NTTU-NCKH-05 CỘNG HÒA XÃ HỘI CHỦ NGHĨA VIỆT NAM Độc lập - Tự - Hạnh phúc Đơn vị chủ trì: Trường Đại học Nguyễn Tất Thành BÁO CÁO TƠNG KẾT ĐÈ TÀI NCKH DÀNH CHO CÁN Bộ - GIẢNG VIÊN 2016 - 2017 Tên đề tài: XÂY DỤNG PHƯƠNG PHÁP PHÂN TÍCH ĐỊNH LƯỢNG CEFUROXIME AXETIL TRONG BỘT PHA HỎN DỊCH ZINAT 125 MG BẰNG PHƯƠNG PHÁP HPLC Số hợp đồng: 2017.01.31 /HĐ-KHCN Chủ nhiệm đề tài: Huỳnh Tân Đơn vị công tác: Khoa Dược Thời gian thực hiện: 06 tháng TP Hồ Chỉ Minh, ngày 20 thảngio năm 2017 CỘNG HÒA XÃ HỘI CHỦ NGHĨA VIỆT NAM Độc lập - Tự - Hạnh phúc Đơn vị chù trì: Trường Đại học Nguyễn Tất Thành BÁO CÁO TỎNG KÉT ĐÈ TÀI NCKH DÀNH CHO CÁN Bộ - GIẢNG VIÊN 2016 - 2017 Tên đề tài: XÂY DỤNG PHƯƠNG PHÁP PHÂN TÍCH ĐỊNH LƯỢNG CEFUROXIME AXETIL TRONG BỘT PHA HỎN DỊCH ZINAT 125 MG BẰNG PHƯƠNG PHÁP HPLC Chủ nhiệm đề tài: Huỳnh Tân Đơn vị công tác: Khoa Dược Thời gian thực hiện: 06 tháng STT Các thành viên phối họp cộng tác: Họ tên Chuyên ngành Cơ quan công tác Ký tên MỤC LỤC Chương 1.1 TÓNG QUAN TĨNG QUAN VỀ TÍNH CHẤT CỦA CEFUROXIME 1.1.1 Tổng quan kháng sinh 1.1.2 Phân loại nhóm kháng sinh 1.2 Cefuroxime - Đối tượng phương pháp nghiên cứu 1.2.1 Cefuroxime 1.2.2 Đối tượng phương pháp nghiên cứu 1.3 PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN cứu 1.3.1 1.4 Phương pháp sắc ký lỏng hiệu cao Các đại lượng đăc trưng 1.4.1 Thời gian lưu thực (tR - Retention time) 1.4.2 Hệ số dung lượng k’: Capacity Factor 1.4.3 1.4.4 Độ chọn lọc a 10 Số đĩa lý thuyết N 10 1.4.5 Độ phân giải (Rs - Resolution) 10 1.4.6 Hệ số không đoi xứng (T - Tailing factor) 11 1.5 Hệ thống H PLC 11 1.5.1 Các phận hệ thống HPLC 11 1.5.2 Một số thông so sắc ký đặc trưng cho HPLC 14 Chương THỤC NGHIỆM 20 2.1 Dụng cụ, thiết bị 20 2.2 Hoá chất 20 2.3 Nội dung nghiên cứu 20 2.3.1 Điều kiện sắc ký: 20 2.3.2 2.4 Khảo sát tính tươngthích hệ thống sắc ký: 21 2.4.1 Chương 3.1 Qui trình phân tích: 20 Yêu cầu: 21 KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 24 Khảo sát tính tương thích hệ thống sắc ký: 24 TÀI LIỆU THAM KHẢO 35 DANH MỤC CÁC KÝ HIỆU, CÁC CHỮ VIÉT TÁT HPLC Sắc ký lõng hiệu cao MeCN Acetonitril AFTA Khu vục mậu dịch tụ Asean BYT Bộ Y tế DĐVN Dược dien Việt Nam EP Dược điển Châu Âu HPLC Sắc ký lỏng hiệu cao MeOH Methanol RS Độ phân giãi N Số đĩa lý thuyết RSD Độ lệch chuẩn tương đối SD Độ lệch chuẩn TLC Sắc ký lớp mỏng tR Thời gian lưu TT Thông tư USP Dược điển Mỹ WHO Tổ chức Y tế Thế giới DANH MỤC • BẢNG Bảng 3.1 Ket khảo sát Ceíiiroxim axetil diasteroisomer B 24 Bảng 3.2 Kết khảo sát Cefuroxim axetil diasteroisomer A 24 Bảng 3.3 Kết khảo sát độ phân giải Cefuroxim axetil diasteroisomer B 25 Bảng 3.4 Kết khảo sát độ phân giải Cefuroxim axetil diasteroisomer A 25 Bảng 3.5 Ket khảo sát độ phân giải Cefuroxim axetil delta - isomer 26 Bảng 3.6 Thời gian lưu Cefuroxim axetil diasteroisomer B 26 Bảng 3.7 Thời gian lưu Cefuroxim axetil diasteroisomer A 27 Bảng 3.8 Tính tuyến tính Cefuroxime axetil diastereoisomer A B 27 Bảng 3.9 Diện tích đỉnh mẫu chuẩn Cefuroxime axetil diastereoisomer A B 28 Bảng 3.10 Lượng cân mầu thử Cefuroxime 29 Bảng 3.11 Diện tích đỉnh Cefuroxim axetil diastereoisomer B với độ pha loàng: 500 29 Bảng 3.12 Tong diện tích đỉnh Cefuroxim axetil diastereoisomer A B với độ pha loãng: 500 29 Bảng 3.13 Kết so với nhãn (%) 30 Bảng 3.14 Kết trung bình 30 Bảng 3.15 Mầu chuẩn Cefuroxime 30 Bảng 3.16 Thông so pha mẫu 30 Bảng 3.17 kết định lượng theo % 30 Bảng 3.18 Diện tích mầu chuẩn 31 Bảng 3.19 Số liệu diện tích đỉnh độđúng 31 Bảng 3.20 Bảng kết khảo sát độ đúngcủa phương pháp 33 DANH MỤC HÌNH ẢNH Hình 1.2.1 Cơng thức cấu tạo Cefuroxime Hình 1.5.1 Cách xác định thời gian lưu 14 Hình 1.5.2 Xác định hiệu lực cột 15 Hình 1.5.3 Hiện tượng kéo đuôi (trái) tượng đồ đầu (phải) 16 Hình 1.5.4 Độ phân giải cùa hai chất điều kiện sắc ký 17 Hình 1.5.5 Ảnh hưởng số đĩa lý thuyết, độ phân giải a hệ so k’ 17 Hình 3.1.1 Đồ thị the độ tuyển tính cùa Cefuroxim Axetil 28 Chương l.TƠNG QUAN 1.1 TĨNG QUAN VỀ TÍNH CHẤT CỦA CEFUROXIME 1.1.1 Tổng quan kháng sinh 0][2][6] Năm 1928, nhà khoa học Alexander Flemming người Scotland lần thấy môi trường nuôi cấy tụ cầu vàng có lần nấm penicilium khuẩn lạc gần nấm khơng phát triển được, sau chất peniciline chiết xuất từ nấm đe dùng điều trị Vào năm 1941, peniciline trở thành kháng sinh tìm sản xuất để dùng lâm sàng Khi đó, kháng sinh coi chất vi sinh vật tiết (vi khuẩn, vi nấm), có khả kìm hãm phát triển cùa vi sinh vật khác, từ gốc Hy Lạp antibiotic, nghĩa chống lại sống sau, với phát triển cúa khoa học, người ta tồng họp, bán tổng họp kháng sinh tự nhiên nhân tạo, định nghía kháng sinh thay đổi: kháng sinh nhừng chất vi sinh vật tiết chất hóa học bán tổng họp, tổng hợp với nồng độ thấp có khả đặc hiệu kìm hãm phát triển diệt vi khuẩn Nó có tác dụng lên vi khuẩn cấp độ phân tử, thường vị trí quan trọng vi khuẩn hay phản ứng trình phát triển vi khuấn 1.1.2 Phân loại nhóm kháng sinh t6][13] Ngày người biết khoảng 8000 chất kháng sinh, có khoảng 100 loại dùng Y khoa Thú y Thuốc kháng sinh có loại dùng theo đường tồn thân (uống, tiêm) chồ (bơi ngồi da; nhỏ mắt, tai, mũi; đặt âm đạo ) Tính đến năm 2010 có khoảng 17 nhóm thuốc kháng sinh với gần 500 tên thuốc (trong có nhóm chuyên biệt là: chống nấm, chống lao, chống phong, trị ung thư; lại 13 nhóm thuốc trị bệnh nhiễm khuấn thơng thường) Mồi nhóm lại có phân nhóm hệ khác Ví dụ: nhóm penicillin có phân nhóm, phân nhóm lại có nhiều tên thuốc gốc khác nhau, tên thuốc gốc có nhiều tên biệt dược khác Hay nhóm cephalosporin hệ khác nhau, mồi hệ có nhiều tên thuốc gốc khác (khoảng 40 tên) nhiều tên biệt dược khác Ngồi cịn nhiều biệt dược phoi hợp kháng sinh với kháng sinh với thuốc chống viêm mạnh (các loại corticoid) đe tăng tác dụng Có nhiều cách đe phân loại kháng sinh: ❖ Dựa vào chế tác dụng: Kìm khuấn: Kháng sinh ức chế phát triển vi sinh vật gây bệnh Bao gồm: Clindamycin, Tetracyclin, Ethambutol, Erythromycin, Azithromycin, Cloramphenicol, Cotrimoxazol Diệt khuẩn: kháng sinh có tác dụng phá huỷ cấu trúc vi sinh vật gây bệnh Gồm Penicillin, Cephalosporin, Aminoglycosid, Metronidazol, Rifampicin, Pyrazinamid, Ciprofloxacin, Nystatin ❖ Dựa vào nguồn gốc: Tự nhiên: Gentamycin, Clindamycin, Erythromycin Bán tổng hợp: Amikacin, Spectinomycin, Tong họp: Azithromycin, Clarithromycin, Ọuinolon, Cephalosporin, Sulfamid ❖ Dựa vào hoạt chất: Họ -Lactam: Penicillin, Cephalosporin Họ Cyclin: Tetracyclin, Doxycyclin Họ Phenicol: Chloramphenicol, Thiophenicol Họ Macrolid: Erythromycin, Spiramycin, Roxithromycin, Clarithromycin Họ Lincosamid: Lincomycin, Clindamycin Họ Aminoglycosid: Streptomycin, Amikacin, Gentamycin, Kanamycin Họ Quinolon: Acid Nalidixid, Ciprofloxacin, Ofloxacin, Norfloxacin Họ Sulfamid: Sufaguanidin, Cotrimoxazol Họ Polypeptid: Polymycin B, Colistin, Bacitracin, Tyrothricin Họ Polyene: Nystatin, Amphotericin B, Natamycin Họ Glycopeptid: Vancomycin, Teicoplanin Họ Azol: Metronidazol, Tinidazol, Mebendazol, Albendazol, Fluconazol Các thuốc khác: Spectinomycin ❖ Dựa vào tác nhân gây bệnh: Nhóm kháng khuẩn: PNC, Aminosid, Cyclin Nhóm kháng nấm: Nystatin, Griseofulvin, Ketoconazol Nhóm kháng lao: Rifampicin, Ethambutol, Isoniazid, Pyrazinamid Nhóm kháng phong: Rifampicin, Sulfones, Dapson, Clofazimine Nhóm kháng virus: Amatadine, Zidovudine, Zovirac Cefuroxime - Đối tượng phương pháp nghiên cứu 1.2 1.2.1 Cefuroxime Cefuroxime kháng sinh thuộc nhóm cephalosporin hệ thứ 2, có phổ kháng khuẩn rộng, dùng nhiều điều trị bệnh nhiễm trùng Cefuroxim điều chế nhiều dạng chế phẩm viên đe uống, bột pha hồn dịch uống, dung dịch tiêm Trong bột pha hồn dịch uống dạng thuốc thích hợp cho trẻ em Đe đảm bảo chất lượng thuốc suốt trình bảo quản, lưu thông phân phối sử dụng, độ on định cùa thuốc phải công bố đăng ký lưu hành sản phẩm Vì vậy, mục tiêu cùa đề tài xây dựng qui trình định lượng khảo sát độ ổn định chế phẩm thuốc bột cefuroxim pha hồn dịch uống nhằm xác định tuổi thọ thuốc cung cấp dừ liệu cho ho sơ đăng ký thuốc Hình 1.2.1 Cơng thức cấu tạo Cefuroxime 1.2.2 Đối tượng phương pháp nghiên cứu I2II4II13||5| 1.2.2.1 Đối tượng nghiên cứu Thuốc bột cefuroxim (Zintat 125mg) pha hồn dịch uống hàm lượng 125 mg Ba lô thuốc bột sử dụng nghiên cứu độ ổn định lô 110909, lô 130708 lô 230508 Hóa chất, dung mơi Chất chuan: cefuroxim axetil, số lơ: QT126 031007, hàm lượng 98,18% tương ứng 81,82% cefuroxim (Viện Kiểm Nghiệm thuốc TP.HCM); natri dihydrophosphat, natri dihydro phosphat đạt tiêu chuẩn dùng phân tích kiểm nghiệm (Prolabo); acetonitril methanol đạt tiêu chuẩn dùng cho HPLC (Merck) Thiết bị Hệ thống sắc ký lỏng hiệu cao (HPLC) WATERS 600E (Mỳ), máy đo pH INOLAB pH 720 (Đức) 1.2.2.2 Phương pháp nghiên cứu Xây dựng qui trình định lượng cefuroxim phương pháp HPLC 171181191 Cefuroxim axetil hồn họp hai đong phân quang học không đối quang A B Hai đồng phân có thời gian lưu gần nhau, vậy, điều kiện sắc ký khảo sát cho hệ số phân giải hai đỉnh đồng phân A B khơng nhỏ Do cefuroxim axetil có tính acid yếu (pKa = 4,7) phân cực nên điều kiện sắc ký chọn cột pha đảo, pha động gồm acetonitril dung dịch đệm phosphat pH Phương pháp sè thẩm định áp dụng khảo sát độ on định thuốc bột cefuroxim Mầu thuốc bột bảo quản nhiệt độ cao (55oC) đe tạo sản phẩm phân hủy nhằm chứng minh tính đặc hiệu qui trình phân tích có diện sản phấm phân hủy mầu Chuẩn bị mẫu Dung dịch chuẩn gốc: Cân xác lượng cefuroxim axetil chuẩn tương đương 50 mg cefuroxim cho vào bình định mức 100 ml, thêm 10 ml methanol, lắc hòa tan, thêm dung dịch đệm phosphat pH đến vạch Lắc Dung dịch chuẩn định lượng: Hút xác 10 ml dung dịch chuẩn gốc cho vào bình định mức 100 ml, thêm dung dịch đệm phosphat pH đến vạch Lắc Lọc qua màng lọc 0,45 mm Dung dịch thử: Cân xác lượng bột thuốc tương ứng với 50 mg cefuroxim từ 10 gói thuốc bột nghiền trộn kỹ, cho vào bình định mức 100 ml, thêm 30 ml methanol siêu âm phút, bo sung vừa đủ dung dịch đệm phosphat pH Lắc Lọc (bỏ 10 ml dung dịch đầu), hút xác 10 ml dịch lọc cho vào bình định mức 100 ml, bổ sung dung dịch đệm pH vừa đủ Lắc Lọc qua màng lọc 0,45pm Bơm mầu chạy sắc ký ❖ Thẩm định phương pháp định lượng (HPLC) Phương pháp thẩm định tính phù họp hệ thống, độ tuyến tính, độ xác độ theo nguyên tắc chung > Khảo sát độ ổn định thuốc bột cefuroxim Đe khảo sát độ ổn định, ba lô thuốc bột cefuroxim liên tiếp bảo quản điều kiện qui định Các tiêu chất lượng dùng để đánh giá độ ổn định thuốc cảm quan, hàm lượng nước, pH, hàm lượng cefuroxim độ hòa tan Tuổi thọ thực thuốc xác định thời điểm hàm lượng hoạt chất giảm đến giới hạn theo qui định bảo quản điều kiện dài hạn Trong trường họp này, ... CÁN Bộ - GIẢNG VIÊN 2016 - 2017 Tên đề tài: XÂY DỤNG PHƯƠNG PHÁP PHÂN TÍCH ĐỊNH LƯỢNG CEFUROXIME AXETIL TRONG BỘT PHA HỎN DỊCH ZINAT 125 MG BẰNG PHƯƠNG PHÁP HPLC Chủ nhiệm đề tài: Huỳnh Tân Đơn... cấu tạo Cefuroxime 1.2.2 Đối tượng phương pháp nghiên cứu I2II4II13||5| 1.2.2.1 Đối tượng nghiên cứu Thuốc bột cefuroxim (Zintat 12 5mg) pha hồn dịch uống hàm lượng 125 mg Ba lô thuốc bột sử dụng... uống, bột pha hồn dịch uống, dung dịch tiêm Trong bột pha hồn dịch uống dạng thuốc thích hợp cho trẻ em Đe đảm bảo chất lượng thuốc suốt trình bảo quản, lưu thông phân phối sử dụng, độ on định