NTTU-NCKH-04 CỘNG HÒA XÃ HỘI CHỦ NGHĨA VIỆT NAM Độc lập – Tự – Hạnh phúc Đơn vị chủ trì: Trường Đại học Nguyễn Tất Thành BÁO CÁO TỔNG KẾT ĐỀ TÀI NCKH DÀNH CHO CÁN BỘ - GIẢNG VIÊN 2021 Tên đề tài: THẨM ĐỊNH QUY TRÌNH PHÂN TÍCH ĐỒNG PHÂN QUANG HỌC LANSOPRAZOL BẰNG HPLC SỬ DỤNG PHA ĐỘNG CHỨA DẪN XUẤT BETA-CYCLODEXTRIN Số hợp đồng: 2021.01.74 Chủ nhiệm đề tài: NGUYỄN THẢO HẠNH NGÂN Đơn vị công tác: Khoa Dược - Đại học Nguyễn Tất Thành Thời gian thực hiện: 4/2021 – 12/2021 TP Hồ Chí Minh, tháng 12 năm 2021 CỘNG HÒA XÃ HỘI CHỦ NGHĨA VIỆT NAM Độc lập – Tự – Hạnh phúc - Đơn vị chủ trì: Trường Đại học Nguyễn Tất Thành BÁO CÁO TỔNG KẾT ĐỀ TÀI NCKH DÀNH CHO CÁN BỘ - GIẢNG VIÊN 2021 Tên đề tài: THẨM ĐỊNH QUY TRÌNH PHÂN TÍCH ĐỒNG PHÂN QUANG HỌC LANSOPRAZOL BẰNG HPLC SỬ DỤNG PHA ĐỘNG CHỨA DẪN XUẤT BETA-CYCLODEXTRIN Số hợp đồng: 2021.01.74 Chủ nhiệm đề tài: NGUYỄN THẢO HẠNH NGÂN Đơn vị công tác: Khoa Dược Thời gian thực hiện: 4/2021-12/2021 Các thành viên phối hợp cộng tác: MỤC LỤC MỤC LỤC DANH MỤC CÁC KÝ HIỆU, CÁC CHỮ VIẾT TẮT DANH MỤC BẢNG DANH MỤC HÌNH ẢNH MỞ ĐẦU CHƯƠNG TỔNG QUAN TÀI LIỆU 10 1.1 TỔNG QUAN VỀ LANZOPRAZOL 10 1.2 ĐẠI CƯƠNG VỀ ĐỒNG PHÂN ĐỐI QUANG 13 1.3 SẮC KÝ LỎNG HIỆU NĂNG CAO Error! Bookmark not defined 1.3 PHA ĐỘNG ĐỐI QUANG TRONG SẮC KÝ LỎNG HIỆU NĂNG CAO (CHIRAL ADDITIVE MOBILE PHASE) 16 1.3 MỘT SỐ PHƯƠNG PHÁP ĐỊNH LƯỢNG DEXLANSOPRAZOL 18 CHƯƠNG ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 20 2.1 ĐỐI TƯỢNG NGHIÊN CỨU 20 2.2 PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 22 2.3 PHƯƠNG PHÁP CHUẨN BỊ MẪU 25 CHƯƠNG KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 26 3.1 KHẢO SÁT CỘT SẮC KÝ 26 3.2 KHẢO SÁT TÁC NHÂN ĐỐI QUANG 28 3.3 KHẢO SÁT PHA ĐỘNG 31 3.4 THẨM ĐỊNH QUY TRÌNH PHÂN TÍCH 37 CHƯƠNG KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 52 DANH MỤC CÁC KÝ HIỆU, CÁC CHỮ VIẾT TẮT Từ viết tắt Tên tiếng Anh Tên tiếng Việt ACN Acetonitril CE Capillary electrophoresis CM-β-CD Carboxymethyl-beta-cyclodextrin CSPs Chiral stationary phases Pha tĩnh bất đối Đối chiếu ĐC EMEA European Medicines Evaluation Agency FDA Food and Drug Administration HPLC High performance liquid Sắc ký lỏng hiệu cao chromatography HP- β-CD Hydroxypropyl-beta-cyclodextrin IR Infrared Phổ hồng ngoại LOD Limit of detection Giới hạn phát LOQ Limit of quantification Giới hạn định lượng M- β-CD Methyl-beta-cyclodextrin MeOH Methanol MS Mass spectrometry RP-HPLC Reversed phase- High performance Sắc ký lỏng hiệu cao liquid chromatography SBE- β-CD SKĐ pha đảo Sulfo butylether- beta-cyclodextrin Sắc ký đồ DANH MỤC BẢNG Bảng 1.1 Tính chất số pha động sắc ký lỏngError! Bookmark not defined Bảng 2.1 Danh mục chất đối chiếu 20 Bảng 2.2 Danh mục hóa chất thuốc thử 21 Bảng 2.3 Danh mục trang thiết bị 21 DANH MỤC HÌNH ẢNH Hình 1.1 Cơng thức cấu tạo lansoprazol 10 Hình 1.2 Cơng thức cấu tạo dexlansoprazol 10 Hình 3.1 SKĐ khảo sát thay đổi loại cột sắc ký khác 27 Hình 3.2 Đồ thị ảnh hưởng cột sắc ký HPLC lên phân tách đồng phân lansoprazol 27 Hình 3.3 SKĐ khảo sát thay đổi tác nhân đối quang khác 29 Hinh 3.4 SKĐ khảo sát thay đổi nồng độ tác nhân đối quang 30 Hình 3.5 Đồ thị ảnh hưởng nồng độ tác nhân đối quang SBE-β-CD lên phân tách đồng phân lansoprazol 30 Hình 3.6 SKĐ khảo sát tách đồng phân thay đổi pH pha động 32 Hình 3.7 Đồ thị ảnh hưởng pH pha động lên phân tách đồng phân lansoprazol 32 Hình 3.8 SKĐ khảo sát tách đồng phân thay đổi nồng độ đệm NaH2PO4 33 Hình 3.9 Đồ thị ảnh hưởng nồng độ đệm NaH2PO4 lên phân tách đồng phân lansoprazol 34 Hình 3.10 SKĐ khảo sát tách đồng phân thay đổi tỷ lệ pha động 35 Hình 3.11 Đồ thị ảnh hưởng tỷ lệ pha động lên phân tách đồng phân lansoprazol 36 TÓM TẮT KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU STT Kết quà đạt Công việc thực Khảo sát điều kiện phân tích đồng Điều kiện phân tích phù hợp với tiêu phân quang học hợp chất chí lựa chọn lansoprazol phương pháp HPLC sử dụng pha động chứa dẫn xuất β-cyclodextrin Thẩm định quy trình phân tích Quy trình phân tích thẩm định xây dựng STT Sản phẩm đăng ký 01 quy trình phân tích đồng phân 01 quy trình phân tích đồng phân lansoprazol sử dụng pha động lansoprazol sử dụng pha động chứa chứa tác nhân đối quang tác nhân đối quang thẩm định thẩm định theo hướng dẫn ICH theo hướng dẫn ICH 01 báo khoa học đăng tạp 01 báo khoa học đăng tạp chí Sản phẩm đạt chí Thời gian đăng ký : từ tháng 4/2021 đến tháng 12/2021 Thời gian nộp báo cáo: ngày 30/12/2021 MỞ ĐẦU Ngày nay, bên cạnh việc nghiên cứu tổng hợp hợp chất việc phân tách hợp chất đối quang từ hỗn hợp racemic quan tâm Các hợp chất đối quang khơng khác tính chất vật lý hóa học khác cấu trúc không gian dẫn đến khác biệt tác dụng sinh học Vì vậy, quan quản lý Thuốc Thực phẩm Hoa Kỳ (FDA) khuyến cáo việc sản xuất chế phẩm thuốc dạng đồng phân riêng lẻ Với phát triển phương pháp phân tích đồng phân quang học xuất không ngừng chế phẩm thuốc với dạng đồng phân riêng lẻ thị trường, địi hỏi phải có quy trình kiểm tra độ tinh khiết đồng phân thuốc thành phẩm Nhóm thuốc ức chế bơm proton (PPI) sử dụng điều trị loét dày- tá tràng có nhiều thành tựu bên cạnh nhóm thuốc kháng acid, thuốc bao phủ niêm mạc dày, thuốc kháng thụ thể histamin H2 kháng sinh diệt vi khuẩn Helicobacter pylori Những năm gần đây, nhóm thuốc có hoạt chất biết đến nhiều như: omeprazol, pantoprazol, lansoprazol, rabeprazol,… Nhóm thuốc ngồi định cho bệnh lt dày- tá tràng cịn sử dụng cho bệnh nhân mắc bệnh trào ngược dày thực quản (GERD), hội chứng Zollinger-Ellison Bên cạnh việc nghiên cứu hoạt chất mới, nhóm thuốc tập trung vào tổng hợp dạng đối quang hoạt chất có esomeprazol, dexlansoprazol, dexrabeprazol,… ưu điểm liều dùng giảm, tác dụng chuyên biệt receptor, độc tính giảm so với dạng thuốc racemic Hiện nay, chế phẩm thuốc đối quang nhóm PPI (esomeprazol, dexlansoprazol, dexrabeprazol) chưa sản xuất nhiều Việt Nam, thành phẩm nhập có giá thành lại đắt Với nhu cầu thị trường ngày lớn, công ty dược Việt Nam nghiên cứu sản xuất chế phẩm thuốc đối quang kể Vì vậy, cần phải xây dựng quy trình tách đồng phân đối quang hoạt chất để từ kiểm độ tinh khiết đồng phân Trong nhóm thuốc PPI, lansoprazol dạng đồng phân đối quang dexlansoprazol phát minh sau nên tạp chí ngồi nước có số lượng nghiên cứu chúng cịn Đại học Nguyễn Tất Thành hạn chế Hai phương pháp phân tích đồng phân quang học thường sử dụng phương pháp điện di mao quản (CE) phương pháp sắc kí lỏng hiệu cao (HPLC) với điểm thuận lợi khó khăn khác Vì lẽ đó, với mong muốn xây dựng quy trình phân tích lansoprazol với nhiều khả ứng dụng vào thực tiễn, đề tài “Thẩm định quy trình phân tích đồng phân quang học lansoprazol HPLC sử dụng pha động chứa dẫn xuất beta-cyclodextrin” thực với mục tiêu sau: - Xây dựng quy trình phân tích đồng phân quang học lansoprazol kỹ thuật sắc ký lỏng hiệu cao - Thẩm định quy trình phân tích đồng phân quang học lansoprazol kỹ thuật sắc kí lỏng hiệu cao xây dựng Đại học Nguyễn Tất Thành CHƯƠNG TỔNG QUAN TÀI LIỆU 1.1 TỔNG QUAN VỀ LANZOPRAZOL Lansoprazol có tên khoa học đầy đủ 2-[3-Methyl-4-(2,2,2-trifluoroethoxy)-2- pyridinyl]methylthio-1H-benzimidazole (C16H14F3N3OS) với khối lượng phân tử 353,363 g/mol Công thức cấu tạo lansoprazol sau: Hình 1.1 Cơng thức cấu tạo lansoprazol Nhận xét cấu trúc: Vị trí nguyên tử lưu huỳnh (S) trung tâm tạo nên nhóm sulfoxid vị trí xác định nên hai đồng phân lập thể (R) (S) Chúng có cơng thức phân tử cơng thức cấu tạo hồn tồn giống phân bố mặt phẳng không gian lại khác nhau, dẫn đến khác biệt tác dụng dược lý Dexlansoprazol đồng phân (R) lansoprazol, có cơng thức cấu tạo sau: Hình 1.2 Cơng thức cấu tạo dexlansoprazol Đại học Nguyễn Tất Thành ... tích Quy trình phân tích thẩm định xây dựng STT Sản phẩm đăng ký 01 quy trình phân tích đồng phân 01 quy trình phân tích đồng phân lansoprazol sử dụng pha động lansoprazol sử dụng pha động chứa chứa... muốn xây dựng quy trình phân tích lansoprazol với nhiều khả ứng dụng vào thực tiễn, đề tài ? ?Thẩm định quy trình phân tích đồng phân quang học lansoprazol HPLC sử dụng pha động chứa dẫn xuất beta-cyclodextrin”... kiện phân tích đồng Điều kiện phân tích phù hợp với tiêu phân quang học hợp chất chí lựa chọn lansoprazol phương pháp HPLC sử dụng pha động chứa dẫn xuất β-cyclodextrin Thẩm định quy trình phân tích