Thông tin tài liệu
Chẩn đoán bệnh lở mồm long móng (FMD)
Nguyễn Thúy Kiều|
1
Oct.30
Trường Đại Học Nông Lâm thành phố Hồ Chí Minh
Bộ môn Công Nghệ Sinh Học
Lớp DH06SH
P
Tiểu luận: CHẨN ĐOÁN BỆNH GIA SÚC GIA CẦM
CHẨN ĐOÁN VIRUS LỞ MỒM LONG MÓNG
(FMDV) BẰNG KỸ THUẬT GENE
Chẩn đoán bệnh lở mồm long móng (FMD)
Nguyễn Thúy Kiều|
2
Oct.30
ĐẶT VẤN ĐỀ
Bệnh lở mồm long móng (Foot and Mouth Disease – FMD) hiện nay vẫn đang còn gây
thiệt hại kinh tế quan trọng ở nhiều nơi trên thế giới, mặc dù nó đã được thanh toán hoặc
khống chế thành công tại nhiều nước. Bệnh gây thành dịch ở nhiều loài động vật móng
guốc chẵn, chủ yếu là trâu, bò và lợn. Bệnh lở mồm long móng được biết đến như nạn đại
dịch của các đàn bò, cừu và l
ợn tại nhiều nước từ thế kỷ XIX. Bệnh có ở khắp thế giới.
Cuối thế kỷ XIX, đại dịch đã hoành hành ở hầu hết châu Âu, kéo dài hơn 10 năm không
tắt, gây bệnh cho hàng chục triệu bò, cừu. Nửa đầu những năm 50 của thế kỷ XX, lại có
một vụ dịch mới kéo dài gây thiệt hại lớn cho đàn gia súc ở nhiều nước thuộc châu Âu. ở
châu Á và châu Phi, bệnh cũng xảy ra trầm trọng như ở châu Âu, hầu hết các nước đã
từng có bệnh. Điều làm đau đầu các nhà dịch tễ học là tại nhiều nước và khu vực, sau
nhiều năm liên tục tiêm phòng vacxin cho đàn gia súc và áp dụng các biện pháp kiểm
soát bệnh nghiêm ngặt, bệnh tưởng như đã hoàn toàn biến mất, nay bỗng nhiên lại bùng
phát dữ dội. Điển hình ở Đài Loan năm 1997 t
ừ nguồn dịch là vài con lợn mắc bệnh trên
một chiếc thuyền buôn, trong vòng 2 tháng bệnh nhanh chóng lan ra hàng ngàn trại chăn
nuôi lợn, làm suy sụp nền kinh tế chăn nuôi, thiệt hại khoảng 2 tỷ USD. Để chẩn đoán lở
mồm long móng, đầu tiên căn cứ vào dấu hiệu lâm sàng của bệnh. Tuy nhiên điều này có
thể bị nhầm lẫn do những bệnh có triệu chứng tương tự. Ở trâu, bò bệnh viêm miệng mụ
n
nước (vesicular stomatitis, VS) rất giống bệnh lở mồm long móng. Ở lợn, bệnh mụn nước
ở lợn (swine vesicular disease, SVD) và bệnh mụn nước ban đỏ (vesicular exanthema ò
swine, VES) tuy khác căn nguyên nhưng có triệu chứng giống nhau. Sự phát hiện sớm
giai đoạn nhiễm bệnh và xác định đúng bệnh nếu có thể trước khi xuất hiện các dấu hiệu
lâm sàng là yếu tố chủ yếu cho sự khống chế bệnh hiệu qu
ả, ngăn chặn bệnh lây lan. Điều
đó đòi hỏi phải có phương pháp chẩn đoán nhanh, đặc hiệu, chính xác có thể cho kết quả
trong vòng 24g. Hơn nữa, sự xác định kịp thời typ đặc hiệu của virus thuộc địa và đặc
Chẩn đoán bệnh lở mồm long móng (FMD)
Nguyễn Thúy Kiều|
3
Oct.30
tính phân tử của nó là rất cần thiết để thực hiện tiêm phòng khẩn cấp với kháng nguyên
tương ứng và để đánh dấu nguồn gốc ổ dịch. Vì thế chẩn đoán bằng kỹ thuật gene là
phương pháp đang được nghiên cứu và áp dụng để phát hiện kịp thời để đưa ra những
giải pháp xử lý hiệu quả.
I. TỔNG QUAN
1.1. FMD (foot and mouth disease)
Lở mồm long móng (FMD) là bệnh truyền nhiễm cấp tính nguy hiểm do virus gây ra.
Đây là bệnh được tổ chức dịch tể thế giới (Office International des Epizooties _ OIE) xếp
vào hàng đầu trong danh mục A gồm 15 bệnh truyền nhiễm nguy hiểm cho các loài móng
guốc chẵn: trâu, bò, dê, cừu, heo (Cục thú y, 1993). Năm 2001, một vụ dịch khác xảy ra
sau hơn 20 năm vắng bóng tại nước Anh, cũng gây thiệt hại cho ngành chăn nuôi và du
lịch khoảng 2 tỷ USD. Ở nướ
c ta bệnh đầu tiên được phát hiện ở Nha Trang (1898) sau
đó lang ở cả ba miền. Năm 1995 có 26 tỉnh, thành có bệnh với hàng ngàn ổ dịch (19.883
trâu, bò và 10.293 heo bệnh, chết 384 trâu bò, 5208 heo _ cục thú y Việt Nam) đã gây tác
hại lớn đến nền kinh tế cho các trại chăn nuôi (giảm 25% sức sản xuất) và nền kinh tế
nước ta. Việt Nam là nước trong vùng Châu Á được báo cáo trên bản đồ dịch tể bệnh lở
mồm long móng thế giới là vùng dịch đị
a phương (endemic) (Gleeson, 2002). Dịch lở
mồm long móng đã xảy ra trên trâu bò liên tục suốt thời gian từ 1975-2005, trên lợn
1992-2005 và gây thiệt hại nặng nề nhất vào các năm 1993, 1995, 1999, 2000. Ngoài typ
O lưu hành trong nhiều năm qua, typ A cũng đã được phát hiện năm 2004 trên trâu bò và
Chẩn đoán bệnh lở mồm long móng (FMD)
Nguyễn Thúy Kiều|
4
Oct.30
typ Asia 1 trên lợn năm 2005 ở Việt Nam. FMD là một bệnh địa phương và các type
huyết thanh phổ biến là O, Asia 1 và A. Các typ huyết thanh có sự phân bố khác nhau
trên thế giới. Typ huyết thanh O, A được nhận biết ở nhiều vùng khác nhau trên thế giới.
Trái lại các type huyết thanh SAT1, SAT2, SAT3 được giới hạn ở một số nước thuộc
châu Phi. Typ huyết thanh Asia 1 được tìm thấy ở nhiều nước thuộc châu Á. Riêng typ
huyết thanh C chỉ còn tồn tại một vài nước như
Philippine. Trong các ổ dịch, động vật có
thể mắc bệnh do một hoặc cùng một lúc nhiều typ huyết thanh. Sự biến đổi của các typ
huyết thanh cũng khá phức tạp, đôi khi còn những điều chưa được hiểu biết rõ. Các
chủng virus lở mồm long móng biến đổi rất nhiều và do sự phân bố rộng rãi, phức tạp của
chúng nên thường gặp rất nhiều khó khăn trong việc xác định ngu
ồn gốc lây lan của
chúng. Chỉ riêng typ O người ta đã các định được 8 nhóm với kiểu di truyền sai khác
nhau từ 15% trở lên khi so sánh trình tự gene VP1. Virus lở mồm long móng typ A là
nhóm có tính đa dạng kháng nguyên cao nhất, typ A có đến 32 subtype. Và hiện nay
người ta cũng chưa thống nhất được với nhau về số lượng kiểu di truyền của virus typ A
khi giải trình tự gene VP1. Với virus typ C việc giải trình tự gene VP1 cho phép phân
chúng thành 8 nhóm di truyền. Typ virus Asia 1 có sự đa dạng di truyền ít nhất, chúng
chỉ có 1 nhóm di truy
ền. Theo kết quả giải trình tự gene VP1 các typ SAT1 có 3 nhóm,
SAT2 có 2 nhóm, SAT3 có 3 nhóm di truyền và phân bố theo khu vực địa lý rõ ràng. Ở
Việt Nam đã xác định có typ O, A, và Asia 1 ở trâu, bò và typ A, O ở heo.
1.2. Triệu chứng bệnh tích
Triệu chứng
Ở trâu bò và lợn hoặc các loài vật khác, bệnh có chung đặc điểm là sốt đột ngột 2-3 ngày,
viêm dạng mụn nước rồi lở loét ở miệng, vú, vùng móng chân, nước bọt chảy nhiều như
Chẩn đoán bệnh lở mồm long móng (FMD)
Nguyễn Thúy Kiều|
5
Oct.30
bọt bia. Niêm mạc miệng, môi, lợi, chân răng đỏ ửng, khô, nóng. Mụn nước bắt đầu mọc
ở bên trong má, mép, chân răng, môi, lợi, và bề mặt lưỡi. Kích thước mụn bằng hạt gạo,
hạt ngô hoặc to hơn. Mụn nước phồng lên, có màng bọc mỏng, bên trong chứa nước
trong, sau đục dần. Sau 1-2 ngày, mụn nước bị vỡ, lớp niêm mạc tróc ra để lộ mặt dưới
đỏ, chạm nhẹ vào dễ ch
ảy máu. Mụn nước thường không có mủ. Do viêm vùng miệng,
con vật có chịu, luôn lúc lắc đầu, nhai tóp tép, nước bọt sùi ra đầy mõm miệng, chảy lòng
thòng thành sợi dài.
Do có viêm mụn nước ở vùng vành móng, kẽ móng chân làm con vật khó chịu, tỏ ra đau
đớn, bồn chồn, luôn nhấc chân lên. Dễ thấy nhất là hiện tượng què, không đi cày kéo
được trong khoảng 1-2 tuần. Có trường hợp móng chân bị long hẳn ra, phổ biến nhất là ở
lợn. Triệu chứng què ở
cả đàn trâu bò gây ảnh hưởng xấu đối với vùng dựa vào sức kéo
của chúng, làm lỡ thời vụ gieo trồng, có nơi năng suất lúa bị giảm 20%.
ở con vật cái đang nuôi con, triệu chứng và bệnh tích ở bầu vú, núm vú cũng tương tự
như ở miệng và chân làm con vật giảm tiết sữa, sữa bị giảm phẩm chất. Con mẹ thường
không cho con bú vì đau, làm con non thiếu sữa. Hơn nữ
a chính con non cũng bị viêm lở
mồm như mẹ nên không bú được. Hậu quả có tới 50-80% gia súc non bị chết. Ở con vật
trưởng thành, tỷ lệ mắc bệnh trong đàn có serotyp đều gây bệnh giống nhau.
Súc vật cái mang thai nhiễm virus lở mồm long móng sẽ sẩy thai.
Biến chứng: Viên cơ tim ở súc vật non và viêm ruột (bê non, lợn <-2 tháng).
Chẩn đoán bệnh lở mồm long móng (FMD)
Nguyễn Thúy Kiều|
6
Oct.30
.
Hình: Triệu chứng FMD ở trâu, bò và heo
Bệnh tích
Chẩn đoán bệnh lở mồm long móng (FMD)
Nguyễn Thúy Kiều|
7
Oct.30
Từ miệng tới thực quản, dạ dày, ruột đều có mụn loét với từng mảng xuất huyết hoặc tụ
máu. Bộ máy hô hấp cũng bị viêm.
Ở trâu bò hay gặp hiện tượng mặt ngoài cơ tim có những vệt hoại tử màu trắng xen kẽ
trông giống như da hổ nên gọi là “tim vằn hổ”.
Bệnh lở mồm long móng ở người: Lây nhiễm bệnh lở mồm long móng ở ngườ
i khá hiếm
và nhẹ. Đôi khi gặp ở người hay tiếp xúc với gia súc có bệnh hoặc với virus trong phòng
thí nghiệm như người chăn nuôi, chăm sóc gia súc, cán bộ thú y, công nhân lò mổ, nhân
viên phòng thí nghiệm. Đôi khi do uống sữa nhiễm mầm bệnh không tiệt trùng kỹ, hoặc
qua vết trầy xước trên da. Biểu hiện là có mụn nước nổi trên da ở tay, chân và lưỡi, lợi,
có cảm giác ngứa ngáy và hơi nóng rát. Mụn nước có thể tự vỡ ra hoặ
c xẹp đi sau
1.3. Đường lây truyền và thời gian lây truyền
Đường lây bệnh
Quan trọng là nhiễm virus có trong nước bọt, nước mũi dưới dạng khí dung. Gia súc hít
phải virus có khi từ khoảng cách hàng chục km nếu thuận chiều gió thổi, có khi tới 250
km. Điều này giải thích sự lây lan bệnh mạnh và nhanh chóng trong thời gian ngắn trên
phạm vi nhiều huyện, tỉnh, thậm chí giữa các quốc gia. Sự lây truyền trực tiếp cũng xả
y
ra hoặc gián tiếp qua thức ăn, nước uống, bãi chăn, đồng cỏ, dụng cụ, quần áo, tay chân
bị nhiễm trùng. ở đây, con người là yếu tố quan trọng làm lây lan bệnh, nhất là khi đưa
gia súc có bệnh hoặc các sản phẩm của chúng đến nơi khác. Bệnh có thể truyền qua bào
thai.
Thời kỳ ủ bệnh
Từ 1 – 7 ngày, trung bình 3 – 4 ngày. Trong suốt thời gian từ khi có các triệu chứng đầu
tiên đến khi kh
ỏi bệnh. Nhiều trâu bò sau khi khỏi bệnh vẫn còn mang trùng và thải trùng
hàng tháng, có trường hợp tới 3 năm. Lợn có vai trò thải trùng rất lớn, gấp nhiều lần trâu
Chẩn đoán bệnh lở mồm long móng (FMD)
Nguyễn Thúy Kiều|
8
Oct.30
bò khi đang có triệu chứng, nhưng sau khi khỏi lâm sàng, lợn vẫn thải virut sau 1-2
tháng, trâu bò sau khỏi lâm sàng vẫn thải virut 6-24 tháng. Đây là đặc điểm quan trọng
trong quá trình phòng chống bệnh ở gia súc. Sức đề kháng của mầm bệnh với điều kiện tự
nhiên và thuốc sát trùng.
II. NỘI DUNG
2.1. Giới thiệu về virus gây lở mồng long móng (FMDV)
Do virus Apthovirus gây ra. Aphthovirus thuộc giống Picornaviridae. Có 7 type huyết
thanh gồm: A, O, C, SAT1, SAT2, SAT3 và Asia 1 gây bệnh có triệu chứng giống nhau
nhưng không gây miễn dịch chéo. Các typ O1, O2, O3 …, A1, A2, A3, C1, C2, C3 …
căn cứ vào sự khác biệt về gen và cấu trúc kháng nguyên. Cấu trúc của FMDV (foot and
mouth disease virus) là cấu trúc đối xứng khối 20 mặt, gồm 1 sợi RNA mạch đơn chứa
8500 nucleotide được đóng gói trong một vỏ protein được tạo thành từ 60 capsome,
không vỏ bọc. Mỗi capsomer gồm 4 lo
ại polypeptide VP (virus protein) ký hiệu
VP1(1D), VP2 (1C), VP3 (1B), VP4 (1A). 4 loại VP này đều có nguồn gốc từ VP0, VP1
ở lớp ngoài cùng, là yếu tố cấu trúc, tham gia quá trình cố định virus trên màng tế bào, có
tính sinh miễn dịch chủ yếu. Người ta đã ứng dụng phát hiện này để điều chế vacxin cho
hiệu quả cao với VP1 (dẫn liệu của Lê Anh Phụng, 1996; Trần Thanh Phong, 1996). Do
có đặc điểm của các virus sợi đơn (+) RNA, virus có tính biến dị và truyền nhiễm mạnh.
Bộ gene g
ồm vùng không giải mã (UTR: untranslated region) dài 1200base ở đầu 5’
(5’UTR) (có vai trò quan trọng trong việc giải mã, độc lực, hình thành capsid), vùng này
chứa một cấu trúc thứ cấp có thể xoay (clover-leaf secondary structure), và được biết như
là vị trí để tiến vào bên trong ribosome (IRES: international ribosome entry site) và đầu
3’ (3’UTR). Phần giải mã protein cấu trúc (1ABCD) và phần giải mã protein không cấu
trúc (2ABC và 3ABCD). Chỉ thị phần tử sử dụng nhiều nhất trong định typ và nghiên cứu
phả hệ virus lở mồm long móng là 5’UTR và VP1. Cả hai đầu của bộ gene có thể
được
Chẩn đoán bệnh lở mồm long móng (FMD)
Nguyễn Thúy Kiều|
9
Oct.30
thay đổi, đầu 5’ tận cùng bởi VPg (genome-linked protein) (khoảng 23 acid amin), đầu 3’
bởi chuổi dài adenyl (King, 2000).
Hình: genome FMDV
Toàn bộ genome của FMDV mã hóa cho một protein đơn. Sau khi dịch mã, protein này
phân cắ thành 4 sản phẩm sơ cấp: Amino terminal L protease, phân cắt ở đầu cuối
carboxyl , P1-2A, tiền chất của protein vỏ, sẽ trải qua giai đoạn polyprotein sau dịch mã
với sự tham gia của các protease virus để tạo thành 1 protomer. Hạt virus hình thành từ
từng đơn vị protomer (hay đơn vị capsid). Từ đơn vị căn bản này, 5 protomer hợp thành 1
5' UT
R
L VP4 VP2VP3VP12A2B2C3A3B
1
3B
2
3B
3
3C3D3' UT
R
VP1:xanhdương
VP2: xanh lá cây
VP3: đỏ
VP4: vàng
Chẩn đoán bệnh lở mồm long móng (FMD)
Nguyễn Thúy Kiều|
10
Oct.30
pentamer, 12 pentamer liên kết nhau theo cấu trúc khối đối xứng gồm 3 trục để hình
thành 1 sợi RNA, đó là 1 virus.
Hình: Cấu trúc của FMDV. Có
3 loại protein bề mặt là VP1,
VP2, VP3. Mỗi protein hiện
diện với dạng hình thang trên bề
mặt. Ba loại protein này nhóm
lại tạo thành 1 đơn vị cấu trúc
được chỉ ở bên trái.
[...]... nước bọt ở mồm, mũi hay nứt toác móng chân Kỹ thuật RT- PCR cho phép phát hiện bệnh ngay trong giai đoạn đầu tiên" Nguyễn Thúy Kiều | 15 Oct. 30 Chẩn đoán bệnh lở mồm long móng (FMD) Sở dĩ RT- PCR nhận biết được bệnh nhanh như vậy vì nhờ việc kết hợp PCR với cặp mồi 1F/1R khả năng xác định các type O, A, C và ASIA- 1 gây bệnh của virus lở mồm long móng diễn ra rất nhanh Theo TS Tô Long Thành,... trong 45 giây, và sau cùng ủ ở 720C trong 7 phút Nguyễn Thúy Kiều | 25 Oct. 30 Chẩn đoán bệnh lở mồm long móng (FMD) Hình: Sản phẩm PCR từ sự khuếch đại của FMDV từ những động vật được lây nhiễm khi sử dụng cặp mồi A/B Lane M: DNA size maker Nguyễn Thúy Kiều | 26 Oct. 30 Chẩn đoán bệnh lở mồm long móng (FMD) Hình: Giới hạn phát hiện RNA của FMDV bằng RT-PCR với primer A/B (A) Dãy pha... thuộc môi trường mô, đặc hiệu nhanh, ít (+) tính giả Hiện bộ kit chẩn đoán đang được sử dụng tại Việt Nam gồm bộ kháng thể chuẩn để phát hiện 4 Nguyễn Thúy Kiều | 13 Oct. 30 Chẩn đoán bệnh lở mồm long móng (FMD) serotyp kháng nguyên O, A, C, Asia 1, và bộ kháng nguyên chuẩn để chẩn đoán 3 serotyp O, A, C Phương pháp này chẩn đoán nhanh, đặc hiệu và độ nhạy cao, được dùng trong giám định serotype... bổ thể: dùng kháng thể chuẩn để phát hiện serotype virus O, A, C trong bệnh phẩm Phản ứng nhanh chỉ trong 12 giờ, đơn giản giúp khẳng định hoặc loại trừ nghi ngờ bệnh lở mồm long móng (FMD) Phản ứng này cũng đã được hoàn thiện và nếu sử dụng thành thục sẽ là một phương pháp hữu hiệu để chẩn đoán phân biệt giữa virus lở mồm long móng và các virus gây viêm mụn nước khác Trung hòa virus: phát hiện qua... thương mại Nguyễn Thúy Kiều | 28 Oct. 30 Chẩn đoán bệnh lở mồm long móng (FMD) III KẾT LUẬN Chẩn đoán FMD sớm và chính xác là công cụ cần thiết để kiểm soát dịch bệnh Chiến lược mới dựa vào RT-PCR đang được áp dụng để phát triển phương pháp kiểm tra nhanh và nhạy cho FMDV Thử thách chính của phương pháp này là phải thiết kế các primer thích hợp cho chẩn đoán đa dạng di truyền của virus Vì thế đòi... Kiều | 14 Oct. 30 Chẩn đoán bệnh lở mồm long móng (FMD) cần thiết và được xem như là phương pháp bổ sung hay thay thế cho phương pháp huyết thanh học Phương pháp kết hợp bổ thể, phương pháp ELISA mới chỉ dừng lại ở việc trả lời câu hỏi type gây bệnh thuộc loại gì Phương pháp RT- PCR không dừng lại ở đó, chúng còn có thể phân biệt được sự khác biệt biến chủng có trong bệnh phẩm đã xác định có... ngày, trong cỏ khô sống được 8-15 tuần Trong đất ẩm virut sống hàng năm Xút 1% Nguyễn Thúy Kiều | 12 Oct. 30 Chẩn đoán bệnh lở mồm long móng (FMD) diệt virus sau 10 phút, Formol 2% - 6 giờ Virus trong không khí còn sống tốt nhất ở ẩm độ tương đối RH > 60% 2.2 Các phương pháp chẩn đoán Các kỹ thuật phân tích khác nhau đã được sử dụng để phát hiện acid nucleic của virus, kháng nguyên và sự đáp... thu nhận từ heo/bò trâu có biểu hiện lâm sàn nghi nhiễm virus (hay những mẫu có phản ứng ELISA dương tính với kháng thể kháng virus) Xử lý mẫu: Nguyễn Thúy Kiều | 20 Oct. 30 Chẩn đoán bệnh lở mồm long móng (FMD) Mẫu bệnh phẩm: cho vào nghiền với cát vô trùng hay mảnh thủy tinh và sau đó cho nước muối sinh lý vào tạo huyễn dịch 10-20%, cho vào tủ lạnh rồi rã đông (làm nhiều lần để tách tế bào)... phản ứng PCR với các cặp mồi tương ứng Nguyễn Thúy Kiều | 24 Oct. 30 Chẩn đoán bệnh lở mồm long móng (FMD) Serotype O A C Asia 1 Primer pair ARS4/NK61 A-1C526/NK61 C-1C536/NK61 As 1-1C505/NK61 Cycle 30 30 25 30 Denaturation 1 phút 1 phút 1 phút 1 phút Annealing 45 giây, 600C 1 phút, 550C 30 giây, 600C 1 phút, 550C Elongation 2 phút 1,5 phút 2 phút 1,5 phút • Cặp primer A/B được thiết kế cho... 37-420C Trong những trường hợp này phải sử dụng reverse transcriptase chịu nhiệt thermoscriptTMRT hoạt động ở 42-650C Các primer trong phiên mã ngược Nguyễn Thúy Kiều | 17 Oct. 30 Chẩn đoán bệnh lở mồm long móng (FMD) Mồi là những trình tự oligonucleotide có khả năng bắt cặp chuyên biệt với đầu 5’ hay đầu 3’ của đoạn DNA cần khuếch đại Mồi là yếu tố quan trọng quyết định tính đặc hiệu của phản .
Tiểu luận: CHẨN ĐOÁN BỆNH GIA SÚC GIA CẦM
CHẨN ĐOÁN VIRUS LỞ MỒM LONG MÓNG
(FMDV) BẰNG KỸ THUẬT GENE
Chẩn đoán bệnh lở mồm long móng (FMD)
Nguyễn. virus lở mồm long móng sẽ sẩy thai.
Biến chứng: Viên cơ tim ở súc vật non và viêm ruột (bê non, lợn <-2 tháng).
Chẩn đoán bệnh lở mồm long móng (FMD)
Nguyễn
Ngày đăng: 22/02/2014, 19:27
Xem thêm: chẩn đoán bệnh lở mồm long móng (fmd), chẩn đoán bệnh lở mồm long móng (fmd)