... phỏp RT- PCR trờn RNA virus 25 3.5.6 in di sn phm RT- PCR 27 PHN IV: KT QU V THO LUN 28 4.1 Kt qu RT- PCR trờn mu chun ca PRRSV 28 4.1.1 RT- PCR vi Taq beat hot start (Promega) ... 3.2 Thnh phn phn ng RT- PCR 25 Bng 3.3 Chu k nhit cho phn ng RT- PCR 26 Hỡnh 4.1 Sn phm RT- PCR trờn mu RNA chun dựng vi Taq Beat Hot Start 28 Hỡnh 4.2 Sn phm RT- PCR trờn mu RNA chun ... Phn IV KT QU V THO LUN 4.1 Kt qu RT - PCR trờn mu RNA chun ca PRRSV 4.1.1 RT- PCR vi Taq beat u tiờn, thit lp quy trỡnh RT- PCR, chỳng tụi ó tin hnh phng phỏp RT- PCR mt bc trờn mu chun (quy trỡnh...
... xanh kỹthuật RT- PCR Nội dung nghiên cứu Thử nghiệm qui trình Single - Step RT - PCR phát MrNV, XSV từ mẫu chứng dƣơng đƣợc cung cấp từ Ấn Độ Khảo sát số điều kiện qui trình Single - Step RT ... lợi để phát triển kỹthuật multiplex Nhƣ vậy, nhiệt độ 550C theo qui trình Single - Step RT - PCR tối ƣu cho hai mồi MrNV XSV 4.3 KẾT QUẢ ỨNGDỤNG QUI TRÌNH SINGLE - STEP RT - PCR KHẢO SÁT ĐƢỢC ... độ mồi hai virus cho phản ứng Single - Step RTPCR 20 mol cho MrNV 20 mol cho XSV Khảo sát đƣợc nhiệt độ lai tối ƣu hai virus cho phản ứng Single - Step PCR 550C Ứngdụng qui trình khảo sát...
... phỏp RT- PCR trờn RNA virus 25 3.5.6 in di sn phm RT- PCR 27 PHN IV: KT QU V THO LUN 28 4.1 Kt qu RT- PCR trờn mu chun ca PRRSV 28 4.1.1 RT- PCR vi Taq beat hot start (Promega) ... 3.2 Thnh phn phn ng RT- PCR 25 Bng 3.3 Chu k nhit cho phn ng RT- PCR 26 Hỡnh 4.1 Sn phm RT- PCR trờn mu RNA chun dựng vi Taq Beat Hot Start 28 Hỡnh 4.2 Sn phm RT- PCR trờn mu RNA chun ... Phn IV KT QU V THO LUN 4.1 Kt qu RT - PCR trờn mu RNA chun ca PRRSV 4.1.1 RT- PCR vi Taq beat u tiờn, thit lp quy trỡnh RT- PCR, chỳng tụi ó tin hnh phng phỏp RT- PCR mt bc trờn mu chun (quy trỡnh...
... xanh kỹthuật RT- PCR Nội dung nghiên cứu Thử nghiệm qui trình Single - Step RT - PCR phát MrNV, XSV từ mẫu chứng dƣơng đƣợc cung cấp từ Ấn Độ Khảo sát số điều kiện qui trình Single - Step RT ... lợi để phát triển kỹthuật multiplex Nhƣ vậy, nhiệt độ 550C theo qui trình Single - Step RT - PCR tối ƣu cho hai mồi MrNV XSV 4.3 KẾT QUẢ ỨNGDỤNG QUI TRÌNH SINGLE - STEP RT - PCR KHẢO SÁT ĐƢỢC ... độ mồi hai virus cho phản ứng Single - Step RTPCR 20 mol cho MrNV 20 mol cho XSV Khảo sát đƣợc nhiệt độ lai tối ƣu hai virus cho phản ứng Single - Step PCR 550C Ứngdụng qui trình khảo sát...
... vitro tái sinh từ ĐST kiểm tra PMWaV-1 kỹthuật RT- PCR 24 Bảng 3.2 Thành phần mix phản ứng RT- PCR 27 Bảng 3.3 Chu trình nhiệt phản ứng RT- PCR 28 Bảng 4.1 Kết kiểm tra ... tổng số Tổng hợp cDNA từ RNA cDNA khuếch đại phản ứngPCR Điện di kiểm tra sản phẩm PCR Hình 2.7 Phản ứng RT- PCR Do Taq polymerase sử dụng bước PCR không hoạt động RNA nên trước hết cần chuyển ... Bảng 3.2 Thành phần mix phản ứng RT- PCR Hóa chất AMV / Tfl Buffer (5X) (ủ 650C/15 phút trước sử dụng) dNTP (10mM) (vortex trước sử dụng) MgSO4 (25 mM) (vortex trước sử dụng) Thể tích μl 0.5 μl μl...
... vitro tái sinh từ ĐST kiểm tra PMWaV-1 kỹthuật RT- PCR 24 Bảng 3.2 Thành phần mix phản ứng RT- PCR 27 Bảng 3.3 Chu trình nhiệt phản ứng RT- PCR 28 Bảng 4.1 Kết kiểm tra ... tổng số Tổng hợp cDNA từ RNA cDNA khuếch đại phản ứngPCR Điện di kiểm tra sản phẩm PCR Hình 2.7 Phản ứng RT- PCR Do Taq polymerase sử dụng bước PCR không hoạt động RNA nên trước hết cần chuyển ... Bảng 3.2 Thành phần mix phản ứng RT- PCR Hóa chất AMV / Tfl Buffer (5X) (ủ 650C/15 phút trước sử dụng) dNTP (10mM) (vortex trước sử dụng) MgSO4 (25 mM) (vortex trước sử dụng) Thể tích μl 0.5 μl μl...
... kết cho thấy việc sử dụng mồi đột biến để phát vật liệu di truyền từ mẫu DNT làm tăng độ nhạy kỹthuật RT- PCR, nh-ng có d-ơng tính giả [3] V kết luận ứngdụngkỹthuật RT- PCR để xét nghiệm 53 ... tách chiết ARN QIAGEN, Nhật Bản Sinh phẩm cho kỹthuật RT- PCR trực tiếp Roche (Titan one tube RT- PCR System), Nhật Bản Sinh phẩm cho kỹthuật RT- PCR Takara Bio Inc, Nhật Bản Tế bào muỗi Aedes ... chủng virut từ mẫu DNT đ-ợc xác định d-ơng tính kỹthuật RT- PCR nghiên cứu minh chứng cho nhận định Mặc dù mẫu DNT đ-ợc xác định d-ơng tính kỹthuật RT- PCR với mồi virut nhóm Bunya, nh-ng chủng virut...
... lợi để phát triển kỹthuật multiplex Nhƣ vậy, nhiệt độ 550C theo qui trình Single - Step RT - PCR tối ƣu cho hai mồi MrNV XSV 4.3 KẾT QUẢ ỨNGDỤNG QUI TRÌNH SINGLE - STEP RT - PCR KHẢO SÁT ĐƢỢC ... phản ứng Single - Step RT - PCR mẫu RNA mẫu chứng dƣơng nồng độ pha loãng khác với kết nhƣ sau: 31 10 15 20 25 30 M 10 10 A 15 20 25 30 M B Hình 4.3: Kết điện di sản phẩm RT - PCR từ mẫu chứng ... khuếch đại chứng tỏ mồi sử dụng phản ứng Single Step RT - PCR đặc hiệu Để kiểm tra vấn đề ngoại nhiễm tiến hành làm hai mẫu chứng âm (giếng 1, 6), mẫu có đầy đủ thành phần phản ứng trừ RNA mẫu...
... cho phản ứng tuỳ thuộc vào số lƣợng mẫu ban đầu 2.3.5.3 Các yếu tố ảnh hƣởng đến phản ứngPCR 14 DNA mẫu: Phản ứng khuếch đại tối ƣu xảy DNA thật tinh sạch, nhiều kỹthuật chẩn đoán PCR đạt kết ... định cho phản ứng qua nhiều thử nghiệm 2.3.5.5 Số lƣợng chu kỳ phản ứngPCR Trong thực tế sử dụng, số lƣợng chu kỳ phản ứngPCR không vƣợt 40 chu kỳ phân hủy cạn kiệt thành phần phản ứng, xuất sản ... phƣơng pháp nhƣ Northern blot Ngoài ra, RT- PCR kết hợp với kỹthuật RFLP dễ dàng phát đột biến đa hình đoạn khuếch đại xác định độ dài gen biểu mRNA quan tâm biểu mức độ thấp Nhờ RT - PCR khuếch đại...
... gian làm thí nghiệm sử dụng thiết bị vô trùng thực thao tác chiết tách hay phân tích Sử dụng thiết bị vô trùng sử dụng lần Những vật liệu đòi hỏi phải RNA Cần xử lý RNA cho dụng cụ trước thực thao ... sử dụng DEPC chung với dung dịch đệm có Tris Duy trì điều kiện RNase phản ứng Recombinant Rnasin(a,b) giúp giữ RNA không bị thoái hoá cách ức chế vài RNase mà không gây trở ngại cho phản ứng ... hoạt Để thành công, cần phải trì môi trường RNase trước thực thao tác tinh phân tích sau Sau số ý kỹthuật cần ghi nhớ làm việc với RNA: Nguồn lây nhiễm RNA thông thường RNA da, vi khuẩn nấm, chúng...
... Cần hoàn thiện quy trình ứngdụng RT- PCR việc phát virus PRRS, khử băng phụ giảm thành phần phản ứng nhằm làm giảm giá thành cho phản ứng xét nghiệm Thực phản ứng RT- PCR phát virus gây bệnh PRRS ... 24 Sử dụng song song cặp mồi Rovira 1,2 P1, P2 để thực phản ứng RTPCR phát virus PRRS 36 TÀI LIỆU THAM KHẢO Tài liệu tiếng việt Quách Tuyết Anh, 2003 Một số kinh nghiệm ứngdụngkỹthuậtPCR để ... cậy nên định sử dụng quy trình vào việc kiểm tra diện virus PRRS mẫu ly trích sau 4.1.2 RT- PCR với Taq polymerase Biorad ABgene Ngoài để thử nghiệm khả số loại Taq khác kỹthuật RTPCR bước để phát...
... Kỹthuật RT- PCR RNA virus Để thực phản ứng phiên mã ngược khuếch đại đoạn cDNA sau phiên mã ngược với độ nhạy độ đặc hiệu cao, sử dụngkỹthuật RT- PCR bước nhằm hạn chế lây nhiễm Trong phản ứng ... chu kỳ nhiệt cho phản ứng trình bày sau Thành phần phản ứng RT- PCR: Bảng 3.2 Thành phần phản ứng RT- PCR Thành Phần DDung dịch gốc Thể tích Nồng độ cuối TaqBeat® Hot Start 1,25 U/viên viên 1,25 ... TaqBeat® Hot Start Taq DNA polymerase công ty Biorad Taq DNA polymerase công ty ABgene để chạy quy trình nhiệt 26 Chu kỳ nhiệt cho phản ứng RT- PCR Bảng 3.3: Chu kỳ nhiệt cho phản ứng RT- PCR Bƣớc Hoạt...
... 11/140 mẫu máu chứa lượng virus phát RT- PCR Ông kết luận kết phản ứng RT- PCR phụ thuộc nhiều vào mẫu phân tích (7).Wagstrom cộng nghiên cứu chứng minh kỹthuật RT- PCR trực tiếp có khả phát RNA virus ... đến tính đặc hiệu hiệu suất phản ứngPCR 2.3.3 Các yếu tố ảnh hƣởng đến phản ứngPCR DNA mẫu Phản ứng khuếch đại tối ưu xảy DNA thật tinh Nhiều kỹthuật chẩn đoán PCR đạt kết tốt với DNA thu nhận ... nghiệm; kỹ kinh nghiệm người thực việc phân tích 2.3 Phƣơng pháp PCRKỹthuật nhân DNA đặc hiệu, gọi phản ứng chuỗi trùng hợp hay kỹthuậtPCR (polymerase chain reaction) Karl Mullis cộng phát minh...
... 2 1.2 Mục tiêu – yêu cầu Mục tiêu Thăm dò khả ứngdụngkỹthuật RT- PCR (Reverse transcriptase polymerase chain reaction) chẩn đoán virus PRRS Yêu cầu - ... RNA từ số mẫu bệnh phẩm - Sử dụng quy trình RT - PCR vừa thiết lập để kiểm tra diện RNA virus huyết dịch nuôi cấy tế bào 3 Phần II TỔNG QUAN TÀI LIỆU 2.1 Hội chứng rối loạn sinh sản hô hấp lợn ... hấp lợn (PRRS) 2.1.1 Giới thiệu Hội chứng rối loạn sinh sản hô hấp lợn – PRRS (porcine reproductive and respiratory syndrome) bệnh gây virus thuộc nhóm Arteriviridae có khả xâm nhiễm vào đại...
... RT- PCR mẫu chuẩn PRRSV 28 4.1.1 RT- PCR với Taq beat hot start (Promega) 28 4.1.2 RT- PCR với Taq polymerase Biorad ABgene 29 4.2 Kết RT- PCR mẫu RNA ly trích 30 4.2.1 RT- PCR ... dụng phản ứng 21 Bảng 3.2 Thành phần phản ứng RT- PCR 25 Bảng 3.3 Chu kỳ nhiệt cho phản ứng RT- PCR 26 Hình 4.1 Sản phẩm RT- PCR mẫu RNA chuẩn dùng với Taq Beat Hot Start ... ảnh hưởng đến PCR 14 2.3.4 Thiết bị dụng cụ cho phản ứngPCR 15 iv Phương pháp RT- PCR 16 2.4 2.4.1 Nguyên tắc phản ứng RT- PCR 16 2.4.2 Các enzyme sử dụng cho phiên...