Đang tải... (xem toàn văn)
Giáo trình Bệnh ở động vật thủy sản (Nghề: Nuôi trồng thủy sản - Trình độ: Cao đẳng) được biên soạn nhằm giúp các em sinh viên trình bày được các bước tiến hành chẩn đoán bệnh động vật thủy sản; Mô tả được các đặc điểm bệnh lý của những bệnh thường gặp trên tôm, cá; đặc điểm của các loại thuốc thường dùng phòng bệnh tổng hợp; nguyên tắc dùng thuốc trong nuôi tôm, cá và các đối tượng thủy sản khác. Mời các bạn cùng tham khảo giáo trình tại đây.
ỦY BAN NHÂN DÂN TỈNH BẠC LIÊU TRƯỜNG CĐ KINH TẾ – KỸ THUẬT GIÁO TRÌNH MƠ ĐUN: BỆNH Ở ĐỘNG VẬT THỦY SẢN NGHỀ: NI TRỒNG THỦY SẢN TRÌNH ĐỘ: CAO ĐẲNG (Lưu hành nội bộ) Ban hành kèm theo Quyết định Số:…/QĐ….ngày…tháng…năm……của NĂM 2020 TUYÊN BỐ BẢN QUYỀN Tài liệu thuộc loại sách giáo trình nên nguồn thơng tin phép dùng ngun trích dùng cho mục đích đào tạo tham khảo Mọi mục đích khác mang tính lệch lạc sử dụng với mục đích kinh doanh thiếu lành mạnh bị nghiêm cấm LỜI GIỚI THIỆU Bệnh động vật thủy sản môn học sở nhằm cung cấp cho học sinh kiến thức bệnh học thủy sản nói chung đặc biệt trọng bệnh cá, giáp xác nước để giúp cho học sinh dễ tiếp cận với môn học chuyên sâu kỹ thuật cho đẻ nuôi cá, tôm, cua đối tượng thủy sản khác Khác với vật nuôi cạn, động vật thủy sản thường đòi hỏi theo dõi nhiều môi trường sức khỏe chúng Do sống nước nên hoạt động động vật thủy sản thường khó quan sát trừ chúng bắt khỏi mặt nước bị bệnh Động vật thủy sản lại sống môi trường sinh thái phức tạp thường xuyên biến động Thêm vào đó, thức ăn thừa, thủy sản chết nhiều thứ khác ẩn đáy ao Các đối tượng nuôi thủy sản đa dạng lồi, mơi trường sống, mức độ thâm canh kỹ thuật nuôi hệ thống nuôi áp dụng Các dạng bệnh động vật thủy sản đa dạng có nhiều biến đổi, có số bệnh chưa xác định vật chủ có nhiều bệnh khơng có dấu hiệu lâm sàng riêng biệt Phần thực hành môn học cung cấp kiến thức kỹ hỗ trợ cho phần lý thuyết sở để sinh viên tiếp cận phương pháp chẩn đoán bệnh thủy sản MỤC LỤC Bài 1: Chẩn đoán bệnh trang Yêu cầu khảo sát yếu tố ảnh hưởng đến sức khỏe ĐVTS Yêu cầu kỹ thuật kiểm tra thể ĐVTS Quy trình chẩn đốn bệnh 11 Bài 2: Phịng trị bệnh ký sinh trùng 14 Yêu cầu kỹ thuật thu mẫu bệnh phẩm 14 Yêu cầu kỹ thuật xác định bệnh ký sinh trùng 14 Yêu cầu kỹ thuật phịng trị bệnh 16 Quy trình thực phòng trị bệnh ký sinh trùng 18 22 Bài 3: Phòng trị bệnh vi khuẩn Yêu cầu kỹ thuật thu mẫu bệnh phẩm 22 Yêu cầu kỹ thuật xác định bệnh vi khuẩn 30 Yêu cầu kỹ thuật phòng trị bệnh 37 41 Bài 4: Phòng bệnh vi rus Yêu cầu kỹ thuật thu mẫu bệnh phẩm 42 Yêu cầu kỹ thuật xác định bệnh vi rus 43 Yêu cầu kỹ thuật phòng trị bệnh 46 Quy trình thực phịng bệnh vi rus 48 51 Tài liệu tham khảo GIÁO TRÌNH MƠ ĐUN Tên mơ đun: BỆNH Ở ĐỘNG VẬT THỦY SẢN Mã số mô đun: MĐ13 Thời gian mô đun: 75 ( Lý thuyết: 15 giờ; Thực hành: 57 giờ, Kiểm tra: 03 giờ) I Vị trí, tính chất mơ đun - Vị trí mơ đun: Là mơn học dạy song song học mô đun kỹ thuật sở chuyên môn nghề cao đẳng ni trồng thủy sản - Tính chất mơ đun: Mơ đun giảng dạy bệnh động vật thủy sản ứng dụng phịng, chẩn đốn trị bệnh cho động vật thủy sản nuôi II Mục tiêu mô đun - Kiến thức: + Trình bày bước tiến hành chẩn đốn bệnh động vật thủy sản; Mơ tả đặc điểm bệnh lý bệnh thường gặp tôm, cá; đặc điểm loại thuốc thường dùng phòng bệnh tổng hợp; nguyên tắc dùng thuốc nuôi tôm, cá đối tượng thủy sản khác - Kỹ năng: + Thực biện pháp phịng bệnh tổng hợp, chẩn đốn trị bệnh cho động vật thủy sản an toàn hiệu - Năng lực tự chủ trách nhiệm: + Năng lực tự chủ: chủ động tham gia tích cực nhạy bén việc thực thực hành; có tinh thần cầu tiến công việc học tập + Người học tuân thủ qui trình kỹ thuật, phòng trị bệnh chủ động, cẩn thận, xác; phản đối sử dụng thuốc, hóa chất cấm hạn chế dùng nuôi động vật thủy sản Nội dung mơ đun Bài 1: CHẨN ĐỐN BỆNH Mục tiêu: - Trình bày phương pháp chẩn đốn bệnh thủy sản nuôi - Nêu bước phương pháp chẩn đốn bệnh thủy sản ni - Thực thao tác phương pháp - Đánh giá ảnh hưởng môi trường tới sức khỏe thủy sản nuôi - Xác định nguyên nhân, tác nhân gây bệnh thủy sản nuôi - Chủ động phối hợp nhóm thực quy trình chẩn đốn bệnh thủy sản ni - Tn thủ ngun tắc chẩn đốn bệnh thủy sản ni Nội dung giảng: Yêu cầu khảo sát yếu tố ảnh hưởng đến sức khỏe thủy sản 1.1 Thời tiết Cơ thể sinh vật phát sinh bệnh nguyên nhân định mà cần có điều kiện thích hợp Do điều kiện khác mà nguyên nhân gây bệnh có làm cho thể sinh vật phát sinh bệnh hay không Điều kiện gây bệnh bao gồm thân thể sinh vật điều kiện môi trường Cơ thể sinh vật tuổi, tình trạng sức khỏe, giới tính…; Điều kiện mơi trường như: khí hậu, chất nước, tình hình ni dưỡng, khu hệ sinh vật ảnh hưởng đến nguyên nhân gây bệnh Phần lớn bệnh vi sinh vật phát triển mạnh điều kiện môi trường nuôi cá, tôm bị ô nhiễm, bệnh nguyên sinh động vật gây thường ao ương nuôi cá, tôm mật độ dày, thức ăn không đầy đủ, mực nước thấp Các loài sán song chủ phát triển ký sinh cá phải nhờ có vật chủ trung gian ốc, vật chủ sau chim Động vật thủy sản bị bệnh có nguyên nhân định khơng phải tác dụng lập mà điều kiện bên bên thể để phát huy tác dụng Nguyên nhân định q trình phát sinh đặc tính bệnh, cịn điều kiện có tác dụng làm tăng lên hay cản trở cho trình phát sinh phát triển bệnh Điều kiện ảnh hưởng đến nguyên nhân 1.2 Yêu cầu khảo sát biến đổi môi trường nuôi 1.2.1 Các yếu tố thủy lý Động vật thủy sản bị bệnh nhiều nguyên nhân môi trường gây phản ứng thể cá, yếu tố tác dụng tương hỗ lẫn điều kiện định Nắm vững nguyên nhân điều kiện phát sinh bệnh để hiểu rõ chất bệnh để có biện pháp phịng trị có hiệu ĐVTS mắc bệnh khơng biểu dấu hiệu bệnh lý thể, mà cịn thể hiện tượng ao Khi có tượng ĐVTS chết ao, chết ĐVTS mắc bệnh, mà mơi trường nước bị nhiễm bẩn, nhiễm độc tố chất thải nhà máy công nghiệp thải ra, nước thải sinh hoạt từ khu dân cư, thuốc trừ sâu nông nghiệp,… làm cho cá tôm chết Do cần kiểm tra trường bao gồm nội dung sau: 1.2.2 Các yếu tố thủy hóa Trong mùa vụ ni ĐVTS khơng thích hợp: Nóng q, rét quá, mưa gió thất thường, thủy triều kiệt,…đều yếu tố ngoại cảnh ảnh hưởng đến sức khỏe ĐVTS Do cần phải điều tra thời gian trước từ 5-7 ngày chế độ thủy hóa ao NTTS; nhiệt độ, pH, độ trong, oxy hịa tan, NH 3, H2S, NO2…, để phân tích cho ĐVTS nuôi Một số sinh vật gây hại cho ĐVTS: tảo độc, sứa, cá dữ, lưỡng thê, bò sát, chim, động vật có vú… 1.2.3 Sự biến động thủy sinh vật 1.3 Sự biến đổi thủy sản ni Như ta biết q trình phát sinh bệnh có loại: loại cấp tính loại mạn tính - Động vật thủy sản bị bệnh cấp tính thường có màu sắc thể trạng khơng khác với thể bình thường, nơi bị bệnh thay đổi Cá thể bị bệnh chết tỷ lệ chết tăng nhanh, thời gian ngắn đạt đến đỉnh cao (2-3 ngày) - Động vật thủy sản bị bệnh mạn tính thường màu sắc tối (đen xám), thể trạng gầy yếu, tách đàn bơi lờ đờ mặt nước bao quanh bờ ao, tỷ lệ chết tăng lên từ từ mà thời gian dài đạt đỉnh cao (2-3 tuần) 1.3.1 Tập tính, hoạt động thuỷ sản - Nếu mơi trường nước nhiễm độc ĐVTS chết hàng loạt Do cần tìm hiểu kỹ tượng bệnh ĐVTS để chẩn đoán bệnh cách xác Đo tiêu mơi trường nước, so sánh với giới hạn cho phép để nuôi ĐVTS 1.3.2 Mức độ ăn thuỷ sản Mức độ ăn thuỷ sản bệnh giảm nhanh chóng, bỏ ăn Có số chất số tác dụng kích thích điều kiện bình thường yếu tố cần thiết để đáp ứng nhu cầu thể phát triển bình thường thể sinh vật có thay đổi số tổ chức quan có bệnh lý, yếu tố trở thành nguyên nhân gây bệnh 1.4 Yêu cầu tìm hiểu tình hình quản lý, chăm sóc thuỷ sản ni 1.4.1 Sử dụng thức ăn, phân bón, thuốc, hóa chất Định kỳ sử dụng để xử lý môi trường phù hợp tiêu chuẩn ao ni tơm ĐVTS mắc bệnh có liên quan đến vấn đề chăm sóc quản lý ao: Bón phân nhiều, chất lượng thức ăn phẩm chất, cho ăn nhiều…dễ dẫn đến chất lượng ni thay đổi: oxy hịa tan giảm, ảnh hưởng đến sức khỏe ĐVTS Ngược lại bón phân ít, thức ăn không đủ, môi trường nước nghèo, ĐVTS gầy yếu dễ bị bệnh công 1.4.2 Chế độ cho ăn, bón phân, sử dụng thuốc, hóa chất 1.4.3 Chế độ quản lý môi trường Yêu cầu kỹ thuật kiểm tra thể thủy sản nuôi 2.1 Kiểm tra da,vỏ động vật thủy sản Kiểm tra mắt thường phương pháp chủ yếu để kiểm tra bệnh, tìm tác nhân gây bệnh chỗ bị bệnh tượng phản ứng thể tác nhân gây bệnh Đối với ký sinh trùng lớn (như giáp xác, nấm thủy) nhìn thấy mắt thường, số tác nhân gây bệnh nhỏ (vi khuẩn, ký sinh đơn bào) mắt thường khơng thể nhìn thấy được, dựa vào dấu hiệu bệnh lý: bệnh khuẩn thường biểu xuất huyết viêm, thối rữa, hoại tử, dựng vẩy, ăn mòn vỏ… Các bệnh ký sinh trùng thường thể tiết nhiều chất nhờn, chảy máu có bào nang thành chấm nhỏ Do cần phải xem xét tỷ mỷ dấu hiệu để chẩn đoán bệnh phận sau: - Kiểm tra da, vỏ: Đối với cá, đặt cá khay, quan sát từ đầu đến miệng, mắt, nắp mang, vẩy, vây, tia vây,… có tác nhân gây bệnh nấm thủy my, rận cá, trùng mỏ neo, đỉa, giun, bào nang ký sinh đơn bào hay không; Đối với tơm, quan sát xem có sinh vật bám vỏ, phần phụ (râu, chân, đuôi), ăn mịn, đen râu vỏ phần phụ hay khơng 2.2 Kiểm tra mang động vật thủy sản - Kiểm tra mang: Đối với cá kiểm tra tơ mang nắp mang có đóng mở lại bình thường hay khơng, tơ mang có nhiều nhớt hay khơng, có dính bùn, ký sinh trùng, giáp xác, sán đơn chủ ký sinh hay khơng Đối với tơm có Isopod ký sinh mang hay không - Kiểm tra nội tạng: Kiểm tra tồn hệ tiêu hóa cá, dày, ruột có thức ăn khơng, có khơng, thành có xuất huyết khơng, có giun sán ký sinh tong dày ruột hay không Kiểm tra quan khác (gan, thận, lách, bóng hơi) có bào nang giun sán, điểm xuất huyết bệnh vi khuẩn hay không Đối với tôm, kiểm tra màu sắc hình thái gan tụy 2.3 Kiểm tra bên thể động vật thủy sản Kiểm tra chỗ bị bệnh mà mắt thường không quan sát Soi kính kiểm tra ký sinh trùng đơn bào, giun sán nhỏ Đối với tôm nhuộm tươi gan tụy Malachite Green để kiểm tra thể ẩn bệnh MBV… - Kiểm tra tơm: Bệnh cấp tính: tơm có màu sắc thể trạng khơng khác với bình thường Tơm bị bệnh chết tỷ lệ chết tăng lên nhanh, thời gian ngắn đạt đến đỉnh cao (2-5 ngày), ví dụ bệnh đốm trắng, bệnh đầu vàng, bệnh phát sáng Bệnh mãn tính: tơm bị bệnh mãn tính thường có màu sắc tối đen, thể trạng gầy yếu, chậm lớn, tôm tách đàn, bơi lờ đờ mặt nước quanh bờ ao, tỷ lệ chết tăng lên từ từ, thời gian dài đạt đỉnh cao (2-3 tuần, 1-2 tháng) Vì dụ: bệnh MBV, bệnh ăn mịn vỏ, bệnh nấm Dựa vào dấu hiệu bệnh tôm, cần quan sát thay đổi tôm sau: Màu sắc tơm: Màu sắc tơm bình thường liên quan với điều kiện môi trường nước Chẳng hạn ao cạn nước tôm có khuynh hướng sậm màu tơm nước sâu nước Tuy nhiên thay đổi màu sắc dấu hiệu sức khỏe tôm Tôm bị sốc bị bệnh thường thay đổi màu sắc Ví dụ: tơm chuyển màu đỏ phóng thích sắc tố carotene hủy hoại gan tụy Những tôm còi hay chậm lớn thường thấy vết đỏ trắng dọc lưng tập trung sắc tố màu nâu vàng Tơm ủ bệnh thường có vỏ cứng tối màu Tôm giai đoạn bệnh nặng có màu trắng đục đỏ Hâu hết vết thương tôm chuyển màu đen hay nâu sau thời gian ngắn Đó sinh sắc tố đen hay nâu sậm (melanin) để chống lại vi sinh vật bảo vệ tơm khỏi nhiễm bệnh Ngồi chuyển màu đen, có số trường hợp khơng bình thường khác ảnh hưởng đến phần phụ; phần phụ bị cong hay bị gãy sưng phồng lên Hiện tượng sưng lên thường hậu nhiễm trùng từ vùng đáy ao bị ô nhiễm chất thải Những biến đổi ruột, gan tụy: Tơm bị nặng dừng ăn ốm ăn bình thường Ruột khơng có thức ăn dấu hiệu tơm bệnh tơm có it thức ăn ruột giai đoạn đầu bệnh Ruột có màu trắng hay đỏ so với màu bình thường thức ăn viên Màu đỏ tơm ăn động vật khơng xương sống có màu đỏ ao giun nhiều tơ Nếu ruột có màu đỏ khơng phải giun nhiều tơ dấu hiệu cho biết tôm ăn xác tôm chết ao, điều chứng tỏ ao có tơm chết Màu sắc hệ gan tụy thay đổi nguy hiểm màu vàng mà ta thường gọi bệnh đầu vàng Hiện tượng mềm vỏ: Một dấu hiệu khác thường thấy tôm bị mềm vỏ kinh niên Thông thường vỏ tôm cứng lại sau lột xác 24 Nếu vỏ khơng cứng bị nhăn, biến dạng trở nên mẫn cảm với bệnh Có nhiều nguyên nhân gây tượng mềm vỏ như: - Thức ăn hôi thối, chất lượng thiếu thức ăn - Thả giống mật độ cao - pH thấp - Hàm lượng lân nước thấp - Thuốc trừ sâu Sinh vật bám: 10 Xử lý nước ương chlorine 20-25ppm; Tránh tượng môi trường nước giàu dinh dưỡng, nhiều chất hữu cơ, xác bã; - Chọn tôm mẹ tôm giống không nhiễm vi khuẩn gây bệnh 3.3.3 Kiểm tra, theo dõi tôm xử lý Quy trình thực phịng trị bệnh vi khuẩn Bước Chuẩn bị dụng cụ, thiết bị, vật tư, bảo hộ - Thiết bị: Kính hiển vi, kính lúp, lam, lamen, - Dụng cụ: Cân, kéo, kẹp, khay, thau, ly, vợt - Vật tư: giấy, bao tay, trang - Hóa chất: thuốc phịng, trị bệnh - Dụng cụ bảo hộ Bước 2: Thu mẫu bệnh phẩm - Xác định địa điểm, thời gian thu mẫu + Định thời gian cụ thể ao tom có tượng bệnh + Trang bị bảo hộ vào ao nuôi - Chuẩn bị dụng cụ - Thực thu mẫu + Dùng vợt vớt động vật thủy sản bệnh cho vào bọc cột dây + Có thể bơm oxy có - Bảo quản mẫu bệnh + Bảo quản nhiệt độ 20oC Bước Xác định ký sinh trùng - Xác định dấu hiệu bệnh lý thể động vật thủy sản bệnh: Xác định vị trí lấy mẫu bệnh Quan sát dấu hiệu bất thường thể + Quan sát mắt thường biểu tổng thể động vật thủy sản bệnh 37 + Quan sát chi tiết vị trí tren thể động vật thủy sản bệnh - Quan sát ký sinh trùng: Quan sát mẫu bệnh kính hiển vi, kính lúp Nhận dạng, phân loại vi khuận Xác định mức độ, tỉ lệ nhiễm Bước Xác định thuốc, tính tốn lượng thuốc sử dụng - Điều kiện quy mô trang trại: Đối tượng nuôi: động vật thủy sản Phạm vi áp dụng - Xác định loại thuốc phòng trị bệnh: Xác định loại thuốc Xác định phương pháp dùng thuốc - Thực phòng trị bệnh: Sử dụng thuốc phòng trị bệnh Kiểm tra, theo dõi tơm xử lý Bước Tính diện tích ao ni, thể tích nước có ao - Đo đạc - Tính tốn - Kết Bước Kiểm tra pH nước ao - Xác định vị trí cần đo ao - Đo pH nước ao - Đọc kết - Tính tốn Bước Cân thuốc - Cân đủ lượng phun xuống ao - Cân phân bổ vị trí 38 - Cho vào thùng, thau - Căn pH đáy ao xác định lượng thuốc cần phun Bước Hòa tan - Đong (lường) nước cho vào thùng xô theo lượng thuốc cần pha - Từ lượng nước lường cho thuốc vừa đủ để hòa tan - Dùng vá hòa tan lượng thuốc vào nước lường sẵn Bước Phun thuốc - Bảo hộ lao động - Phun - Phun xi theo chiều gió - Phun trước cánh quạt nước Bước 10 Theo dõi hoạt động tôm sau dùng thuốc - Quan sát tôm bơi lội ao sau dùng thuốc - Dùng sàng kiểm tra Bài tập thực hành học sinh sinh viên: Câu hỏi: Câu Mô tả yêu cầu kỹ thuật thu mẫu bệnh phẩm tôm vi khuẩn? Câu Mô tả phương pháp xác định nhận dạng bệnh vi khuẩn? Câu Mô tả phương pháp dùng thuốc phịng trị bệnh tơm vi khuẩn? Bài thực hành: Bài Mô tả yêu cầu kỹ thuật thu mẫu bệnh phẩm tôm vi khuẩn ? - Vị trí thu mẫu - Thời gian thu mẫu - Bảo quản mẫu tôm Bài Mô tả phương pháp xác định nhận dạng bệnh vi khuẩn? 39 - Cách thức quan sát khuẩn lạc, kính hiển vi - Nhận dạng loại bệnh vi khuẩn Bài Mơ tả phương pháp dùng thuốc phịng trị bệnh tơm vi khuẩn? - Xác định thể tích ao, mật độ tôm nuôi, cân pha thuốc, trộn, phun đề, theo dõi hoạt động tôm sau dùng Yêu cầu đánh giá kết học tập: Đánh giá kiến thức kỹ thuật nghiệp vụ liên quan thực hành Ghi nhớ: Thu mẫu thời gian, xác định bệnh phòng trị bệnh 40 Bài 4: PHÒNG BỆNH DO VI RUS Giới thiệu: Bệnh virus xuất nhiều gây thiệt hại nghiêm trọng cho nghề nuôi tôm Châu Á bệnh đầu vàng bệnh đốm trắng Năm 1986, bệnh đầu vàng gây thiệt hại lớn cho nghề nuôi tôm Đài Loan, Indonesia, Malaysia, Philippines Năm 1990, bệnh đầu vàng xuất Thái Lan bộc phát mạnh vào năm 1995 gây tổn thất cho nghề nuôi tôm gần 40 triệu USD Bệnh đốm trắng xuất Trung Quốc Nhật Bản vào năm 1992, 1993 Cho đến bệnh xem bệnh nguy hiểm nhất, gây hiệu nghiêm trọng đến nghề nuôi tơm Châu Á Mỗi lồi virus thường gây bệnh cho lồi, thường vài lồi tơm ni, mức độ khác tùy lồi vật chủ Mầm bệnh virus tồn dạng thể ẩn tất giai đoạn phát triển vật chủ, nhiên chúng gây bệnh gây chết vật chủ điều kiện thuận lợi Mầm bệnh virus lây lan từ lồi sang vài lồi khác có liên quan trực tiếp đến điều kiện gây sốc mật độ cao, biến đổi dột ngột nhiệt độ hay độ mặn Nhập chuyển giống từ nơi đến nơi khác nguyên nhân lây truyền bệnh Hiện chưa có cách trị bệnh virus chưa hiệu nên việc áp dụng biện pháp phòng bệnh chọn tôm giống bệnh, xử lý nước cấp nước thải q trình ni quản lý tốt môi trường nuôi cần thiết Mục tiêu: - Nêu đặc điểm bệnh lý tôm vi rus - Mơ tả phương pháp phịng bệnh vi rus cho tôm nuôi - Xác định thuốc sử dụng phương pháp phun vào mơi trường đề phịng bênh tôm nuôi vi rus - Nêu bước phương pháp phun thuốc vào môi trường để phịng bệnh vi rus cho tơm ni - Nêu lỗi thường mắc phải trình thực hành thao tác - Xác định bệnh lý tôm nuôi vi rus gây - Xác định lượng thuốc cần sử dụng để phun vào môi trường; - Thực thao tác phương pháp; 41 - Nhận biết lỗi mắc phải trình thực hiện; - Chủ động xếp, bố trí ngun liệu, dụng cụ theo trình tự thực bước phịng bệnh tơm ni - Tn thủ tiêu chuẩn chất lượng việc sử dụng thuốc để đảm bảo an tồn vệ sinh thực phẩm khơng gây hại cho môi trường, người; - Tuân thủ nguyên tắc bảo quản sử dụng thuốc Nội dung giảng: Yêu cầu kỹ thuật thu mẫu bệnh phẩm 1.1 Xác định địa điểm, thời gian thu mẫu Thời gian thu mẫu động vật thủy sản có dấu hiệu bất thường Thu thập thơng tin liên quan đến trình bộc phát bệnh từ người nuôi (địa điểm thu mẫu, thời gian thu mẫu, cá nuôi tuổi, mô tả dấu hiệu bệnh, ghi nhận thông tin quản lý ao nuôi v.v.) Ghi lại thông tin ao thu mẫu (địa điểm thu mẫu, thời gian thu mẫu, tôm nuôi tuổi, mô tả dấu hiệu bệnh, ghi nhận thông tin quản lý ao nuôi v.v.) 1.2 Chuẩn bị dụng cụ - Phịng học chun mơn hóa/nhà xưởng: phịng học, phịng thí nghiệm, trại sản xuất giống, ao ni cá nước - Phương tiện dạy học: Máy projecter, slide, hình ảnh minh họa - Thiết bị: Máy PCR, Kính hiển vi, kính lúp, lam, lamen, Dụng cụ: Cân điện tử, cân đồng hồ, ly thủy tinh, đũa thủy tinh, bình tam giác, ống nghiệm, kẹp, đèn cồn, giấy vệ sinh, khăn, - Học liệu, dụng cụ, nguyên vật liệu: Thau, xô, vợt, bao tay, trang, - Vật tư: chlorine, ao cá (mơ hình), nước cất - Hóa chất: thuốc phòng bệnh - Dụng cụ bảo hộ 1.3 Thực thu mẫu Thu mẫu động vật thủy sản có dấu hiệu bị bệnh, phải thu động vật thủy 42 sản lờ đờ cịn sống khơng thu tơm chết Mỗi ao thu từ 5-10 con, cá 1-2 Chuyển động vật thủy sản phịng thí nghiệm thùng xốp hay xơ nhựa có sục khí Về đến phịng thí nghiệm xử lý mẫu cịn sống (tối thiểu tôm/ao, cá con) Mỗi ao thu 2-3 tôm khỏe, cá Xử lý mẫu (mỗi xem mẫu) 1.4 Bảo quản mẫu bệnh Yêu cầu kỹ thuật xác định bệnh Phân lập - Dùng ống chích 1ml (kim tiêm tiệt trùng) lấy huyết tương từ gốc chân bò thứ năm lấy trực tiếp từ tim - Nhỏ giọt huyết tương vào đĩa TSA + 1.5 % NaCl - Sau dùng que cấy cấy theo bước cấy tiêu chuẩn iv Để đĩa TSA 28 ºC từ 16-24 - Nếu có vi khuẩn phát triển đường cấy chọn 01 khuẩn lạc theo thứ tự ưu tiên 4, 3, 2, Sau cấy truyền sang đĩa TSA khác để khẳng định tính rịng - Chọn 01 khuẩn lạc đĩa cấy rịng ni tăng sinh môi trường NB + 1.5% 28 ºC 18 - Cho 0.9ml dung dịch vi khuẩn 0.9 ml dung dịch glycerol 50% vào ống eppendorf dung tích 2ml Lắc giữ - 80 ºC Ly trích DNA RNA Sau lấy mẫu huyết tương, cắt ngang đầu tôm cắt dọc phần đầu làm đôi Phân nửa sử dụng để ly trích RNA DNA Ly trích RNA phương pháp Trizol (sử dụng máy li tâm thường) trữ RNA - 80 ºC sau ly trích xong Ly trích DNA phương pháp CTAB lysis buffer DNA sau ly trích giữ - 20 ºC Có thể giữ mẫu tơm - 80 ºC chưa có thời gian ly trích RNA DNA 2.1 Mùa vụ tôm bị bệnh 43 Mùa thường xuất bệnh mùa xuân đầu hè thời tiết biến đổi nhiều biên độ nhiệt độ ngày biến thiên lớn (>5oC) gây sốc cho tôm 2.2 Xác định loài vi rút gây bệnh Tác nhân gây bệnh MBV Monodon Baculovirus, cấu trúc nhân (acid nucleic) ds DNA, có lớp vỏ bao, dạng hình que Virus ký sinh tế bào biểu mơ hình ống gan tụy tế bào biểu bì phía trước ruột giữa, virus tái sản xuất bên nhân tế bào vật nuôi, bao gồm giai đoạn sau: - Giai đoạn tiềm ẩn: Sau tế bào nhiễm MBV giai đoạn sớm tế bào chất biến đổi - Giai đoạn 1: Nhân tế bào sưng nhẹ, nhiễm sắc thể tan di chuyển sát màng nhân Tế bào chất dần chức chúng hình thành giọt mỡ Virus bắt đầu gây ảnh hưởng - Giai đoạn 2: Nhân sưng nhanh, số lượng virus tăng nhanh, xuất thể ẩn nhân - Giai đoạn 3: Tế bào bị bệnh, nhân tăng lên gấp lần, đường kính bình thường tăng lần thể tích, bên nhân có đến nhiều thể ẩn, thể ẩn có chứa đầy virus Virus phá hủy tế bào ký chủ, tiếp tục di chuyển sang tế bào khác theo chất tiết ngồi mơi trường, tạo thành virus tự tồn bùn nước Tác nhân gây bệnh đầu vàng: Nidovirus có dạng hình que, kích thước 40-45 x150-170nm, cấu trúc acid nhân chuỗi ARN Virus gây bệnh đầu vàng thường ký sinh tế bào chất tế bào ngoại trung phơi bì mang, quan tạo bạch cầu hồng cầu 2.4 Xác định mức độ nhiễm bệnh tốc độ phát triển bệnh Hiện tượng tôm bệnh thường xảy tôm giống đến tôm trưởng thành, khu vự nuôi thâm canh quảng canh Khi môi trường nuôi tôm xấu bệnh dễ xuất Bệnh đốm trắng xuất nhiều động vật giáp xác tự nhiên, lồi tơm he, tơm nước ngọt, ấu trùng trùng, bệnh lây lan nhanh chóng đầm nuôi tôm Bệnh đốm trắng lây truyền qua đường nằm ngang Virus lây từ giáp xác (chân chèo, tôm cua) nhiễm bệnh đốm trắng từ mơi trường bên ngồi ao ao ni tôm Khi sứ đề kháng củ tôm nuôi yếu, bệnh lây lan 44 nhanh Bệnh đốm trắng khả lây truyền qua đường thằng đứng Nhưng q trình đẻ trứng tơm mẹ thải virus đốm trắng từ buồng trứng chúng, ấu trùng tơm dễ dàng nhiễm virus từ giai đoạn sớm Bệnh xuất sau thả giống 20 ngày, thường gặp 50-70 ngày ao nuôi tôm sú thâm canh Ngồi bệnh cịn gặp số lồi tơm tự nhiên khác thẻ, bạc, Ở Việt Nam, vùng ni tơm sú tỉnh phía Bắc, miền Trung Nam có tơm bị bệnh đầu vàng gây tôm chết Bệnh đầu vàng lây truyền theo đường nằm ngang, virus từ tôm nhiễm bệnh tiết môi trường số tôm tự nhiên nhiễm bệnh đầu vàng lây truyền cho tơm ao ni Hoặc số lồi chim ăn tôm bị bệnh từ ao sang ao khác 2.5 Quan sát biểu bệnh lý tôm ao Khi tôm nhiễm virus MBV, dấu hiệu không biểu rõ ràng Khi tôm nhiễm bệnh nặng phát bệnh thường có biểu số dấu hiệu sau: - Tơm có màu tối xanh tái, xanh xẫm Tôm ăn, hoạt động yếu sinh trưởng chậm - Các phần phụ vỏ kitin có tượng hoại tử, có nhiều sinh vật bám (ký sinh trùng đơn bào, tảo bám, vi khuẩn dạng sợi) - Gan tụy teo lại có màu trắng vàng, thối nhanh Dấu hiệu bệnh đốm trắng: Tơm có nhiều đốm trắng 0.5-3mm xuất vỏ, vỏ đầu ngực đốt bụng thứ sau lan khắp thể - Thường liên quan đến bệnh đỏ thân - Các dấu hiệu khác: Đầu tiên thấy tôm tầng mặt dạt vào bờ, bỏ ăn, hoạt động Phụ bị tổn thương, nắp mang phồng lên vỏ có nhiều sinh vật bám -Virus gây bệnh đốm trắng thường bộc phát thành dịch Khi có dấu hiệu sức khỏe tơm yếu, đồng thời đốm trắng xuất hiện, tỷ lệ tôm phát bệnh vòng 3-10 ngày lên đến 100% tôm chết hầu hết ao nuôi 45 Dấu hiệu bệnh đầu vàng: Biểu tôm phát triển nhanh ăn nhiều mức bình thường Đột ngột tôm dừng ăn, sau hai ngày tôm dạt vào bờ chết - Mang gan tụy có màu vàng nhạt, tồn thân có màu nhợt nhạt - Bệnh gây tỷ lệ chết nghiêm trọng đến 100% vịng 3-5 ngày - Khi tơm nhiễm bệnh đầu vàng kiểm tra tiêu máu thấy có dấu hiệu bất thường Nhân tế bào hồng cầu thoái hóa, kết đặc lại bị phá hủy phân mãnh - Kiểm tra mơ bệnh học tế bào có tượng hoại tử nhiều quan xuất thể vùi tế bào chất, nhân thối hóa kết đặc - Bệnh thường kết hợp với tượng tảo nở hoa, đáy ao nuôi xấu, mật độ nuôi cao ảnh hưởng thuốc trừ sâu 2.7 Kết luận Dựa vào dấu hiệu phân lập kết PCR, bệnh vi rus cách phòng bệnh Yêu cẫu kỹ thuật phòng trị bệnh 3.1 Điều kiện quy mô trang trại 3.1.1 Đối tượng nuôi Động vật thủy sản ương nuôi 3.1.2 Phạm vi áp dụng Sử dụng phòng trị cho diện tích mặt nước tơm bị nhiễm bệnh 3.2 Xác định loại thuốc phòng trị bệnh 3.2.1 Xác định loại thuốc Chủ yếu sử dụng hóa chất xử lý hết mầm bệnh 3.2.2 Xác định phương pháp dùng thuốc Phương pháp chủ yếu phun xuống ao tôm Cho bao tay vào tay kỹ thuật - Xác định lượng nước, thể tích ao ni - Cân hóa chất theo nồng độ xử lý 46 - Dùng xô hịa hóa chất (Chlorin) với nước, rải xuống khắp ao - Điều chỉnh quạt nước chạy - Nồng độ sử dụng lớn 30 ppm (g/m3) Sục khí liên tục sau ngày đêm Chlorin phản ứng bay hết - Kiểm tra khả diệt trùng 3.3 Thực biện pháp phòng trị bệnh 3.3.1 Khoanh vùng, cô lập nơi xảy dịch bệnh - Loại bỏ động vật thủy sản bệnh - Ngăn chặn giáp xác khác vào ao nuôi - Nước ao nuôi tôm bị bệnh đốm trắng phải xử lý trước xả - Khi phát bệnh tốt thu hoạch 3.3.2 Thực phòng trị bệnh - Chọn tơm bố mẹ có chất lượng tốt, không nhiễm WSSV - Không vận chuyển tôm giống mật độ cao - Nguồn nước cấp cho ao nuôi tôm phải lắng lọc khử trùng - Chọn tôm giống tốt không bị bệnh đầu vàng - Loại bỏ tôm bệnh - Tẩy trùng ao ương nuôi kênh cấp nước thật triệt để trước ni - Xử lý nước kỹ trước nuôi chlorine 25ppm Hạn chế thay nước nuôi Xem xét tơm thường xun, phát có dấu hiệu bệnh tốt thu hoạch Nếu tôm càn giai đoạn tương đối nhỏ cần xử lý nước ao trước tháo bỏ - Không dùng tôm giống có nhiễm mầm bệnh MBV - Tẩy dọn ao, bể ni phương pháp phịng chung - Ni tơm mùa vụ, quản lý chăm sóc tốt, cung cấp đầy đủ thức ăn chất lượng - Không để tơm sốc q trình ni - Kiểm dịch đàn tôm bố mẹ trước cho đẻ 47 - Xử lý nước trước ấp trứng 3.3.3 Kiểm tra, theo dõi tơm xử lý Quy trình thực hành phịng bệnh tơm vi rus Bước Chuẩn bị dụng cụ, thiết bị, vật tư, bảo hộ - Thiết bị: Máy PCR, Kính hiển vi, kính lúp, lam, lamen, - Dụng cụ: Cân, kéo, kẹp, khay, thau, ly, vợt, đũa thủy tinh, bếp, đèn cồn - Vật tư: giấy, bao tay, trang - Hóa chất: thuốc phịng bệnh - Vật liệu: Động vật thủy sản - Dụng cụ bảo hộ Bước 2: Thu mầu Động vật thủy sản bệnh - Xác định địa điểm, thời gian thu mẫu - Chuẩn bị dụng cụ - Thực thu mẫu - Bảo quản mẫu bệnh Bước 3: Xác định vi rus gây bệnh - Chuẩn bị dụng cụ - Mùa vụ tơm bị bệnh - Xác định lồi vi khuẩn gây bệnh - Xác định mức độ nhiễm bệnh tốc độ phát triển bệnh - Quan sát, mô tả dấu hiệu bệnh lý thể tôm - Kết luận Bước Tính tốn thể tích ao, mật độ, khối lượng tôm nuôi ao - Cho bao tay vào kỹ thuật - Đo đạc - Dùng vợt vớt tôm 48 - Để nước chảy hết sau cân vợt tơm có vợt, ghi lại khối lượng, trừ khối lượng vợt - Cho tôm thau chứa nước Bước Xác định cân lượng thuốc sử dụng - Từ lượng tôm thẻ thức ăn cân, tính tốn cho số lượng thuốc cân phải xác nồng độ 3-5ppm - Cắm điện nhấn nút mở (ON) cân điện tử - Cho hộp lồng giấy vào sau điều chỉnh cân điện tử mức - Dùng muỗng đưa thuốc từ từ vào cho số gram cân tương ứng với lượng thuốc cần dùng - Đóng cân lại (tránh tác động bên ngoài) đọc số - Lấy thuốc khỏi cân, tắt cân Bước Pha thuốc - Đong (lường) nước cho vào bình nón theo lượng thuốc cần pha - Từ lượng nước lường cho vào ly thủy tinh vừa đủ để hòa tan thuốc - Dùng giấy cân cho thuốc vào ly - Dùng nước ấm hòa cho tan thuốc - Dùng đũa thủy tinh hòa tan lượng thuốc vào nước lường sẵn Bước Phun thuốc - Phun khắp ao - Phun xi theo chiều gió - Quạt nước chạy để thuốc hòa tan khắp ao Bước Theo dõi hoạt động tôm - Theo dõi tôm hoạt động sau phun thuốc - Cho thức ăn vào vó để quan sát - Canh thời gian để kiểm tra theo dõi Bài tập thực hành học sinh sinh viên: Câu hỏi: 49 Câu Nêu yêu cầu kỹ thuật thu mẫu bệnh phẩm tôm vi russ? Câu Mô tả phương pháp xác định nhận dạng bệnh vi rus? Câu Mô tả phương pháp dùng thuốc phịng bệnh tơm vi rus? Bài thực hành: Bài Nêu yêu cầu kỹ thuật thu mẫu bệnh phẩm tôm vi rus ? - Vị trí thu mẫu - Thời gian thu mẫu - Bảo quản mẫu tôm Bài Mô tả phương pháp xác định nhận dạng bệnh vi rus? - Cách thức quan sát khuẩn lạc, kính hiển vi - Nhận dạng loại bệnh vi rus Bài Mơ tả phương pháp dùng thuốc phịng bệnh tơm vi rus? - Xác định thể tích ao, mật độ tôm nuôi, cân pha thuốc phun đề, theo dõi hoạt động tôm sau dùng Yêu cầu đánh giá kết học tập: Đánh giá kiến thức kỹ thuật nghiệp vụ liên quan thực hành Ghi nhớ: cắt phụ bộ, thu gan, tránh làm vỡ quan nội tạng Cần nhấc mũi kéo lên tránh làm thủng ruột, nguồn tạp nhiễm làm ảnh hưởng đến kết phân lập 50 TÀI LIỆU THAM KHẢO [1] Từ Thanh Dung, (2005) Giáo trình Bệnh học thủy sản đại cương Trường Đại học Cần Thơ [2] Đỗ Thị Hịa, (2006) Giáo trình Bệnh động vật thủy sản Trường Đại học Nha trang, NXB Nông Nghiệp [3] Từ Thanh Dung, Đặng Thị Hoàng Oanh, Trần Thị Tuyết Hoa, (2005) Giáo trình Bệnh học thủy sản Trường đại học Cần Thơ [4] Bùi Quang Tề, (2006) Bệnh động vật thủy sản Viện nghiên cứu Nuôi trồng Thủy sản I, NXB Nông nghiệp 51 ... phương pháp - Đánh giá ảnh hưởng môi trường tới sức khỏe thủy sản nuôi - Xác định nguyên nhân, tác nhân gây bệnh thủy sản ni - Chủ động phối hợp nhóm thực quy trình chẩn đốn bệnh thủy sản ni - Tuân... phịng bệnh - Vật liệu: Động vật thủy sản - Dụng cụ bảo hộ Bước 2: Thu mầu Động vật thủy sản bệnh - Xác định địa điểm, thời gian thu mẫu - Chuẩn bị dụng cụ - Thực thu mẫu - Bảo quản mẫu bệnh Bước... sản - Cho thức ăn vào vó - Vợt tơm cho vào thau - Theo dõi tơm hoạt động - Kiểm tra bên ngồi thể động vật thủy sản - Kiểm tra mang tôm - Kiểm tra bên đường ruột, gan động vật thủy sản Bước Kết -