TRƯỜNG ĐẠI HỌC CẦN THƠ KHOA THỦY SẢN LÊ NGỌC LAN VÂN ẢNH HƯỞNG CỦA THUỐC KHÁNG SINH LÊN CÁC CHỈ TIÊU HUYẾT HỌC CỦA CÁ TRA (Pangasianodon hypophthalmus) NHIỄM Edwardsiella ictaluri LUẬN VĂN TỐT NGHIỆP ĐẠI HỌC NGÀNH BỆNH HỌC THỦY SẢN 2009 PDF created with FinePrint pdfFactory Pro trial version http://www.fineprint.com LỜI CẢM TẠ Xin gởi lời cảm ơn đến cô Đặng Thụy Mai Thy, cô Đặng Thị Hoàng Oanh và chị Nguyễn Thị Thúy Liễu đã tận tình hướng dẫn em trong suốt thời gian thực hiện đề tài. Mình xin chân thành cảm ơn những người bạn thân yêu của lớp Bệnh học thủy sản khóa 31 đã luôn gắn bó, quan tâm, giúp đỡ mình trong 4 năm đại học. Lời cảm ơn cuối cùng con xin gởi đến cha mẹ, cha mẹ là nguồn động viên lớn nhất giúp cho con vượt qua những lúc khó khăn , giúp con có đủ tự tin trong học tập và trong cuộc sống. Chân thành cảm ơn! PDF created with FinePrint pdfFactory Pro trial version http://www.fineprint.com i TÓM TẮT Đề tài “ Ảnh hưởng của thuốc kháng sinh lên các chỉ tiêu huyết học của cá tra (Pangasianodon hypophthalmus) nhiễm Edwardsiella ictaluri” nhằm mục tiêu xác định ảnh hưởng của các loại thuốc kháng sinh thường dùng trong nuôi cá tra lên các chỉ tiêu huyết học của cá tra nhiễm E. ictaluri. Cá tra giống mua về có biểu hiện bệnh mủ gan, tiến hành bố trí thí nghiệm với 7 nghiệm thức trong đó có 6 nghiệm thức sử dụng kháng sinh, nghiệm thức 1 – Amoxicilin, nghiệm thức 2 – Flofenicol, nghiệm thức 3 – Docycilin, nghiệm thức 4 – Flofenicol và Amoxicillin, nghiệm thức 5 – Flofenicol và Doxycilin và nghiệm thức 6 - Amoxicillin và Doxycilin, 1 nghiệm thức đối chứng không sử dụng kháng sinh. Theo dõi tỉ lệ chết của cá, tiến hành phân lập vi khuẩn và lấy máu xác định các chỉ tiêu huyết học trên những cá có biểu hiện lờ đờ. Kết quả thí nghiệm cho thấy tỉ lệ chết ở nghiệm thức 1 cao nhất (100% cá chết vào ngày thứ 3 thí nghiệm), kế đến là nghiệm thức đối chứng (93,3%), nghiệm thức 2 (93%), nghiệm thức 3 (47%), nghiệm thức 4 (43%), nghiệm thức 5 và 6 (30%). . Kết quả phân lập vi khuẩn xác định cá nhiễm bệnh do E.ictaluri. Trong máu tìm được 5 loại tế bào: hồng cầu, lympho, tiểu cầu, bạch cầu đơn nhân, bạch cầu trung tính. Ngoài ra còn tìm thấy hồng cầu nhiều nhân và không nhân. Hồng cầu được định loại bằng dung dịch Natt – Herick, bạch cầu bằng phương pháp nhuộm Wright & Giemsa. Số lượng hồng cầu của cá sau khi điều trị bằng kháng sinh là 1,6x10 6 tế bào/mm 3 thấp hơn hồng cầu của cá nhiễm bệnh trước khi sử dụng kháng sinh là 1,8x10 6 tế bào/mm 3 , sự khác biệt không có ý nghĩa thống kê (p>0,05). Lympho sau sử dụng kháng sinh thấp hơn trước khi sử dụng kháng sinh còn bạch cầu đơn nhân và bạch cầu trung tính sau sử dụng kháng sinh cao hơn trước khi sử dụng kháng sinh. Đối với từng nghiệm thức, lympho và bạch cầu trung tính ở nghiệm thức không sử dụng kháng sinh có số lượng thấp nhất (13,3x10 3 tế bào/mm 3 và 7,3x10 3 tế bào/mm 3 ), số lượng lympho cao nhất ở nghiệm thức 6 (53,8x10 3 tế bào/mm 3 ) và bạch cầu trung tính cao nhất ở nghiệm thức 2 (16,6x10 3 tế bào/mm 3 ). Số lượng bạch cầu đơn nhân cao nhất ở nghiệm thức 2 với 12,8x10 3 tế bào/mm 3 và tiểu cầu cao nhất với số lượng 24.6x10 3 tế bào/mm 3 ở nghiệm thức 6. Nghiệm thức 5 có số bạch cầu đơn nhân thấp nhất (5,1x10 3 tế bào/mm 3 ) và nghiệm thức 2 có số tiểu cầu thấp nhất (5,3x10 3 tế bào/mm 3 ). PDF created with FinePrint pdfFactory Pro trial version http://www.fineprint.com ii MỤC LỤC Tóm tắt i Mục lục ii Danh sách bảng iv Danh sách hình v CHƯƠNG I: GIỚI THIỆU 1 CHƯƠNG II: LƯỢC KHẢO TÀI LIỆU 2 2.1 Tình hình dịch bệnh trên cá tra 2 2.2 Tình hình bệnh mủ gan trên cá tra 2 2.3 Bệnh mủ gan trên cá 2 2.4 Tình hình quản lý sử dụng kháng sinh trên thế giới và Việt Nam 3 2.5 Kháng sinh 4 2.5.1 Khái niệm 4 2.5.2 Cơ chế tác động của thuốc kháng sinh 4 2.5.3 Các loại thuốc kháng sinh thường dùng trong thủy sản 5 2.6 Những nghiên cứu về sự kháng thuốc kháng sinh của vi khuẩn E.ictaluri 6 2.7 Các chỉ tiêu huyết học 7 2.7.1 Hồng cầu ( Erythrocyte) 8 2.7.2 Bạch cầu đơn nhân 8 2.7.3 Bạch cầu trung tính ( Neutrophil) 9 2.7.4 Tiểu cầu ( Thrombocyte 9 2.7.5 Tế bào lympho ( lymphocyte) 10 CHƯƠNG III: VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 11 PDF created with FinePrint pdfFactory Pro trial version http://www.fineprint.com iii 3.1 Thời gian thực hiện 11 3.2 Địa điểm nghiên cứu 11 3.3 Vật liệu nghiên cứu 11 3.3.1 Đối tượng nghiên cứu 11 3.3.2 Dụng cụ và thiết bị nghiên cứu 11 3.3.3 Hóa chất 11 3.4 Phương pháp nghiên cứu 12 3.4.1 Chuẩn bị thí nghiệm 12 3.4.2 Bố trí thí nghiệm 12 3.4.3 Các chỉ tiêu thu thập 12 3.5 Định danh vi khuẩn 13 3.6 Phương pháp lấy mẫu máu quan sát các chỉ tiêu huyết học 13 3.6.1 Phương pháp lấy mẫu máu, nhuộm và đếm hống cầu 13 3.6.2 Phương pháp lấy mẫu máu, nhuộm và đếm bạch cầu 14 3.7 Xử lý số liệu 15 CHƯƠNG IV KẾT QUẢ THẢO LUẬN 16 4.1 Dấu hiệu bệnh lý 16 4.2 Kết quả thí nghiệm 16 4.3 Kết quả phân lập vi khuẩn 17 4.4 Kết quả phân tích huyết học 18 4.4.1 Hồng cầu 18 4.4.2 Bạch cầu 20 CHƯƠNG V KẾT LUẬN VÀ ĐỀ XUẤT 24 5.1 Kết luận 24 5.2 Đề xuất 24 TÀI LIỆU THAM KHẢO 25 PDF created with FinePrint pdfFactory Pro trial version http://www.fineprint.com iv Phụ lục 28 PDF created with FinePrint pdfFactory Pro trial version http://www.fineprint.com v DANH SÁCH BẢNG Bảng 2.1 So sánh độ nhạy của các loại kháng sinh đối với vi khuẩn E.ictaluri phân lập trên cá tra bệnh gan thận mủ (nguồn: Nguyễn Đức Hiền) 8 Bảng 3.1 Các loại thuốc và liều lượng kháng sinh sử dụng cho các nghiệm thức thí nghiệm 12 Bảng 4.1 Sự biến đổi số lượng các loại bạch cầu trước và sau khi sử dụng kháng sinh 20 Bảng 4.2 Số lượng các loại bạch cầu ở các nghiệm thức sau khi sử dụng kháng sinh 21 PDF created with FinePrint pdfFactory Pro trial version http://www.fineprint.com vi DANH SÁCH HÌNH Hình 2.1 Cá tra bệnh xuất hiện nhiều đốm trắng trên gan (G), thận (Th) và tỳ tạng (Tt)). 3 Hình 2.2 Tế bào hồng cầu 8 Hình 2.3 Bạch cầu đơn nhân 9 Hình 2.4 Bạch cầu trung tính 9 Hình 2.5 Tiểu cầu 10 Hình 2.6 Tế bào lympho 10 Hình 3.1 Buồng đếm hồng cầu 13 Hình 3.2 Thao tác lấy mẫu máu và trải mẫu 14 Hình 4.1 Biểu đồ thể hiện tỉ lệ chết của các nghiệm thức trogn quá trình thí nghiệm 16 Hình 4.2 Khuẩn lạc trên môi trường TSA 17 Hình 4.3 Kết quả nhuộm gram 18 Hình 4.4 Kết quả kiểm tra các loai đường 18 Hình 4.5 Hồng cầu nhiều nhân (100X) 18 Hình 4.6 Hồng cầu không nhân (100X) 18 Hình 4.7 Biểu đồ mật độ hồng cầu cá tra trước, sau khi sử dụng kháng sinh và không sử dụng kháng sinh 19 Hình 4.8 Tế bào lympho (100X) 20 Hình 4.9 Tiểu cầu (100X) 20 Hình 4.10 Bạch cầu trung tính (100X) 20 Hình 4.11 Bạch cầu đơn nhân (100X) 20 PDF created with FinePrint pdfFactory Pro trial version http://www.fineprint.com vii PDF created with FinePrint pdfFactory Pro trial version http://www.fineprint.com 1 CHƯƠNG I GIỚI THIỆU Nghề nuôi trồng thuỷ sản đang ngày một phát triển và trở thành một ngành có đóng góp đáng kể trong kim ngạch xuất khẩu. Hiện tại, nhu cầu cá tra cho xuất khẩu và tiêu thụ trong nước đều tăng cao. Giải pháp quan trọng để tạo thêm nhiều sản phẩm là nuôi công nghiệp tập trung. Song song với sự phát triển đó, vấn đề dịch bệnh trên cá tra nuôi ngày càng trở nên trầm trọng. Tình hình dịch bệnh xuất hiện nhiều hơn khi vào mùa mưa, chủ yếu là bệnh gan thận có mủ, trắng gan, trắng mang. Theo thống kê của Bộ nông nghiệp và phát triển nông thôn, diện tích nuôi cá tra ở ĐBSCL giảm hơn trước, tính đến ngày15/8/2008, diện tích thả nuôi của các tỉnh An Giang là 1.392 ha, Cần Thơ - 1.250 ha, Đồng Tháp - 630 ha, Bến Tre - 563 ha, Vĩnh Long - 221 ha, Sóc Trăng - 212 ha, Hậu Giang - 171 ha và Tiền Giang - 118 ha (Dương Long Trì, 2008). Để hạn chế dịch bệnh người nuôi đã sử dụng một số loại kháng sinh. Việc dùng kháng sinh trị bệnh thường tốn kém và hiệu quả không cao. Theo điều tra của Nguyễn Tấn Duy Phong ( 2008) về tình hình sử dụng thuốc thú y thủy sản ở 2 tỉnh Cần Thơ và An Giang cho thấy chi phí cho việc sử dụng thuốc thú y thủy sản là rất lớn, chiếm hơn 7% tổng chi phí sản xuất. Hơn nữa lượng tồn dư kháng sinh không chỉ ảnh hưởng đến chất lượng sản phẩm, mà còn ảnh hưởng đến sức khoẻ người tiêu dùng. Việc dùng kháng sinh tùy tiện, không đúng loại, liều lượng và cách thức điều trị đã đưa đến hiệu quả điều trị của kháng sinh ngày càng giảm và tạo ra các dòng vi khuẩn kháng thuốc. Từ thực tế nêu trên, đề tài “ Ảnh hưởng của thuốc kháng sinh lên các chỉ tiêu huyết học của cá tra (Pangasianodon hypophthalmus) nhiễm Edwardsiella ictaluri” được thực hiện với mục tiêu xác định ảnh hưởng của các loại kháng sinh thường dùng trong nuôi cá tra lên các chỉ tiêu huyết học của cá tra khỏe và cá bị nhiễm E. ictaluri. Nội dung đề tài: - Xác định ảnh hưởng của các loại thuốc kháng sinh thường dùng trong nuôi cá tra lên các chỉ tiêu huyết học của cá tra nhiễm E. ictaluri. PDF created with FinePrint pdfFactory Pro trial version http://www.fineprint.com [...]... nấm), của virus (tác nhân kháng virus) 2.5.2 Cơ chế tác động của thuốc kháng sinh Theo Bùi Quang Tề (2004) các thuốc kháng sinh có tác dụng độc lập với cấu trúc hóa học chính là do nó được gắn vào các điểm tác dụng, mà các điểm tác dụng này có thể xác định được một cách chắc chắn bằng các phương pháp hóa, lý khác nhau Khi thuốc kháng sinh tác động vào các điểm tác dụng, liền theo đó các quá trình sinh. .. 97,9%) kháng với kháng sinh này Đối với các loại kháng sinh còn lại E ictaluri đề kháng 1 phần với tỷ lệ thay đổi từ 27,7% đến 42,5% - Qua kết quả kiểm tra kháng sinh đồ của Từ Thanh Dung và ctv (2002) trên vi khuẩn E ictaluri cho kết quả kháng với 3 loại thuốc kháng sinh là oxytetracyllin, oxolinic acid và sulphonamid Nguyên nhân là do trong quá trình nuôi cá tra người dân thường sử dụng thuốc kháng sinh. .. có tác dụng diệt khuẩn Các kháng sinh oxytetracyclin, chlotetracyclin và doxycyclin thuộc nhóm tetracycline được dùng phổ biến trong nuôi thủy sản Các kháng sinh này thường được dùng để trị bệnh đường ruột, bệnh nhiễm khuẩn máu, xuất huyết ở các loài cá nước ngọt như cá tra, basa, trắm cỏ (Đỗ Thị Hòa và ctv, 2004) Theo Lê Thị Kim Liên và Nguyễn Thị Như Ngọc (2006) thì các kháng sinh này được dùng để... kim của y học: thời đại của chất kháng sinh Theo Lê Thị Kim Liên và Nguyễn Thị Như Ngọc (2006), kháng sinh là các chất hữu cơ có cấu tạo hóa học phức tạp, có nguồn gốc sinh học (do xạ khuẩn, vi khuẩn và nấm sinh ra), hay do con người tổng hợp nên, có tác dụng một cách chuyên biệt trên một giai đoạn chính yếu trong chu trình biến dưỡng của các vi khuẩn (tác nhân kháng khuẩn), của nấm (tác nhân kháng. .. khuẩn, tác dụng kháng khuẩn hoặc các tác dụng khác trong đó có tác dụng gây nên khả năng kháng thuốc Các kết quả nghiên cứu hiện đại đã chỉ rõ hoạt động của các chất kháng sinh đều cho một hướng giống nhau ở trong cơ thể đơn bào cũng như cơ thể đa bào, nhưng những hiệu quả của các quá trình đó thể hiện bằng những đặc hiệu khác nhau cả về số lượng và cả về chất lượng 2.5.3 Các loại thuốc kháng sinh thường... trimethoprim điểu trị các bệnh như: đỏ mỏ, viêm ruột, xuất huyết, đốm trắng, đốm đỏ, trắng đuôi do vi khuẩn gây ra trên cá, Vibrio 2.6 Những nghiên cứu về sự kháng thuốc kháng sinh của vi khuẩn Edwadsiella ictaluri - Theo kết quả khảo sát của Nguyễn Hữu Thịnh và Trương Thanh Loan (2007) về tính đề kháng kháng sinh của 47 chủng E ictaluri cho thấy 47 chủng E ictaluri phân lập được đều đề kháng với Sulfamethoxazole/Trimethoprim,... nghiệm Qua phương pháp ngâm kháng sinh để điều trị cho cá tra nhiễm bệnh và qua 10 ngày theo dõi thí nghiệm để xác định ảnh hưởng của kháng sinh lên cá tra, kết quả cho thấy kháng sinh có ảnh hớn rất lớn đối với cá tra nhiễm bệnh Tỉ lệ chết (%) Ngày Hình 4.1 Biểu đồ thể hiện tỉ lệ chết của các nghiệm thức trong quá trình thí nghiệm Chú thích: NT1: Amoxicillin, NT2: Flofenicol, NT3: Docycillin, NT4: Flofenicol+Amoxicilin,... lượng kháng sinh tồn tại trong sản phẩm thủy sản (Nguyễn Ngọc Hải, 2004) Ở Việt Nam Qua khảo sát của Nguyễn Ngọc Hải (2004) cho thấy người ương cá đều dùng thuốc hay hóa chất với nhiều chủng loại khác nhau Tỉ lệ thuốc kháng sinh nguyên liệu và thuốc có nguồn gốc kháng sinh chiếm đa số với 23 loại kháng sinh là nguyên liệu gốc và 27 loại có chứa thành phần phối chế chuyên dùng như kháng sinh, tỉ lệ thuốc. .. dịch không đặc hiệu trên cá tra nuôi trong ao bị bệnh mủ gan Luận văn tốt nghiệp Đại Học Khoa Thủy sản Trường Đại Học Cần Thơ 49 trang 18 Phạm Thị Phương Tiến, 2008 Xác định một số yếu tố huyết học trên cá tra (Pangasianodon hypophthalmus) trắng gan trắng mang ở một số tỉnh nuôi cá tra tại Đồng Bằng Sông Cửu Long Luận văn tốt nghiệp Đại Học Khoa Thủy sản Trường Đại Học Cần Thơ 73 trang 19 Phan Thị Hừng,... hình sử dụng thuốc, hóa chất trong nuôi cá tra thâm canh tại An Giang và Cần Thơ Luận văn cao học Khoa Thủy Sản 11 Nguyễn Đức Hiền, 2008 Giải pháp tăng hiệu quả điều trị các bệnh nhiễm khuẩn trên cá tra ( Pangasianodon hypophthalmus) Tạp chí khoa học Thủy Sản, quyển 2, 2008 12 Nguyễn Hoài Hương, 2009 Bài giảng thực hành sinh lý động, thực vật Khoa môi trường và công nghệ Sinh học Trường Đại học Kỹ Thuật . xác định ảnh hưởng của các loại thuốc kháng sinh thường dùng trong nuôi cá tra lên các chỉ tiêu huyết học của cá tra nhiễm E. ictaluri. Cá tra giống. nuôi cá tra lên các chỉ tiêu huyết học của cá tra khỏe và cá bị nhiễm E. ictaluri. Nội dung đề tài: - Xác định ảnh hưởng của các loại thuốc kháng sinh