1 TRƢỜNG ĐẠI HỌC HÙNG VƢƠNG KHOA NÔNG - LÂM - NGƢ NGUYỄN LAN HƢƠNG TÊN ĐỀ TÀI NGHIÊN CỨU PHÂN LẬP VÀ GIÁM ĐỊNH MỘT SỐ ĐẶC ĐIỂM SINH HOÁ CỦA VI KHUẨN STREPTOCOCCUS SUIS GÂY VIÊM PHỔI LỢN TẠI THÁI NGUYÊN KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP Ngành: Thú Y Phú Thọ, 2018 TRƢỜNG ĐẠI HỌC HÙNG VƢƠNG KHOA NÔNG - LÂM - NGƢ NGUYỄN LAN HƢƠNG TÊN ĐỀ TÀI NGHIÊN CỨU PHÂN LẬP VÀ GIÁM ĐỊNH MỘT SỐ ĐẶC ĐIỂM SINH HOÁ CỦA VI KHUẨN STREPTOCOCCUS SUIS GÂY VIÊM PHỔI LỢN TẠI THÁI NGUYÊN KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP Ngành: Thú Y NGƢỜI HƢỚNG DẪN: PGS TS CAO VĂN Ths: PHAN THỊ PHƢƠNG THANH Phú Thọ, 2018 LỜI CẢM ƠN Trong suốt thời gian từ bắt đầu học tập trƣờng đến nay, em nhận đƣợc nhiều quan tâm, giúp đỡ quý Thầy cô, gia đình bạn bè Với lịng biết ơn sâu sắc nhất, em xin gửi đến quý Thầy cô khoa Nông - Lâm - Ngƣ Trƣờng Đại học Hùng Vƣơng với tri thức tâm huyết để truyền đạt vốn kiến thức quý báu cho chúng em suốt thời gian học tập trƣờng Em xin gởi lời cảm ơn chân thành tri ân sâu sắc công ty CP thuốc thú y Marphavet tạo điều kiện cho em để em hồn thành tốt báo cáo thực tập Và em xin chân thành cám ơn thầy PGS.TS Cao Văn nhiệt tình hƣớng dẫn hƣớng dẫn em hồn thành tốt khóa thực tập Trong q trình thực tập, trình độ lý luận nhƣ kinh nghiệm thực tiễn cịn hạn chế nên báo cáo khơng thể tránh khỏi thiếu sót, em mong nhận đƣợc ý kiến đóng góp Thầy, Cơ để em học thêm đƣợc nhiều kinh nghiệm Em xin chân thành cảm ơn! Phú Thọ, ngày 10, tháng 05, năm 2018 Sinh viên thực Nguyễn Lan Hƣơng ii DANH MỤC VIẾT TẮT S suis Streptococus suis Cs Cộng CP Cổ phần VP Voges Proskauer HIP Thuỷ phân Hippuric acid ESC Esculin PYRA Pyrrolidonyl Arylamidase GAL Galactosidase GUR Glucuronidase GAL Galactosidase PAL Alkaline Phosphatase LAP Leucine Amino Peptidase ADH Arginine Dihydrolase RIB Ribose ARA Arabinose MAN Mannitol SOR Sorbitol LAC Lactose TRE Trehalose INU Inulin RAF Raffinose AMD Amidon GLYG Glycogen TT Thể trọng CPS Capsule polysaccharide Bp Base pair PCR Polymerase Chain Reaction iii DANH MỤC BẢNG STT Tên bảng Trang Bảng 3.1 Trình tự Nucleotide CPS 21 Bảng 3.2 Thành phần phản ứng PCR (từ khuẩn lạc) 22 Bảng 2.5 Bảng đánh giá mức độ mẫn cảm vi khuẩn với số loại kháng sinh (NCCLS - 2002) [29] 24 Bảng 4.1 Kết phân lập vi khuẩn Streptococcus suis 27 Bảng 4.2 Đặc điểm khuẩn lạc chủng phân lập đƣợc 28 Bảng 4.3 Kết kiểm tra đặc tính ni cấy vi khuẩn S.suis 30 Bảng 4.4 Kết xác định số đặc tính sinh vật, hóa học chủng vi khuẩn S suis phân lập đƣợc hệ thống API 20 Strep 32 Bảng 4.5 Kết PCR 34 11 Bảng 4.6 Kết xác định đƣợc triệu chứng điển hình lợn mắc bệnh viêm phổi vi khuẩn Streptococcus suis gây Bảng 4.7 Kết xác định đƣợc bệnh tích điển hình lợn mắc bệnh viêm phổi vi khuẩn Streptococcus suis gây Bảng 4.8 Bảng đánh giá mức độ mẫn cảm vi khuẩn 12 Bảng 4.9 Kết thử nghiệm phác đồ điều trị 10 iv 35 36 38 39 DANH MỤC HÌNH STT Tên hình Trang Hình 3.1 Cách tiến hành nhuộm Gram 19 Hình 3.2 Hệ thống API 20 Strep 21 Hình ảnh 4.1 Đĩa ni cấy vi khuẩn sau 12 mơi trƣờng 29 Hình ảnh 4.2 Hình thái vi khuẩn S suis 29 v MỤC LỤC LỜI CẢM ƠN ii DANH MỤC VIẾT TẮT iii MỤC LỤC iv DANH MỤC BẢNG vi DANH MỤC HÌNH vii Chƣơng 1: MỞ ĐẦU 1.1 Tính cấp thiết đề tài 1.2 Mục tiêu nghiên cứu 1.3 Ý nghĩa khoa học thực tiễn 1.3.1 Ý nghĩa khoa học 1.3.2 Ý nghĩa thực tiễn Chƣơng 2: TỔNG QUAN TÀI LIỆU 2.1 Đặc điểm vi khuẩn Streptococcus suis 2.1.1 Đặc điểm hình thái 2.1.2 Đặc điểm nuôi cấy 2.1.3 Đặc tính sinh hóa 2.1.4 Các yếu tố độc lực vi khuẩn 2.2 Bệnh viêm phổi lợn vi khuẩn Streptococcus suis gây 2.2.1 Đặc điểm bệnh 2.2.2.Triệu chứng bệnh tích 2.2.3 Các biện pháp phòng bệnh 2.2.4 Điều trị bệnh 11 2.3 Tình hình nghiên cứu ngồi nƣớc 11 2.3.1 Tình hình nghiên cứu nƣớc 11 2.3.2 Tài liệu nghiên cứu nƣớc 12 Chƣơng 3: NỘI DUNG VÀ PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 15 3.1 Đối tƣợng phạm vi nghiên cứu 15 3.1.1 Đối tƣợng nghiên cứu 15 vi 3.1.2 Phạm vi nghiên cứu 15 3.1.2.1 Thời gian nghiên cứu 15 3.1.2.2 Địa điểm nghiên cứu 15 3.2 Nội dung nghiên cứu 15 3.3 Nguyên vật liệu dùng cho nghiên cứu 15 3.4 Phƣơng pháp nghiên cứu 16 3.4.1 Phƣơng pháp lấy mẫu 16 3.4.2 Phƣơng pháp phân lập vi khuẩn 16 3.4.3 Phƣơng pháp nuôi cấy 17 3.4.4 Phƣơng pháp giám định đặc tính sinh hóa 20 3.4.5 Phƣơng pháp xác định Streptococcus suis kỹ thuật PCR 21 3.4.6 Phƣơng pháp xác định triệu chứng, bệnh tích điển hình lợn mắc bệnh viêm phổi 23 3.4.7 Phƣơng pháp xác định mức độ mẫn cảm với số kháng sinh chủng vi khuẩn S.suis phân lập đƣợc 24 3.4.7 Phƣơng pháp thử phác đồ điều trị 25 3.5 Phƣơng pháp phân tích số liệu 26 Chƣơng 4: KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU VÀ THẢO LUẬN 27 4.1 Kết phân lập vi khuẩn Streptococcus suis 27 4.2 Kết nuôi cấy vi khuẩn 28 4.2.1 Kết xác định số loại khuẩn lạc từ mẫu bệh phẩm 28 4.2.2 Kết kiểm tra đặc tính nuôi cấy vi khuẩn Streptococcus suis 30 4.3 Kết xác định số đặc tính sinh vật, hoá học chủng vi khuẩn S suis phân lập đƣợc hệ thống API 20 Strep 31 4.4 Kết thử phản ứng PCR 33 4.5 Kết xác định đƣợc triệu chứng, bệnh tích điển hình bệnh viêm phổi vi khuẩn Streptococcus suis gây thực địa 34 4.6 Kết thử kháng sinh đồ 37 4.7 Kết thử nghiệm phác đồ điều trị lợn mắc bệnh viêm phổi vi khuẩn Streptococcus suis gây 39 vii Chƣơng 5: KẾT LUẬN VÀ ĐỀ NGHỊ 41 5.1 Kết luận 41 5.2 Đề nghị 41 TÀI LIỆU THAM KHẢO 42 viii Chƣơng MỞ ĐẦU 1.1 Tính cấp thiết đề tài Ngành chăn nuôi tháng đầu năm 2017 gặp khó khăn khâu tiêu thụ, đặc biệt chăn nuôi lợn, nguyên nhân năm trƣớc tình hình chăn ni thuận lợi, giá ổn định nên ngƣời dân đầu tƣ mở rộng đàn, dẫn đến tình trạng cung vƣợt cầu khiến cho giá lợn giảm sâu, ngƣời chăn nuôi chịu thua lỗ nặng Tổng số đàn lợn nƣớc ƣớc tính đến tháng 1/10/2017 24,7 triệu giảm 5,7% so với kỳ năm 2016 Sản lƣợng thịt lợn xuất chuồng tháng ƣớc đạt 2.202 nghìn tấn, tăng 2,7% so với kỳ năm trƣớc theo Thống kê chăn nuôi [17] Mặt khác mức sống ngƣời dân tăng lên nhu cầu sử dụng thực phẩm vấn đề mà xã hội quan tâm, mà ngành chăn ni nói chung chăn ni lợn nói riêng phải tạo số lƣợng nhƣ phải đảm chất lƣợng sản phẩm Việc địi hỏi cơng tác thú y phải trọng để có biện pháp hợp lý đáp ứng với nhu cầu xã hội Dù bệnh truyền nhiễm nhƣng Bệnh viêm phổi lợn bệnh gây thiệt hại kinh tế lớn, bệnh tồn lâu thể lợn nhƣ ngồi mơi trƣờng làm cơng tác phịng bệnh khó khăn, bị mắc bệnh, chi phí điều trị lớn, thời gian liệu trình điều trị kéo dài Mặt khác thực tế đặt là: bệnh mang tính chất mãn tính nên ngƣời chăn ni khó nhận định rõ ràng hậu nhƣ viêm phổi thùy làm cho dịch tích tụ phổi - màng phổi, đƣợc gọi tràn dịch màng phổi viêm phổi tạo khoang mủ (áp xe) phổi biến chứng nguy hiểm làm cho lợn còi cọc, chậm lớn, tiêu tốn thức ăn cao, giá thành sản phẩm thiếu cạnh tranh Cho tới Việt Nam, có nhiều cơng trình nghiên cứu bệnh viêm phổi lợn, nhiên tập chung vào tỷ lệ nhiễm, dịch tễ học, phác đồ phòng trị bệnh, kết phân lập giám định tác giả nghiên cứu Xuất phát từ thực tiễn sản xuất nhằm mục đích hiểu rõ đặc tính ni cấy giám định đặc tính sinh hóa vi khuẩn Streptococcus suis từ xây dựng kế hoạch phịng trị bệnh cách có hiệu quả, tiến Bảng 4.4: Kết xác định số đặc tính sinh vật, hóa học chủng vi khuẩn S suis phân lập đƣợc hệ thống API 20 Strep TT Tên phản ứng Ký hiệu Kết (n=10) phản ứng Số chủng (+) Tỷ lệ (%) Voges Proskauer VP 0 Thuỷ phân Hippuric acid HIP 10 Esculin ESC 70 Pyrrolidonyl Arylamidase PYRA 40 -Galactosidase GAL 80 -Glucuronidase GUR 80 -Galactosidase GAL 60 Alkaline Phosphatase PAL 10 Leucine Amino Peptidase LAP 10 100,0 10 Arginine Dihydrolase ADH 90 11 Ribose RIB 0 12 Arabinose ARA 0 13 Mannitol MAN 0 14 Sorbitol SOR 20 15 Lactose LAC 90 16 Trehalose TRE 80 17 Inulin INU 60 18 Raffinose RAF 90 19 Amidon AMD 90 20 Glycogen GLYG 80 Kết bảng 4.4 cho thấy có 100% số chủng vi khuẩn S suis đƣợc kiểm tra cho kết âm tính phản ứng Voges Proskauer (VP) không lên men đƣờng ribose (RIB), arabinose (ARA) Các phản ứng khác, bao gồm: 32 phản ứng thủy phân acid Hippuric (HIP), Alkaline Phosphatase (PAL) phản ứng lên men đƣờng sorbitol (SOR) có đến chủng có phản ứng dƣơng tính, chiếm tỷ lệ 60%; hầu hết chủng đƣợc kiểm tra lên men loại đƣờng raffinose (RAF), lactose (LAC), glycogen (GLYG), trehalose (TRE), amidon (AMD) với tỷ lệ từ 80 đến 90%; phản ứng thủy phân (LAP) tất chủng vi khuẩn S suis đƣợc kiểm tra cho kết dƣơng tính, chiếm tỷ lệ 100% Từ kết thu đƣợc cho thấy tất chủng vi khuẩn S suis phân lập đƣợc lợn dƣơng tính với viêm phổi tỉnh Thái Nguyên mang đặc tính sinh vật, hóa học đặc trƣng vi khuẩn S Suis Tƣơng đồng với mô tả nghiên cứu nhƣ xác định đặc tính sinh vật, hóa học 116 chủng vi khuẩn S suis phân lập đƣợc lợn ổ dịch PRRS thuộc số tỉnh Miền Bắc Trƣơng Quang Hải cs (2012) [1] xác định số đặc tính sinh vật, hóa học 62 chủng vi khuẩn S suis phân lập đƣợc lợn mắc viêm phổi Các kết thu đƣợc cho thấy tất chủng vi khuẩn S suis đƣợc kiểm tra âm tính với phản ứng lên men đƣờng glucose, galactose, lactose, maltose; 96,55% đến 96,77% số chủng lên men đƣờng trehalose 100% chủng vi khuẩn S suis kiểm tra không lên men đƣờng mannitol, sorbitol, mannit Vậy ta kết luận vi khuẩn Streptococcus suis 4.4 Kết thử phản ứng PCR Để khẳng định xác mẫu khuẩn lạc nghi ngờ S.suis gây bệnh viêm phổi cho lợn, tiến hành đem mẫu khuẩn lạc để chạy phản ứng PCR, kết kiểm tra phƣơng pháp điện di cho ta thấy: 33 Bảng 4.5: Kết PCR Điện di Thời gian: 35 phút Tổng hợp kết PCR Mẫu Điện thế: 100 V Mồi 16ssF1/R1 M Kết + str 1 N kb 1,5 \ kb *Kết luận: - Mẫu khuẩn lạc từ đĩa cấy chủng str dƣơng tính với cặp mồi định danh S Suis Giếng M: kb DNA ladder (1 µl 6X loading dye-NEB + µl DNA ladder-NEB) giếng : sản phẩm PCR thu đƣợc sử dụng cặp mồi 16ssF1/R1 (1 µl 6x loading dye-NEB + µl sản phẩm PCR) giếng N: đối chứng âm cặp mồi 16ssF1/R1 (Sản phẩm PCR khơng có DNA) * Kích thƣớc SP PCR: 1500 bp Kết luận: Mẫu khuẩn lạc dƣơng tính với gene định danh CPS vi khuẩn S.suis Trùng khớp với kết phản ứng sinh hóa Ta khẳng định vi khuẩn S.Suis tiếp tục thử kháng sinh đồ 4.5 Kết xác định đƣợc triệu chứng, bệnh tích điển hình bệnh viêm phổi vi khuẩn Streptococcus suis gây thực địa - Sau tiến hành phân lập, xác đinh đặc tính sinh hóa, chạy phản ứng PCR vi khuẩn S.suis từ 30 mẫu đƣợc kết có 18 mẫu dƣơng tính với vi 34 khuẩn S.suis Chúng quay trở lại điều tra triệu chứng bệnh tích 18 mẫu lợn hai giai đoạn khác bị viêm phổi S.suis gây kết đƣợc thể bảng 4.6 4.7 Bảng 4.6: Kết xác định đƣợc triệu chứng điển hình lợn mắc bệnh viêm phổi vi khuẩn Streptococcus suis gây Tổng số mẫu (con) Số có biểu Tỉ lệ (%) Sốt, sốt nhẹ 10 10 100 Chảy nƣớc mắt, dịch mũi, giảm ăn 10 10 100 10 10 100 10 10 100 10 20 10 10 100 10 10 100 10 10 100 10 30 Chỉ tiêu Triệu chứng bỏ ăn, tiêu chảy Lợn sau cai Thở khó, thở nhan, đơi hóp sữa (>1,5-3 bụng vào để thở tháng tuổi) Hạch hầu sƣng to niêm mạc vùng da mỏng xuất huyết, tím bầm Chết đột ngột, có triệu chứng chảy máu mũi Sốt, sốt nhẹ Bỏ ăn, hắt hơi, ho kéo dài, khó thở, thở hóp bụng, tiêu chảy, xù Lợn thịt lơng, mệt mỏi nằm chỗ (>3-6 tháng Hạch hầu sƣng to niêm mạc tuổi) vùng da mỏng xuất huyết, tím bầm Chết đột ngột, có triệu chứng chảy máu mũi Qua bảng ta thấy lợn mắc bệnh viêm phổi S.suis có triệu chứng chủ yếu sốt, bỏ ăn, tiêu chảy, lợn ho khó thở, hạch hầu sƣng to, xuất huyết 35 vùng da mỏng tím bầm chiếm 100% Trong trƣờng hợp bệnh cấp tính có triệu chứng chết đột ngột chảy máu mũi, giai đoạn sau cai sữa chiếm 20%; giai đoạn lợn thịt chiếm 30% Xác định đƣợc triệu chứng lâm sàng, chúng tơi tiếp tục xác định bệnh tích bệnh viêm phổi vi khuẩn S.suis gây Bảng 4.7: Kết xác định đƣợc bệnh tích điển hình lợn mắc bệnh viêm phổi vi khuẩn Streptococcus suis gây Chỉ tiêu Tổng số mẫu (con) Số có biểu Tỉ lệ (%) Hạch amidan sƣng to, tụ máu 10 10 100 Niêm mạc phế quản niêm mạc 10 10 100 10 20 10 10 100 Hạch amidan sƣng to, tụ máu 10 10 100 Niêm mạc phế quản niêm mạc 10 10 10 10 100 10 10 100 Triệu chứng mũi tụ huyết Lợn sau cai sữa Viêm phổi có điểm hoại tử trắng, (>1,5-3 tháng tổn thƣơng có ranh giới rõ với tuổi) vùng khác; thận sƣng to xuất huyết điểm Niêm mạc dƣới vùng da mỏng tụ huyết mảng mũi có tụ huyết Viêm phổi gồm đốm Lợn thịt (>3-6 xuất huyết, cứng có màu đỏ tháng tuổi) sẫm, đơi có mủ; thận xuất huyết điểm Niêm mạc dƣới vùng da mỏng tụ huyết mảng Qua q trình nghiên cứu chúng tơi thấy hai giai đoạn lợn mắc bệnh có triệu chứng sốt, sốt nhẹ niêm mạc dƣới vùng da mỏng tụ huyết 36 mảng; viêm phổi gồm đốm xuất huyết, cứng có màu đỏ sẫm, đơi có mủ; thận xuất huyết điểm Trong triệu chứng niêm mạc phế quản niêm mạc mũi tụ huyết giai đoạn sau cai sữa 20% giai đoạn lợn thịt 10%, trƣờng hợp thƣờng gặp thể cấp tính Nhƣ triệu chứng, bệnh tích điển hình lợn bị viêm phổi S.suis gây là: sốt, bỏ ăn, lợn ho khó thở, hạch hầu sƣng to, xuất huyết vùng da mỏng tím bầm Trong trƣờng hợp bệnh cấp tính có triệu chứng chết đột ngột chảy máu mũi Niêm mạc dƣới vùng da mỏng tụ huyết mảng; viêm phổi gồm đốm xuất huyết, cứng có màu đỏ sẫm, đơi có mủ; thận xuất huyết điểm Triệu chứng niêm mạc phế quản niêm mạc mũi tụ huyết thƣờng gặp thể cấp Kết nghiên cứu tƣơng đồng với kết nghiên cứu Nguyễn Bá Hiên cs (2013)[2] xác định triệu chứng lâm sàng 28 lợn mắc bệnh viêm phổi cho thấy, triệu chứng chủ yếu lợn mắc bệnh sốt, bỏ bú, có nhử mắt tiêu chảy; lợn choai mắc bệnh sốt, bỏ ăn, khó thở, sƣng mí mắt; lợn nái mắc bệnh sốt, bỏ ăn, sảy thai, ho, khó thở, tím âm hộ tím tai Đồng thời, chúng tơi tiến hành lấy mẫu bệnh phẩm phổi cuống họng tất 15 lợn nghi mắc bệnh trên, để xác định lợn dƣơng tính với virus gây PRRS phân lập vi khuẩn S.suis Kết làm tiền đề cho việc xác định lợn mắc bệnh viêm phổi S.suis để đƣa đƣợc biện pháp phòng điều trị bệnh 4.6 Kết thử kháng sinh đồ Để làm tiền đề cho việc xây dựng đƣợc phác đồ điều trị lợn mắc bệnh viêm phổi vi khuẩn Streptococcus suis gây ta tiến hành thử kháng sinh đồ phịng thí nghiệm, kết thể bảng 4.8: 37 Bảng 4.8: Bảng đánh giá mức độ mẫn cảm vi khuẩn TT sinh Đánh giá mức độ mẫn cảm Số Kháng chủng Mạnh Trung bình Kháng thuốc VK thử (+) (%) (+) (%) (+) (%) Ceftiofur 10 90 10 0 Amoxicillin 10 80 20 0 Florfenicol 10 70 30 0 Neomycin 10 0 80 20 Lincomycin 10 10 50 40 Erythromycin 10 0 30 70 Kết cho thấy loại kháng sinh cho kết mẫn cảm tốt loại kháng sinh thử là: - Mẫn cảm là: Ceftiofur (90%), florfenicol (80,0%), amoxicillin (70,0%) Kháng sinh lincomycin mẫn cảm yếu với vi khuẩn(10%), neomycin erythromycin không kháng đƣợc vi khuẩn Hiện tƣợng kháng kháng sinh bắt nguồn từ việc sử dụng kháng sinh không cách với liều cao kéo dài, bổ sung kháng sinh vào thức ăn việc di truyền kháng thuốc gen nằm plasmid vi khuẩn Streptococcus suis Kết tƣơng đồng với kết Trƣơng Quang Hải cs (2012)[1] xác định khả mẫn cảm với kháng sinh 25 chủng vi khuẩn S suis phân lập đƣợc lợn mắc bệnh viêm phổi cho thấy chủng vi khuẩn S suis mẫn cảm cao với ceftiofur (92,0%), florfenicol (88,0%), amoxicillin (88,0%), ofloxacin (72,0%), amikacin (72,0%) kháng lại số loại kháng sinh nhƣ streptomycin (72,0%), neomycin (64,0%), colistin (60,0%), tetracycline (56,0%) penicillin G (48,0%) Vậy kết luận vi khuẩn S.suis phân lập đƣợc TP Thái Nguyên mẫn cảm mạnh với ceftiofur, florfenicol, amoxicillin kháng lại mội số kháng sinh nhƣ erythromycin, neomycin, lincomycin 38 4.7 Kết thử nghiệm phác đồ điều trị lợn mắc bệnh viêm phổi vi khuẩn Streptococcus suis gây Qua trình phân lập, giám định đặc tính sinh hóa, thử kháng sinh đồ theo dõi bệnh tích điển hình ta tiến hành xây dựng phác đồ điều trị thử nghiệm cho kết quả: Bảng 4.9: Kết thử nghiệm phác đồ điều trị Số Phác đồ Liều lƣợng Loại thuốc cách dùng đƣợc điều trị II III CEFANEW-LA 1ml/25kg TT/ngày; (ceftiofur: tiêm bắp; ngày tiêm 10g/100ml) lần Gluco-K-C- 1ml/10kg TT/ngày; Namin tiêm bắp: 1lần/ngày Marphamox-LA 1ml/10kg TT/ngày; (amoxicillin: tiêm bắp; ngày tiêm 15g/100ml) lần Gluco-K-C- 1ml/10kg TT/ngày; Namin tiêm bắp: 1lần/ngày MARFLO-45% 1ml/30kgTT/ngày; (florfenicol: tiêm bắp; ngày tiêm 45g/100m lần Gluco-K-C- 1ml/10kg TT/ngày; Namin tiêm bắp: 1lần/ngày Tổng 39 Số ngày khỏi điều trị bệnh Tỷ lệ (%) (ngày) (con) 11 10 90,9 10 8 80,0 77,7 30 25 83,3 (con) I Số Qua bảng cho thấy: Có 30 lợn nghi mắc viêm phổi S.suis gây đƣợc tiến hành điều trị thử nghiệm với loại kháng sinh ceftiofur, amoxicillin, florfenicol Kết hợp bổ sung Gluco-K-C-Namin để trợ sức trợ lực, giảm sốt, giảm ho, tiêu viêm tăng cƣờng sức đề kháng cho lợn mắc bệnh + Ở phác đồ sử dụng ceftiofur với liều lƣợng mg/kg thể trọng, điều trị 11 lợn mắc bệnh có 10 khỏi, đạt tỷ lệ 90,9% + Ở phác đồ sử dụng amoxicillin với liều lƣợng 15 mg/kg thể trọng; tiến hành điều trị 10 lợn bệnh, khỏi con, đạt tỷ lệ 80% + Ở phác đồ sử dụng florfenicol với liều lƣợng 15 mg/kg thể trọng; điều trị tổng số lợn mắc bệnh, khỏi con, đạt tỷ lệ 77.7% Tổng cộng với phác đồ điều trị thử nghiệm 30 lợn nghi mắc mắc viêm phổi S.suis có 25 khỏi triệu chứng, đạt tỷ lệ trung bình 83.3% Trong đó, phác đồ có tỷ lệ khỏi cao (90,9%), tiếp đến phác đồ (80%) thấp phác đồ (77.7%) Nhƣ vậy, phác đồ điều trị thử nghiệm lợn nghi mắc viêm phổi S.suis gây có kết tốt, tỷ lệ lợn khỏi bệnh cao Xây dựng thành công phác đồ tạo điều kiện cho ngƣời chăn ni chủ động phịng, trị bệnh viêm phổi lợn; quản lý chặt chẽ, xử lý hiệu lợn nghi mắc viêm phổi, giảm thiểu đƣợc thiệt hại, tăng giá trị sản phẩm chăn nuôi Giúp ngành chăn nuôi lợn phát triển bền vững Từ kết thu đƣợc qua điều trị thử nhiệm, khuyến cáo ngƣời chăn nuôi chủ động sử dụng phác đồ với kháng sinh ceftiofur 40 Chƣơng KẾT LUẬN VÀ ĐỀ NGHỊ 5.1 Kết luận Giai đoạn sau cai sữa có tỷ lệ nhiễm tính chung 64,3% cao giai đoạn lợn thịt 56,2 % Các mẫu S suis phân lập đƣợc mang hình thái, đặc tính ni cấy, hóa học tƣơng đồng với tài liệu nƣớc công bố - 100% số chủng vi khuẩn S suis đƣợc kiểm tra cho kết âm tính phản ứng VP, RIB, ARA Các phản ứng khác, bao gồm: HIP, PAL SOR có đến chủng có phản ứng dƣơng tính, chiếm tỷ lệ 10 - 20%; hầu hết chủng đƣợc kiểm tra lên men loại đƣờng RAF, LAC, GLYG, LAP tất chủng vi khuẩn S suis đƣợc kiểm tra cho kết thấy tất chủng vi khuẩn S suis phân lập đƣợc lợn dƣơng tính, chiếm tỷ lệ 80 - 100% Kết mẫu khuẩn lạc đem thử phản ứng PCR cho kết dƣơng tính với CPS vi khuẩn S.suis Xác định đƣợc triệu chứng, bệnh tích điển hình chủ yếu : Lợn bệnh sốt cao, chảy nƣớc mắt, dịch mũi, họng sƣng, bỏ ăn, thở khó, thở nhanh; da tụ huyết mảng Thể thƣờng gặp lợn sau cai sữa lợn thịt Qua kháng sinh đồ xác định đƣợc loại kháng sinh mẫn cảm lần lƣợt là: Ceftiofur, Amoxicillin Florfenicol Tổng cộng với phác đồ chúng tơi điều trị đạt tỷ lệ trung bình 86,6% Trong đó, kháng sinh ceftiofur có tỷ lệ khỏi cao (90,9%) 5.2 Đề nghị - Tiếp tục tiến hành phản ứng PCR xác định gen độc tố chọn đƣợc chủng vi khuẩn S.suis mang tính đại diện, điển hình, phù hợp với thực địa để dùng làm giống sản xuất vaccine phòng bệnh viêm phổi cho lợn - Áp dụng phác đồ thử nghiệm điều trị lợn nghi mắc lợn mắc viêm phổi vi khuẩn S suis gây địa phƣơng 41 TÀI LIỆU THAM KHẢO Tiếng Việt Trƣơng Quang Hải, Nguyễn Quang Tính, Nguyễn Quang Tuyên, Cù Hữu Phú, Lê Văn Dƣơng (2012), “ Kết phân lập xác định số đặc tính sinh học chủng Streptococcus suis Pasteurella multocida lợn mắc viêm phổi tỉnh Bắc Giang”, Tạp chí Khoa h c ỹ huậ hú y, 19(7), tr 71-76 Nguyễn Bá Hiên, Nguyễn Thị Lan, Nguyễn Hữu Nam (2013), “Nghiên cứu chọn chủng virus gây Hội chứng rối loạn hô hấp sinh sản (PRRS) để sản xuất vaccine phịng bệnh Việt Nam”, Tạp chí Khoa h c kỹ thuật thú y, 20(1), tr 5-15 Đăng Văn Kỳ (2007): Bệnh liên cầu khuẩn lợn biện pháp phòng trị Tài liệu hội thảo hội chứng rối loạn hô hấp & sinh sản bệnh liên cầu khuẩn lợn, trang 148-156 Phạm Sỹ Lăng (2007): Bệnh liên cầu khuẩn lợn biện pháp phòng trị Tài liệu hội thảo hội chứng rối loạn hô hấp & sinh sản bệnh liên cầu khuẩn lợn, trang 135-140 Phạm Sỹ Lăng, Đỗ Ngọc Thúy, Nguyễn Bá Hiên, Huỳnh Thị Mỹ Lệ, Hoàng Văn Năm, Phạm Ngọc Thạch, Nguyễn Quốc Doanh, Phạm Ngọc Đính, Văn Đăng Kỳ, Nguyễn Thị Kim Oanh, Nguyễn Hữu Hƣng, Phan Văn Long, Phan Quí Minh, Đỗ Hữu Dũng, Nguyễn Tùng, Trần Đức Hạnh (2012), Bệnh truyền lây từ động vậ sang ng ời, Nxb Nông nghiệp, tr 168-178 Phạm Sỹ Lăng, Phan Địch Lân, Trƣơng Văn Dung (2005), Bệnh phổ biến lợn, Nxb Nông nghiệp, tr 115-142;151-155 Phạm Sỹ Lăng, Trƣơng Văn Dung, Hoàng Văn Năm, Trần Duy Khánh (2006), Các bệnh truyền nhiễm h ờng gặp lợn biện pháp phịng trị, Nxb Nơng nghiệp, tr 88-97 Phạm Sỹ Lăng (2007): Bệnh liên cầu huẩn lợn biện ph p phòng ị Tài liệu hội thảo hội chứng rối loạn hô hấp & sinh sản bệnh liên cầu khuẩn lợn, trang 135-140 Nguyễn Thị Nội Nguyên Ngọc Nhiên (1993): Mộ số vỉ huẩn hờng gặp ong bệnh ho hở uyền nhiễm lợn Cơng trình Nghiên cứu Khoa học Kỹ 42 thuật 1990, 1991, Nhà xuất Nông nghiệp, Hà nội 10 Trịnh Phú Ngọc (2002), Nghiên cứu số đặc tính sinh vậ độc lực vi khuẩn Streptococcus gây bệnh lợn số tỉnh, Luận án tiến sĩ Nông nghiệp, Viện Thú y Quốc gia, Hà Nội 11 Trịnh Phú Ngọc, Lê Văn Tạo, Nguyễn Ngọc Nhiên (1999), “Một số tính chất vi khuẩn học chủng Streptococcus phân lập từ lợn tỉnh phía Bắc Việt Nam”, Tạp chí Khoa h c kỹ thuật thú y, (2), tr 47-49 12 Khƣơng Thị Bích Ngọc (1996), Bệnh cầu khuẩn số sở ch n nu i lợn tập trung biện pháp phòng trị, Luận án PTS khoa học Nông nghiệp, Viện Thú y Quốc gia, Hà Nội 13 Nguyễn Ngọc Nhiên, Khƣơng Thị Bích Ngọc (1994), “Bệnh đƣờng hơ hấp chăn ni lợn cơng nghiệp”, Tạp chí Khoa h c kỹ thuật thú y, (4), tr 42- 46 14 Lê Văn Tạo (2005), “Bệnh vi khuẩn Streptococcus gây lợn”, Tạp chí Khoa h c kỹ thuật thú y, 12(3), tr 89-90 15 Nguyễn Nhƣ Thanh, Nguyễn Bá Hiên, Trần Thị Lan Hƣơng (2001), Vi sinh vật thú y, Nxb Nông nghiệp, Hà Nội, tr 11-17 16 Đỗ Ngọc Thuý, Lê Thị Minh Hằng, Constance Schutz, Ngơ Thị Hoa, Trần Đình Trúc, Cù Hữu Phú, Trần Việt Dũng Kiên, Âu Xuân Tuấn, Nguyễn Xuân Huyên, Trần Thị Thanh Xuân (2009), “Một số đặc tính chủng vi khuẩn Streptococcus suis lƣu hành lợn miền Bắc Việt Nam”, Tạp chí Khoa h c ỹ huậ hú y, 16(3), tr 24-28 17 http://channuoivietnam.com/thong-ke-chan-nuoi/,(1/3/2018) Tiếng Anh 18 Clifton-Hadley F A (1983), Streptococccus suis type infection, Br Vet J, No 139, pp 1-5 19 Enright M R., Alexander T J L., Clifton-Hadley E A (1987), Role of houseflies (Musca domestica) in the epidemiology of Streptococcus suis type 2, Vet Rec, No 121, pp 132-133 43 20 Gottschalk M., Higgins R., Jacques M., Mittal K R., Henrichsen J (1989), Description of 14 new capsular types of Streptococcus suis, J Clin Microbiol, No 2, pp 2633- 2635 21 Gottschalk M., Lebrun A., Wisselink H., Dubreuil J D., Smith H., Vecht U (1998), Production of virulence-related proteins by Canadian strains of Streptococcus suis capsular type 2, Can J Vet Res, No 62, pp 75-79 22 Higgins R., Gottschalk M (2002), Streptococcal diseases Diseases of swine, pp 563-573 23 Higgins R., Gottschalk M., Boudreau M., Lebrun A., Henrichsen J (1995) Description of six new Streptococcus suis capsular types, J Vet Diagn Invest 7: 405- 406 24 Jacques M., Gottschalk M., Foiry B., Higgins R (1990), Ultrastructural study on surface components of Streptococcus sui, J Bacteriol, No 172, pp 2833- 2838 25 Lun Z R., Wang Q P., Chen X G., Li A X., Zhu X Q (2007), Streptococcus suis: an emrging zoonotic pathogen, Lancet Infect Dis 7(3), pp 201- 209 26 NCCLS (2002), Performance standards for antimicrobial susceptibility testing M 100-S12 Vol 22 No.1 27 Perch B., Pedersen K B., Henrichsen J (1983), Serology of capsulated Streptococci pathogenic for pigs: Six new serotypes of Streptococcus suis, J Clin Microbiol, No 17, pp 993-996 28 Pijoan C (1996), Bacterial respiratory pathogens: What is their impact? In Proc 4th Annu Swine Dis Conf Swine Pract, pp 45- 47 29 Reams R Y., Glickman L T., Harrington D D., Thacker H L., Bowersock T L (1994), Streptococcus suis infection in swine: A retrospective study of 256 cases Part II Clinical signs, gross and microcopic lessions, and coexisting microorganisms, J Vet Diagn Invest, No 6, pp 326- 334 30 Reams R Y., Glickman L T., Harrington D D., Thacker H L., Bowersock T L (1996), Streptococcus suis infection in swine: A retrospective study of 256 44 cases Part II Clinical signs, gross and microcopic lessions, and coexisting microorganisms, J Vet Diagn Invest, No 6, pp 326- 334 31 Smith H., Vecht H., Gielkens A L J., Smiths M A (1992), Cloning and nucleotide sequence of the gene encoding the 136-kilodalton surface protein (muramidase-released protein) of Streptococcus suis type 2, Infestion and immunity, No 60, pp 2361- 2367 32 Vasconcelos D., Middleton D M., Chirino Trejo J M (1994), Lesions caused by natural infection with Streptococcus suis type in weaned pigs, J Vet Diagn Invest, No 6, pp 335-341 33 Vecht U., Wisselink H J., Jellema M L., Smith H E (1991), Identification of two proteins associated with virulence of Streptococcus suis type 2, Infect Immun 59: 3156- 3162 34 Vecht U., Wisselink H J., van Dijk J E., Smith H E (1992), Virulence of Streptococcus suis type strains in newborn germfree pigs depends on phenotype, Infect Immun, No 60, pp 550- 556 35 Vecht U., Van Leengoed L A M G., Verheijen E R M (1985), Streptococcus suis infections in pigs in the Netherlands (part I), Vet Quart , No 7, pp 315- 321 36 Windsor R S., Elliott S D (1975), Streptococcal infection in young pigs IV An outbreak of Streptococcal meningitis in weaned pigs, J Hyg Camb, No 75, pp 69-78 45 PHỤ LỤC Một số hình ảnh trình nghiên cứu: Hình 1: Mổ khám bệnh tích Hình 2: Mổ khám bệnh tích Hình : Lấy mẫu bệnh phẩm Hình 4: Ni cấu vi khuẩn 46 ... giám định số đặc điểm sinh hóa vi khuẩn Streptococcus suis gây vi? ?m phổi lợn Thái Nguyên? ?? 1.2 Mục tiêu nghiên cứu - Phân lập xác định đặc điểm ni cấy, đặc tính sinh hóa vi khuẩn S .suis gây bệnh vi? ?m... - NGƢ NGUYỄN LAN HƢƠNG TÊN ĐỀ TÀI NGHIÊN CỨU PHÂN LẬP VÀ GIÁM ĐỊNH MỘT SỐ ĐẶC ĐIỂM SINH HOÁ CỦA VI KHUẨN STREPTOCOCCUS SUIS GÂY VI? ?M PHỔI LỢN TẠI THÁI NGUYÊN KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP Ngành: Thú Y... NGHIÊN CỨU 3.1 Đối tƣợng phạm vi nghiên cứu 3.1.1 Đối tƣợng nghiên cứu - Vi khuẩn Streptococcus suis gây vi? ?m phổi lợn - Bệnh vi? ?m phổi lợn 3.1.2 Phạm vi nghiên cứu 3.1.2.1 Thời gian nghiên cứu