Báo cáo Trung tâm Tiêu chuẩn Đo lường Chất lượng SVTH: HỒ THỊ MINH VẨN Báo cáo Trung tâm Tiêu chuẩn Đo lường Chất lượng MỤC LỤC Trang MỞ ĐẦU CHƯƠNG I: TỔNG QUAN TRUNG TÂM 1.1 Lịch sử hình thành phất triển Trung Tâm Tiêu chuẩn Đo lường Chất lượng 1.2 Chức nhiệm vụ Trung Tâm Tiêu chuẩn Đo lường Chất lượng khu vực 1.3 Quá trình hoạt động Trung Tâm Tiêu chuẩn Đo lường Chất lượng 1.4 Sơ đồ tể chức bố trí nhân 1.5 Sơ đồ bố trí mặt Trung Tâm Tiêu chuẩn Đo lường Chất lượng 1.6 Xử lý nước thải 1.7 Mơi trường phịng thí nghiệm 1.8 Thiết bị chất chuẩn CHƯƠNG II: QUẢN LÝ MAU THử 2.1Khấiniệm 2.2 Lấy mẫu 2.3 Lưu giữ mẫu thử nguy hiểm 2.4 Quản lý mẫu thử 2.5 Thủ tục CHƯƠNG III: CÁC TIÊU CHUAN KIÊM TRA CHAT LƯợNG SỬ DỤNG TRONG NGÀNH THựC PHAM 3.1 Cấc phương phấp thử nước 3.2 Các phương phấp thử Tiêu chuẩn Việt Nam CHƯƠNG IV: PHÂN TÍCH CÁC CHỈ TIÊU TRONG NGÀNH THựC PHẨM 4.1 Phân tích giá trị cảm quan sản phẩm 4.2 Phân tích cấc tiêu hóa lý 4.3 Phân tích cấc tiêu vi sinh CHƯƠNG V: KẾT LUẬN CHƯƠNG VI: PHỤ LỤC LỜI CẢM ƠN Jg* 18 20 22 22 26 26 26 26 27 29 38 49 51 89 109 SVTH: HỒ THỊ MINH VẪN Báo cáo Trung tâm Kỹ thuật Tiêu chuẩn Đo lường Chất lượng m Sau ba tháng làm luận án tốt nghiệp, xin chân thành cảm ơn: Các Ban lãnh đạo Trung tâm Tiêu chuẩn Đo lường Chất lượng tạo điều kiện thuận lợi tơi hồn thành tốt luận văn Các anh chị đồng nghuiệp truyền đạt kinh nghiệm quý bấu Cô Tôn Nữ Minh Nguyệt tận tình hướng dẫn bảo Các bạn giúp đóng góp ý kiến Sinh viên Hồ Thị Minh Vân MỞ ĐẦU Quản lý chất lượng nguyên liệu sản phẩm theo tiêu chuẩn nước chức quan trọng Trung tâm Kỹ thuật Tiêu chuẩn Đo lường Chất lượng (gọi tắt Trung tâm Kỹ thuật 3) Đây nơi ban hành hiệu chuẩn tiến hành kiểm tra chất lượng nguyên vật liệu sản phẩm cơng nghiệp nói chung, sản phẩm thực phẩm nói riêng Trải qua nhiều năm tháng, hoạt động Trung tâm Kỹ thuật Tiêu chuẩn Đo lường Chất lượng ngày vào nề nếp, phương tiện, phương pháp kiểm tra đại hơn, phù hợp vđi yêu cầu khách hàng, góp phần ổn định chất lượng cho sản phẩm công nghiệp Nhằm tìm hiểu kỹ hoạt động kiểm nghiệm, quản lý chất lượng Trung tâm Kỹ thuật Tiêu chuẩn Đo lường Chất lượng 3, em nhận đề tài ”Báo cáo Trung tâm Kỹ thuật Tiêu chuẩn Đo lường Chất lượng 3” Bên cạnh việc trình bày tổ chức hoạt động kiểm nghiệm, có sở vật chất Trung tâm, em tổng hợp tiêu chuẩn kiểm tra chất lượng thực phẩm sử dụng Trung tâm tập trung trình bày tiêu chuẩn kiểm tra Trang 2/126 SVTH: HỒ THỊ MINH VẪN Báo cáo Trung tâm Kỹ thuật Tiêu chuẩn Đo lường Chất lượng nguyên liệu sản phẩm từ sữa Do khả có giđi hạn em mong thầy cô bảo thêm CHƯƠNG I TỔNG QUAN TRUNG TÂM 1.1 Lịch sử hình thành phát triển 1.2 Chức nhiệm vụ 1.3 Q trình hoạt động 1.4 Sơ đồ tổ chức bố trí nhân 1.5 Sơ đồ bố trí mặt 1.6 Xử lý nước thải 1.7 Mơi trường phịng thí nghiệm 1.8 Thiết bị - Chất chuẩn 1.1 LỊCH SỬ VÀ HÌNH THÀNH PHÁT TRIEN: 1.1.1 Giới thiệu: Trung tâm Kỹ thuật Tiêu chuẩn Đo lường Chất lượng 3(gọi tắt Trung tâm Kỹ Thuật 3), tên giao dịch tiếng Anh Quality Assurance & Testing Centre QUATEST đơn vị trực thuộc Tổng Cục tiêu Chuẩn Đo lường Chất lượng, Bộ Khoa học Công nghệ Trung tâm Kỹ thuật thành lập theo định số 1275/ QĐ ngày 5/11/1994 Bộ Khoa học Công nghệ Môi trường (nay Bộ Khoa học công nghệ), cấu tổ chức Trung tâm theo Quyết định số 124/ QĐ-TĐC ngày 26/04/1999 Tổng cục Tiêu chuẩn Đo lường Chất lượng Trang 3/126 SVTH: Hồ THỊ MINH VẤN Báo cáo Trung tâm Kỹ thuật Tiêu chuẩn Đo lường Chất lượng 1.1.2 Lịch sử Trung tâm 3: Năm 1979, quan Tiêu chuẩn Đo lường Chất lượng miền Bắc Viện Định Chuẩn miền Nam kết hợp với Cục Tiêu Chuẩn Đo lường Chất lượng Vào đầu năm 1984, lập thành Tổng Cục Tiêu Chuẩn Đo lường Chất lượng Cũng từ Viện Định Chuẩn miền nam đổi tên Trung tâm Tiêu Chuẩn Đo lường Chất lượng (gọi tắt Trung tâm 3) văn phịng lũc dời 49 Pasteur, Q.l, TP Hồ Chí Minh Từ năm 1994 Trung tâm đổi tên thành Trung tâm Kỹ thuật Tiêu chuẩn Đo lường Chất lượng (gọi tắt Trung tâm Kỹ thuật 3) - Văn phịng đặt 49 Pasteur, Nguyễn Thái Bình, Q.l, TP Hồ Chí Minh Điện thoại: (848) 8294274 Fax: (848) 8293012 Website: www.quatest3.com.vn - Khối thí nghiệm Biên Hịa nằm khu Cơng nghiệp Biên Hịa 1, Đồng Nai Điện thoại: 8461 - 836212 Fax: 8461 - 836298 Email: Testing@quatest3.com.vn - Xưởng thiết bị đo lường số 62 Lê Hồng Phong, Q.5, TP Hồ Chí Minh - Bộ phận dịch vụ phịng thí nghiệm: số 79 Trương Định, Q.3, TP Hồ Chí Minh 1.1.3 Nguổn nhân lực: Trung tâm có nguồn nhân lực hùng hậu 200 kỹ sư cán kỹ thuật có khả thực hoạt động kỹ thuật Trung tâm như: Các cán với nhiều năm kinh nghiệm lĩnh vực Tiêu chuẩn-Đo lườngChất lượng Các cộng tác viên có chun mơn kỹ thuật giỏi ngành công nghiệp, viện nghiên cứu, trường đại học Các chuyên gia, tổ chức nước ngồi có uy tín Ngồi nhiều cán thuộc Trung tâm học tập chun mơn nưđc ngồi Trung tâm Kỹ thuật có đội ngũ nhân viên có trình độ cao, đồng thời Trung tâm Kỹ thuật có hội tốt giúp nhân viên học tập thăng tiến 1.2 CHỨC NẮNG NHIỆM vụ CỦA TRUNG TÂM 1.2.1 Nhiệm vụ: - Tiến hành thử nghiệm phân định, giám định chất lượng hàng hóa đo lường phục vụ cho công tác Nhà nước Tiêu chuẩn Đo lường Chất lượng yêu cầu quản lý quan Hải quan, Môi trường, Quản lý thị trường Cơng nghệ, Tư pháp Ngồi ra, Trung tâm Kỹ thuật phép khai thác lực đo lường, thử nghiệm để phục vụ yêu cầu sở sản xuất kinh doanh Trang 4/109 SVTH: Hồ THỊ MINH VẤN Báo cáo Trung tâm Kỹ thuật Tiêu chuẩn Đo lường Chất lượng - Bảo quản sử dụng thiết bị đo lường tiến hành kiểm định tiêu chuẩn theo phân cấp tổng cục TĐC chi cục Tiêu chuẩn Đo lường Chất lượng tỉnh, thành phố trực thuộc trung ương, sở sản xuất, kinh doanh - Tham gia xây dựng tiêu chuẩn Việt Nam, tiêu chuẩn quốc tế - Tổ chức công tác thông tin, đào tạo, hợp tác Quốc tế địa bàn theo phân công tổng cục - Quản lý cán bộ, tài sản, tài theo quy định 1.2.2 Quyền hạn: - Cấp phiếu kết thử nghiệm, giấy chứng nhận chất lượng, chứng thư giám định chất lượng sản phẩm, hàng hóa, giấy chứng nhận kiểm định thiết bị theo quy định - Ký hợp đồng kiểm định thí nghiệm, dịch vụ khác nội dung khác theo yêu cầu sở sản xuất kinh doanh, tổ chức cá nhân - Thu lệ phí kiểm tra, kiểm định, thử nghiệm theo định Nhà nước.Phạm vi hoạt động trung tâm bao gồm nhiều lĩnh vực, trung tâm vừa phải thực nhiệm vụ Tổng cục Tiêu chuẩn Đo lường Chất lượng giao, vừa cung cấp dịch vụ kỹ thuật sở tận dụng lực có theo nhu cầu kinh tế Nhiều đơn vị trung tâm lúc thực nhiệm vụ khác thuộc trình khác đạo thống theo thủ tục điều hành, o Phạm vi áp dụng chuẩn mực quản lý chất lượng lĩnh vực hoạt động sau: ■ Kiểm tra chất lượng sản phẩm, hàng hóa xuất nhập theo danh mục phủ ban hành theo qui trình Tổng cục TĐC ■ Thẩm định kỹ thuật liên quan đến tiêu chuẩn Đo lường Chất lượng theo yêu cầu quan quản lý Nhà nưđc ■ Thử nghiệm chất lượng sản phẩm, hàng hóa thiết bị, cơng trình theo u cầu công tác quản lý Nhà nưđc Doanh nghiệp ■ Hiệu chuẩn phương tiện đo theo yêu cầu tổ chức doanh nghiệp, kiểm định phương tiện đo công tác chuẩn đo lường theo qui định pháp lệnh đo lường ■ Hướng dẫn xây dựng hệ thống quản lý, đào tạo chuyên môn, nghiệp vụ liên quan đến tiêu chuẩn hóa, đo lường chất lượng theo yêu cầu ■ Nghiên cứu chế tạo thử thiết bị thử nghiệm, phương tiện đo công tác chuẩn phục vụ cho công tác kiểm định, hiệu chuẩn đo lường công nghiệp 1.2.3 Hoạt động Trung tâm Kỹ thuật 3: ■ Kiểm tra nhà nước chất lượng hàng hóa xuất nhập khẩu, thẩm định kỹ thuật tiêu chuẩn, đo lường, chất lượng Trang 5/109 SVTH: Hồ THỊ MINH VẤN Báo cáo Trung tâm Kỹ thuật Tiêu chuẩn Đo lường Chất lượng ■ Thử nghiệm đánh giá chất lượng nguyên liệu, vật liệu, sản phẩm hàng hóa thuộc lĩnh vực khí thử nghiệm không phá hủy, sản phẩm tiêu dùng, xây dựng, điện - điện tử, hóa, mơi trường, dầu khí, thực phẩm ■ Kiểm định hiệu chuẩn phương tiện đo phương tiện chuẩn lĩnh vực: khối lượng, độ dài, lực, độ cứng, điện, nhiệt, dung tích, lưu lượng, áp suất, chân khơng, hóa lý ■ Đánh giá phù hợp theo tiêu chuẩn (Việt Nam, nước ngoài) ■ Đào tạo tư vấn hoạt động liên quan đến tiêu chuẩn, đo lường chất lượng 1.3 Q TRÌNH HOẠT ĐỘNG CHÍNH: - Trung tâm Kỹ thuật xây dựng hệ thống quản lý chất lượng phù hợp với yêu cầu tiêu chuẩn TCVN ISO 9001:2000 có kết hợp hợp lý với tiêu chuẩn khác TCVN ISO/ IEC 17025:2001 ■ Yêu cầu chung lực phòng hiệu chuẩn thử nghiệm TCVN ISO/ IEC 17020:2001 ■ Các chuẩn mực chung cho tổ chức giám định - Trong phòng thử nghiệm phòng Đo lường Vietnam Laboratory Accreadation schemes (VILAS)-TỔ chức cơng nhận phịng thử nghiệm công nhận xây dựng hệ thống quản lý chất lượng phù hợp với tieu chuẩn TCVN ISO/ IEC 17025 - Phòng nghiệp vụ đơn vị hưđng dẫn xây dựng áp dụng hệ thống quản lý chất lượng cho doanh nghiệp, chứng nhận có hệ thống quản lý chất lượng phù hợp vđi tiêu chuẩn TCVN ISO 9001:2000 Các phòng nghiệp vụ ,2 ,3, 5, giai đoạn xây dựng để tiến đến cuối năm 2006 tiến hành đăng ký xin công nhận phù hợp với TCVN ISO/ IEC 17020 - Hoạt động trung tâm bao gồm mảng sau: 1.3.1 Thẩm định kỹ thuật: - Trung tâm định quan kiểm tra chất lượng sản phẩm hàng hóa buộc phải kiểm tra nhà nước chất lượng - Thực thẩm định kỹ thuật yêu cầu quan quản lý nhà nước chuyên ngành yêu cầu khác thuộc lĩnh vực: Thiết bị công nghệ, Cơ khí - Luyện kim, Vật liệu Xây dựng cơng trình xây dựng, sản phẩm tiêu dùng, nơng sản - Thực phẩm, Hóa chất - Vật liệu, Dầu khí 1.3.2 Thử nghiệm: Thử nghiệm, phân tích chất lượng, yêu cầu vệ sinh, an tồn sản phẩm, hàng hóa cơng trình Trung tâm Kỹ thuật có hệ thống phòng thử nghiệm theo chuyên nghành sau: ■ Cơ khí - NDT: Vật liệu kim loại, thiết bị, kiểm tra không phá hủy ■ Hàng tiêu dùng: vải sợi, may mặc, giấy, cao su, chất dẻo,sơn, đồ chơi trẻ em Trang 6/109 SVTH: Hồ THỊ MINH VẤN Báo cáo Trung tâm Kỹ thuật Tiêu chuẩn Đo lường Chất lượng ■ Xây dựng: vật liệu xây dựng, cơng trình xây dựng giao thơng, nhựa đường ■ Điện: sản phẩm điện - điện tử: dây cáp điện, dụng cụ điện dân dụng, cấu đóng ngắt, thiết bị điện ■ Hóa - Mơi trường: phân bón, hóa chất bản, vật liệu, khống sản, mỹ phẩm, nước sinh hoạt, nước thải, chất thải rắn, khí ■ Hóa hữu cơ: hợp chất thiên nhiên, hương liệu, phẩm màu, độc chất hữu cơ, thuốc trừ sâu, thuốc kháng sinh, thuốc bảo vệ thực vật ■ Dầu khí: xăng, xăng máy bay, dầu bơi trơn, nhiên liệu, khí hóa lỏng ■ Thực phẩm: nơng sản, ngũ cốc, thực phẩm, thủy sản, trà, cà phê, thuốc lá, đường, mật, bánh, kẹo, thức ăn gia súc, nước giải khát 1.3.3 Đo lường: ■ Kiểm định phương tiện đo: thuộc danh mục bắt buộc phải kiểm định Nhà nước ■ Hiệu chuẩn phương tiện đo chuẩn đo lường lĩnh vực độ dài, lực, độ cứng, áp suất, chân không, khôi lượng, điện, nhiệt, đại lượng, hóa lý ■ Tư vấn trang bị, lắp đặt vận hành dụng cụ đo lường thử nghiệm, thiết bị, chế tạo, lắp đặt chuẩn, dụng cụ đo lường khối lượng, áp suất, sung tích, lưu lượng, điện 1.3.4 Hướng dẫn - Đào tạo: - Hướng dẫn cho tổ chức, doanh nghiệp việc xây dựng áp dụng hệ thống về: ■ Quản lý chất lượng theo ISO 9000 ■ Quản lý chất lượng theo ISO 14000 ■ An toàn vệ sinh thực phẩm theo HACCP, GMP ■ Quản lý phịng thí nghiệm theo ISO 17025 -Tổ chức khóa đào tạo nâng cao theo nội dung: ■ Hệ thống quản lý: ISO 9000, ISO 14000, SA 8000, ISO/ IEC 17025 ■ Các công cụ quản lý chất lượng ■ Kỹ thuật thống kê ■ Công tác tiêu chuẩn hóa, đo lường, quản lý chất lượng doanh nghiệp ■ Kỹ thuật thử nghiệm theo lĩnh vực: lý, hóa học, vi sinh - Kiểm định viên đo lường thuộc lĩnh vực khối lượng, áp suất, lực, nhiệt - Kỹ thuật đo lĩnh vực - Bảo dưỡng, hiệu chỉnh, bảo trì phương tiện đo kiểm doanh nghiệp 1.3.5 Thông tin Tiêu chuẩn:Dịch vụ tìm kiếm thơng tin tư liệu tiêu chuẩn, đo lường, chất lượng theo chủ đề cung cấp, cập nhật loại tiêu chuẩn tài liệu sau: ■ Tiêu chuẩn Việt nam (TCVN) Trang 7/109 SVTH: Hồ THỊ MINH VẤN Báo cáo Trung tâm Kỹ thuật Tiêu chuẩn Đo lường Chất lượng ■ Tiêu chuẩn nước ngoài: ASTM, JIS, GOST, BS, AS, IS, DIN, NF, APHA, ASME, AWS, AOAC, AOCS, CIPAC, FAO FNP ■ Tiêu chuẩn tài liệu quốíc tế: ISO, IEC, CODEX, OIML ■ Tài liệu pháp chế nghiệp vụ tiêu chuẩn đo lường chất lượng 1.4 Sơ ĐỒ TO CHỨC VÀ BỐ TRÍ NHÂN sự: 1.4.1 Cơ câu tể chức: -Trung tâm Kỹ thuật Tiêu chuẩn Đo lường Chất lượ gọi tắt Trung tâm Kỹ thuật ba trung tâm Kỹ thuật trực thuộc Tổng cục Tiêu chuẩn Đo lường Chất lượng Cơ cấu tổ chức máycủatrung tâm Kỹ thuật xếp sau: -Lãnh đạo Trung tâm: Gồm 01 giám đốc, 02 phó giám đốc phân cơng: ■ Giám đốc phụ trách chung ■ Phó giám đốc phụ trách kỹ thuật ■ Phó giám đốc nghiệp vụ 1.4.2 Các đơn vị trực thuộc: Trung tâm kỹ thuật có 20 đơn vị trực thuộc: gồm 19 phòng, 01 xưởng Nhiệm vụ phịng sau: Phịng tểng hựp: -Tổ chức xây dựng kế hoạch theo dõi, điều độ việc thực công tác chuyên môn -Đầu mối giải vấn đề nghiệp vụ Tiêu chuẩn Đo lường Chất lượng Theo dõi công tác pháp chế Tiêu chuẩn Đo lường Chất lượng -Theo dõi công tác hợp tác quốc tế - Tổ chức thực hoạt động đào tạo Tiêu chuẩn Đo lường Chất lượng cho bên ngồi -Thơng tin phát hành phục vụ tra cứu tài liệu Tiêu chuẩn Đo lường Chất lượng -Tiếp nhận đăng ký kiểm tra hàng hóa xuất nhập thẩm định kỹ thuật ♦> Phòng hành chánh - Tổ chức: -Hành chánh: văn thư lưu trữ, công văn - đến, tiếp tân hướng dẫn thủ tục xuất nhập cảnh, gửi nhận hàng, bếp ăn, tạp vụ -Quản trị: Tổ chức thực xây dựng, sửa chữa nhà xưởng, bảo vệ, PCCC, quản lý sử dụng tài sản văn phòng, điện, nưđc, điện thoại -Tổ chức cán bộ: Nhân sự, đào tạo, chế độ sách, trị nội -Tài vụ: Quản lý công tác thu chi, báo cáo tài chính, quản lý tài sản -Tiếp thị: Quản lý công tác tiếp thị, tổ chức hoạt động xúc tiến Tiêu chuẩn Đo lường Chất lượng (quản bá giới thiệu, hội thảo) Phòng nghiệp vụ chuyên ngành: Gồm 06 phòng nghiệp vụ 1, 2, 3, 4, 5,6 Trang 8/109 SVTH: Hồ THỊ MINH VẤN Báo cáo Trung tâm Kỹ thuật Tiêu chuẩn Đo lường Chất lượng - Nhiệm vụ: Kiểm tra chất lượng hàng hóa, Thẩm định kỹ thuật sản phẩm (hàng hóa) thiết bị cơng nghệ, Đánh giá phù hợp - Phạm vi: o Phòng nghiệp vụ 1: Cơ khí tiêu dùng, Thiết bị cơng nghệ, o Phịng nghiệp vụ 2: Cơng nghệ tiêu dùng, Hóa chất vật liệu, Cơng nghệ dầu khí o Phịng nghiệp vụ 3: Nơng sản thực phẩm, thủy sản hóa nơng o Phịng nghiệp vụ 4: ■ Hướng dẫn doanh nghiệp áp dụng hệ thống quản lý chất lượng, đo lường, hiệu chuẩn, hệ thống quản lý môi trường hệ thống quản lý phịng thí nghiệm ■ Tham gia đánh giá hệ thống quản lý chất lượng, môi trường, phịng thí nghiệm sản phẩm phù hợp tiêu chuẩn o Phòng nghiệp vụ 5: Điện - Điện tử o Phịng nghiệp vụ 6: Thẩm định cơng tình xây dựng o Phòng hỗ trự kỹ thuật: ■ Phòng hỗ trợ kỹ thuật có nhiệm vụ thực công tác hỗ trợ, làm đầu mối giải vấn đề kỹ thuật nghiên cứu phát triển vấn đề liên quan đến lĩnh vực thí nghiệm cho phịng thí nghiệm Biên Hịa Trung tâm Kỹ thuật ■ Quản lý công tác đào tạo chuyên mơn, nghiệp vụ, thử nghiệm thành thạo, kiểm sốt tài liệu bên tổ chức giải ý kiến phản ánh, khiếu nại khách hàng ■ Quản lý mua sắm, công tác yểm trỢ công tác Hành - Quản trị khu vực thí nghiệm Biên Hịa o Phịng thí nghiệm khí NDT: Có khả thử nghiệm tiêu chất lượng vật liệu kim loại, sản phẩm khí gang, thép, kim loại màu, nồi hơi, thiết bị áp lực, phụ tùng chi tiết máy móc, kết cấu ■ Cơ tính vật liệu: thử kéo, uốn, nén, va đập, thử độ cứng loại ■ Thành phần hóa học kim loại, xác định mác kim loại gang, thép, nhôm, kẽm ■ Tổ chức thô đại, tổ chức tế vi kim loại, lđp phủ ■ Kiểm tra đồng lượng mối hàn, qui trình, tay nghề thợ hàn ■ Kiểm tra không phá hủy phương pháp siêu âm, chụp ảnh phóng xạ o Phịng thử nghiệm hàng tiêu dùng: Có chức thử nghiệm tiêu chất lượng sản phẩm ngành giấy, cao su, sơn, mực, plastic, sản phẩm dệt, thử nghiệm an toàn đồ chơi trẻ em Trang 9/109 SVTH: HỒ THỊ MINH VẪN Báo cáo Trung tâm Kỹ thuật Tiêu chuẩn Đo lường Chất lượng màu đỏ pha cồn, chứng tỏ có indol (các Ống dương tính) 4.3.2.11 Biểu thị kết quả: - Chọn dịch pha lỗng: có trường hợp sau: ■ Trường hợp 1: Chọn dịch pha loãng cao (tức dịch pha lỗng có nồng độ mẫu thấp nhất) lên men ba Ống dương tính với hai dịch pha loãng cao (tức dịch pha lỗng có nồng độ mẫu 1/10 1/10 dịch loãng chọn) Nếu pha lỗng dịch mà khơng đủ tạo nên dịch pha loãng cao để lên men ba Ống dương tính cần chọn để thay ba dịch pha loãng cao loại (tức dịch pha lỗng có nồng độ mẫu thấp nhất) ■ Trường hợp 2: Trường hợp áp dụng Chọn ba dịch pha loãng cao loạt dịch pha lỗng (tức dịch pha lỗng có nồng độ mẫu thấp nhất) số có Ống cho kết dương tính 4.3.2.12 Trường hựp đặc biệt: Trong tất tníờng hợp, có nhiều ba dịch pha loãng chọn khơng lên men Ống dương tính, chọn từ dịch pha lỗng dịch pha lỗng thấp khơng lên men Ống dương tính hai dịch pha loãng thấp dịch pha loãng, trừ Ống dương tính thấy mức dịch pha loãng chuẩn bị từ mẫu Trong trường hợp cuối, cần thiết, chọn ba dịch pha lỗng để tính MPN, chí loạt pha loãng bao gồm hai dịch pha lỗng khơng lên men ống dương tính 4.3.2.13 Xác định sô' MPN: - Kiểm tra theo số lượng mẫu xét nghiệm theo lô, tần suất số lượng ống dương tính ứng với độ pha lỗng chọn chấp nhận theo phương pháp thống kê Sự chấp thuận phụ thuộc vào số lượng kiểm tra phụ thuộc định có chấp nhận hay khơng chấp nhận theo kết cấp hạng - Đối với tần suất tìm để chấp nhận, để có số MPN 4.3.2.14 Tính tốn số’ xác suất lớn (MPN): - Lấy số E.coli giả định ml gam sản phẩm cách nhân số MPN vđi nghịch đảo độ pha loãng thấp chọn (tức dịch pha lỗng có nồng độ mẫu cao nhất) - Khi độ pha loãng thấp chọn ứng với Ống chuẩn bị với môi trường nồng độ kép (nuôi cấy với 10ml) tníđc hết chia số MPN cho 10 - Biểu thị kết số nằm khoảng từ 1,0 9,9 nhân vđi 102, X luỹ thừa - MPN nhỏ 0,3 vi sinh vật ml g sử dụng qui trình thích hợp số E.coli giả định thấp, biểu thị kết theo cách sau: ‘’không có E.coli Trang 97/109 SVTH: HỒ THỊ MINH VẪN Báo cáo Trung tâm Kỹ thuật Tiêu chuẩn Đo lường Chất lượng giả định ml g sản phẩm) 4.3.2.15 Báo cáo thử nghiệm: Báo cáo thử nghiệm phải qui định phương pháp sử dụng, nhiệt độ ủ ấm kết thu được, báo cáo thử nghiệm phải cập đến tất chi tiết thao tác không qui định tiêu chuẩn này, điều coi tùy ý cố ảnh hưởng đến kết thử 4.3.3 Định lượng đơn vị khuẩn lạc nấm men nấm mốc theo phương pháp TCVN 6265:1997: 4.3.3.1 Phạm vi áp dụng: Tiêu chuẩn qui định phương pháp định lượng đơn vị hình thành khuẩn lạc từ nấm men nấm mốc nhìn thấy sữa sản phẩm sữa kỹ thuật đếm khuẩn lạc 25°c 4.3.3.2 Định nghĩa:Nấm men nấm mốc vi sinh vật 25°c dưđi điều kiện qui định tiêu chuẩn tạo thành khẩun lạc 4.3.3.3 Nguyên tắc: - Chuẩn bị đĩa nuôi cấy, sử dụng môi trường nuôi cấy chọn lọc lượng mẫu thử xác định sản phẩm dạng lỏng, dạng huyền phù ban đầu sản phẩm dạng khác Chuẩn bị đĩa khác điều kiện, với dung dịch pha loãng thập phân huyền phù từ mẫu thử - Nuôi ấm đĩa ngày d 25°c mơi trường có khơng khí - Tính số đơn vị khuẩn lạc tạo thành nấm men nấm mốc gam ml sản phẩm từ số khuẩn lạc thu đĩa chọn mức độ pha lỗng để có kết 4.3.3A Môi trường cao men/ dextroza/ oxitetraxiclin/ thạch: a) Môi trường bản: - Thành phẩn: Bơt cao men 5,0g 20,0 Dextroza (CtìH^Otì) Tha ch 10 g đến 15 g Trang 98/109 SVTH: HỒ THỊ MINH VẪN Báo cáo Trung tâm Kỹ thuật Tiêu chuẩn Đo lường Chất lượng 900 ml Nước Chuẩn bị: Hoà tan thành phần mơi trường hồn chỉnh khơ nước đun nóng, cần chỉnh pH để đạt sau khử trùng pH 6,6 25°c Khử trùng hấp nồi hấp áp lực 121°c ±l°c khoảng 15 phút b) Dung dịch Oxitetraxiclin: - Thành phẩn: Oxitetraxiclin hidroclorua (C22lỈ3oN20ii).HCl 50 mg Nước 50 ml - Chuẩn bị:Hoà tan Oxitetraxiclin nước Chuẩn bị dung dịch trước lần sử dụng Khử trùng dung dịch cách lọc c) Mơi trường hồn chỉnh: - Thành phần: _ _ Oxitetraxiclin hidroclorua (C22H3oN20ii).HC1 10 ml Môi trường 90 ml - Chuẩn bị: Làm nguội môi trường khử trùng tới 45°c Ngay trước sử dụng đưa dung dịch OxitetraxicHn 45°c cho 10 ml dung dịch vào 90 ml môi trường 4.3.3.5 Cách tiến hành: - Để tăng độ xác phương pháp, việc chuẩn bị dung dịch pha lỗng phải chuẩn hóa cần thận Những yếu tố tác động độ xác là: ■ Kiểu loại thiết bị khuấy trộn ■ Thời gian khuấy trộn ■ Chất pha loãng ■ Thời gian hạt tơ lắng xuống ■ Thời gian trộn cho phép chuẩn bị dung dịch loãng thập phân - Cấy nuôi ấm: ■ Lấy hai đĩa petri vô trùng Dùng pipet vô trùng cho vào đĩa ml mẫu thử, dạng lỏng, lml chất huyền phù ban đầu sản phẩm dạng khác ■ Lấy tiếp hai đĩa petri vô trùng Dùng pipet vô trùng khác, cho vào đĩa ml dung dịch pha loãng 10“1 (sản phẩm dạng lỏng) ml dung dịch pha loãng 10"2 (sản phẩm dạng khác) ■ Nếu cần, lặp lại thao tác này, sử dụng dung dịch pha lỗng thập phân ■ Rót vào đĩa petri khoảng 15 ml môi trường chứa oxitetraxiclin mơi trường chứa cloramphenicol làm cho nóng chảy từ trước giữ 45 °c Trang 99/109 SVTH: HỒ THỊ MINH VẪN Báo cáo Trung tâm Kỹ thuật Tiêu chuẩn Đo lường Chất lượng nồi cách thủy Trang 100/109 SVTH: HỒ THỊ MINH VẪN Báo cáo Trung tâm Kỹ thuật Tiêu chuẩn Đo lường Chất lượng ■ Khuấy trộn thật kỹ chất cấy với môi trường cách xoay đĩa petri hỗn hợp đông đặt đĩa petri mặt phẳng nằm ngang, mát ■Thời gian từ chuẩn bị dung dịch pha loãng thứ đến trộn chất nuôi cấy vđi môi trường không vượt 15 phút ■Chuẩn bị đủ số đĩa đối chứng để kiểm tra độ vô trùng ■ Lật ngược đĩa cấy xong đặt chúng vào tủ ấm ngày, ỏ nhiệt độ 25 c o Phủ thêm lớp môi trường nuôi cấy lên bề mặt đĩa cấy sau đông đặc o Nhỏ thêm giọt glixerol lên giấy lọc nắp đĩa ■ Không chồng đĩa lên Để chồng đĩa tách xa hẳn nhau, xa thành xa tủ ấm 4.3.3 Ĩ Đọc kết quả: - Đếm số khuẩn lạc đĩa, tránh đếm nhầm khuẩn lạc mọc bất thường Nếu cần, phân biệt khẩun lạc nấm men nấm mốc dựa sở đặc tính hình thái sinh vật - Chỉ giữ lại đĩa có từ 10 khuẩn lạc đến 150 khuẩn lạc Nếu phần đĩa bị nấm mốc che phủ, khó khuẩn lạc riêng biệt đếm khuẩn lạc đĩa có độ pha lỗng cao tiếp theo, chí số khuẩn lạc 4.3.3.7 Trong trường hỢp tiến hành: ■Nếu có hai đĩa tương ứng với mẫu thử (sản phẩm lỏng) huyền phù ban đầu (sản phẩm dạng khác) có chứa 10 khuẩn lạc báo cáo kết sau: - 10 CFU nấm men nấm mốc có mililit - 10 X 1/d CFU nấm men nấm mốc có gam (sản phẩm dạng khác), d hệ số pha lỗng chất huyền phù ban đầu ■Nếu tất đĩa chứa nhiều 150 khuẩn lạc số lượng ước tính từ đĩa có số khuẩn lạc gần 150 nhân số với số nghịch đảo hệ số pha loãng cao Báo cáo kết theo ”số lượng đơn vị khuẩn lạc CFU nấm men nấm mốc ưđc tính gam mililit sản phẩm’ ’ 4.3.3.8 Biểu thị kết quả: - Chỉ giữ lại đĩa có 10 khuẩn lạc, nhiều 150 khuẩn lạc - Tính sơ' CFU nấm mốc nấm men, N gam mililit sản phẩm, theo công thức: Yc N - ^ (nl + 0,ln2)xd Trong đó: ZC: tổng số khuẩn lạc đếm tất đĩa giữ lại nl: số đĩa độ pha lỗng thứ có chứa từ 10 đến 150 khuẩn lạc n2: số đĩa độ pha loãng thứ hai có chứa từ 10 đến 150 khuẩn lạc d: hệ số pha Trang 101/109 SVTH: HỒ THỊ MINH VẪN Báo cáo Trung tâm Kỹ thuật Tiêu chuẩn Đo lường Chất lượng loãng tương ứng với độ pha lỗng thứ - Nếu có nhiều hai độ pha lỗng đếm được, cho kết từ 10 đến 150 khuẩn lạc cơng thức phải sửa đổi, có tính đến độ pha lỗng Với ba độ pha lỗng theo cơng thức: N = ^ («1 + 0,1«2 + 0,01«3 )xd Trong đó: n3: số đĩa độ pha lỗng thứ ba có chứa từ 10 đến 150 khuẩn lạc - Làm tròn số kết thu đến chữ số có nghĩa Khi số cần làm trịn mà khơng có chữ số có nghĩa theo sau làm trịn tníđc chữ số cho thành số chẩn Thí du: 28 500 làm tròn thành 28000 - Lấy kết số CFU nấm mốc nấm men có ml gam sản phẩm biểu thị số từ 1,0 đến 9,9 nhân vđi 10*, X lũy thừa tương ứng 10 Thí du: Việc đếm khuẩn lạc CFU nấm men nấm mốc cho kết sau (hai đĩa poetri cho độ pha loãng ủ) -Độ pha loãng thứ (102) giữ lại chứa 83 97 khuẩn lạc Độ pha loãng thứ hai (103) giữ lại chứa 33 28 khuẩn lạc N = zc/ (ri! + 0,1 n2) d = 83 + 97 + 33 + 28/ -[2+(0,1x2)] 10-2 = 241/ 0,022 = 10 954 Làm tròn kết hướng dẫn thu 11 000 1,1 X 104 CFU nấm men nấm mốc có ữong gam, mililit sản phẩm - Nếu có hai đĩa tương ứng với mẫu thử (sản phẩm lỏng) huyền phù ban đầu (sản phẩm dạng khác) có chứa 10 khuẩn lạc báo cáo kết sau: -ít 10 CFU nấm men nấm mốc có ml (sản phẩm lỏng) -ít 10 X 1/d CFU nấm men nấm mốc có g (sản phẩm dạng khác), d hệ số pha loãng chất huyền phù ban đầu - Nếu tất đĩa chứa nhiều 150 khuẩn lạc tính số lượng ước tính từ đĩa có số khuẩn lạc gần 150 khuẩn lạc nhân số với số nghịch đảo hệ số pha loãng cao Báo cáo kết theo ”số lượng đơn vị khuẩn lạc CFU nấm men nấm mốc ước tính gam mililit sản phẩm” 4.3.3.9 Báo cáo kết quả: Báo cáo kết phải phương pháp sử dụng, kết thử nghiệm thu phương pháp biểu thị sử dụng Cũng phải đề cập đến tất chi tiết không qui định tiêu chuẩn tùy ý lựa chọn vđi chi tiết bất thường khác ảnh hưởng tới kết Trang 102/109 SVTH: HỒ THỊ MINH VẪN Báo cáo Trung tâm Kỹ thuật Tiêu chuẩn Đo lường Chất lượng 4.3.4 Xác định tổng số vi khuẩn hiếu khí theo phương pháp TCVN 5165-90: 4.3.4.1 Nguyên tắc: sử dụng kỹ thuật đổ đĩa, đếm khuẩn lạc môi trường thạch sau ủ hiếu khí nhiệt độ 30 ± l°c thời gian từ 48 đến 72 SỐ lượng vi khuẩn hiếu khí lg lml mẫu sản phẩm thực phẩm kiểm nghiệm tính từ số khuẩn lạc đếm từ đĩa nuôi cấy theo đậm độ pha loãng 4.3.4.2 Lấy mẫu chuẩn bị mẫu: Lượng mẫu cân tối thiểu để pha lỗng khơng lml sản phẩm lỏng 10 + 0,1 g sản phẩm khác 4.3.4.3 Hóa chất: - Thạch dùng cho vi sinh vật; Pepton dùng cho vi sinh vật; Cao thịt - Natri clorua tinh khiết (NaCl); Trypton; Clucoza tinh khiết; - Natri hydrophophat tinh khiết (Na2ĨỈP04) - Kali dihydrophophat tinh khiết (KH2PO4) - Natri hydroxit tinh khiết (NaOH), dung dịch 0,1 N 4.3.4.4 Môi trường: Nưđc đệm pep ton: Pepton, g NaCl, g Na2HP04,g kh2po4, g Nưđc cất, mL 10 b) NƯđc pepton: Pepton, g NaCl, g 8,5 1000 1,5 Nưđc cất, mL 1000 Cách pha chế: Đun sơi để hồ tan chất Để nguội đến 30±5°c Điều chỉnh pH dung dịch NaOH 0,1 N cho sau tiệt khuẩn pH = 7,0 ±0,2 Rót vào bình dung tích 250 ml bình 90 ml, vào Ống nghiệm Ống ml môi trường Tiệt khuẩn nồi hấp nhiệt độ 120°c 15 phút Môi trường không dùng ngay, cần bảo quản nơi khơ ráo, bóng tối, nhiệt độ từ đến 5°c không 30 ngày, c) Môi trường thạch thường: Cao thịt, Pepton, g NaCl, g Glucoza,g Thạch, g Nước cất, mL s 10 1000 5 15-20 d) Môi trường thạch thường: Trypton, g Cao men, g Glucoza,g Thạch, g Nưđc cất, mL 1000 2,5 15-20 Cách pha chế: Đun nhỏ lửa, quyấy để hịa tan chất đến sơi Để nguội môi trường đến 55±5°c, điều chỉnh pH cho sau tiệt khuẩn pH = 7,0 ±0,2 Rót vào bình thủy tinh lượng mơi trường khơng q 1/ dung tích bình Tiệt khuẩn nồi hấp nhiệt độ 120 °c 15 phút Nếu môi trường sử dụng ngay, để nguội đến 45±l°c nồi cách thủy, chưa sử Trang 103/109 SVTH: HỒ THỊ MINH VẪN Báo cáo Trung tâm Kỹ thuật Tiêu chuẩn Đo lường Chất lượng dụng cần bảo quản nơi khơ ráo, bóng tối với nhiệt độ từ đến 5°c không 30 ngày Trước nuôi cấy đun cách thủy cho mơi trường nóng chảy để nguội đến 45+1 °c 4.3.3.S Các bước nuôi cây: 4.3.3.5.1 Pha lỗng mẫu: Pha lỗng mẫu có đậm độ pha loãng cần thiết đủ đếm số khuẩn lạc đĩa theo dự tính 4.3.3.5.2 ĐỖ dĩa: - Đối với mẫu kiểm nghiệm phải ni cấy đậm độ, đậm độ dùng đĩa petri pipet vô khuẩn riêng - Lấy lml sản phẩm (lỏng) dung dịch pha loãng đậm độ khác cho vào đĩa petri - Rót vào đĩa 12-15 ml mơi trường thạch c d, trộn đảo dung dịch mẫu môi trường cách lắc sang phải sang trái chiều lần - Để đĩa thạch đông tự nhiên mặt ngang - Thời gian từ bắt đầu pha lỗng mẫu đến rót mơi trường khơng q 30 phút - Nếu dự đốn sản phẩm có chứa vi sinh vật mọc lan bề mặt thạch sau mơi trường đơng đổ tiếp 4ml thạch màng lên mặt 4.3.3.5.3 ủ ấm - Khi thạch đông, lật sáp đĩa petri để vào tủ ấm nhiệt độ 30+1 °c từ 48 đến 72 - Sau 48 tính kết sơ cách đếm khuẩn lạc mọc đĩa nuôi cấy, sau 72 tính kết thức 4.3.3 Ĩ Tính kết Chọn tất đĩa có khơng q 300 khuẩn lạc để tính kết Sự phân bố khuẩn lạc đĩa nuôi cấy phải hợp lý: độ pha lỗng cao số khuẩn lạc kết không hợp lý, phải tiến hành lại bước ni cấy Tính trung bình cộng tổng số khuẩn lạc đĩa theo công thức sau: Ỹc N = ^ -(«1 + 0,\xn2)xd Trong đó: C: số khuẩn lạc đếm đĩa chọn nl, n2: số đĩa đậm độ pha loãng liên tiếp chọn thứ 1, thứ d hệ số pha loãng đậm độ pha loãng chọn thứ 4.3.5 Phát Listeria monocytogen theo phương pháp TCVN 6401-98: 4.3.5.1 Phạm vi áp dụng: Tiêu chuẩn qui định phương pháp phát Listeria monocytogens sữa sản phẩm sữa 4.3.5.2 Định nghĩa: - Listeria spp: vi sinh vật tạo thành khuẩn lạc đặc trưng môi trường Trang 104/109 SVTH: HỒ THỊ MINH VẪN Báo cáo Trung tâm Kỹ thuật Tiêu chuẩn Đo lường Chất lượng đặc chọn lọc cho thấy rõ đặc tính hình thái học, sinh lý sinh hóa mơ tả, tiến hành thử theo tiêu chuẩn - Listeria monocytogen: lồi Listeria gây bệnh phân biệt với lồi Listeria khơng gây bệnh khác có mặt sữa sản phẩm sữa đặc tính sinh hóa định - Phát Listeria monocytogen: việc xác định có mặt hay khơng vi sinh vật khối lượng hay thể tích qui định, tiến hành thử theo tiêu chuẩn 4.3.5.3 Nguyên tắc: - Tăng sinh môi trường lỏng chọn lọc: cấy phần mẫu vào môi trường chọn lọc nuôi ấm 30°c 48h - Phân lập nhận dạng sơ bộ: cấy từ mẫu thử môi trường tăng sinh vào mơi tníờng phân lập, ni ấm 37°c sau 48h kiểm tra có mặt khuẩn lạc coi Listeria spp giả định theo dáng vẻ bên - Khẳng định: cấy truyền khuẩn lạc Listeria spp giả định lên môi trường đặc không chọn lọc khẳng định thử nghiệm hình thái, sinh lý sinh hóa 4.3.5.4 Mơi trường chọn lọc (môi trường tăng sinh): a) Môi trường bản: - Thành phần Canh thang tripton đậu tương, g Cao men, g Nước, mL 1000 30 - Chuẩn bị: Hòa tan thành phần khô môi trường hồn chỉnh khơ nưđc cách đun sơi Nếu cần, chỉnh pH cho sau khử trùng pH 7,3 nhiệt độ 25°c Phân phối lượng 225 ml vào bình thí nghiệm dung tích 500ml (hoặc bội số 225ml vào bình thí nghiệm có dung tích thích hợp) Khử trùng 15 phút nồi hấp áp lực 121°c b) Phần bố sung 1: Thành phần: Chuẩn bi: Acriflavin hidroclorua 23 mg Hịa tan Acriílavin hidroclorua Nước 10 lĩiL nước Khử trùng qua lọc c) Phần bổ sung 2: Thành phần: Axit nalidixic (muối natri) Natri hidroxit (0,05 mol/1) Chuẩn bi: 46 mg 10 lĩiL Hòa tan Axit nalidixic dung dịch natri hidroxit Khử trùng qua loc Trang 105/109 SVTH: HỒ THỊ MINH VẪN d) Phẩn bổ sung 3: Thành phần: Xicloheximid Etanol Nước Báo cáo Trung tâm Kỹ thuật Tiêu chuẩn Đo lường Chất lượng Chuẩn bi: 57,5 mg 4mL lĩiL Hòa tan Xicloheximid hỗn hợp Etanol/ nước Khử trùng qua lọc e) Mơi trường hồn chỉnh: Bảo quản riêng môi trường phần bổ sung chuẩn bị chỗ tối nhiệt độ từ 2°c đến 5°c Chuẩn bị mơi tníờng hồn chỉnh cách thêm: lml phần bổ sung 1; 2ml phần bổ sung 2ml phần bể sung vào 225 ml môi trường 4.3.5.5 Môi trường phân lập (thạch Oxford): Thành phần: Chuẩn bi: Mơi trường thạch Columbia 39 g Hịa tan thành phần rắn 1g Aesculin nước cách đun Amoni sắt (III) xitrat 0,5 g sôi Liti clorua 15* Nước 1000 mL b) Mỏi trường bán: Thành phần: Chuẩn bi: Xicloh eximid:200mg Fosfomixin : mg Hòa tan thành phần rắn Colistin sunfat: 10mg Etanola : 2,5 mg hỗn hợp etanol/ nước Acriflavin : 2,5mg Nước : 2,5 mL Khử trùng qua lọc Xefotetan : lmg c) Mơi trường hồn chỉnh: Lấy 5ooml mơi trường thạch Khử trùng 15 phút nồi hấp nhiệt độ 121°c Làm nguội 50°c, vô trùng Độ ph mơi trường 7,0 25°c 4.3.5.Ĩ Thuốc thử: dung dịch hidro peroxit, 3% (v/v) 4.3.5.7 Cách tiến hành: a) Cấy vào môi trường tăng sinh: Cho phần mẫu vào môi trường tăng sinh - Sữa bột: cân 25 ml mẫu thử cách vô trùng cho vào bình thí nghiệm có nút, chứa 225 ml mơi trường tăng sinh Lắc để hịa tan - Ni ấm: mơi trường tăng sinh cấy mẫu tủ ấm 30°c -48h - Phân lập nhận dạng sơ bộ: • Dùng que cấy vịng, ria cấy mẫu nuôi lên bề mặt đĩa thạch Oxford để thu khuẩn lạc tách biệt rõ ràng • Lật sấp đĩa đặt vào tủ ấm để 37°c 48h • Kiểm tra đĩa cấy có mặt khuẩn lạc listeria spp đặc tníng - Khẳng định: • Chọn khuẩn lạc để khẳng định: Từ đĩa môi trường phân lập chọn Trang 106/109 SVTH: HỒ THỊ MINH VẪN Báo cáo Trung tâm Kỹ thuật Tiêu chuẩn Đo lường Chất lượng năm khuẩn lạc điển hình có nghi ngờ, có năm khuẩn lạc tất để thử khẳng định • Ni ấm: Ria cấy khuẩn lạc chọn lên bề mặt đĩa thạch TSYEA cho khuẩn lạc mọc phân tách rõ đặt đĩa tủ ấm 37oC 24h, có khuẩn lạc mọc Độ dày lđp môi trường thạch (15ml/đĩa) quan trọng độ rọi Herry tốt b) Diễn giải đặc tính hình thái sinh lý phản ứng sinh hóa: tất chủng listeria spp trực khuẩn nhỏ, gram dương (chỉ vđi mẫu cấy 24h tuổi) có tính chuyển động tiêu ướt mơi trường di động Chúng chủng listeria spp, catalaza dương tính, L.monocytogens chuyển hóa ramnoza khơng chuyển hóa xyloza, L.monocytogens, L.ivanovii L seeligeri (phản ứng yếu) tạo tan máu ß cấy thạch máu lấy khuẩn lạc để kiểm tra tính tan máu mặt khuẩn lạc Trong ba chủng listeria spp làm tan máu, chí có L.monocytogens khơng chuyển hóa xyloza dương tính với ramnoza (bảng 4.3.5) Báng 4.3.5 phán ứng nhận biết Listeria spp Các loại Sinh axit Thử CAMP Ramnoza Xyloza S.aureus R equi L.monocytogens + + V L innocua L.ivanovii + + L seeligeri + (+) V L.welshimeri + V L.murrayi - - - - - - - - - - - - - - V = phản ứng thay đổi (+) = phản ứng yếu + = phản ứng dương tính - khơng phản ứng 4.3.5.8 Biểu thị kết quả: báo cáo có mặt hay không listeria monocytogens phần mẫu thử, ghi rõ mẫu thử theo khối lượng gam, theo thể tích mililit 4.3.5.9 Báo cáo kết : báo cáo ghi rõ, phương pháp lấy mẫu, phương pháp sử dụng, kết thu — 4.3.6 Xác định tổng số vi khuẩn hiếu khí theo phương pháp TCVN 5165-90: 4.3.6.1 Phạm vi áp dụng: phương pháp định lượng coliform kỹ thuật ni cấy mơi trường lỏng tính số có xác suất lớn (MPN) sau ni cấy 30°c áp dụng cho sữa bột, sản phẩm sữa đông lạnh, sữa dạng lỏng 4.3 Ó.2 Định nghĩa: Coliíorm vi khuẩn nhiệt độ 30oC tạo thành khuẩn lạc đặc trưng lên men lactoza kèm theo sinh điều kiện 4.3 Ĩ.3 Ngun tắc: - Ni cấy phần mẫu thử lượng từ loạt mẫu thử pha loãng theo hệ thập phân vào dãy ba Ống môi trường nuôi cấy lỏng chọn lọc qui định có Trang 107/109 SVTH: HỒ THỊ MINH VẪN Báo cáo Trung tâm Kỹ thuật Tiêu chuẩn Đo lường Chất lượng chứa Ống Durham - Nuôi ấm ống nghiệm 30 °c 48h - Lấy từ ống nghiệm coi dương tính nghĩa Ống cho thấy có sinh Ống Durham canh thang lục sáng mật lactoza,cấy truyền lên bề mặt thạch eosin xanh metylen - Nuôi ấm 30°c 24h 4.3 Ĩ.4 Chất pha lỗng mơi trường 4.3.6.4.1 Nguyên liệu chính: Để làm tăng độ tái lập kết quả, nên sử dụng thành phần khơ mơi trường hồn chỉnh khơ để chuẩn bị chất pha lỗng mơi trường ni cấy Các hóa phẩm phải đạt chất lượng phân tích Nước sử dụng phải nuđc cất dung cụ thủy tinh nước khử ion Nưđc khơng chứa chất ức chế sinh trưởng vi sinh vật điều kiện thử 4.3 Ĩ.4.2 Chất pha lỗng: - Dung dịch pepton/ muối: _ Thành phần Pepton, g Natri clorua (NaCl), g Nước, mL 1,0 1000 8,5 Chuẩn bị: Hoà tan thành phần nưđc, đun nóng cần Điều chỉnh pH cho sau khử trùng, pH 7,0 ±0,1 25°c - Dung dịch pepton: Thành phần Pepton, g Nước, mL 1,0 1000 Chuẩn bị: Hoà tan pepton nưđc Điều chỉnh pH cho sau khử trùng, pH 7,0 ±0,1 25°c 4.3 Ó.5 Phân phối, khử trùng bảo quản chất pha loãng: Phân phối chất pha loãng dùng cho độ pha lỗng ban đầu vào bình lọ, phân phối chất pha loãng dùng cho độ pha loãng vào ống nghiệm lọ nhỏ Lượng phân phối sau khử trùng chứa bình lọ phải 90 ml chất pha loãng bội số 90 ml ống nghiệm lọ nhỏ phải chứa 9,0 ml chất pha lỗng Đậy nắp Ống nghiệm, bình lọ 4.3.6 Ó Cách tiến hành: 4.3.6.6.1 Chuẩn bị mẫu thử dung dịch pha loãng ban đầu: Để ttánh làm ảnh hưởng vi sinh vật thay đổi nhiệt độ đột ngột, nhiệt độ chất pha loãng suốt trình thao tác: Trang 108/109 SVTH: HỒ THỊ MINH VẪN Báo cáo Trung tâm Kỹ thuật Tiêu chuẩn Đo lường Chất lượng > Sữa sản phẩm sữa dạng lỏng: - Trộn mẫu thử thật kỹ cho vi sinh vật phân bố tốt cách đảo chiều lọ chứa liên tục 25 lần cần phải tránh tạo bọt để bọt tan hết Khoảng thời gian từ trộn đến lấy phần mẫu thử không phút - Dùng pipet lấy lml mẫu thử cho vào ml chất pha loãng Lắc dung dịch pha loãng ban đầu Như thu dung dịch pha loãng 10“1 4.3.6 Ĩ.2 Dung dịch pha lỗng thập phân tiếp theo: - Dùng pipet lấy ml dung dịch pha loãng ban đầu cho vào Ống nghiệm khác chứa ml chất pha lỗng vơ trùng, khơng để pipet tiếp xúc với chất pha loãng Mỗi lần phải sử dụng pipet - Trộn kỹ cách dùng pipet hút thả 10 lần để thu dung dịch pha loãng 10"2 - Nếu thấy cần, lặp lại thao tác sử dụng dung dịch pha loãng 10“2 dun dịch pha loãng để nhận dung dịch pha loãng 10“3, 10“4 - Khi lấy tỉ lệ lOml cộng 90ml, llml cộng 99ml lml cộng 99ml lắc tay - Pha đủ số lượng dung dịch pha loãng để đảm bảo tất Ống nghiệm tương ứng với độ pha loãng cuối cho kết âm tính 4.3.6 Ĩ.3 Thời gian thao tác: Khoảng thời gian từ lúc bắt đầu cân đo phần mẫu thử từ lúc kết thúc việc chuẩn bị dung dịch pha loãng ban đầu trộn dung dịch cấy vđi môi trường không 15 phút, trừ có qui định khác 4.3 Ĩ.7 Cấy mẫu: - Lấy ba Ống nghiệm đựng canh thang nồng độ kép dùng pipet cho vào ống 10 ml mẫu thử dạng lỏng lOml dung dịch pha loãng ban đầu - Lấy ba Ống nghiệm đựng canh thang nồng độ đơn dùng pipet cho vào ống ml mẫu thử dạng lỏng lml dung dịch pha lỗng ban đầu - Đơi với dung dịch pha loãng (10_1 10“2, tùy theo trường hợp) lấy ba Ống nghiệm canh thang nồng độ đơn Cho vào ống lml dung dịch pha loãng thích hợp Đối với độ pha lỗng dùng pipet Trộn cẩn thận chất nuôi cấy với môi trường - Nuôi ấm ống nghiệm canh thang nồng độ đơn 30°c±l°c 24h±2h - Nuôi ấm ống nghiệm canh thang nồng độ kép 30°c ±l°c 24h±2h - Cấy truyền từ Ống nghiệm canh thang nồng độ kép nuôi ấm: Từ ống nghiệm canh thang nồng độ kép nuôi ấm dùng que cấy vòng cấy vào ống nghiệm canh thang nồng độ đơn Nuôi ấm 30°c ±l°c 48h±2h - Thử khẳng định: - Từ ống nghiệm nuôi ấm cho thấy có sinh Ống Durham, cấy vịng đầy lên thạch eosin xanh metylen Ni ấm 30°c ±l°c 24h±2h Trang 109/109 SVTH: HỒ THỊ MINH VẪN Báo cáo Trung tâm Kỹ thuật Tiêu chuẩn Đo lường Chất lượng - Các khuẩn lạc mọc có màu đỏ/ hồng, ánh kim đục coi đặc trưng, cần khẳng định thêm nữa, nuôi cấy khuẩn lạc vào Ống nghiệm chứa canh thang nồng độ đơn kiểm tra sinh sau nuôi ấm - Ghi lại số ống khẳng định dương tính đối vđi độ pha lỗng 4.3 Ĩ.8 Biểu thị kết quả: - Lựa chọn độ pha loãng - Xác định số MPN - Tính số xác suất lđn (MPN) - Độ xác 4.3 Ĩ.9 Báo cáo kết quả: - Báo cáo phương pháp xác định sử dụng kết thu được, rõ phương pháp biểu thị dùng Nó phải đề cập đến tất chi tiết thao tác không qui định phần tiêu chuẩn CHƯƠNG V: KẾT LUẬN Trung tâm Tiêu chuẩn Đo lường Chất lượng đơn vị nghiệp khoa học phục vụ cho công tác quản lý Nhà nước tiêu chuẩn, đo lường, chất lượng Bao gồm chức nhiệm vụ Trung tâm là: - Kiểm tra nhà nước chất lượng hàng hóa xuất nhập - Thẩm định kỹ thuật thiết bị công nghệ hàng hóa - Kiểm định, hiệu chuẩn phương tiện đo kiểm - Thử nghiệm chất lượng sản phẩm (hàng hóa) hệ thống quản lý - Hướng dẫn, đào tạo, tư vấn tiêu chuẩn, đo lường quản lý chất lượng - Cung cấp thơng tín tiêu chuẩn hóa, đo lường quản lý chất lượng - Nghiên cứu, chế tạo chuẩn đo lường phương tiện đo - Trung tâm định quan kiểm tra sản phẩm hàng hóa bắt buộc phải kiểm tra Nhà nước chất lượng - Hiện nay, Trung tâm xây dựng nhà thử nghiệm sóng điện từ (EMC) với hệ thống công nghệ cao Nhật đảm nhiệm, lắp ráp thiết bị Các hệ thống tiêu chuẩn: Phần lớn tiêu chuẩn có thời gian ban hành lâu theo thống kê Trung tâm Tiêu chuẩn có khoảng 40% số lượng tiêu chuẩn khơng cịn phù hợp với xu Điều bất lợi lớn q trình hội nhập vđi giới thơng qua WTO, AFTA Giải pháp cho tiêu chuẩn là: Các quan quản lý có chức đưa khoảng thời gian định, để định kỳ xem xét lại hệ thống tiêu chuẩn phù hợp với nhịp độ phát triển xã hội nhằm nâng cao chất lượng sản phẩm Đây khó khăn lđn tốn nhiều chi phí, nguồn lực để thực phải có phối hợp tốt, quán Bộ, Ngành liên quan Trang 110/109 SVTH: HỒ THỊ MINH VẪN Báo cáo Trung tâm Kỹ thuật Tiêu chuẩn Đo lường Chất lượng Ngoài ra, tiêu chuẩn Việt Nam (TCVN) sử dụng nưđc, trung tâm thực phép thử theo phương pháp khác như: AOAC,AOCS, AACC, BS, CODEX STAN, FAO FNP, ISO, IS, EEC, GAFT A, ICUMSA Sản phẩm sữa có nhiều tiêu phương pháp thử khác nhau: - Phần hóa lý: phân tích hàm lượng béo, đạm, casein, số acid, canxi, lactose, chất khô - Phần vi sinh: tổng số vi sinh vật, men, mốc Hiện nay, sữa có nhiều tiêu cần thử nghiệm nhiữig quan chưa có đủ thiết bị để thử nghiệm hết tiêu như: vitamin B5, B12, màng béo sữa, số thông minh A+ DHA, WG3 Trang 111/109 ... vụ Trung Tâm Tiêu chuẩn Đo lường Chất lượng khu vực 1 .3 Q trình hoạt động Trung Tâm Tiêu chuẩn Đo lường Chất lượng 1.4 Sơ đồ tể chức bố trí nhân 1.5 Sơ đồ bố trí mặt Trung Tâm Tiêu chuẩn Đo lường. .. THỊ MINH VẨN Báo cáo Trung tâm Tiêu chuẩn Đo lường Chất lượng MỤC LỤC Trang MỞ ĐẦU CHƯƠNG I: TỔNG QUAN TRUNG TÂM 1.1 Lịch sử hình thành phất triển Trung Tâm Tiêu chuẩn Đo lường Chất lượng 1.2 Chức... chức Trung tâm theo Quyết định số 124/ QĐ-TĐC ngày 26/04/1999 Tổng cục Tiêu chuẩn Đo lường Chất lượng Trang 3/ 126 SVTH: Hồ THỊ MINH VẤN Báo cáo Trung tâm Kỹ thuật Tiêu chuẩn Đo lường Chất lượng