B GIÁO D C VÀ ĐÀO T O TRƯ NG Đ I H C NƠNG LÂM THÀNH PH H CHÍ MINH KHOA CHĂN NI – THÚ Y KHĨA LU N T T NGHI P TH NGHI M CHI T XU T KHÁNG TH SAU KHI TIÊM VACCINE D CH T HEO CHO TH H tên sinh viên: Nguy n H ng Sơn Ngành: Thú y Niên khóa: 2003 – 2008 Tháng 9/2008 TH NGHI M CHI T XU T KHÁNG TH SAU KHI TIÊM VACCINE D CH T HEO CHO TH Tác gi NGUY N H NG SƠN Khóa lu n đư c đ trình đ đáp ng u c u c p b ng Bác s Thú y Giáo viên hư ng d n BSTY Nguy n Kiên Cư ng PGS.TS Tr n Th Dân Tháng 9/2008 i L I C M ƠN Tôi xin chân thành c m ơn: - Ban Giám Hi u trư ng Đ i h c Nơng Lâm Tp H Chí Minh - Ban ch nhi m Khoa toàn b quý th y cô Khoa Chăn Nuôi – Thú Y, q th y Khoa Cơ B n tồn th cán b cơng nhân viên trư ng h t lịng d y d , giúp đ cho tơi su!t th i gian h c t p t i trư ng - PGS TS Tr n Th Dân BSTY Nguy n Kiên Cư ng ñã tr"c ti p hư ng d n giúp đ tơi th i gian th"c hi n ñ# tài t!t nghi p - Các nhân viên thu c phòng Mi n d ch vi n Pasteur Tp HCM ñã t n tình giúp đ , ch$ b o th i gian làm vi c t i vi n - Con vô ghi ơn ba m% nh&ng ngư i thân gia đình ln t o m i ñi#u ki n t!t v# tinh th n v t ch t cho su!t trình h c t p - Các b n bè ngồi l p h t lịng giúp đ , đ ng viên tơi Nguy n H ng Sơn ii TÓM T T Th i gian nghiên c u: t' tháng 2/2008 ñ n tháng 8/2008 Đ a ñi m nghiên c u: Vi n Pasteur Tp HCM Trung Tâm Thú Y Vùng Tp HCM Phịng thí nghi m Sinh Lý trư ng Đ i h c Nông Lâm Tp.HCM Khu tr i bò trư ng Đai h c Nơng Lâm Tp.HCM V i m(c tiêu tìm hi u phương pháp chi t xu t kháng th b ng ammonium sulphate, ñ ng th i xem xét kh ñáp ng c a th) sau tiêm vaccine dich t , ñ# tài ñư c ti n hành ñ t Đ t th* li#u tiêm vaccine xét nghi m huy t b ng phương pháp ELISA, t t c m u sau xét nghi m đ#u cho k t qu âm tính Đ t xem xét kh ñáp ng c a nhóm th) v i vaccine, nhóm đư c tiêm li#u g p đơi nhóm 1, b ng cách l p công th c b ch c u xét nghi m ELISA Đ ng th i ti n hành thu nh n huy t thanh, t a ammonium sulphate bão hòa, thu h i b ng phương pháp th+m tích đ tinh chi t kháng th (ch$ ti n hành tinh chi t kháng th ñ!i v i huy t thu nh n vào ngày th 30) K t qu tóm t,t c a ñ t sau: - T- l lo i b ch c u trung tính, b ch c u ñơn nhân lâm ba c u nhóm có m chung giai đo n đ u t- l b ch c u trung tính tăng, giai ño n ti p theo tl b ch c u ñơn nhân tăng giai ño n cu!i t- l lâm ba c u tăng - Ti n hành xét nghi m ELISA cho nhóm vào ngày 1, ngày 20 (sau mũi nh,c l i l n 3) ngày 30 (sau mũi nh,c l i l n 4) k t qu là: / nhóm 1, th) th) cho k t qu dương tính cịn th) cho k t qu âm tính vào ngày 20 30 (th) vào ngày 20 nghi ng có kháng th huy t thanh) / nhóm 2, th) th) cho k t qu dương tính cịn th) cho k t qu âm tính vào ngày 20 30 - Qua ph n trăm c ch (PI), nh n th y r ng hàm lư ng kháng th huy t sau tinh chi t cao hàm lư ng kháng th trư c tinh chi t iii M CL C Chương M Đ U 1.1 Đ0T V1N Đ2 1.2 M3C TIÊU VÀ YÊU C4U 1.2.1 M(c tiêu 1.2.2 Yêu c u Chương T NG QUAN 2.1 ĐÁP 5NG MI N D6CH .2 2.1.1 Kháng nguyên 2.1.2 Kháng th 2.1.3 Các y u t! nh hư.ng ñ n kh ñáp ng mi n d ch c a ñ ng v t 2.1.4 Cơ ch hình thành đáp ng mi n d ch .8 2.2 KHÁI QUÁT V2 CÔNG TH5C B7CH C4U 2.3 VIRUS D6CH T8 HEO 10 2.3.1 Đ9c ñi m hình thái 10 2.3.2 Đ c l"c 10 2.3.3 Đ9c m ni c y phân l p 11 2.4 VACCINE D6CH T8 HEO 11 2.3.1 Vaccine th h m i .11 2.3.2 Vaccine ch t 11 2.3.3 Vaccine c ñ c .11 2.5 CHI:T XU1T KHÁNG TH; 13 2.5.1 T a b ng ammonium sulphate .13 2.5.2 Phương pháp tinh chi t b ng h th!ng gel l c .15 2.5.3 Phương pháp tinh chi t b ng s,c ký l"c 16 2.6 LƯ=C DUY>T M?T VÀI NGHIÊN C5U LIÊN QUAN 17 iv Chương N I DUNG VÀ PHƯƠNG PHÁP .18 3.1 TH@I GIAN VÀ Đ6A ĐI;M 18 3.1.1 Th i gian 18 3.1.2 Đ a ñi m 18 3.2 N?I DUNG NGHIÊN C5U .18 3.3 VAT LI>U THÍ NGHI>M 18 3.4 PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN C5U 19 3.4.1 Gây ñáp ng mi n d ch th) 19 3.4.2 L p công th c b ch c u 22 3.4.3 Thu nh n huy t kháng th .22 3.5 CHB TIÊU THEO DÕI 25 3.6 XC LÝ SD LI>U 25 Chương K T QU VÀ TH O LU N .26 4.1 ĐÁP 5NG CEA THF KHI TIÊM VACCINE 26 4.1.1 Đ t .26 4.1.2 Đ t .26 4.2 PH4N TRĂM 5C CH: (PI) CEA HUY:T THANH NGUYÊN VÀ SAU KHI THHM TÍCH 31 Chương K T LU N VÀ Đ NGH 35 5.1 K:T LUAN 35 5.2 Đ2 NGH6 35 TÀI LI U THAM KH O 36 PH N PH L C 38 v DANH SÁCH CÁC CH VI T T T Ch vi t t t Ti ng Anh Ti ng Vi t APC Antigen presenting cell T bào trình di n kháng nguyên ELISA Enzyme – linked immuno K thu t h p ph( mi n d ch sorbent assay g,n enzyme FDC Follicular dendritic cell T bào tua nang Ig Immunoglobulin Globulin mi n d ch MHC II Major histocompatibility Các kháng nguyên phù h p complex class II antigens tI ch c l p II Surface immunoglobulin Globulin mi n d ch màng t SIg bào TH Helper T cells T bào lympho T h tr TI Inducer T cells T bào lympho T c m ng TDTH Delayed type hypersensitivity T bào lympho T gây T cells m n mu n vi DANH SÁCH CÁC HÌNH Trang Hình 2.1 Kháng nguyên Hình 2.2 C u trúc phân t* kháng th HÌnh 2.3 Phương pháp th+m tích 14 Hình 2.4 S,c ký gel l c 15 Hình 2.5 S,c ký l"c 16 Hình 3.1 Chu ng ni th) 18 Hình 3.2 L y máu đ ng m ch gi&a tai 22 Hình 3.3 Th"c hi n th+m tích 24 Hình 3.4 Xét nghi m ELISA 25 vii DANH SÁCH CÁC B NG Trang B ng 2.1 B ng công th c b ch c u c a m t s! gia súc nh) B ng 2.2 M t s! lo i vaccine DTH s* d(ng t i Vi t Nam hi n 12 B ng 3.1 Th i ñi m l y máu tiêm vaccine ñ t 20 B ng 3.2 Th i ñi m l y máu, tiêm vaccine, xét nghi m l p công th c b ch c u ñ t 21 B ng 4.1 K t qu ELISA ñ t 26 B ng 4.2 T- l b ch c u trung tính, đơn nhân lâm ba c u c a th) ñ!i ch ng 27 B ng 4.3 T- l b ch c u trung tính, đơn nhân lâm ba c u c a m i th) nhóm 28 B ng 4.4 T- l b ch c u trung tính, đơn nhân lâm ba c u c a m i th) nhóm 29 B ng 4.5 K t qu ELISA ñ t 31 B ng 4.6 K t qu PI c a huy t nguyên ELISA 32 B ng 4.7 PI c a th) I1 th) I3 nhóm 32 B ng 4.8 PI c a th) II2 th) II3 nhóm 32 B ng 4.9 So sánh PI huy t PI sau th+m tích 33 viii DANH SÁCH CÁC BI U Đ Trang Bi u ñ 4.1 T- l c a ba lo i b ch c u th) ñ!i ch ng qua ngày 27 Bi u ñ 4.2 Trung bình c a ba lo i b ch c u th) nhóm qua ngày 28 Bi u đ 4.3 Trung bình c a ba lo i b ch c u th) nhóm qua ngày 29 Bi u ñ 4.4 PI trung bình c a th) nhóm 1và nhóm vào ngày 20 30 33 Bi u ñ 4.5 PI c a huy t nguyên PI c a d ch th+m tích 34 ix Hình 3.3: Xét nghi m ELISA (http://courses.cm.utexas.edu/jrobertus/ch339k/overheads-1/ ch5_elisa.jpg) Lư ng kháng th kháng protein E2 đư c tính toán d"a vào ph n trăm c ch (PI – percent inhibition) theo công th c sau: OD450 m u th* PI = 100 - × 100 OD450 m u ñ!i ch ng âm Ý nghĩa c a ph n trăm c ch PI < 30 % khơng có kháng th m u th* PI = 31 % - 50 % khơng k t lu n (nghi ng có kháng th m u th*) PI > 50 % có kháng th m u th* 3.5 CHB TIÊU THEO DÕI Ph n trăm lo i b ch c u công th c b ch c u c a máu K t qu xét nghi m ELISA c a huy t d ch chi t 3.6 X LÝ S LI U Tính trung bình vS bi u ñ b ng ph n m#m Microsoft Excel S* d(ng tr,c nghi m F m t y u t! ph n m#m Minitab for Windows 12.21 Chương K T QU VÀ TH O LU N 4.1 ĐÁP *NG CCA TH KHI TIÊM VACCINE 4.1.1 Đ:t Trong ñ t này, m(c tiêu xem xét kh ñáp ng c a th) tiêm vaccine v i kho ng cách dài ngày, l y huy t ki m tra hàm lư ng kháng th b ng xét nghi m ELISA TIng s! m u huy t xét nghi m m u, sau ki m tra t t c m u đ#u âm tính B&ng 4.1: K t qu ELISA ñ t Th) Ngày 30 55 -: âm tính Th) Th) Th) - - Ch t Trong ñ t 1, kho ng cách gi&a hai l n tiêm vaccine 30 ngày; th i ñi m l y máu sau mũi m n c m 30 ngày ho9c sau mũi nh,c l i 25 ngày Hàm lư ng kháng th có th ñ t ñư c ñ$nh ñi m vào ngày th 14 sau tiêm kháng nguyên (d n li u Nguy n Vân Anh, 2005) Tuy nhiên Trung Tâm Thú Y Vùng s* d(ng b kít ELISA dùng heo, s* d(ng th) đ nh y có th th p nên k t qu thu đư c t' đ t âm tính Ngồi ra, li#u vaccine có th nh hư.ng đ n ñáp ng mi n d ch c a th) 4.1.2 Đ:t Trong ñ t này, xem xét kh ñáp ng c a th) v i vaccine ñư c đánh giá thơng qua cơng th c b ch c u xét nghi m ELISA Trư c xét nghi m huy t b ng ELISA m u máu đư c l y đ nh kì đ l p công th c b ch c u Do s! lư ng hai lo i b ch c u ưa acid b ch c u ưa bazơ r t ít, ch$ có t- l c a b ch c u trung tính, b ch c u đơn nhân l n lâm ba c u ñư c xem xét Bi u đ 4.1 cho th y khơng có s" thay ñIi l n t- l c a lo i b ch c u trung tính, lâm ba c u ñơn nhân th) ñ!i ch ng Ngo i tr' s! lư ng b ch c u ñơn nhân cao l n l y máu ñ u tiên, có th th) ñang m,c b nh nh% đư ng hơ h p, sau bình ph(c s! lư ng b ch c u đơn nhân In đ nh tr l i Ngồi t- l b ch c u trung tính tăng nh% t' ngày th ñ n ngày th 20, có th giai đo n th) chu+n b lành b nh Tuy nhiên th) ñ!i ch ng ch$ g m nên s! li u ch$ mang tính tham kh o B&ng 4.2: T- l % b ch c u trung tính, đơn nhân lâm ba c u c a th) ñ!i ch ng B chc u BC trung tính Lâm ba c u BC đơn nhân 71 21 85 10 12 81 15 13 79 20 12 78 30 87 Ngày Bi$u ñA 4.1: T- l % c a ba lo i b ch c u th) ñ!i ch ng qua ngày B&ng 4.3: T- l % b ch c u trung tính, ñơn nhân lâm ba c u c a m i th) nhóm BC trung tính (%) TB I1 I2 I3 ( ± SE) I1 22 20 22 21,33 ± 0,67 66 68 68 67,33 ± 0,67 6,33 ± 0,33 50 25 39 38 ± 7,23 38 65 58 53,67 ± 8,09 6,33 ± 2,19 10 15 23 15,67 ± 4,06 80 78 76 10 5,67 ± 2,6 15 22 41 22,7 ± 10,4 69 80 54 67,67 ± 7,54 15 9,33 ± 2,96 20 13 25 24 20,67 ± 3,84 78 70 71 5,67 ± 1,2 5,67 ± 1,76 86 92 85 87,67 ± 2,19 30 I1: th) c a nhóm 1; I2: th) c a nhóm 1; I3: th) c a nhóm 6 ± 1,73 Ngày Lâm ba c u (%) TB I2 I3 ( ± SE) 78 ± 1,15 73 ± 2,52 BC ñơn nhân (%) TB I1 I2 I3 ( ± SE) MC: m n c m; NL: nh,c l i; TB: trung bình Bi$u đA 4.2: Trung bình c a ba lo i b ch c u th) nhóm qua ngày B&ng 4.4: T- l % b ch c u trung tính, đơn nhân lâm ba c u c a m i th) nhóm BC trung tính (%) Ngày Lâm ba c u (%) II1 II2 II3 TB ( ± SE) II1 II2 II3 19 24 20 21 ± 1,53 66 58 69 24 46 26 32 ± 7,02 66 49 10 18 25 17,33 ± 4,63 79 15 17 28 20 21,67 ± 3,28 20 14 36 11 30 19 TB ( ± SE) BC ñơn nhân (%) II1 II2 II3 TB ( ± SE) 64,3 ± 3,28 10 17 10 12,33 ± 2,33 56 57 ± 4,93 16 9,67 ± 3,48 70 80 76,33 ± 3,18 11 5,67 ± 2,73 80 68 76 74,67 ± 3,53 2 2,67 ± 0,67 20,33 ± 7,88 74 42 76 64 ± 11 11 18 13 14 ± 2,08 8,33 ± 5,33 93 78 88 86,33 ± 4,41 ± 2,08 II1: th) c a nhóm 2; II2: th) c a nhóm 2; II3: th) c a nhóm MC: m n c m; NL: nh,c l i; TB: trung bình Bi$u đA 4.3: Trung bình c a ba lo i b ch c u th) nhóm qua ngày Hai bi u đ 4.2 4.3 trình bày tIng qt s" bi n đIi c a lo i b ch c u trung tính, b ch c u đơn nhân lâm ba c u Đ!i v i b ch c u trung tính, t- l b ch c u tăng lên cao vào ngày th (sau mũi m n c m) S" bi n ñIi ti p theo c a b ch c u là: gi m m nh vào ngày th 10 (sau mũi nh,c l i l n 1), tăng nh% vào ngày th 15 (sau mũi nh,c l i l n 2) r i gi m d n ñ n ngày th 30 Đ!i v i b ch c u ñơn nhân l n, biên ñ dao ñ ng nh&ng ñư ng bi u di n c a nhóm khơng th t s" rõ nhóm Ngồi nhóm tăng nh% vào ngày th 15 (sau mũi nh,c l i l n 2), nhóm tăng cao vào ngày th 20 (sau mũi nh,c l i l n 3) Đ!i v i lâm ba c u, t- l c a lâm ba c u ngư c l i so v i t- l b ch c u trung tính Khi b ch c u trung tính tăng lâm ba c u gi m, b ch c u trung tính gi m lâm ba c u tăng T- l c a b ch c u tăng cao nh t vào ngày th 30 (sau mũi nh,c l i l n 4) M9c dù s" thay ñIi t- l lo i b ch c u hai nhóm khơng gi!ng hồn tồn, có m chung sau: giai ño n ñ u t- l b ch c u trung tính tăng, giai đo n ti p theo t- l b ch c u ñơn nhân tăng, giai ño n cu!i t- l b ch c u lympho tăng S" bi n ñIi c a lo i b ch c u cho th y xu t hi n ti n trình phịng v c a th th) ñ!i v i s" xâm nh p c a virus vaccine d ch t , k t qu phù h p v i d n li u c a Tr n Th Dân Dương Ngun Khang (2006) Ngồi s" bi n đ ng không khác bi t th!ng k (P > 0,05) gi&a hai nhóm th) tiêm li#u vaccine khác V i nh&ng thay ñIi nêu trên, th) c a c hai nhóm có lS đáp ng v i vaccine d ch t heo Tuy nhiên ñây ch$ m i k t qu ban ñ u, mu!n bi t xác th) có th t s" đáp ng mi n d ch hay khơng c n ki m tra kháng th K t qu xét nghi m ELISA đư c trình bày qua b ng 4.5 B&ng 4.5: K t qu ELISA ñ t Th) Th) nhóm ĐC Th i m Th) nhóm I1 I2 I3 II1 II2 II3 - - - - - - - 20 - + - Nghi ng - + + 30 - + - + - + + + - + - + + Sau chi t xu t ĐC: ñ!i ch ng -: âm tính +: dương tính Th) I2 II1 ñư c tiêm l n v i nh&ng li#u vaccine khác tăng d n v n cho k t qu âm tính t t c l n th* ELISA, nói cách khác th) khơng đáp ng mi n d ch đư c tiêm vaccine Th) I3 m9c dù có k t qu ELISA nghi ng vào ngày 20 (có th có kháng th m u) đ n ngày 30 cho k t qu dương tính Nhìn chung, s" chuy n dương c a huy t bi n ñ ng theo cá th th) 4.2 PH N TRĂM *C CH (PI) CCA HUY T THANH NGUYÊN VÀ SAU KHI THDM TÍCH Theo nghiên c u c a Wensvoort ctv (1988) v# m!i quan h gi&a phương pháp ELISA v i phương pháp NPLA (neutralisation peroxidase – linked assay) vi c phát hi n kháng th ch!ng virus d ch t heo huy t thanh, có phương trình tương quan h i quy: Y = - 69,6344 + 11,828X – 0,1791X2 (r = 0,93) Trong Y ph n trăm c ch (PI) xét nghi m b ng phương pháp ELISA X k t qu hi u giá kháng th xét nghi m b ng phương pháp NPLA Như v y gi&a PI hi u giá kháng th có m!i tương quan v i nhau, PI đư c dùng đ so sánh lư ng kháng th có huy t c a m u dương tính t' b ng 4.5 B&ng 4.6: K t qu PI c a huy t nguyên ELISA (*) Th) Th i ñi m I1 I3 II2 Ph n trăm c ch (PI) 83 36 20 87 II3 86 I1 93 I3 II2 66 30 95 II3 93 (*) Huy t nguyên huy t trư c t a b ng ammonium sulphate B&ng 4.7: PI c a th) I1 th) I3 nhóm Th) 20 I1 83 I3 36 Trung bình ( ± SE) 59,5 ± 23,5 30 93 66 79,5 ± 13,5 Th i ñi m B&ng 4.8: PI c a th) II2 th) II3 nhóm Th) 20 II2 87 II3 86 Trung bình ( ± SE) 86,5 ± 0,5 30 95 93 94 ± Th i ñi m D"a vào k t qu b ng 4.7 4.8 cho th y hàm lư ng kháng th huy t vào ngày 30 cao ngày 20 / nhóm 1, hàm lư ng kháng th vào ngày 20 30 c a th) I1 cao nhi#u so v i th) I3, m9c dù ñ#u ñư c tiêm li#u vaccine Cho th y ñ9c ñi m cá th gi& vai trị nh t đ nh đáp ng mi n d ch v i y u t! kháng nguyên xâm nh p / nhóm 2, s" thay ñIi hàm lư ng kháng th c a th) II2 th) II3 khơng đáng k Bi$u đA 4.4: PI trung bình c a th) nhóm 1và nhóm vào ngày 20 30 Bi u ñ 4.4 cho th y PI c a nhóm cao nhóm 1, v y v i li#u vaccine g p đơi cho k t qu PI cao Tuy nhiên sai bi t th!ng kê gi&a nhóm th) khơng ý nghĩa (P > 0,05), đi#u có lS dung lư ng m u nh) K t qu phù h p v i ghi nh n c a Nguy n Vân Anh (2005), theo tác gi hi u giá kháng th huy t mũi nh,c l i sau cao mũi nh,c l i trư c B&ng 4.9: So sánh PI huy t PI sau th+m tích (*) Huy t ngun D ch th+m tích Th) nhóm Th) nhóm I1 I3 II2 II3 93 66 95 93 P ( ± SE) 86,75 ± 6,93 P > 0,05 100 99 99 99 99,25 ± 0,25 (*) Ch$ ti n hành th+m tích v i huy t thu th p vào ngày 30 Bi$u ñ/ 4.5: PI c a huy t nguyên PI c a d ch th+m tích K t qu PI c a huy t nguyên th p PI sau ñã t a v i ammonium sulphate th+m tích, v y vi c t a r*a t a ñã lo i b) m t s! ch t không c n thi t làm cho hàm lư ng kháng th tăng lên Tuy nhiên s" khác bi t khơng có ý nghĩa th!ng kê, v i P > 0,05 Vì v y mu!n chi t xu t đư c nhi#u kháng th ngồi t a b ng ammonium sulphate c n ti n hành s,c kí l"c đ có th thu đư c lư ng kháng th t!i ưu Theo ghi nh n c a Nguy n Th Kim Hi#n (2006) chi t xu t b ng phương pháp s,c kí l"c sS cho hi u qu chi t xu t cao nh t Ngồi k t qu c a chúng tơi chưa phù h p v i ghi nh n c a Nguy n Vân Anh (2005), theo tác gi hi u giá kháng th huy t nguyên cao hi u giá huy t ñã t a v i ammonium sulfate th+m tích S" trái ngư c có th do: - Kháng nguyên tiêm cho th) khác nhau: s* d(ng vaccine DTH, Nguy n Xuân Anh s* d(ng vi khu+n E.coli - Cách xét nghi m khác nhau: s* d(ng phương pháp ELISA, Nguy n Xuân Anh s* d(ng ph n ng ngưng k t ch m !ng nghi m Chương K T LU N VÀ Đ NGH 5.1 K T LU N Ph n trăm lo i b ch c u c a nhóm th) đ t khơng có sai bi t m9c dù nhóm đư c tiêm li#u vaccine g p đơi nhóm Tiêm nh,c l i nhi#u l n v i li#u lư ng tăng d n m c cho phép c a m t lo i kháng nguyên vào th giúp tăng lư ng kháng th m9c dù sai bi t không ý nghĩa v# th!ng kê X* lí huy t b ng cách k t t a v i ammonium sulphate th+m tích làm tăng lư ng kháng th d ch chi t 5.2 Đ NGH S* d(ng lo i kháng nguyên khác nhau, ñ9c bi t ch t n i ti t ñ ñánh giá hi u giá kháng th sau th+m tích TÀI LI U THAM KH O PH N TI NG VI T Nguy n Vân Anh, 2005 Th nghi m s n xu t kháng huy t kháng vi khu n E coli Lu n văn t!t nghi p Khoa CNSH – trư ng ĐH Nông Lâm Tp HCM Tr n Th Dân Dương Nguyên Khang, 2006 Sinh lý v t nuôi NXB Nông Nghi p, TP HCM Nguy n Ti n Dũng, 2002 Phương pháp kh ng ch ch n đốn b nh d ch t l n Vi t Nam Vi n Thú y Qu!c gia (tài li u t p hu n) Lê Văn Hùng, 2002 Giáo trình mi n d ch h c thú y NXB Nông Nghi p, Tp HCM Nguy n Th Kim Hi#n, 2006 Tinh ch kháng nguyên b m t virus viêm gan B Lu n văn t!t nghi p Khoa CNSH – trư ng ĐH Nông Lâm Tp.HCM Nguy n Th Thu H ng, 2003 Xác ñ nh th i ñi m tiêm vaccine d ch t heo l n ñ u thích h p cho heo t đàn nái c a tr i chăn nuôi heo quy mô l n Lu n văn Th c sĩ khoa h c Nông nghi p Khoa CNTY – trư ng ĐH Nông Lâm Tp.HCM Ph m Hoàng Phi t, 2006 Mi n d ch – Sinh lý b nh NXB Y h c, chi nhánh TP HCM PH N TI NG NƯEC NGOÀI Koenen F., Vanderhallen H., Dewulf H., Laevens H and Deluyker ctv,1999 Classical swine fever diagnostic on live animal vaccination Proceedings of the 16th International Pig Veterinary Society Congress, 7/12/2000, Melboune, Australia PP 564 Michael Yiu – Kwong Leung Walter Kwok Ho, 2005 Production, characterization ang applications of mouse anti – grass carp (Ctenopharyngodon idellus) growth hormone monoclonal antibodies Department of Biochemistry, the Chinese University of Hong Kong, Shatin PP 105 – 117 10 Stadejek T., Peijsak Z and Kwinkowski M., 1994 Application of RT – PCR for detection of hog cholera virus The 13th International Pig Veterinary Society Congress – Bangkok, Thailand (Eds Prachak Poomvises) PP 80 11 van Oirschot, 1998 Description of the virus infection Classical swine fever and related viral infection Mantius Nijhoft Publishing PP – 12 Wensvoort G., Bloemrad M and Terpstra C., 1988 An enzyme immunoassay employing monoclonal antibodies and detecting specifically antibodies to classical swine fever virus Vetarinary Microbiology 17: 129 – 140 13 Wilson M.B and Nakane P.K., 1978 Recent developments in the periodate method of conjugating horseradish peroxidase (HRPO) to antibodies Trong: Immunofluorescence and related staining teachniques (W Knap, K Holubar and G Wick) Elsevier / North – Holland Biomedical Press, Amsterdam PP 215 – 224 14 Wurzner R., Schulze M., 1992 Ammonium sulphate precipiation of monoclonal antibodies from hybridoma ascites fluid Trong: Monoclonal Antibodies (Baumgarten H., Peters J H.) Springer – Verlag PP 149 – 156 INTERNET 15 Amanda, 2007 Us and things – Antigen matching (http://usandthings.blogspot.com/2007_06_01_archive.html ) 16 Mechanism of Chorismate Mutase Activity – V Department of Chemistry, University of Maine, Orono (http://chemistry.umeche.maine.edu/CHY431/Chorismate5.html) 17 Robertus, 2004.The Department of Chemistry and Biochemistry The University of Texas at Ausin (http://courses.cm.utexas.edu/jrobertus/ch339k/overheads-1) PH N PH L C Pha hóa ch#t Thành ph)n đ m PBS 10X NaCl 84,74g NaH2PO4.2H2O 10,14g Na2HPO4.12H2O 51,93g NaN3 5g Pha ñ m: cân t t c thành ph n hịa tan nư c c t đ đư c lít dung d ch đ m PBS 10X Pha PBS 1X: 100 ml ñ m PBS 10X + 900 ml nư c c t 1000 ml PBS 1X Pha ammonium sulphate bão hòa 100%: cân 767g (NH4)2SO4 hòa lít nư c c t H n h p ñư c khu y t' có ñun nóng cho tan h t mu!i, b o qu n nhi t ñ phòng Pha ammonium sulphate bão hòa 45%: 450 ml (NH4)2SO4 100% + 550 ml PBS 1X 1000 ml (NH4)2SO4 45% B&ng công th3c b@ch c)u B&ng 1: Công th c b ch c u c a th) ñ!i ch ng B chc u BC ưa bazơ (%) BC ưa acid (%) BC trung tính (%) Lâm ba c u (%) BC ñơn nhân (%) 1 71 21 0 85 10 12 81 15 13 79 20 1 12 78 30 0 87 Ngày B&ng 2: Công th c b ch c u c a nh&ng th) nhóm B ch c u BC ưa bazơ (%) I1 I2 I3 BC ưa acid (%) I1 I2 I3 BC trung tính (%) I1 I2 I3 Lâm ba c u (%) I1 I2 I3 BC ñơn nhân (%) I1 I2 I3 1 0 5 22 20 22 66 68 68 0 50 25 39 38 65 58 10 0 1 15 23 80 78 76 10 15 0 0 22 41 69 80 54 15 20 0 1 13 25 24 78 70 71 30 0 86 92 85 Ngày B&ng 3: Công th c b ch c u c a nh&ng th) nhóm B ch c u Ngày BC ưa bazơ BC ưa acid BC trung tính Lâm ba c u BC đơn nhân (%) (%) (%) (%) (%) II1 II2 II3 II1 II2 II3 II1 II2 II3 II1 II2 II3 II1 II2 II3 1 19 24 20 66 58 69 10 17 11 0 1 24 46 26 66 49 56 16 10 0 1 18 25 79 70 80 11 15 0 17 28 20 80 68 76 2 20 1 14 36 11 74 42 76 11 18 13 30 0 19 93 78 88 ... th' 3.4.1.1 Tiêm vaccine cho th' Vaccine d ch t heo c a NAVETCO m i l tiêm 10 li#u S* d(ng 2ml dung d ch pha vaccine, v y m t li#u có dung tích 0,2ml (li#u tiêm cho heo) Sau l y vaccine vào xi... Các vaccine ngồi vi c b o h heo ch!ng b nh DTH, phân bi t đư c heo có kháng th nhi m b nh hay tiêm vaccine d"a s" phát hi n kháng th kháng protein Erns hay NS3 (vaccine ti u ph n) hay E2 (vaccine. .. cách ngày Sau l y máu ti n hành tiêm vaccine Th) ñ!i ch ng khơng đư c tiêm vaccine / nhóm th) 1, l n ñ u m i th) ñư c tiêm 0,4 ml (g p đơi li#u tiêm cho heo) , l n hai m i th) ñư c tiêm 0,8 ml