ĐẠI HOC NGUYỄN TÁT THÀNH NGUYEN TAT THANH THỤC HỌC - THỤC HÀNH - THỤC DANH - THỤC NGHIỆP KHOA CƠNG NGHỆ SINH HỌC KHĨA LUẬN TĨT NGHIỆP KHẢO SÁT Sự ĐA DẠNG DI TRUYỀN CỦA QUẨN THẺ CHÓ NHÀ TẠI A LƯỚI DựA VÀO ĐOẠN TRÌNH Tự 582 BP VÙNG HV1 TRÊN BỘ GEN TY THẺ Sinh viên thực : Vương Thúy Thảo MSSV : 1600001589 GVHD : ThS Trần Thị Bích Huy TP HCM, 2020 MỤC LỤC LỜI CẢM ƠN i MỤC LỤC ii TÓM TẮT V SUMMARY vii DANH MỤC CÁC HÌNH ẢNH ix DANH MỤC BẢNG BIẾU X DANH MỤC CHŨ VIẾT TẤT xi ĐẶT VẤN ĐỀ .1 Tính cấp thiết đề tài Mục tiêu đề tài 2.1 Những đóng góp đề tài nghiên cứu 2.2 Nghiên cứu sè giúp giải vấn đề? 2.3 Những điều sè đạt trình nghiên cứu 2.4 Giới hạn phạm vi nghiên cứu CHƯƠNG TÓNG QUAN TÀI LIỆU 1.1 Phân loại chó nhà 1.2 Nguồn gốc chó nhà 1.3 Đặc điềm di truyền gen ty thể động vật 1.4 Các nghiên cứu đánh giá đa dạng di truyền chó dựa vào trình tự HV1 vùng CR gen ty thể 1.4.1 Các nghiên cứu giới 1.4.2 Các nghiên cứu nước ii CHƯƠNG VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN cứu 12 2.1 Nơi thực hiện, thời gian thực 12 2.2 Vật liệu nghiên cứu 12 2.2.1 Thu mầu ghi nhận thông tin 12 2.2.2 Hóa chất 13 2.2.3 Dụng cụ thiết bị 13 2.2.4 Các phần mềm sử dụng nghiên cứu 13 2.3 Phương pháp nghiên cứu 14 2.3.1 Phương pháp thu mẫu 14 2.3.2 Phương pháp tách chiết DNA tong số 15 2.3.3 Phương pháp kiếm tra độ tinh DNA bằngquang kế 16 2.3.4 Kỳ thuật điện di DNA gel agarose 17 2.3.5 Khuếch đại trình tự vùng HV1 kỳ thuật PCR 17 2.3.6 Phương pháp giải hiệu chỉnh trình tự 19 2.3.7 Phương pháp xử lý phân tích kết 20 CHƯƠNG KẾT QUẢ VÀTHẢO LUẬN 23 3.1 Thu thập xử lý mầu 23 3.2 Kết tách chiết DNA tổng số từ 15 mẫu lơng chó 23 3.3 Ket đo tỷ số OD nồng độ DNA 15 mẫu lơng chó 24 3.4 Ket khuếch đại vùng HV1 25 3.5 Ket giải trình tự hiệu chỉnh vùng HV1 26 3.5.1 Ket giải trình tự 26 3.5.2 Hiệu chỉnh lắp ráp trình tự vùng HV1 30 3.6 Ket so sánh trình tự truy vấn cùa mầu nghiên cứu với sở liệu Gen Bank 31 3.7 Xác định vị trí đa hình từ 15 cá thể chó nhà A Lưới- Thừa Thiên Huế 34 iii 3.8 Định loại haplotype quần chó nhà vùng A Lưới - Thừa Thiên Huế 36 3.9 Đánh giá đa dạng di truyền dựa vào vùng HV1 DNA ty thể quần thể chó nhà vùng núi A Lưới - Thừa Thiên Huế 38 3.9.1 Sự đa dạng cấp độ nucleotide 38 3.9.2 Sự đa dạng cấp độ haplotype 40 KẾT LUẬN VÀ ĐỀ NGHỊ 43 TÀI LIỆU THAM KHẢO 44 PHỤ LỤC 46 IV TĨM TẤT Chó nhà lồi động vật người hóa, chúng xem lồi động vật thơng minh có mối quan hệ gần gũi với người, người xem thú cưng trung thành đồng hành người hoạt động Những năm gần đây, việc nghiên cứu đa dạng di truyền cùa chó Việt Nam trở nên biến Vào năm 2012 Viện Công Nghệ Cao trường Đại học Nguyễn Tất Thành tiến hành nghiên cứu sâu đánh giá đa dạng di truyền nguồn gốc giống chó lưng xốy Phú Quốc cơng nghệ phân tử giải mã trình tự DNA vùng HV1 (Hypervarible region 1) Đen năm 2019 đưa kết luận giống chó có nguồn gốc từ chó nhà Việt Nam khu vực đất liền tỉnh Kiên Giang di cư bác bỏ ý kiến chó lưng xốy Phú Quốc có nguồn gốc từ chó lưng xốy Thái Lan Bên cạnh có nhiều nghiên cứu đa dạng di truyền chó nhà tập trung khu vực mien Nam thành phố Rạch Giá huyện đảo Phú Quốc thuộc tỉnh Kiên Giang, Hồ Chí Minh Và chưa có nghiên cứu đa dạng di truyền chó nhà khu vực biên giới, đặc biệt khu vực biên giới miền trung khu vực huyện A Lưới - Thừa Thiên Huế Nên đề tài: “Khảo sát đa dạng di truyền quần thể chó nhà A Lưới - Thừa Thiên Huế dựa vào đoạn trình tự 582 bp vùng HV1 gen ty thể” thực Đe hoàn thành mục tiêu cùa nghiên cứu này, mục tiêu sau phải thực hiện: - Thu mẫu lơng chó A Lưới-Thừa Thiên Huế; - Tách chiết DNA mẫu thu được; - Khuếch đại vùng HV1 DNA chó nhà lấy A Lưới - Thừa Thiên Huế; - Xác định halotype chó dựa trình tự 582 bp vùng HV1; - Đánh giá đa dạng di truyền dựa kết thu Ket đạt sau tháng nghiên cứu: - 15 mẫu ADN thu từ lơng chó A Lưới - Thừa Thiên Hue; V - 15 trình tự DNA vùng HV1 thu sau PCR giải trình tự; - Đánh giá đa dạng di truyền giừa quần chó nhà A Lưới- Thừa Thiên Huế với khu vực khác Việt Nam vi DANH MỤC CÁC HÌNH ẢNH Hình 1.1 Chó nhà (ảnh tác giả thực hiện) Hình 1.2 Vị trí thành phần vùng CR gen ty the Hình 2.1 Vị trí địa lí mẫu thu nghiên cứu 12 Hình 2.2 Sơ đồ tóm tắt mơ tả bước nghiên cứu đề tài 14 Hình 2.3 VỊ trí bắt cặp mồi 15412F 16625R8 17 Hình 3.1 Kết điện di DNA tổng số 8/15 mầu lơng chó 24 Hình 3.2 Ket điện di DNA tổng số 8/15 mẫu lơng chó 25 Hình 3.3 Biểu đồ huỳnh quang (Electropherogram) đoạn trình tự vùng HV1 mầu L02 giải trình tự cặp moi 15412F 16114R .27 Hình 3.4 Biểu đồ huỳnh quang (Electropherogram) mẫu L05 với đỉnh (peak) đường (base line) 28 Hình 3.5 Biểu đo huỳnh quang (Electropherogram) đoạn trình tự mẫu L10 có cường độ tín hiệu giảm dần 29 Hình 3.6 Biểu đồ huỳnh quang (Electropherogram) the kết !4 mầu giải trình tự lại .29 Hình 3.7 Đại diện đoạn trình tự đong (consensus sequence) vùng HV1 mẫu L02 30 Hình 3.8 Đại diện đoạn trình tự đồng (Consensus sequence) vùng HV1 15 mầu chó nhà vùng núi A Lưới-Thừa Thiên Huế 31 Hình 3.9 Kết so sánh trình tự mầu L02 với sở liệu GenBank thông qua công cụ BLAST 32 Hình 3.10 Đo thị mơ tả số lượng SNP xuất 11 nhóm 34 Hình 3.11 Kết xác định haplotype với trình tự truy vấn mầu L03 37 IX DANH MỤC • BẢNG BIÉU Bảng 2.1 Cặp mồi đặc hiệu sử dụng phản ứng khuếch đại trình tự vùng HV1 18 Bảng 2.2 Các thành phần có phản ứng khuếch đại vùng HV1 18 Bảng 2.3 Chương trình nhiệt khuếch đại vùng HV1 11 18 Bảng 2.4 Cặp mồi sử dụng phản ứng trình tự vùng HV1 19 Bảng 3.1 Ket đo tỷ so OD nong độ DNA thu thập 8/15 mẫu chó nhà thu A Lưới 24 Bảng 3.2 Các SNP tìm thấy đoạn trình tự 582 bp vùng HV1 15 cá thể chó Các số cột dọc mơ tả vị trí nucleotide Dấu chấm (.) đại diện cho nucleotide trùng khóp với trình tự tham khảo, 35 Bảng 3.3 Sự phân bo haplogroup, haplotype chó nhà A Lưới- Thừa Thiên Huế 37 Bảng 3.4 Tần số haplogroup quần the nghiên cứu 38 Bảng 3.5 Bảng tóm tat số lượng loại vị trí đa hình đoạn trình tự 582 bp vùng HV1 quần the chó nhà .38 Bảng 3.6 Chỉ số đa dạng cấp độ Nucleotide 39 Bảng 3.7 Tỷ lệ phân bo haplotype haplogroup quần 41 Bảng 3.8 Mức độ đa dạng haplotype cùa khu vực 42 X DANH MỤC CHỮ VIẾT TẤT pg Microgram pL Microlit pM Micromole BLAST Local Alignment Search Tool Bp Base pair CHD Canis mtDNA HV1 database CR Control Region D - loop Displacement - loop DNA Deoxyribonucleic acid dNTP Deoxyribonucleotide triphosphate EDTA Ethylenediamine tetraacetate EtBr Ethidium bromide F Forward HV1 Hypervariable region HV2 Hypervariable region Kb Kilo base mg Miligram Ml Mililit mM Milimol mtDNA Mitochondrial DNA NCBI National Center for Biotechnology Information nm Nanomet OD Optical Density PCR Polymerase Chain Reaction R Reverse RNA Ribonucleic acid rRNA Ribosomal RNA SNP Single Nucleotide Polymorphism Taq Thermus aquaticus XI TBE Tris/Borate/EDTA Tm Melting Temperature tRNA Transfer RNA uv Utraviolet VNTR Variable number tandem repeat Xll Chương Kết thảo luận chó nhà khu vực khác Việt Nam cho thấy quần chó nhà vùng A Lưới cao với nhóm chó khác Việt Nam quần the chó lưng xốy Phú Quốc Phú Quốc (4,81%), quần thể chó nhà Phú Quốc (4,64%), quần thể chó lưng xốy Phú Quốc Hà Nội (3,26%), quần chó lưng xốy Phú Quốc Huế (2,92%), lại thấp so với quần thể chó nhà Rạch Giá (6,53%) thể Bảng 3.6 Bảng 3.6 Chỉ số đa dạng cấp độ Nucleotide Quần STT thể Số Vị trí lượng đa hình Tỷ Đa dạng nucleotide lệ % CNAL 15 32 5,50 0.00132 ±0.01496 CNRG 50 38 6,53 0,0144 ±0,007 CNPQ 50 27 4,64 0,015 ±0,008 CLXPQ 30 28 4,81 0,01441 ±0,007651 CLXH 17 17 2,92 0,00866 ± 0,004952 CLXHN 17 19 3,26 0,01139 ±0,006335 Chú thích: CNAL Chó nhà A Lưới CNRG Chó nhà Rạch Giá CNPQ Chó nhà Phú Qc CLXH Chó lưng xốy Phú Quốc Huế Chó lưng xốy Phú Quốc CLXPQ Chó lưng xốy Phú Quốc CLXHN Phú Quôc Hà Nội Xét số đa dạng nucleotide, quần thể chó nhà A Lưới (0.00132 ± 0.01496) cao so với quần the chó lưng xốy Phú Quốc Huế (0,00866 ± 0,004952), lại thấp so với quần thể lại (Bảng 3.6) 39 Chương Kết thảo luận 3.9.2 Sự đa dạng cấp độ haplotype Trong tổng số 11 haplotype tìm thấy quần thể chó nhà A Lưới, tần suất haplotype thuộc nhóm A dao động từ 6,67% (A9, A17, A18, A65, A73, A132, A223) đến cao 13,33% (All) Đối với nhóm B, có haplotype B1 với tỷ lệ 20% Nhóm c, có haplotype haplotype C2 (L14, L09) chiếm đến 13,33% xuất haplotype nhóm c chiếm 6,67% thể cụ thể Bảng 3.3 Ngồi ra, phân tích số lượng cá thể có haplotype thuộc haplogroup khác nhau, thấy quần thể chó nhà khu vực A Lưới - Thừa ThiênHuế có tỷ lệ phân bố haplotype thuộc haplogroup (A, B, C) chiếm tỷ lệ 100% số lượng cá thể có haplotype thuộc haplogroup A, B, c quần thể chó nhà khu vực A (60%), B (20%), nhóm c (20%) thể cụ thể Bảng 3.4 Có thể thấy tỉ lệ phần bố haplotype phù họp với nghiên cứu trước đây, cho hầu hết quần the chó nhà khắp lục địa thuộc haplogroup thường thấy haplogroup (A, B, C), haplogroup lại D, E, F haplogroup vốn chiếm tỉ lệ thấp chưa đến 3% tồn giới19-24 Khi phân tích số cụ thể tỷ lệ phân bố haplotype quần thể A Lưới so với quần thể khác Việt Nam cho thấy quần thể chó nhà A Lưới (73,33%) có tính đa dạng di truyền cao so với quần lại Xét riêng phân bố nhóm quần the nghiên cứu có phân bố khác Đối với nhóm A, B, quần the chiếm cao quần thê chó lưng xốy Phú Quốc Huế, thấp quần thể chó lưng xốy Phú Quốc Hà Nội Đối với nhóm B, quần thể chiếm cao quần thể chó lưng xốy Phú Quốc Hà Nội, thấp quần thể chó nhà Rạch Giá Nhóm c, quần thể chó nhà A Lưới chiếm cao 20%, khơng có xuất nhóm c quần the chó lưng xốy Phú Quốc Huế Hà Nội Đặc biệt nhóm E, chiếm cao quần the chó lưng xốy Phú Quốc Phú Quốc chiếm 16.67%, đến quần thể chó lưng xốy Hà Nội 11,76%, chó nhà Phú Quốc (8%), chó nhà Rạch Giá (6%) khơng có xuất hai quần thể chó lưng xốy Huế quần thể chó nhà A Lưới (Bảng 3.7) 40 Chương Kết thảo luận Bảng 3.7 Tỷ lệ phân bố haplotype haplogroup quần thể ST T Quần thể Số lượng CNAL nH (%) n (ABC) (%) nA (%) nB (%) nC (%) nD (%) nE (%) nF (%) 15 11 (73,33%) 15(100%) (60%) (20%) (20%) 0 CNRG 50 18 (36,00%) 47 (94%) 30 (60%) 8(16%) 9(18%) (6%) CNPQ 50 13 (26,00%) 46 (92%) 24 (48%) 14(28%) 8(16%) (8%) CLXPQ 30 11 (36,67%) 25 (83,33%) 10 (33,33%) 11 (36,67%) (13,33%) (16,67%) CLXH 17 (35,29%) 17(100%) 14 (82,35%) (17,65%) 0 0 CLXHN 17 (29,41%) 15 (88,24%) (29,41%) 10 (58,82%) 0 (11,76%) Chú thích CNAL Chó nhà A Lưới CNRG Chó nhà Rạch Giá CNPQ Chó nhà Phú Ọc CLXH Chó lưng xốy Phú Quốc Huế CLXPỌ Chó lưng xốy Phú Quốc CLXHN Phú Qc n Số lượng nH Chó lưng xoáy Phú Quốc Hà Nội Số lượng haplotype So sánh mức độ đa dạng haplotype quần thể cho thấy quần thể chó nhà A Lưới có so đa dạng haplotype cao 0.958 ± 0.036 điều có nghĩa quần the xác suất bắt gặp ngẫu nhiên hai mầu có haplotype khác lên đến 95%, cao quần thê lại (Bảng 3.8.) 41 Chương Kết thảo luận Bảng 3.8 Mức độ đa dạng haplotype khu vực STT Quần thể Đa dạng haplotype CNAL 0.958 ±0.036 CNRG 0,92 ±0,019 CNPQ 0,86 ± 0,029 CLXPỌ 0,8713 ±0,0403 CLXH 0,6544 ±0,1223 CLXHN 0,6471 ±0,1185 Chú thích: CNAL Chó nhà A Lưới CNRG Chó nhà Rạch Giá CNPQ Chó nhà Phú Quốc CLXH Chó lưng xốy Phú Ọuốc Huế Chó lưng xốy Phú Quốc CLXPQ Chó lưng xốy Phú Quốc CLXHN Phú Qc Hà Nội Như vậy, dựa vào kết quan trọng nêu phân bố haplogroup, số lượng haplotype, phân bố haplotype haplogroup số đa dạng di truyền (đa dạng nucleotide, đa dạng haplotype) cho thấy quần thể chó nhà A Lưới - Thừa Thiên Huế có đa dạng di truyền cao 42 KÉT LUẬN VÀ ĐÈ NGHỊ Kết luận Tách chiết thành công DNA tổng số 15 mầu lông chó Cặp moi 15412F 16625R lựa chọn hợp lý giúp khuếch đại thành cơng vùng HV1 Giải trình tự hai chiều thành cơng tồn 15 mẫu chó nhà vùng A Lưới - Thừa Thiên Huế Ket định loại haplotype xác định 11 haplotype 15 cá chó nhà A Lưới Haplotype xác định 15 cá thể chó nhà A Lưới A9, All, A17, A18, A65, A73, A132, A223, Bl, C2 Cnl Trên đoạn trình tự 582 bp vùng HV1 mtDNA xác định 32 vị trí đa hình quần thể chó nhà A Lưới So sánh đa dạng di truyền hai quần thể nghiên cứu cho thấy chó nhà thu vùng A Lưới - Thừa Thiên Huế có tính đa dạng di truyền cao so với số quần thê chó khác khu vực khác Việt Nam Từ kết phân tích cho thấy đoạn trình tự 582 bp vùng HV1 hệ gen ty thể marker đáng tin cậy phân tích đánh giá đa dạng di truyền truy tìm nguồn gốc cùa cá thể chó Kiến nghị Nghiên cứu khảo sát 15 cá chó nhà huyện A Lưới tỉnh Thừa Thiên Hue Neu có thời gian cần tăng thêm số mẫu nghiên cứu đe tránh thiên lệch mẫu cỡ mầu tiến hành khảo sát thêm số khu vực địa lý khác Việt Nam 43 TÀI LIỆU THAM KHẢO Pang J.F, Kluetsch c, Zou X.J, Zhang A.B, Luo L.Y, Angleby H, Ardalan A, Ekstrom c, Skollermo A, Lundeberg J, Matsumura s, Leitner T, Zhang Y.p and Savolainen p mtDNA data indicate a single origin for dogs south of Yangtze River, less than 16,300 years ago, from numerous wolves Molecular Biology and Evolution 2009;26(12):2849-2864.' PGS.TS Phạm Ngọc Thạch Ni chó gia đình', 2011 Li Y and Zhang Y High genetic diversity of Tibetan Mastiffs revealed by mtDNA sequences Chinese science bulletin, 2012;57( 13): 1483-1487 Kumar D.p, Sangeetha N Mitochondrial DNA mutations and male infertility Indian journal of human genetics 2009; 15(3):93 Kim K.s, Lee S.E, Jeong H.w and Ha J.H The complete nucleotide sequence of the domestic dog (Canisfamiliaris) mitochondrial genome Lang B.F, Gray M IV, Burger G Mitochondrial genome evolution and the origin of eukaryotes Annual Review Genetics 1998-1999;33:351 - 397 Verscheure s, Backeljau T and Desmyter s Reviewing population studies forforensic purposes Dog mitochondrial DNA ZooKeys 2013;(365):381 Himmelberger A L, Spear T F, Satkoski J A, et al Forensic utility of the mitochondrial hypervariable region of domestic dogs, in conjunction with breed and geographic information Journal of forensic sciences 2008;53( ):81 -89 Quan T K, Tu N V, Trinh, et al Evaluation of genetic diversity of Phu Quoc ridgeback dogs based on mitochondrial DNA Hypervariable-1 region Tap chi Congnghe Sinh hoc 2016;14:245-253 Quan T K, Huynh V H, Chung A D, et al Evaluation of genetic diversity of Vietnamese dogs based on mitochondrial dna hypervariable-1 region HayuHbiu pesyjibmam Cepim (G>U3UOJIO2WI) 2016;2(3) 10 Nguyễn Thành Công Đảnh giả đa dạng di truyền quần thể chó nhà huyện đảo Phủ Quốc thành phố Rạch Giả tinh Kiên Giang dựa vào trình tự vùng Hypervariable gen Ty thê [Luận văn Thạc sĩ Sinh học] Tp.Hơ Chí Minh, Việt Nam : Đại học Khoa học Tự nhiên - ĐHQG TP Hồ Chí Minh; 2017 11 Gundry, R L., Allard, M w., Moretti, T R., et al (2007) Mitochondrial DNA analysis of the domestic dog: control region variation within and among breeds Journal offorensic sciences, 52(3), 562-572 12 Kumar s, Stecher G, and Tamura K MEGA7: molecular evolutionary genetics analysis version 7.0 for bigger datasets Molecular biology and evolution 2016;33(7): 1870-1874 13 Quan T K, Chung D A, and Tran H D Canis mtDNA HV1 database: a web-based tool for collecting and surveying Canis mtDNA HV1 haplotype in public database BMC genetics 2017; 18( ):60 44 14 Trân Thị Bích Huy Đánh giả đa dạng di truyền quần chó lưng xốy Phủ Quốc số khu vực ngồi huyện đảo Phủ Quốc [Luận văn Thạc sĩ Sinh học] Tp Hồ Chí Minh, Việt Nam : Đại học Khoa học Tự nhiên - ĐHỌG TP Hồ Chí Minh; 2018 15 Trần Hồng Dũng, Thái Ke Qn, Nguyễn Thành Cơng, Huỳnh Văn Hiếu, Chung Anh Dũng Xác định nguôn gôc chó Phú Qc băng trình tự vùng D-loop genome ty thể Tạp chí Sinh học 2016;38(2),269-278 16 Trương Nguyễn Thị Như Mai Định loại haplotype truy tìm nguồn gốc chó Phú Quốc trình tự vùng CR gen ty the [Luận văn thạc sì] Tp Hơ Chí Minh, Việt Nam : Đại học Khoa học Tự Nhiên TP HCM; 2013 17 Quyền Đình Thi, Nơng Văn Hải Công nghệ sinh học — Tập - Những kỹ thuật PCR ứng dụng phân tích DNA Hà Nội: Nhà xuât Khoa học Tự Nhiên Công nghệ, Hà Nội: 2008 18 Allard M w Building a Genetic Reference Database for Dog mtDNA Sequences and SNPs.2QQ9 19 Ardalan A, Kluetsch c F, Zhang A B, et al Comprehensive study of mtDNA among Southwest Asian dogs contradicts independent domestication of wolf but implies dog-wolf hybridization Ecology and evolution 201 l;l(3):373-385 20 Nei M, and Li w H Mathematical model for studying genetic variation in terms of restriction endonucleases Proceedings of the National Academy ofSciences 1979;76(10):5269-5273 21 Sanger F, Nicklen s, Coulson A.R DNA sequencing with chain terminating inhibitors Proceedings of the National Academy of Sciences 1977;74(12):5463-5467 22 Kim KS, Lee SE, Jeong HW, Ha JH The complete nucleotide sequence of the domestic dog (Canis familiaris) mitochondrial genome Molecular phylogenetics and evolution 1998; 10(2):210-220 23 Vila c, Amorim IR, Leonard JA, et al Mitochondrial DNA phylogeography and population history of the grey wolf Cants lupus Molecular ecology 1999;8(12):2089-2103 24 Savolainen p, Zhang Y-p, Luo J, Lundeberg J, Leitner T Genetic evidence for an East Asian origin of domestic dogs Science 2002;298(5598): 1610-1613 45 PHỤ LỤC Phụ lục A: Các hóa chất, dụng cụ, thiết bị sử dụng nghiên cứu Dụng cụ thiết bị Tên Hãng sản xuất Nước sản xuất Tủ đông lạnh -30 °C BD - 400 °C Trung Quốc Tủ mát °C LC-633B Trung Quốc Tủ đông - 80 °C Panasonic Nhật Bản Máy ly tâm Panasonic Beckmancouter Be điều nhiệt MB-48P Daiqan - Hàn Quốc Nồi hấp vô trùng SA - 300 VF0 Sturdy - Đài Loan Máy đo pH HI 2211 Itanna - Roman Máy PCR Prime - Techne UK Be điện di nguồn điện ESH 3300 Cosrort - Bỉ Bàn soi gel E2103 Cosrort - Bỉ Lò vi sóng nấu gel CMCV20-LMVIE Candy - Trung Quốc Máy vortex SA8 Bibby - Anh Cân phân tích 1281080347 oHaus - Mỹ Máy nước cất lần AQUA - ON4D LABSILL - Án độ Tủ cấy vơ trùng HUY HỒNG HUY HOÀNG Việt Nam Tủ cấy Trung Quốc Micropipette (100 - 1,000 pL; 10—100 pL; 2-20 pL; Eppendorf 0,5-10 pL) Đầu tip (1,000 pL; 100 pL; 10 |1l) Đức Tube (2 mL; 1,5 mL; 0,2 Axygen mL) Mỳ 46 Hóa chất tách chiết DNA Tên Mã hàng hóa Hãng sản xuất BIO - 52066 BIOLINE - Anh Ọuồc Kit isolate DNA Hóa chất dùng kĩ thuật PCR Tên My Taq Mã hàng hóa Hãng sản xuất BIO-25041 BIOLINE - Anh Quốc Lot #: 070418 A01E1 PHƯSA-Việt Nam Lot #: 070418-A01-F1 PHƯSA - Việt Nam ™Mix Mồi 15412F Mồi 16625R PHƯSA - Việt Nam Mồi Lot#: 070418-A01-G2 16114R Hóa chất điện di Hãng sản xuất Tên Mã hàng hóa Agarose 1168020025 Merck KGaA - Đức 1001899819 Sigma - Mỳ APOD007102 GenOn - Đức 612-278-00-6 Merck KGaA - Đức Đệm TBE IX (Tris - Borate - EDTA) Đệm nạp mầu DNA: loading buffer 6X Ethidium Bromide 47 Kb DNA Ladder DT_ „n„ - Anh Qu°c Marker 50 bp BIOLINE BIOLINE DNA Ladder - Anh Quốc Marker Phụ lục B: thơng tin hình ảnh ciia 15 cá thể chó nhà đề tài Ket đo quang 15 mẫu lơng chó nhà lưng có xốy A Lưới STT Kí hiệu Nồng độ Tỷ số Tỷ số DNA (ng/pL) OD260nm/280nm OD260nm/230nm LI