TRƢỜNG ĐẠI HỌC HÙNG VƢƠNG KHOA NÔNG - LÂM - NGƢ ĐỖ THỊ QUỲNH PHÂN LẬP VÀ GIÁM ĐỊNH MỘT SỐ ĐẶC TÍNH SINH HĨA CỦA VI KHUẨN ESCHERICHIA COLI VÀ SALMONELLA SPP TẠI PHỊNG THÍ NGHIỆM CỦA CƠNG TY CP THUỐC THÚ Y MARPHAVET KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP ĐẠI HỌC Ngành: Thú Y PHÚ THỌ, 2018 i TRƢỜNG ĐẠI HỌC HÙNG VƢƠNG KHOA NÔNG - LÂM - NGƢ ĐỖ THỊ QUỲNH PHÂN LẬP VÀ GIÁM ĐỊNH MỘT SỐ ĐẶC TÍNH SINH HĨA CỦA VI KHUẨN ESCHERICHIA COLI VÀ SALMONELLA SPP TẠI PHỊNG THÍ NGHIỆM CỦA CƠNG TY CP THUỐC THÚ Y MARPHAVET KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP ĐẠI HỌC Ngành: Thú Y NGƢỜI HƢỚNG DẪN: TS NGUYỄN THỊ QUYÊN Th.S NGUYỄN VĂN THĂNG PHÚ THỌ, 2018 i LỜI CẢM ƠN Trong thời gian thực đề tài hoàn thành khóa luận tốt nghiệp, tơi ln nhận đƣợc giúp đỡ Thầy cô cán công nhân viên cty cổ phần thuốc thú y Marphavet Nhân dịp này, xin trân trọng cảm ơn Ban giám đốc, phịng kiểm nghiệm thuốc thú y Marphavet, khoa Nơng Lâm Ngƣ, trƣờng Đại học Hùng Vƣơng nhiệt tình giúp đỡ tạo điều kiện thuận lợi để tơi hồn thành khóa luận tốt nghiệp Đặc biệt, tơi xin bày tỏ lòng biết ơn sâu sắc đến ngƣời hƣớng dẫn khóa luận tơi TS Nguyễn Thị Quyên GĐ Phòng kinh doanh cty cổ phần thuốc thú y Nanovet thuộc tập đoàn Đức Hạnh Th.S Nguyễn Văn Thăng trực tiếp hƣớng dẫn, giúp đỡ tơi suốt q trình thực đề tài hồn thành khóa luận tốt nghiệp Tơi ln biết ơn gia đình, thầy bạn bè học động viên, giúp đỡ tơi hồn thành khóa luận tốt nghiệp Tơi xin chân thành cảm ơn./ Việt Trì, ngày tháng năm 2018 SINH VIÊN ĐÕ THỊ QUỲNH ii DANH MỤC CÁC TỪ VIẾT TẮT VÀ KÝ HIỆU BHI : Brain Heart Infusion CP : Cổ phần CFU : Colony Forming Unit Cs : Cộng DHL : Deoxycholate Hydrogen sulfide Lactose DNA : DeoxyriboNucleic Acid E coli : Escherichia coli EMB : Eosin Methylene Blue ETEC : EnteroToxigenic E coli LPS : LipoPolySaccharide PCR : Polymerase Chain Reaction RR : Relative Risk S choleraesuis : Salmonella choleraesuis S dublin : Salmonella dublin S enteritidis : Salmonella enteritidis S gallinarum : Salmonella gallinarum S pullorum : Salmonella pullorum S typhimurium : Salmonella typhimurium ST : Heat- stabile Toxin SS : Salmonella Shigella TSA : Tryptic Soya Agar iii MỤC LỤC TRANG BÌA PHỤ .i LỜI CẢM ƠN ii DANH MỤC CÁC TỪ VIẾT TẮT VÀ KÝ HIỆU iii MỤC LỤC iv DANH MỤC BẢNG vii MỞ ĐẦU 1 Tính cấp thiết đề tài Mục tiêu nghiên cứu Ý nghĩa khoa học thực tiễn 3.1 Ý nghĩa khoa học 3.2 Ý nghĩa thực tiễn CHƢƠNG TỔNG QUAN VẤN ĐỀ NGHIÊN CỨU 1.1 Một số hiểu biết vi khuẩn E coli 1.1.1 Đặc điểm hình thái, cấu trúc kháng nguyên vi khuẩn E coli 1.1.2 Đặc tính ni cấy,sinh hóa vi khuẩn E coli 1.1.3 Đặc tính gây bệnh vi khuẩn E coli 1.1.4 Vai trò vi khuẩn E coli hội chứng tiêu chảy 10 1.1.5 Bệnh phù đầu lợn vi khuẩn E coli 12 1.2 Một số hiểu biết vi khuẩn Salmonella 14 1.2.1 Đặc điểm hình thái 14 1.2.2 Đặc tính ni cấy 15 1.2.3 Đặc tính sinh hoá 15 1.2.4 Sức đề kháng vi khuẩn Salmonella 16 1.2.5 Các yếu tố gây bệnh vi khuẩn Salmonella 16 1.2.6 Bệnh vi khuẩn Salmonella gây lợn 18 1.3 Tình hình nghiên cứu ngồi nƣớc 21 1.3.1 Tình hình nghiên cứu nƣớc ngồi 21 iv 1.3.2 Tình hình nghiên cứu nƣớc 22 CHƢƠNG 24 ĐỐI TƢỢNG, NỘI DUNG VÀ PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 24 2.1 Đối tƣợng nghiên cứu 24 2.2 Địa điểm thời gian nghiên cứu 24 2.2.1 Địa điểm nghiên cứu 24 2.2.2 Thời gian nghiên cứu 24 2.3 Nội dung nghiên cứu 24 2.4 Phƣơng pháp nghiên cứu 24 2.4.1 Nguyên vật liệu dùng cho nghiên cứu 24 2.4.2 Phƣơng pháp thu thập mẫu 25 2.4.3 Phƣơng pháp xác định số lƣợng giám định số đặc tính sinh hóa vi khuẩn E coli 26 2.4.4 Phƣơng pháp xác định số lƣợng giám định số đặc tính sinh học vi khuẩn Salmonella 28 2.4.5 Phƣơng pháp xác định Salmonella E coli kỹ thuật PCR 31 2.4.6 Phƣơng pháp xử lý số liệu 36 CHƢƠNG 37 KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU VÀ THẢO LUẬN 37 3.1 Kết phân lập vi khuẩn từ mẫu bệnh phẩm mẫu phân 37 3.2 Kết xác định số lƣợng vi khuẩn E coli Salmonella spp mẫu phân 38 3.3 Kết giám định đặc tính sinh hóa vi khuẩn E coli 40 3.5 Kết giám định đặc tính sinh hóa vi khuẩn Salmonella 42 3.6 Kết phản ứng sinh hóa với chất thị màu Andrade 43 3.7 Kết phản ứng thử oxydaza 44 3.8 Kết phản ứng thử Catalaza 45 3.9 Kết phản ứng PCR vi khuẩn Salmonella 45 3.10 Kết phản ứng PCR vi khuẩn E coli 46 CHƢƠNG 48 v KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 48 4.1 Kết luận 48 4.2 Đề nghị 49 TÀI LIỆU THAM KHẢO 50 vi DANH MỤC BẢNG STT Tên bảng Bảng 3.1 Kết phân lập vi khuẩn từ bệnh phẩm phân lợn tiêu chảy Bảng 3.2 Kết xác định số lƣợng vi khuẩn E coli Salmonella mẫu phân Bảng 3.3 Kết giám định số đặc tính sinh hóa mẫu E coli phân lập đƣợc từ phân lợn bị tiêu chảy Bảng 3.4 Kết xác định đặc tính lên men đƣờng chủng E coli phân lập đƣợc Bảng 3.5 Kết giám định đặc tính sinh hóa mẫu Salmonella phân lập đƣợc phân lợn tiêu chảy Bảng 3.6 Kết phản ứng sinh hóa với chất thị màu Andrade mồi Stn-F/R Trang 37 39 41 42 43 44 Bảng 3.9 Kết phản ứng PCR vi khuẩn Salmonella 46 Bảng 3.10 Kết phản ứng PCR vi khuẩn E coli 47 vii MỞ ĐẦU Tính cấp thiết đề tài Trong nhiều năm gần đây, với phát triển kinh tế, ngành chăn ni nói chung chăn ni lợn nói riêng nƣớc ta có bƣớc phát triển mạnh mẽ, trở thành ngành sản xuất quan trọng, chiếm tỷ trọng đáng kể xuất sản phẩm chăn ni góp phần xóa đói giảm nghèo Theo Quyết định số 10/2008/QĐ-TTg ngày 16/01/2008 Thủ tƣớng Chính phủ[8] Chiến lƣợc phát triển chăn nuôi đến năm 2020 [1], mục tiêu định hƣớng là: Phát triển nhanh quy mô đàn lợn ngoại theo hƣớng trang trại, cơng nghiệp nơi có điều kiện đất đai, kiểm sốt dịch bệnh mơi trƣờng; trì quy mơ định hình thức chăn nuôi lợn lai, lợn đặc sản phù hợp với điều kiện chăn nuôi nông hộ số vùng Tỷ trọng chăn nuôi nông nghiệp đến năm 2020 đạt 42%, năm 2010 đạt khoảng 32% năm 2015 đạt 38%; đảm bảo an toàn dịch bệnh vệ sinh an toàn thực phẩm, khống chế có hiệu bệnh nguy hiểm chăn nuôi; sở chăn nuôi, chăn nuôi theo phƣơng thức trang trại, công nghiệp sở giết mổ, chế biến gia súc, gia cầm phải có hệ thống xử lý chất thải, bảo vệ giảm ô nhiễm môi trƣờng Tuy nhiên, song song với phát triển chăn ni ngành chăn ni lợn nƣớc ta phải đối mặt với khó khăn, thách thức chất lƣợng giống, thức ăn, giá thị trƣờng,… Đặc biệt bệnh dịch thƣờng xuyên xảy gây thiệt hại lớn kinh tế Trong có số bệnh thƣờng xuyên xảy ảnh hƣởng đến mục tiêu phát triển chăn ni mà cịn đe dọa ảnh hƣởng đến sức khỏe ngƣời Bệnh tiêu chảy vi khuẩn E coli bệnh vi khuẩn Salmonella gây tổn thất nặng nề cho ngành chăn nuôi lợn toàn quốc Bệnh Salmonella gây thƣờng dạng nhiễm trùng máu cấp tính viêm ruột non Tuy nhiên, hai thể bệnh thƣờng xảy đồng thời với Vi khuẩn Salmonella E coli gây tiêu chảy cho lợn lứa tuổi, đặc biệt lợn trƣớc sau cai sữa chăn nuôi trang trại quy mô lớn hay chăn nuôi nông hộ với quy mô nhỏ Việc nghiên cứu vi khuẩn E coli Salmonella gây tiêu chảy lợn việc làm cần thiết, để từ có sở xây dựng biện pháp phịng bệnh đạt hiệu cao, góp phần thúc đẩy chăn ni lợn phát triển bền vững, tạo sản phẩm an toàn vệ sinh thực phẩm, có sức cạnh tranh cao thị trƣờng Xuất phát từ tình hình thực tiễn đáp ứng sở khoa học cho việc phòng chống bệnh tiêu chảy lợn, chúng tối tiến hành nghiên cứu đề tài:“ Phân lập giám định số đặc tính sinh hóa vi khuẩn Escherichia coli Salmonella spp phịng thí nghiệm cơng ty CP thuốc thú y Marphavet.” Mục tiêu nghiên cứu Phân lập giám định vi khuẩn E coli Salmonella spp từ mẫu bệnh phẩm phân lợn tiêu chảy Xác định đặc tính sinh học chủng vi khuẩn phân lập đƣợc Xác định vai trò gây bệnh vi khuẩn E coli Salmonella spp hội chứng tiêu chảy lợn Ý nghĩa khoa học thực tiễn 3.1 Ý nghĩa khoa học Cơng trình chứng minh vai trị vi khuẩn E coli Salmonella spp hội chứng tiêu chảy Kết nghiên cứu đề tài sở khoa học phục vụ cho nghiên cứu hội chứng tiêu chảy lợn con, đồng thời đóng góp tƣ liệu tham khảo, nghiên cứu cho cán thú y ngƣời chăn nuôi 3.2 Ý nghĩa thực tiễn Chứng minh đƣợc vai trò gây bệnh vi khuẩn E coli Salmonella spp hội chứng tiêu chảy lợn Điều phục vụ cho cơng tác phịng điều trị hội chứng tiêu chảy lợn trình bày bảng 3.3: Bảng 3.3 Kết giám định số đặc tính sinh hóa mẫu E coli phân lập đƣợc từ phân lợn bị tiêu chảy Loại phản Số chủng dƣơng tính/tổng số ứng chủng kiểm tra Indol 28/28 100 MR 28/28 100 VP 0/28 Citrat 0/28 H2S 0/28 STT Tỷ lệ (%) Kết bảng 3.3 cho thấy: 100% chủng đƣợc kiểm tra cho phản ứng sinh Indol MR dƣơng tính Cịn phản ứng VP, Citrat, H2S âm tính So sánh kết giám định đặc tính sinh hóa 28 chủng vi khuẩn E coli phân lập đƣợc với bảng sinh hóa chuẩn vi khuẩn thấy chủng vi khuẩn phân lập đƣợc từ phân lợn tiêu chảy có đặc điểm chung, điển hình vi khuẩn E coli nhƣ đƣợc tài liệu ngồi nƣớc mơ tả 41 Bảng 3.4 Kết xác định đặc tính lên men đƣờng chủng E coli phân lập đƣợc STT Tên đƣờng VK sinh axit VK sinh Sucrose + + Mantose ++ ++ Manitol ++ ++ Salicin - - Lactose ++ ++ Inulin + + Glucose + + Galactose + + Arabinose - - 10 Sorbitol ++ ++ 11 Xylose + + Ghi chú: ++ (mạnh), + (ít), - (không) Từ kết bảng 3.4 cho thấy: chủng vi khuẩn E coli lên men sinh sinh axit mạnh loại đƣờng Mantose, Manitol,Sorbitol, Lactose loại đƣờng Sucrose, Inulin, Glucose, Galactose Xylose Riêng với đƣờng Salicin Arabinose chủng đƣợc thử không lên men 3.5 Kết giám định đặc tính sinh hóa vi khuẩn Salmonella Trong mẫu kiểm tra có 20 mẫu dƣơng tính với Salmonella Để giám định đặc tính sinh hóa mẫu phân lập đƣợc này, tiến hành làm phản ứng sinh hóa, kết đƣợc trình bày bảng 3.5 42 Bảng 3.5 Kết giám định đặc tính sinh hóa mẫu Salmonella phân lập đƣợc phân lợn tiêu chảy STT Loại phản ứng Số chủng dƣơng tính/tổng số chủng kiểm tra Tỷ lệ (%) Indol 0/20 MR 20/20 100 VP 0/20 Citrat 20/20 100 H2S 20/20 100 Từ kết bảng 3.5 cho thấy: 100% mẫu Salmonella đƣợc kiểm tra cho phản ứng dƣơng tính MR, Citrat, H2S, cịn phản ứng Indol VP cho kết âm tính So sánh kết giám định đặc tính sinh hóa 20 chủng vi khuẩn Salmonella phân lập đƣợc với bảng sinh hóa chuẩn vi khuẩn thấy chủng vi khuẩn phân lập đƣợc từ phân lợn tiêu chảy có đặc điểm chung, điển hình vi khuẩn Salmonella nhƣ đƣợc tài liệu ngồi nƣớc mơ tả 3.6 Kết phản ứng sinh hóa với chất thị màu Andrade Kết phản ứng sinh hóalàm từ khuẩn lạc nghi Salmonella thạch DHL đƣợc nuôi cấy môi trƣờng TPB Làm 11 loại đƣờng 43 Bảng 3.6 Kết phản ứng sinh hóa với chất thị màu Andrade Thứ tự Tên loại đƣờng VK sinh axit VK sinh Trehalose ++ ++ Mantol ++ ++ Cellobinose - - Rhamnose ++ + Sucrose + + Lactose - - Manitol ++ ++ Sobitol ++ ++ Glucose ++ + 10 Arabinose + - 11 Salicin - - Ghi chú: ++ (mạnh), + (ít), - (không) Từ kết bảng 3.6 cho thấy: chủng vi khuẩn Salmonella lên men sinh axit loại đƣờng Trehalose, Maltol, Malnitol, Sobitol nhiều so với Sucrose, Glucose Đối với Arabinose vi khuẩn Salmonella sinh axit ko sinh Riêng với đƣờng Cellobinose, Lactose Salicin chủng đƣợc thử không lên men 3.7 Kết phản ứng thử oxydaza Hình 1: Hình ảnh thử phản ứng oxydaza khuẩn lạc Salmonella 44 Nhìn vào hình ảnh thấy miếng giấy khơng bị khơng bị chuyển màu, ta kết luận phản ứng Oxydaza vi khuẩn nghi Salmonella cho kết âm tính 3.8 Kết phản ứng thử Catalaza Hình 2: Hình ảnh thử phản ứng Catalaza khuẩn lạc Salmonella Nhìn vào hình ảnh thấy phiến kính mẫu khuẩn lạc Salmonella có tƣợng sủi bọt nhỏ H2O2 vào Vậy ta kết luận phản ứng thử Catalaza khuẩn lạc Salmonella dƣơng tính 3.9 Kết phản ứng PCR vi khuẩn Salmonella M N 300 bp Hình 3: Sản phẩm PCR Gene độc tố vi khuẩn Salmonella sử dụng cặp mồi Stn-F/R 45 Ghi chú: Giếng M: 100 bp DNA ladder (1 µl 6X loading dye-NEB +5 µl DNA ladder) Giếng 1: Sảnphẩm PCR từ DNA mẫu với cặp mồi Stn-F/R (1 µl 6X loading dye-NEB +5 µl mẫu) Giếng 2: Sảnphẩm PCR từ DNA mẫu với cặp mồi Stn-F/R (1 µl 6X loading dye-NEB +5 µl mẫu) Giếng N: Đối chứng âm cặp mồi Stn-F/R Bảng 3.9 Kết phản ứng PCR vi khuẩn Salmonella Tổng hợp kết PCR Mẫu Mồi Stn-F/R + Stn-F/R + Stn-F/R - Đối chứng âm Kết Từ kết bảng 3.9 ta kết luận: mẫu dƣơng tính với gene đích sử dụng cặp mồi Stn-F/R Từ hình thấy: kích thƣớc sản phẩm PCR mồi Stn-F/R tƣơng ứng 259bp 3.10 Kết phản ứng PCR vi khuẩn E coli M 10 46 10 Hình 4: Sản phẩm PCR từ DNA tách chiết khuẩn lạc vi khuẩn E coli sử dụng cặp mồi Fed A – 1/Fed A – Chú ý: Giếng M: 100 bp DNA ladder (NEB) Giếng đến 5: Sản phẩm PCR từ DNA dịch chiết mẫu 1, 2, 3, 4, tƣơng ứng Giếng đến 10: Sản phẩm PCR từ khuẩn lạccác mẫu 6,7,8,9,10 tƣơng ứng Bảng 3.10 Kết phản ứng PCR vi khuẩn E coli Tổng hợp kết PCR Mẫu Mồi Kết Fed A – 1/2 + Fed A – 1/2 + Fed A – 1/2 + Fed A – 1/2 + Fed A – 1/2 + Fed A – 1/2 + Fed A – 1/2 + Fed A – 1/2 + Fed A – 1/2 + 10 Fed A – 1/2 + Từ kết bảng 3.10 ta kết luận 10 mẫu dƣơng tính với gen tộc tố F18 vi khuẩn E coli Từ hình ta thấy kích thƣớc sản phẩm PCR tƣơng ứng 510bp 47 CHƢƠNG KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 4.1 Kết luận Từ kết nghiên cứu phân lập, xác định số lƣợng vi khuẩn E coli, Salmonella gây hội chứng tiêu chảy lợn nuôi khu chăn nuôi cty cổ phần thuốc thú y Marphavet, rút số kết luận sau: Kết phân lập, xác định số lƣợng giám định số đặc tính sinh hóa vi khuẩn E coli phân lợn tiêu chảy: + Vi khuẩn E coli diện hầu hết mẫu (28/40) chiếm tỷ lệ trung bình 70% + Số lƣợng vi khuẩn E.coli 1g phân lợn mắc tiêu chảy tăng lên cao, cao gấp 20,59 lần so với lợn không mắc bệnh + Các chủng vi khuẩn E.coli đặc tính sinh hóa điển hình theo bảng sinh hóa chuẩn E coli + Kích thƣớc sản phẩm PCR mồi Stn – F/R tƣơng ứng 510bp Kết phân lập, xác định số lƣợng giám định số đặc tính sinh hóa vi khuẩn Salmonella phân lợn tiêu chảy: + Vi khuẩn Salmonella sp phân lập đƣợc với tỷ lệ thấp nhiều, có 20/40 mẫu, chiếm tỷ lệ trung bình 50% + Vi khuẩn Salmonella sp gam chất chứa đƣờng ruột lợn bị tiêu chảy cao 5,35 × 106 vi khuẩn lợn khỏe mạnh cao có 0,18 × 106 vi khuẩn (cao gấp 29,72 lần) + Các chủng vi khuẩn Salmonella đặc tính sinh hóa điển hình theo bảng sinh hóa chuẩn Salmonella + Kích thƣớc sản phẩm PCR cặp mồi Fed A – 1/2 tƣơng ứng 259bp 48 4.2 Đề nghị Tiếp tục tiến hành nghiên cứu đầy đủ yếu tố gây bệnh chủng vi khuẩn E coli Salmonella phân lập đƣợc, nhƣ vai trò số vi khuẩn khác gây hội chứng tiêu chảy, nhằm lựa chọn đƣợc chủng vi khuẩn phù hợp để chế tạo vaccine phịng bệnh Để chăn ni lợn có hiệu hạn chế đƣợc dịch bệnh, xây dựng trại chăn nuôi đảm bảo yêu cầu kỹ thuật vệ sinh an toàn dịch bệnh 49 TÀI LIỆU THAM KHẢO I Tài liệu tiếng Việt 1.Bộ Nông nghiệp Phát triển nông thôn, Chiến lược phát triển chăn nuôi đến năm 2020, NXB Nông nghiệp, Hà Nội, 2008 Trƣơng Văn Dung, Yoshihara shinobu (2002), Cẩm nang chẩn đoán tiêu chuẩn bệnh gia súc Việt Nam, Viện Thú y Quốc gia Tổ chức hợp tác quốc tế Nhật Bản Đào Trọng Đạt, Phan Thanh Phƣợng, Lê Ngọc Mỹ, Huỳnh Văn Kháng(1996) Bệnh lợn nái lợn con, NXB Nông nghiệp, Hà Nội Nguyễn Bá Hiên, Huỳnh Thị Mỹ Lệ, Lê Văn Lăng, Đỗ Ngọc Thúy (2012) “Bệnh truyền nhiễm thú y”, NXB Đại học Nông nghiệp Hà nội Phạm Sỹ Lăng, Phan Địch Lân, Trƣơng Văn Dung (1997), Bệnh phổ biến lợn biện pháp phịng trị, NXB Nơng nghiệp, Hà Nội Nguyễn Khả Ngự (2000), Xác định yếu tố gây bệnh vi khuẩn E coli bệnh phù đầu lợn đông sông Cửu Long, chế vacxin phòng bệnh, Luận án tiến sĩ Nông nghiệp, Viện Thú y, Hà Nội Nguyễn Vĩnh Phƣớc (1974), Vi sinh vật Thú y, tập NXB Khoa học kỹ thuật, Hà Nội Quyết định số 10/2008/QĐ – TTg ngày 16/01/2008 chiến lƣợc phát triển chăn nuôi đến năm 2020 Lê Văn Tạo (1997), Bệnh Escherichia coli gây Những thành tựu nghiên cứu phòng chống bệnh vật nuôi, tài liệu giảng dạy sau đại học cho bác sĩ thú y kỹ sư chăn nuôi, Viện thú y quốc gia, Hà Nội 10 Nguyễn Quang Tuyên (2008), Giáo trình vi sinh vật thú y, NXB Nơng nghiệp 11 Trịnh Quang Tuyên(2004), “Phân lập xác định yếu tố gây bệnh vi khuẩn E coli từ lợn bị tiêu chảy nuôi trại lợn Tam Điệp”, Tạp chí Khoa học Kỹ thuật Thú y (số 4) 12 Nguyễn Nhƣ Thanh, Nguyễn Bá Hiên, Trần Thị Lan Hƣơng (1997), Vi sinh vật thú y, NXB Nông nghiệp, Hà Nội 50 13 Trung tâm Chẩn đoán cố vấn thú y Công ty cổ phần chăn nuôi C.P Việt Nam (2010), Bệnh heo cách điều trị, tập 2, NXB Khoa học kỹ thuật, Hồ Chí Minh II Tài liệu tiếng Anh 14 Bergey’s (1994), Manual of determinative Bacteriology, 9th Edition, by the Williams and Wilkings Company 15 Carter G.R., Chengapa M.M., Rober T.S (1995) Essentials of veterinary Microbiology.A warerly Company, 1995 16 Dean E.A., Whipp S.C & Moon H.W (1989).Age specific colonization of porcine intestinal epithelium by 987P-piliated enterotoxigenic Escherichia coli Infection and Immunity, pp 57 17 Dean Nystrom E.A & Samuel, J.E (1994) Age-related resistance to 987P fimbria-mediated colonization correlates with specific glycolipid receptors in intestinal mucus in swine Infection and Immunity, pp 62 18 Ewing Edward (1970), Indentification of Enterobacteriaceae.Edicion Revolucionnaria, Instituto Cubano del Libro, 19 No 1002, Vedado Habana 19 Fairbrother J.M (1992).Enteric colibacillosis Diseases of swine.IOWA State University Press/AMES, IOWA U.S.A 7th Edition, 1992 20 Giannella R.A (1976) Suckling mouse model for detection of heat-stable Escherichia coli enterotoxin: characteristics of the model.Infection and Immunity, pp.14 21 Guinee P.A & Jansen W H (1979) Behavior of Escherichia coli K antigens K88ab, K88ac, and K88ad in immunoelectrophoresis, double diffusion, and haemagglutination Infection and Immunity, pp.23 22 Gyles C.L., Fairbrother J.M (2010).Escherichia coli In: Pathogenesis of bacterial infections in animal (4th edition) Editor: Gyles, C.L., Prescott, J.F., Songer, J.G., and Thoen, C.O., Blackwell publishing, USA 23 Isaacson R.E., Nagy B & Moo, H.W (1977) Colonization of porcine small intestine by Escherichia coli: Colonization and adhesion factors of pig enteropathogens that lack K88 Journal of Infectious Diseases, pp.135 51 24 Jones J.W., Richardson A.L (1981), “The attachment to invasion of helacells by Salmonella typhimurium the contribution of manose sensitive and manose sensitive haemaglutinate activities” J Gen Microbiol, pp 127 25 Ketyle I Emodyl, Kentrohrt (1975), Mouse lang Oedema caused by a toxin substance of Escherichia coli strains Acta Microbiol, A cad-Sci Hung-25 26 Links I., Love R & Greenwood P (1985), Colibacillosis in newborn piglets associated with class enterotoxigenic Escherichia coli In Infectious diarrhoea of the young: strategies for control in humans and animals, pp 281-287 Edited by S Tzipori Geelong, Australia: Elsevier Science Publishers 27 Nagy B & Fekete P.Z (1999),Enterotoxigenic Escherichia coli (ETEC) in farm animals Veterinary Research, pp.30 28 Orskov I., Orskov F., Sojka W.J., Wittig W (1964) K antigens K88ab (L) and K88ac (L) in E coli A new O antigen: O147 and a new K antigen K89 (B) Acta Pathologica et Microbiologica Scandinavica sect, pp 62 29.Orskov F.(1978) Vilurence Factor of the bacterial cell surface.J.Infect 30 Quinn P.J., Carter M.E., Makey B., Carter G.R (2002), Clinical veterinary microbiology Wolfe Pulishing, London WC1 H9LB, England 31 Rippinger P., Bertschinger H.U., Imberechts H., Nagy B., Sorg I., Stamm M., Wild P & Wittig W (1995) Designations F18ab and F18ac for the related fimbrial types F107, 2134P and 8813 of Escherichia coli isolated from porcine postweaning diarrhoea and from oedema disease Veterinary Microbiology , pp.45 32 Smith H.W & Halls S (1967), Observations by the ligated segment and oral inoculation methods on Escherichia coli infections in pigs, calves, lambs and rabbits Journal of Pathology and Bacteriology, pp 93 33 Timoney J.F., Gillespie J.H., Baelough J.E., Hagan and Bruner ’s (1988), “Microbiology and infection disease of domentic animals”, Inthca and London Comstock Publising Associates, A Division of cornell University press 34 Wilcock B.P (1995), “Salmonellosis” Disease of Swine, Sixth Edition, Iowa state University Press, U.S.A 52 PHỤ LỤC MỘT SỐ HÌNH ẢNH MINH HỌA Hình 5: Lợn bị tiêu chảy Hình 6: Mổ khám bệnh tích Hình 7: Kiểm tra bệnh tích Hình 8: Kiểm tra bệnh tích Hình - 10: Ria cấy vi khuẩn mặt thạch Hình 11: Khuẩn lạc Salmonella cấy Hình 12: Khuẩn lạc Salmonellacấy trên thạch MacConkey từ máu tim thạch MacConkey từ lách Hình 13 – 14: Thử phản ứng sinh hóa Hình 15: Máy chạy PCR Hình 16: Máy chạy điện di ... QUỲNH PHÂN LẬP VÀ GIÁM ĐỊNH MỘT SỐ ĐẶC TÍNH SINH HĨA CỦA VI KHUẨN ESCHERICHIA COLI VÀ SALMONELLA SPP TẠI PHỊNG THÍ NGHIỆM CỦA CƠNG TY CP THUỐC THÚ Y MARPHAVET KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP ĐẠI HỌC Ngành: Thú. .. phân lợn tiêu ch? ?y khu chăn nuôi công ty cổ phần thuốc thú y Marphavet Kiểm tra số đặc tính ni c? ?y vi khuẩn E coli Salmonella spp phân lập đƣợc Giám định số đặc tính sinh hố vi khuẩn E coli Salmonella. .. cứu Phân lập giám định vi khuẩn E coli Salmonella spp từ mẫu bệnh phẩm phân lợn tiêu ch? ?y Xác định đặc tính sinh học chủng vi khuẩn phân lập đƣợc Xác định vai trò g? ?y bệnh vi khuẩn E coli Salmonella