả sử dụng bộc lộ p63 dấu ấn biệt hóa tế bào vảy Một số tác giả đánh giá bộc lộ p63 nhân hóa mơ miễn dịch 33 trường hợp ung thư biểu mô tuyến, 43 trường hợp phổi lành tính với xơ hóa dị sản, trường hợp ung thư biểu mô tuyến vảy trường hợp ung thư biểu mô vảy Những bệnh lành tính phổi bao gồm phế viêm kẽ thơng thường, sẹo nhu mơ, phế viêm tổ chức hóa tổn thương phế nang lan tỏa Trong phổi bình thường, p63 bộc lộ tế bào ngẫu nhiên đơn vị tiểu thùy xa Trong trình phản ứng xơ, nhuộm nhân quan sát thấy tế bào đáy đường thở biểu mô tiểu phế quản dị sản vảy Phản ứng miễn dịch p63 nhận xét bộc lộ đồng tổn thương phổi cấp Phản ứng mạnh phát 33 ung thư biểu mô q sản u tuyến khơng điển hình Ba trường hợp ung thư biểu mô tuyến phổi dương tính tế bào u Các tác giả đến kết luận kết họ chứng minh bộc lộ p63 khác qua tổn thương tiểu phế quản phế nang khác p63 có lợi phân biệt tăng sinh phản ứng với tăng sinh tuyến u phổi 4.3.3 Cytokeratin Là nhóm gồm protein hịa tan nước có trọng lượng phân tử nằm khoảng 40-79 kD Chúng tìm thấy cấu trúc vi ống, cấu trúc xem khung xương tế bào biểu mơ Có 20 cytokeratin xác định, đánh số từ đến 20 chúng chia thành nhóm nhóm I nhóm II + Nhóm I bao gồm cytokeratin acid (Acidic cytokeratins) (pI < 5.5), đánh số từ đến 20 45 + Nhóm II bao gồm cytokeratin base (Basic cytokeratins) (pI > 6), đánh số từ đến Mỗi Cytokeratin nhóm I bắt cặp với Cytokeratin nhóm II tất tế bào biểu mơ chứa loại Cytokeratin, ngoại trừ Cytokeratin 19 tồn riêng lẻ khơng theo cặp Các Cytokeratin phân chia theo trọng lượng phân tử, nhóm có trọng lượng phân tử thấp (như 8, 18 19) nhóm có trọng lượng phân tử cao (như 1, 5, 10 14) Các kháng thể sử dụng để phát u phổi thần kinh nội tiết bao gồm dấu ấn keratin Hai mươi loại phân tử tồn phân loại CK7 bộc lộ nhiều tế bào biểu mô phổi, tìm thấy nhiều loại tế bào biểu mô khác nhiều loại ung thư biểu mô phổi CK7 loại phân tử keratin tìm thấy phổ biến ung thư biểu mơ tuyến phổi CK5 tìm thấy chủ yếu ung thư biểu mô tế bào vảy Khi sử dụng chẩn đoán, CK7 thường sử dụng với CK20 kháng thể khơng keratin khác chẩn đốn phân loại u tuyến Hầu hết ung thư biểu mô phổi tiên phát chứa nhiều loại phân tử keratin, với ngoại lệ ung thư biểu mô tế bào nhỏ, thường chứa keratin trọng lượng phân tử thấp bao gồm CK7 Chu CS (2000), đánh giá 435 u biểu mô từ quan khác sử dụng hóa mơ miễn dịch với kháng thể CK7 CK20 CK7 tìm thấy nhiều loại ung thư, với ngoại lệ ung thư biểu mô phát sinh từ đại tràng, tuyến tiền liệt, thận tuyến ức, u carcinoid phổi đường tiêu hóa u tế bào Merkel da Phần lớn ung thư biểu mô vảy từ quan khác âm tính với CK7, với ngoại lệ ung thư biểu mô vảy cổ tử cung CK20 dương tính gần tất ung thư biểu mô đại trực tràng ung thư biểu mô tế bào Merkel 4.3.4 TTF-1 TTF-1 yếu tố phiên mã chứa vùng đồng (homeodomain), bộc lộ tuyến giáp, não trung gian phổi TTF-1 điều hoà bộc lộ gen thyroperoxidase thyroglobulin tuyến giáp Trong phổi, TTF-1 giữ vai trò quan trọng bộc lộ đặc hiệu protein hoạt tính bề mặt A, B, C protein chế tiết tế bào Clara Ở phổi, dấu ấn báo cáo dương tính 72,5% UTBM tuyến, 10% UTBM vảy, 26% UTBM tế bào lớn, 75% UTBM thần kinh nội tiết tế bào lớn, 90% UTBM tế bào nhỏ 100% u tuyến phế nang Trái lại, số 286 UTBM tuyến thuộc týp phổi tyuến 46 giáp có phản ứng miễn dịch TTF-1 Trong nghiên cứu UTBMTG UTBM phổi, Kaufmann Dietel chứng minh rằng, phản ứng dương tính với protein hoạt tính bề mặt A số UTBMTG dạng ổ 4.3.5 Ki-67 Trong số dấu ấn sinh học ung thư phổi, Ki67 yếu tố hữu ích dự báo ung thư phổi Ki-67 kháng nguyên ung thư, tìm thấy tăng sinh phân chia tế bào nhân, diện kỳ hoạt động tế bào (G1, S, G2 phân bào), vắng mặt kỳ nghỉ ngơi (G0) protein nhân liên quan đến quy luật tiến triển tế bào Một số nghiên cứu cho thấy mối liên quan Ki-67 sống thêm bệnh nhân ung thư phổi 49% bệnh nhân ung thư có Ki67 dương tính, 29% liên quan đến ung thư phổi không tế bào nhỏ (NSCLC), 1% liên quan ung thư biểu mô tế bào nhỏ (SCLC), 2% với khối u carcinoid Về kết sống còn, Ki-67 yếu tố tiên lượng, nghĩa Ki-67 tăng, tiên lượng bệnh xấu 4.3.6 NSE (Neuron Specific Enolase) NSE phát u nguyên bào thần kinh, ung thư biểu mô tế bào nhỏ số khối u ác tính khác Sự bộc lộ NSE gặp chủ yếu u nguyên bào thần kinh ung thư phổi typ tế bào nhỏ Giá trị NSE dấu hiệu cho bệnh ung thư phổi tế bào nhỏ, đánh giá cách sử dụng kháng thể đơn dòng (MCAB) kháng NSE NSE có tế bào thần kinh nội tiết ngoại vi peptid thần kinh nội tiết ruột tụy Ung thư tế bào nhỏ phổi xem u typ thần kinh nội tiết 4.3.7 Napsin A Napsin A dấu ấn có nhiều hứa hẹn, phát bào tương tế bào phổi loại đại thực bào phế nang Nó aspartic protease có trọng lượng phân tử khoảng 38kDa liên quan đến trình lập trình chuỗi N C tận protein B bề mặt Ngoài ra, nghiên cứu khẳng định đánh giá mô học tế bào học ung thư phổi biểu mơ tuyến với Napsin A có độ phù hợp cao mô học tế bào học 4.3.8 Claudin Claudin thành phần phức hợp protein liên kết chặt tế bào số lượng liên kết lại tỉ lệ nghịch với tiên lượng đợt bùng phát bệnh nhân ung thư Trong dòng tế bào ung thư phổi, có bộc lộ thay đổi claudin 1, 2, 3, tìm thấy Trong nghiên cứu sử dụng mẫu lấy từ u có phân loại 47 mơ học khác cho thấy bộc lộ claudin chúng thay đổi tăng giảm khác so với số lượng chúng tế bào phế quản mô phổi bình thường Sự bộc lộ khác claudin loại ung thư phổi khác phần liên quan đến nguồn gốc tế bào chúng Claudin bộc lộ cao ung thư biểu mô tuyến ung thư biểu mô phế quản phế nang claudin bộc lộ thấp hai loại ung thư Ung thư biểu mô phổi tế bào nhỏ cho bộc lộ với claudin cao so với ung thư biểu mô tuyến Tổng kết lại, số nghiên cứu gần cho thấy rằng: thành phần phức hợp đa protein liên kết chặt thay đổi trình phát triển ung thư phổi Trong vài trường hợp, tăng điều hòa protein cách ấn tượng quan sát thấy (gần đáng kể, claudin-1 ung thư biểu mô tế bào vảy claudin-5 ung thư biểu mô tuyến), thường giảm bộc lộ nhận biết Mặc dù không rõ cách thay đổi ảnh hưởng lên cấu trúc chức mối liên kết chặt ung thư biểu mơ người ta có sở đưa giả thuyết rằng: sử giảm điều hịa chức kết dính mối liên kết chặt làm tăng tính xâm lấn di Ngồi ra, giảm điều hịa số protein liên kết chặt chứng minh làm tăng sinh sản biểu mô xương sống động vật có xương sống Sự phá vỡ phức hợp protein liên kết chặt ảnh hưởng đến thiết lập trì kiểu hình phân cực Mặc dù cịn chưa rõ cách bộc lộ bị thay đổi protein liên kết chặt đặc hiệu liên quan với sinh bệnh học ung thư, nghiên cứu cho thấy hữu ích mơ bọc ung thư Các nghiên cứu nhiều tương lai cần thực để hiểu rõ cách mà bất thường phân tử bộc lộ protein liên kết chặt góp phần vào q trình hình thành u, mở rộng phạm vi sử dụng cơng cụ chẩn đốn, tiên lượng điều trị ung thư Kết luận Hóa mơ miễn dịch phương pháp áp dụng phổ biến chẩn đoán bệnh ung thư Phương pháp sử dụng kết hợp hóa chất với phản ứng miễn dịch Qua quan sát tồn kháng nguyên ung thư mô bệnh phẩm mà thông thường, kháng nguyên dạng hình thái sinh học, khó quan sát Bằng cách “nhuộm” với kỹ thuật miễn dịch huỳnh quang miễn dịch men 48 Từ bác sĩ nhận biết chúng cách dễ dàng kính hiển vi, giúp phát nhanh xác bệnh ung thư, từ có phương pháp điều trị sớm hiệu cho bệnh nhân ung thư, góp phần quan trọng cho thành công điều trị ung thư 49 TÀI LIỆU THAM KHẢO Lương Tuấn Hiệp, 2020 Hóa mơ miễn dịch chẩn đoán chất khối u Phần I Ungthuhoc.vn Link: https://ungthuhoc.vn/hoa-mo-miendich-trong-chan-doan-ban-chat-khoi-u-phan-1/ Truy cập ngày 06/06/2021 Trung tâm Xét nghiệm, Bệnh viện Đa khoa MEDLATEC, 2019 Kỹ thuật ELISA điều cần lưu ý thực kỹ thuật này.https://medlatec.vn/tin-tuc/ky-thuat-elisa-la-gi-va-nhung-dieu-canluu-y-khi-thuc-hien-ky-thuat-nay-s159-n16546 Accessed on 06/06/2021 Biotech Việt Nam, 2011 Ứng dụng hóa mơ miễn dịch chẩn đoán giải phẫu bệnh http://www.biotech.vn/index.php? language=vi&nv=news&op=Tin-khoa-hoc-ky-thuat/Ung-dung-ky-thuathoa-mo-mien-dich-trong-chan-doan-giai-phau-benh-90 Truy cập ngày 06/06/2021 Zonggao Shi , M Sharon Stack, 2015 An Update on Immunohistochemistry in Translational Cancer Research https://www.cancertm.com/article.asp?issn=23953977;year=2015;volume=1;issue=4;spage=115;epage=122;aulast=Shi Accessed on 06/06/2021 Ihc word, Introduction to Immunohistochemistry http://www.ihcworld.com/_intro/ihc-methods.htm Accessed on 06/06/2021 Case, 2012 Phương pháp ELISA https://case.vn/viVN/34/96/114/details.case Truy cập ngày 06/06/2021 Creative-diagnostics, ELISA Guide https://www.creativediagnostics.com/ELISA-guide.htm Accessed on 06/06/2021 Novusbio, Immunohistochemistry (IHC) Detection https://www.novusbio.com/ihc-detection Accessed on 06/06/2021 Chu Văn Đức, 2014 “Nghiên cứu bộc lộ số dấu ấn hố mơ miễn dịch mối liên quan với đặc điểm mô bệnh học ung thư biểu mô đại trực tràng” luận án tiến sĩ, Đại học Y Hà Nội, Tr 29- 38 10 Đặng Cơng Thuận, 2012, Hóa mơ miễn dịch ung thư vú, Tạp chí phụ sản, Tập 10, Số 3, Tháng – 2012, Tr 74 -84 50 11 Phạm nguyên cường, 2015 “Nghiên cứu phân loại mô bệnh học ung thư biểu mô phổi theo WHO 2004 IASLC/ATS/ERS 2011 có sử dụng dấu ấn hố mơ miễn dịch” luận án tiến sĩ, Đại Học Y Hà Nội, Tr 17-21 51 ... ngày 06/06/2021 Zonggao Shi , M Sharon Stack, 2015 An Update on Immunohistochemistry in Translational Cancer Research https://www.cancertm.com/article.asp?issn=23953977;year=2015;volume=1;issue=4;spage=115;epage=122;aulast=Shi... Phương pháp chuỗi dextran Makers IHC sàng lọc kháng thể cho markers IHC 3.1 Makers IHC Markers IHC (Immunohistochemistry) hay cịn gọi dấu ấn hóa mơ miễn dịch Dựa nguyên tắc phương pháp nhuộm IHC:... thuật cắt bỏ số mơ quan sát kính hiển vi để tìm kiếm dấu hiệu ung thư 1.2 Sơ lược hóa mơ miễn dịch (Immunohistochemistry) Hóa mơ miễn dịch (IHC) q trình xác định chọn lọc kháng nguyên (protein) tế