TRƯỜNG ĐẠI HỌC CẦN THƠ KHOA THỦY SẢN LÂM TRUNG TÍNH KHẢO SÁT SỰ BIẾN ĐỘNG MẬT ĐỘ VI KHUẨN BACILLUS SUBTILIS TRONG BỂ NUÔI TÔM SÚ (PENAEUS MONODON) LUẬN VĂN TỐT NGHIỆP ĐẠI HỌC CHUYÊN NGÀNH BỆNH HỌC THUỶ SẢN 2009 TRƯỜNG ĐẠI HỌC CẦN THƠ KHOA THỦY SẢN LÂM TRUNG TÍNH KHẢO SÁT SỰ BIẾN ĐỘNG MẬT ĐỘ VI KHUẨN BACILLUS SUBTILIS TRONG BỂ NUÔI TÔM SÚ (PENAEUS MONODON) LUẬN VĂN TỐT NGHIỆP ĐẠI HỌC CHUYÊN NGÀNH BỆNH HỌC THUỶ SẢN CÁN BỘ HƯỚNG DẪN Ths. PHẠM THỊ TUYẾT NGÂN 2009 i LỜI CẢM TẠ Tôi xin chân thành cám ơn Ban Giám Hiệu, Ban Chủ Nhiệm Khoa Thuỷ Sản, Quý Thầy Cô và toàn thể cán bộ Khoa Thuỷ Sản đã tận tình giúp đỡ, tạo điều kiện thuận lợi cho tôi trong suốt thời gian thực tập. Đặc biệt tôi sinh chân thành biết ơn cô Phạm Thị Tuyết Ngân và chị Liễu Như Ý cùng các cán bộ bộ môn Thuỷ Sinh Học Ứng Dụng, các bạn lớp Bệnh Học Thuỷ Sản K 31 đã tận tình hướng dẫn, động viên và giúp đỡ để tôi hoàn thành luân văn. Cuối cùng tôi xin bày tỏ lòng biết ơn sâu sắc đến gia đình, đặc biệt là cha mẹ đã dành cho tôi những tình cảm, sự động viên cũng như hỗ trợ về vật chất để tôi vượt qua khó khăn trong suốt quá trình học. Chân thành cảm tạ Sinh viên thực hiện Lâm Trung Tính TÓM TẮT Đánh giá khả năng làm sạch môi trường nước của nhóm vi khuẩn chọn lọc, được phân lập từ những ao nuôi tôm sú thâm canh đã được thực hiện, là một trong những bước quan trọng trong qui trình chọn lọc vi khuẩn hữu ích. Bacillus subtilis từ lâu đã được chứng minh là vi khuẩn tham gia trong quá trình phân hủy protein trong nuôi trồng thủy sản. Thí nghiệm được bố trí gồm có 4 nghiệm thức, trong đó 3 nghiệm thức bổ sung vi khuẩn Bacillus subtilis chủng 9, 41, 67 và một nghiệm thức đối chứng. Mỗi nghiệm thức được lập lại 3 lần. Kết quả cho thấy thời gian tồn tại trong bể tôm của vi khuẩn dòng 9 là 7 ngày, dòng 41 và 67 là 5 ngày. Mật độ bào tử trong bùn của 3 chủng 9, 41 và 67 lần lượt là 5,3×10 6 , 5,95×10 5 và 3,5×10 5 bào tử/g. Trong khi đối chứng chỉ khoảng 22 bào tử/g cho thấy sự khác biệt có ý nghĩa thống kê so với các nghiệm thức còn lại (p< 0.05). Trong nước mật độ chủng 9, 41 và 67 lần lượt là 3×10 3 , 4,9×10 2 và 2,9×10 2 bào tử/ml, còn đối chứng chỉ 10 bào tử/ml cho thấy sự khác biệt có ý nghĩa thống kê so với các nghiệm thức còn lại (p< 0.05). Mật độ tổng vi khuẩn trung bình trong bùn chủng 9, 41 và 67 lần lượt là 5,2 x 10 7 , 6,7x 10 6 , 6,7 x 10 6 CFU/g, còn đối chứng 3,8 x 10 8 CFU/g . Trong nước chủng 9, 41 và 67 lần lượt là 3,7 x 10 5 , 4,3x 10 5 , 57 x ,10 5 CFU/ml, còn đối chứng 5 x 10 7 CFU/ml, có số lượng tăng cao khác biệt có ý nghĩa thống kê so với các nghiệm thức còn lại (p< 0.05). Mật độ vi khuẩn Vibrio trong bùn, chủng 9, 41 và 67 lần lượt là 7,6 x 10 1 , 2,1x 10 2 và 3,7 x 10 2 CFU/g, thấp hơn nhiều so với đối chứng (5,8 x 10 4 CFU/g). Trong nước mật độ chủng 9, 41,và 67 lần lượt là 4,1 x 10 1 , 1,9x 10 2 và 3,5 x 10 2 CFU/ml, đối chứng 6,4 x 10 4 CFU/ml có số lượng tăng cao khác biệt có ý nghĩa thống kê so với các nghiệm thức còn lại (p< 0.05). Tỉ lệ tăng trưởng đạt cao nhất ở nghiệm thức 1 (chủng 9) tăng 10,7g/con và sai khác có rất có ý nghĩa thống kê (p<0,01) so với nghiệm thức đối chứng tăng 5,3g/con và khác biệt rất có ý nghĩa thống kê với nghiệm thức bổ sung vi khuẩn dòng 41 và dòng 67 (p< 0.01). Tỷ lệ sống ở nghiệm thức 1 (chủng 9) cao nhất 97,2% và sai khác rất có ý nghĩa so với nghiệm thức đối chứng (p<0,01). Trong khi đó tỉ lệ sống giữa các nghiệm thức bổ sung vi khuẩn sai khác không có ý nghỉa thống kê. Các chỉ tiêu sinh hóa cơ bản đều thỏa mản điều kiện của Andretta et at., (2004). Qua thí nghiệm nhận thấy chủng 9 là chủng có nhiều ưu thế nhất về thời gian tồn tại, làm tăng tỷ lệ sống, tỷ lệ tăng trưởng và làm giảm mật độ vi khuẩn Vibrio trong bể nuôi tôm. ii iii MỤC LỤC PHẦN I: GIỚI THIỆU 1 2.1 Đặc điểm sinh học của tôm sú (Penaeus monodon) 3 2.1.1 Vị trí phân loại: 3 Theo hệ thống phân loại của Holthuis, 1989. Tôm sú 3 2.1.2 Phân bố 3 2.1.3 Vòng đời 3 2.1.4 Tập tính ăn và loại thức ăn 4 2.1.5 Lột xác 4 2.2 Sự siến động các yếu tố thuỷ lý trong ao nuôi thuỷ sản 4 2.2.1 Nhiệt độ 4 2.2.2 pH 4 2.2.3 Độ mặn 5 2.2.4 Oxy hoà tan (DO) 5 2.3 Sử dụng chế phẩm sinh học (Probiotic) trong nuôi trồng thủy sản 5 2.3.1 Sơ lược về probiotic 5 3.2.2 Tình hình sử dụng probiotic trong nuôi trồng thủy sản 6 2.4 Đặc điểm sinh học của Bacillus subtilis 7 2.4.1 Vị trí phân loại 7 2.4.2 Quá trình hình thành bào tử ở Bacillus subtilis 7 2.4.3 Vai trò của Bacillus subtilis 8 PHẦN III: VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 10 3.1 Thời gian và địa điểm nghiên cứu. 10 3.1.1 Thời gian nghiên cứu 10 3.1.2 Địa điểm nghiên cứu 10 3.2 Phương pháp nghiên cứu 10 3.2.1 Dụng cụ và trang thiết bị: 10 3.2.2 Phương pháp bố trí thí nghiệm 10 3.2.3 Phương pháp thu và phân tích mẫu nước 12 3.2.4 Phương pháp thu mẫu bùn 14 3.2.4.1 Phương pháp xác định mật độ vi khuẩn 14 3.2.5 Xác định các chỉ tiêu sinh lý, sinh hoá của vi khuẩn Bacillus subtilis. 15 3.2.6 Phương pháp xác định sự biến động các yếu tố thuỷ lý 15 3.2.7 Cách cho ăn và quản lý tôm nuôi thí nghiệm 15 3.2.8 Tính tốc độ tăng trưởng của tôm 16 3.2.9 Tính tỉ lệ sống của tôm 16 PHẦN IV: KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 17 4.1 Sự biến động các chỉ tiêu thủy lí 17 4.1.1 ảnh hưởng của pH 17 4.1.2 Ảnh hưởng của nhiệt độ 17 4.1.3 Ảnh hưởng của độ kiềm 17 4.1.4 Ảnh hưởng của hàm lượng oxy hòa tan (DO) 17 iv 4.2 Kết quả kiểm tra các đặc điểm sinh hóa vi khuẩn Bacillus subtilis phân lập. 18 4.4 Biến động mật độ Vi khuẩn Bacillus subtilis trong bể nuôi tôm Sú 23 4.5 Biến động mật độ tổng vi khuẩn trong bể nuôi tôm Sú 24 4.6 Biến động mật độ tổng vi khuẩn Vibrio trong bể nuôi tôm Sú 26 4.7 Tỉ lệ sống 27 PHẦN IV KẾT LUẬN VÀ ĐỀ XUẤT 31 4.1 Kết luận. 31 4.2 Đề xuất 31 PHẦN V: TÀI LIỆU THAM KHẢO 32 DANH SÁCH HÌNH Hình 3.1 Các bước pha loãng mẫu…………… 13 Hình 3.2 Cách cấy mẫu vào môi trường thạch………… 13 Hình 4.1 Khuẩn lạc sau 24 giờ…………………………………… 19 Hình 4.2 Nhuộm Gram………………………………… 19 Hình 4.3 Nhuộm bào tử………………………………………… 20 Hình 4.4 Phản ứng Starch……………………………………… 20 Hình 4.5 Phản ứng Gelatin……………………………… 21 Hình 4.6 Phản ứng Thủy phân Casein……………………………. 21 Hình 4.7 Thời gian tồn tại của vi khuẩn Bacillus subtiilis trong bùn… 22 Hình 4.8 Thời gian tồn tại của vi khuẩn Bacillus subtiilis trong nước… 22 Hình 4.9 Biến động mật độ Bacillus subtiilis trong bùn…… 23 Hình 4.10 Biến động mật độ Bacillus subtiilis trong nước……… 23 Hình 4.11 Biến động mật độ tổng vi khuẩn trong bùn……………. 25 Hình 4.12 Biến động mật độ tổng vi khuẩn trong nước…………… 25 Hình 4.13 Biến động mật độ Vibrio trong bùn…………………… 27 Hình 4.14 Biến động mật độ Vibrio trong nước……………… 27 Hình 4.15 Tỉ lệ sống của tôm sú…………………… 28 Hình 4.16 Tỉ lệ tăng trưởng của tôm sú………………… 29 Hình 4.17 Tôm sú sau khi thu hoạch……………………………… 30 v [...]... đề tài "Khảo sát Sự biến động mật độ của vi khuẩn Bacillus subtilis trong bể nuôi tôm sú (Penaueus monodon) được thực hiện với mục tiêu và nội dung sau Mục tiêu Xác định thời gian cần thiết để bổ sung vi khuẩn hữu ích Bacillus subtilis vào bể nuôi tôm sú Xác định mật độ và sự biến động của Bacillus subtilis trong một chu kỳ nuôi Phân lập và xác định các đặc điểm sinh hóa của vi khuẩn chiếm ưu thế trong. .. bể nuôi tôm sú Nhằm khẳng định lại dòng ưu thế là dòng đã bổ sung Nội dung Theo dõi và xác định thời gian bổ sung vi khuẩn Bacillus subtilis và theo dõi biến động mật độ vi khuẩn Bacillus subtilis sau khi bổ sung vào bể nuôi Xác định sự biến động của tổng vi khuẩn, tổng Vibrio trong bể nuôi tôm sú trên môi trường Nutrient Agar (NA) và Thiosulphate Citrate Bile Sucrose Agar (TCBS) Xác định sự biến động. .. khảo sát 4 ao nuôi tôm sú thâm canh tại Sóc Trăng của Lê Mỹ Phương (2008), đã xác định số lượng bào tử của Bacillus subtilis trong bùn không có sự biến động lớn giữa các đợt thu mẫu (2 tuần/lần), trung bình khoảng 105 bào tử/g Kết quả này phù hợp với kết quả nghiêm cứu của chúng tôi mật độ bào tử trong bể nuôi tôm cũng dao động 104_ 105bào tử/g 4.5 Biến động mật độ tổng vi khuẩn trong bể nuôi tôm Sú. .. 4.11 Biến động mật độ tổng vi khuẩn trong bùn 12 Log (CFU/ml) 10 8 C9 C41 6 C67 ĐC 4 2 0 1 2 3 4 5 6 7 Đợt thu mẫu Hình: 4.12 Biến động mật độ tổng vi khuẩn trong nước Mật độ tổng vi khuẩn ở các nghiệm thức bổ sung vi khuẩn trong bùn dao động từ 4,7 x105 2,6 x 108 CFU/g Qua đó cho thấy tổng vi khuẩn ở nghiệm thức đối chứng 7,1 x 106 – 1,8 x 109 CFU/g Mật độ vi khuẩn tổng ở các nghiệm thức có bổ sung vi. .. Ngày Hình: 4.7 Thời gian tồn tại của vi khuẩn Bacillus subtiilis trong bùn Log (CFU/ml ) Log (CFU/g ) 9 8 7 6 5 4 3 2 1 0 9 8 7 6 5 4 3 2 1 0 C9 C41 C67 1 2 Ngày Hình: 4.8 Thời gian tồn tại của vi khuẩn Bacillus subtiilis trong nước 22 4.4 Biến động mật độ Vi khuẩn Bacillus subtilis trong bể nuôi tôm Sú Mật độ bào tử Bacillus subtilis sau khi phân tích trong nước và trong bùn ở các nghiệm thức được thể... 1,5 năm; tôm cái khoảng 2 năm 3 2.1.4 Tập tính ăn và loại thức ăn Tôm sú thích ăn động vật sống hơn xác thối rửa hay mảnh vụn hữu cơ Tôm bắt mồi nhiều hơn khi thuỷ triều rút Nuôi tôm sú trong ao hoạt động bắt mồi nhiều vào sáng sớm và chiều tối Trong tự nhiên tôm chịu được sự biến động về độ mặn rất lớn (345‰), độ mặn tối ưu là 15-25‰ Ở nhiệt độ 28ºC tôm sú lớn tương đối chậm, ở nhiệt độ 30ºC tôm lớn... này cho thấy có sự liên quan đến vi c bổ sung vi khuẩn định kỳ Điều này phù hợp với nhận định của nhà vi sinh vật học Winogradsky xem vi khuẩn Bacillus subtilis như hệ vi sinh vật thường xuyên của đất Qua khảo sát sự biến động mật độ các chủng 9, 41 và 67 cho thấy mật độ vi khuẩn chủng 9 luôn cao nhất Trong bùn là 9 x 106 bào tử/g, trong nước là 2.5 x 103 bào tử/ml và thời gian tồn tại trong bùn lâu... thấy mật độ tổng vi khuẩn trong bùn dao động từ 6,7x 106 - 3,8 x 108 CFU/g và trong nước dao động từ 3,7 x 105 – 5,0 x 107 CFU/ml Qua đó nhận thấy tổng vi khuẩn trong bùn luôn cao hơn trong nước khoảng 10 lần Khi so sánh mật độ giữa các nghiệm thức có bổ sung vi khuẩn thì nhận thấy mật độ tổng vi khuẩn trung bình trong bùn các chủng 9, 41 và 67 lần lượt là 5,2 x 107, 6,7x 106, 6,7 x 106 CFU/g, trong. .. Nước sau khi xử lý bơm vào bể với thể tích khoảng 400L Mật độ thả tôm 30 con/m2 Thí nghiệm gồm 4 nghiệm thức Nghiệm thức 1: bổ sung vi khuẩn Bacillus subtilis chủng 9, mật độ 106 CFU/ml Nghiệm thức 2: bổ sung vi khuẩn Bacillus subtilis chủng 41, mật độ 106 CFU/ml Nghiệm thức 3: bổ sung vi khuẩn Bacillus subtilis chủng 67, mật độ 106 CFU/ml Nghiệm thức 4: không bổ sung vi khuẩn ( đối chứng) Thí nghiệm... trị 11 OD trong khoảng 0,125-1,25 Theo tiêu chuẩn Mac Farland giá trị OD bằng 1 tương ứng mật độ vi khuẩn 1,2x109 tế bào/ml Mật độ vi khuẩn được tính theo công thức Mật độ vi khuẩn (tế bào/ml) = 1200*106*OD *Độ pha loãng Bảng giá trị OD550nm Giá Trị OD550 0.125 Mật Độ Vi Khuẩn 150 (106 CFU/ml) 0.250 0.500 0.750 1.000 1.250 300 600 900 1200 1500 Mật độ vi khuẩn của mỗi dòng bổ sung vào mỗi bể thí nghiệm . Bacillus subtilis phân lập. 18 4.4 Biến động mật độ Vi khuẩn Bacillus subtilis trong bể nuôi tôm Sú 23 4.5 Biến động mật độ tổng vi khuẩn trong bể nuôi tôm Sú. 4.12 Biến động mật độ tổng vi khuẩn trong nước…………… 25 Hình 4.13 Biến động mật độ Vibrio trong bùn…………………… 27 Hình 4.14 Biến động mật độ Vibrio trong nước………………