... trung tâm cơng nghệ gen Các bước cần tiến hành kỹ thuật chuyển nh tựu tạo Mộtsố gen giống công nghệ gen Sơ đồ chuyển gen từ tế bào cho sang tế bào nhận Enzim cắt Restrictaza Enzim cắt Gen cần ... tái tổ hợp vào tế bào nhận? Mộtsố biện pháp đưa ADN tái tổ hợp vào tế bào nhận: Dung dịch CaCl2 Xung điện cao áp I Cơng nghệ gen: Khái niệm cơng nghệ gen: Các bước cần tiến hành kỹ thuật chuyển ... (pomato) BÀI 20.TẠO GIỐNG NHỜ CƠNG NGHỆ GEN I Cơng nghệ gen Khái niệm cơng nghệ gen Cơng nghệ gen qui trình tạo tế bào sinh vật có gen bị biến đổi có thêm gen em cho biết: Cơng nghệ gen gì? Kỹ thuật...
... TRONG ACREMONIUM CHRYSOGENUM» Đặt vấn đề Tổng quan Nội dung phươngpháp Kết luận I ĐẶT VẤN ĐỀ Kháng sinh nhóm thuốc sử dụng phổ biến y học điều trị bệnh viêm nhiễm vi sinh vật gây Cephalosporin ... Một chất kháng sinh hợp chất tổng hợp ta từ thể sống ức chế trình sống vi sinh vật nồng độ thấp” Trong số kháng sinh nhóm β-lactam sử dụng nhiều phổ biến Các Cephalosporin C kháng sinh bán ... (g/l): Khoai tây: 300 Glucose: 20 Thạch: 15 pH = – (Theo môi trườngsố 30,JCM) CON ĐƯỜNG SINH TỔNG HỢP CPC III. NỘI DUNG VÀ PHƯƠNG PHÁP Tạo chủng Acremonium chrysogenum mang ADN tái tổ hợp Quy...
... hàng gen Tách chiết tinh axit nucleic Mộtsố nguyên tắc Tách chiết ADN Các dung môi hữu l m nớc, thay đổi môi trờng điện môi kết tủa protein & ADN Độ pH thờngtrung tính kiềm (7,0 8,5) Phenol, ... nucleic Mộtsố nguyên tắc Tách chiết aRN Để tách chiết mARN, ngời ta thờng dùng cột Oligo dT celluloza, cột hấp thụ từ tính với biotin-oligo(dT) Định tính v định lợng ADN dựa phơng pháp điện ... alcohol (vd EtOH, MeOH, 2-propanol) đợc dùng để kết tủa axit nucleic Các muối (vd acetate) trung hòa điện tích v l m giảm khả tan axit nucleic To -20oC / 0oC (1/2h 24h) 10 Tách chiết tinh axit...
... với phươngpháp trên, tải nạp cho hiệu suất cao Như vậy, đến có nhiều phươngpháp hóa học, hóa lý, học sinh học để đưa DNA tái tổ hợp vào tế bào chủ Tùy đối tượng yêu cầu cụ thể, phươngpháp ... giữ màng Các phân tử phân cực qua màng hỗ trợ bên Nhiều phươngpháppháttriển để vượt qua rào cản này, cho phép đưa DNA phân tử khác vào tế bào nghiên cứu Mộtphươngpháp kỹ thuật xung điện Kỹ ... Perrny, 2001) Phươngpháp này, trước tiên sử dụng cho Xeponus, chứng tỏ thành công chuột Tuy nhiên không cho kết cao phươngpháp vi tiêm vào tiền nhân phươngpháp đơn giản nhiều Phươngpháp ISCI...
... nhánh pháttriển mau lẹ công nghệ sinh học, với việc sản xuất vaccine chúng trở thành phương tiện quan trọng sách y tế cộng đồng nước pháttriển xét lâu dài, việc ứng dụng kháng thể đơn dòng cótriển ... Phán 1997 Di truyền học Phân tử NXB Giáo Dục Hoàng Trọng Phán 1999 "Giới thiệu công nghệ sinh học" ; "Cơ sở 277 khoa học công nghệ sinh học" Trong: Chuyên đề Công nghệ Sinh học (Tài liệu BDTX giáo ... DNA tái tổ hợp công nghệ sinh học nói chung pháttriển kinh tế-xã hội đất nước ta kỷ XXI, Chính phủ Nghị 18/CP ngày 11/4/1994 "Phương hướng pháttriển công nghệ sinh học Việt Nam đến năm 2010" Đây...
... Đợc tách từ tuyến ức bê (Chang & Bollum, 1971) Xúc tác phản ng gắn dNTP v o phía đầu ADN m không cần mạch khuôn Gọi tắt l Terminal transferase ứng dụng: (1) Đánh dấu đầu phân tử ADN (2) Tạo đầu ... TCGA, ứng dụng: (1) Bảo vệ trình tự giới hạn bên trình tự mã hóa, (2) Thay đổi tính đặc hiệu số enzym giới hạn Ví dụ: Bình thờng enzym giới hạn ScrFI cắt trình tự CCNGG; sau xử lý M HpaII, ... dòng tế b o chủ để nhân lên th nh nhiều Nhân dòng gen biết trình tự Phân lập gen: Tách ADN tổng số nhân gen (PCR) sử dụng mồi đặc hiệu kiểm tra sản phẩm điện di gel agarose/polyacrylamide cắt...
... Enzym giới hạn (restriction endonuclease) Mộtsố enzym giới hạn cắt mạch đơn Tên enzym Dde I Hae III Hga I Hha I Hinf I Hin PI Mnl I Rsa I Taq ... cách tạo đoạn lai ARN/ADN, (2) loại đầu poly(A) phân tử mARN điện di để l m giảm tợng nhiễu phân tích ARN, (3) loại bỏ phân tử mARN tổng hợp cADN 40 Các Enzym làm đứt gãy liên kết phosphodieste ... DNA ligase Xúc tác hình th nh liên kết phosphodieste hai phân đoạn ADN nằm kề, có 5-P, có 3-OH Cầncó trình tự đối diện vị trí nick translation ứng dụng: Nối đoạn polynucleotit tổng hợp gián...
... Endonucleaza / methylaza Enzym đa chức nucleaza / methylaza, đa tiểu phần, 250.000 dalton II III Cofactor Cơ chất ATP Mg2+ SAM Cắt ngẫu nhiên phân tử ADN sợi kép cách trình tự giới hạn 4000 - 7000 bp Mg2+...
... 35 45 kb 26 véctơ cosmid 27 véctơ cosmid 28 véctơ thoi Các véctơ plasmid, phage v cosmid cần trình tự khởi đầu chép khác tùy theo loại tế b o chủ (trừ E coli) Các véctơ thoi chép E coli nh tế ... chuẩn có kích thớc > 35-45 kb (vd gen dystrophin ngời có kích thớc đến 2000kb), nh nghiên cứu pháttriển đợc véctơ nhiễm sắc thể nhân tạo nấm men mang đoạn c i ADN d i từ 200 đến 500 kb Véctơ ... véctơ cosmid L véctơ lai plasmid v phage , mang u điểm hai véctơ n y: (1) khả tự tái số lợng lớn plasmid, (2) có khả đóng gói in-vitro nh phage Có khả mang đoạn ADN c i có kích thớc...
... véctơ plasmid u điểm Cấu trúc đơn giản, kích thớc nhỏ Dễ tinh sạch, dễ phân tích đoạn tái tổ hợp Có thể nhân lên với số lợng lớn, tốc độ nhanh Nhợc điểm Đôi khi, hiệu suất biến nạp v o tế b o ... eukaryote Không tách dòng đợc phân đoạn ADN kích thớc lớn (> 10 kb) 23 véctơ Phage Phần lớn xuất phát từ phage Kích thớc khoảng 48,5 kb Có thể mang đoạn ADN c i đến ~20 kb (virut đóng gói ADN...
... Kích thớc c ng nhỏ, kích thớc đoạn xen c ng lớn Trình tự nucleotit đợc biết đầy đủ Có trình tự khởi đầu chép phù hợp tế b o chủ Nhận biết nhờ gen thị gen đánh dấu Có vị trí gắn phân tử ADN ngoại...
... chung Mục đích Phân lập gen từ hỗn hợp nhiều gen tế b o, để phân tích v nghiên cứu gen riêng lẻ Nhân dòng gen đợc phân lập lên số lợng lớn, để đáp ứng đủ cho nhu cầu nghiên cứu Khả tạo gen/tổ...
... thụ tinh bất thường nhiễm sắc thể người chứa, nguyên nhân phổ biến thất bại mang thai (35% trường hợp) Những bất thường nhiễm sắc thể phát sinh từ sai sót giảm phân, thường giảm phân I; xảy ... giảm phân I o em gái nhiễm sắc trình giảm phân II Hợp tử thiếu nhiễm sắc thể ("đơn nhiễm") pháttriển để khai sinh (ngoại trừ cho với nhiễm sắc thể X ) Ba nhiễm sắc thể ("tam nhiễm") gây ... thường giảm phân I; xảy thường xuyên (90%) hình thành trứng trình hình thành tinh trùng; trở nên thường xuyên người phụ nữ lứa tuổi Aneuploidy - việc đạt hay toàn nhiễm sắc thể - bất thường...
... PCR Phươngpháp PCR phươngphápphổ biến dùng để phân lập trình tự nucleotide (gen) từ genome sinh vật dựa primer đặc hiệu cho trình tự Phươngpháp PCR đơn giản tốn thời gian hai phươngpháp ... Điện biến nạp Đây kỹ thuật hiệu để biến nạp vi khuẩn Hai thôngsố quan trọng phương thức loại tế bào vi khuẩn tần số xung điện cần thiết Thể tích dung dịch tế bào thường dùng 30 µL (tương ứng với ... E.coli sinh trưởng 37oC môi trườngcó Amp IPTG + X-gal Vi khuẩn E.coli chứa vector tái tạo vòng pháttriển thành khuẩn lạc có màu xanh Vi khuẩn E.coli chứa vector tái tổ hợp pháttriển thành khuẩn...
... khuẩn (plasmid) - Nối đoạn gen cần thiết với ADN vi khuẩn thu đợc ADN tái tổ hợp Sơ đồ công nghệ cấy truyền gen hay kỹ thuật tái tổ hợp gen - ADN tái tổ hợp đợc cấy trở lại vi khuẩn - Vi khuẩn đợc ... ờng dùng E.Coli E.Coli mang số đặc điểm thuận lợi cho việc cấy truyền gen: E.Coli mang ADN dạng vòng E.Coli sinh sản nhanh nhờ gen tái tổ hợp đợc nhân nhanh chóng với số lợng lớn 3 ng dng Công ... chn ging giu dinh d ng, chn ging khỏng thuc tr c Chuyn gen ng vt phc v nghiờn cu khoa hc Mộtsố thành tựu công nghệ ADN Việt nam Nâng cao sản lợng lúa nhờ thành tựu công nghệ gen.( Viện...
... phẩm sau tách chiết cầncó độ tinh hàm lượng đủ cho nghiên cứu, dùng phươngpháp đo quang phổ để xác định số hấp phụ, tù đánh giá độ tinh hàm lượng cần thiết Hoặc dùng phươngpháp điện di gel thạch ... thống lấy từ tế bào động vật.Biện pháp làm giảm chi phí nhiều so với phươngpháp cũ, đồng thời lại thân thiện với môi trường KIẾN NGHỊ: Khuyến khích ứng dụng ,phát triển công nghệ sản xuất insulin ... tính trạng theo mong muốn - Những hiểu biết sâu sắc đại phân tử sinh họcsở khoa học kỹ thuật gen( kỹ thuật di truyền) mà khởi đầu kỹ thuật AND tái tổ hợp - Kỹ thuật AND tái tổ hợp gồm bước sau:...
... thớc lớn plasmid, nên phân tích phức tạp Số phage hình th nh tế b o thấp số plasmid 25 véctơ cosmid L véctơ lai plasmid v phage , mang u điểm hai véctơ n y: (1) khả tự tái số lợng lớn plasmid, (2) ... nucleic Mộtsố nguyên tắc Tách chiết aRN Để tách chiết mARN, ngời ta thờng dùng cột Oligo dT celluloza, cột hấp thụ từ tính với biotin-oligo(dT) Định tính v định lợng ADN dựa phơng pháp điện ... hàng gen Tách chiết tinh axit nucleic Mộtsố nguyên tắc Tách chiết ADN Các dung môi hữu l m nớc, thay đổi môi trờng điện môi kết tủa protein & ADN Độ pH thờngtrung tính kiềm (7,0 8,5) Phenol,...