... ETEC trì đủ lượng nước thể có triệu chứng tiêu chảy d Phát chẩn đốn Việc phát nhóm ETEC dựa vào phát độc tố LT và/hoặc ST Có nhiều phương pháp phát ETEC như: radioimmunoassay, enzyme linked immunosorbent ... hoạt hóa protein kinase (A kinase) từ dạng khơng hoạt động thành dạng hoạt động Điều dẫn đến phosphoryl kênh chloride hoạt động mức bình thường màng tế bào biểu mơ Kết kích thích tế bào mào ruột ... phản ứng tùy thuộc số lượng mẫu ban đầu DNA mẫu ban đầu 105 cần khoảng 25 – 30 chu kỳ, DNA mẫu 102 – 1 03 số chukỳ phải 35 – 40 Giai đoạn biến tính (denaturation) Giai đoạn ủ bắt cặp (anealing)...
... 1992) cho khuẩn lạc riêng lẻ thuộc nhóm để xác định E coli 3.3 .3 Li trích DNA Theo Cebula ctv (1995), kết hợp với ý kiến Cerna (20 03) Botteldoorn (20 03) , việc ly trích DNA thực sau: thu khoảng ... tâm 130 00 vòng 21 phút Để yên hút phần dung dịch phía làm DNA khuôn mẫu (DNA xét nghiệm) Mẫu Thịt Phân MAC SMAC (37 C/24h) Pepton (vancomycin, (37 oC/24h) o cefixime) (37 oC/24h) CT - SMAC (37 o ... NA Multiplex- PCR Sơ đồ 3. 1 Qui trình phân lập, định tính phát gen độc lực E coli 22 3. 3.4 Qui trình multiplex – PCR (1) Trình tự đoạn mồi sử dụng multiplex – PCR Bảng 3. 1 Trình tự đoạn mồi sử...
... nhủ heo nhỏ tốt hết đàn heo giống cần kiểm tra đểphát tình trạng nhiễm virus PRRS đàn 2.2.4 Kỹ thuật PCR đểphát PRRSV Kỹ thuật PCR phát triển đểphát RNA virus PRRS mẫu bệnh phẩm Vì không cần ... nên PCR tốn thời gian đểphát so với phương pháp nuôi cấy tế bào PCR xem phương pháp có độ nhạy độ đặc hiệu cao 12 Nhiều dạng khác PCR sử dụng, hầu hết chúng sử dụng đểphát vùng ORF7, ORF6 hay ... cao khoảng 30 ngày đến 50 ngày (IFA), 35 ngày đến 50 ngày (IPMA), 30 ngày đến 50 ngày (ELISA), 60 ngày đến 90 ngày (SNV) sau nhiễm, sau bị giảm dần Yoon cộng thí nghiệm chứng minh phát kháng...
... 20 3. 3.2 Cp primer phn ng RT-PCR 20 3.3 .3 Vt liu v húa cht cho chit tỏch RNA 21 3. 3.4 Vt liu v húa cht cho in di RNA 21 3. 3.5 Vt liu v húa cht cho RT-PCR 21 3. 3.6 ... theo b kit 31 v 4 .3 in di RNA trờn mu ly trớch 32 4.4 Kim tra c hiu ca cỏc cp primer 33 4.5 RT-PCR s dng cp primer P1, P2 33 PHN V: KT LUN V NGH 35 5.1 Kt lun ... CAG GCG CAC WGT ATG 14 938 n 14918 (Lelystad) 32 48 n 32 28 (VR 233 2) Rovira CCT CGT CAA GTA TGG CCG GTA di on gene nhõn lờn: Rovira GAC TGT CAA ATT AGC TTG CAC CC 400bp 3.3 .3 Vt liu v húa cht cho...
... điểm thực 18 3. 1.1 Thời gian .18 3. 1.2 Địa điểm 18 3. 2 Nội dung thực .18 3.3 Phương pháp thực .18 3. 3.1 Vật liệu thí nghiệm .18 3. 3.2 Cách lấy mẫu ... Thử sinh hóa 20 3.3 .3 Ly trích DNA 20 3. 3.4 Qui trình multiplex – PCR .22 3. 3.5 Điện di, đọc kết 23 KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 24 4.1 Kết phát gen độc lực E coli ... 3. 3.2 Nuôi cấy phân lập E coli 19 3. 3.2.1 Môi trường nuôi cấy 19 3. 3.2.2 Qui trình phân lập, định tính .19 (1) Nuôi cấy phân lập 19 (2) Chọn khuẩn lạc E coli 20 (3) ...
... vt2e 0 66,6 33 ,3 0 10 3 tiêu chảy (%) Bề mặt 30 30 10 10 10 0 0 0 0 (%) 36 13 11,1 13, 8 0 16,6 36 ,1 8 ,3 % 11,1 Phân bê thịt bò Tổng 5,56 N: Số lượng mẫu khảo sát n: Số lượng mẫu phát E coli có ... cao - mẫu (55,56%) phát gen lt 32 - mẫu (33 ,33 %) phát gen vt2e - mẫu (22,22%) phát gen hly - mẫu (11,11%) phát gen stx1 - mẫu (11,11%) pháthiên gen eae - Khơng phát gen stx2 sta E coli mẫu phân ... mơi trường SMAC, multiplex – PCR phát 3/ 9 khuẩn lạc mang gen lt (33 ,33 %); 4/9 khuẩn lạc mang gen stb (44,44%) 1/9 khuẩn lạc mang gen vt2e (11,11%) 34 Bảng 4.4 Kết phát gen độc lực cho số khuẩn...
... 20 3. 3.2 Cp primer phn ng RT-PCR 20 3.3 .3 Vt liu v húa cht cho chit tỏch RNA 21 3. 3.4 Vt liu v húa cht cho in di RNA 21 3. 3.5 Vt liu v húa cht cho RT-PCR 21 3. 3.6 ... theo b kit 31 v 4 .3 in di RNA trờn mu ly trớch 32 4.4 Kim tra c hiu ca cỏc cp primer 33 4.5 RT-PCR s dng cp primer P1, P2 33 PHN V: KT LUN V NGH 35 5.1 Kt lun ... CAG GCG CAC WGT ATG 14 938 n 14918 (Lelystad) 32 48 n 32 28 (VR 233 2) Rovira CCT CGT CAA GTA TGG CCG GTA di on gene nhõn lờn: Rovira GAC TGT CAA ATT AGC TTG CAC CC 400bp 3.3 .3 Vt liu v húa cht cho...
... thực .19 3. 2 Nội dung 19 3.3 Phương pháp nghiên cứu 19 3. 3.1 Lấy mẫu 19 3. 3.2 Nuôi cấy, phân lập ly trích DNA vi khuẩn E coli 20 3.3 .3 Xác định gen stx1, ... SƠ ĐỒ Sơ đồ 3. 1 Phân lập, xác định E coli phát gen độc lực 22 BIỂU ĐỒ Biểu đồ 4.1 Tổng kết kết phát gen độc lực E coli mẫu khảo sát 40 x DANH SÁCH CÁC BẢNG BẢNG TRANG Bảng 3. 1 Số lượng ... từ phân bê tiêu chảy 36 4.5 Kết phát gen độc lực E coli phân lập từ mẫu bề mặt thịt bò 38 4.6 Tổng kết kết phát gen độc lực E coli mẫu khảo sát .39 KẾT LUẬN VÀ ĐỀ NGHỊ ...
... 11,11 22,22 55,56 66,67 33 ,33 10 3 1 0 0 tiêu chảy (%) 30 30 10 10 10 0 0 Phân bê Bề mặt 0 0 0 0 thịt bò (%) 0 0 0 0 36 13 4 % 36 ,1 16,67 8 ,33 Tổng 11,11 8 ,33 5,56 11,11 13, 89 N: Số lượng mẫu khảo ... Tổng 1 0 0 Tỉ lệ(%) 80 30 70 30 10 10 10 0 0 Kết phát gen độc lực E coli phân lập từ 10 mẫu phân bê tiêu chảy trình bày bảng 4.5 - Trong tổng số 10 mẫu phân có 3/ 10 (30 %) mẫu phát E coli mang gen ... kết nghiên cứu Beutin ctv (19 93) Ông cho phân bò nguồn lưu cữu chủ yếu nhóm STEC Ở phân heo tiêu chảy, phát E coli mang gen stb (66,67%), lt-I (55,56%), vt2e (33 ,33 %), hly (22,22%), stx1 (11,11%),...
... (66,67%) phát gen stb, chiếm tỉ lệ phát cao - mẫu (55,56%) phát gen lt - mẫu (33 ,33 %) phát gen vt2e - mẫu (22,22%) phát gen hly - mẫu (11,11%) phát gen stx1 - mẫu (11,11%) pháthiên gen eae - Không phát ... vt2e (28,57%) (3) khuẩn lạc riêng lẻ màu trắng môi trường SMAC, multiplex – PCR phát 3/ 9 khuẩn lạc mang gen lt (33 ,33 %); 4/9 khuẩn lạc mang gen stb (44,44%) 1/9 khuẩn lạc mang gen vt2e (11,11%) ... nghiên cứu Moon ctv (1986), Harel ctv (1991), Handl ctv (1992), Lê Thị Mai Khanh (2004) - Có 3/ 9 mẫu (33 ,33 %) E coli từ phân heo tiêu chảy mang gen vt2e Tuy độc tố VT2e không liên quan đến bệnh người,...
... Multiplex- PCR Sơ đồ 3. 1 Phân lập, xác định E coli phát gen độc lực 34 3.3 .3 Xác định gen stx1, stx2, eae, hly, stx2e, sta, stb, lt-I E coli phân lập multiplex - PCR - Việc phát gen độc lực E coli ... 10 khuẩn lạc hồng MAC (Ký hiệu HM) – 10 khuẩn lạc trắng SMAC (Ký hiệu TS) – 10 khuẩn lạc đỏ hồng SMAC (Ký hiệu HS) 32 – 10 khuẩn lạc trắng CT – SMAC (Ký hiệu TC) (3) Tăng sinh, giữ gốc ... phân lập vi khuẩn E coli sau: 33 Mẫu Phân MAC (37 oC/24h) Chọn 6-10 khuẩn lạc đỏ hồng Peptone (vancomycin, cefixime) (37 oC/24h) Thịt SMAC (37 oC/24h) CT - SMAC (37 oC/24h) Chọn 6-10 khuẩn lạc trắng...
... coli riêng lẻ phân lập từ phân bò tiêu chảy 30 Bảng 4 .3 Kết phát gen độc lực nhóm khuẩn lạc đại diện cho E coli phân heo tiêu chảy 33 Bảng 4.4 Kết phát gen độc lực cho số khuẩn lạc E coli riêng ... 35 Bảng 4.5 Kết phát gen độc lực nhóm khuẩn lạc đại diện cho E coli phân bê tiêu chảy 36 Bảng 4.6 Kết phát gen độc lực nhóm khuẩn lạc đại diện cho E coli mẫu bề mặt thịt bò 38 Bảng ... thương dạng bám dính phá hủy (attaching - and – effacing, A/E) ruột già vi khuẩn bám chặt vào tế bào biểu mô (Donnerberg ctv, 19 93) Gen eae tìm thấy nhóm EPEC Gen eae số gen nằm vùng gây bệnh 35 ,5...
... PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU .19 3. 1 Thời gian địa điểm thực 19 3. 2 Nội dung 19 3.3 Phương pháp nghiên cứu 19 3. 3.1 Lấy mẫu 19 3. 3.2 Nuôi cấy, phân lập ly trích ... cấy, phân lập ly trích DNA vi khuẩn E coli 20 3.3 .3 Xác định gen stx1, stx2, eae, hly, stx2e, sta, stb, lt-I E coli phân lập 23 3 .3. 4 Điện di gel aragose đọc kết điện di 25 KẾT ... lạc chọn 27 4.2 Kết phát gen độc lực E coli phân lập từ phân bò tiêu chảy 28 4 .3 Kết phát gen độc lực E coli phân lập từ phân heo tiêu chảy 32 4.4 Kết phát gen độc lực E coli...
... Microbiol 4: 147 - 1 53 36 Mainil J G., and Daube G., 2005 Verotoxigenic Escherichia coli from animals, humans and foods: who’s who ? Journal of Applied Microbiology Rev 98: 133 2 134 4 37 Monday S., Whittam ... 175 - 182 39 34 Leyer G J., Wang L., and Johnson E A., 1995 Acid adaptation of Escherichia coli O157:H7 increases survival in acidic foods Appl Environ Microbiol 61: 37 52 - 37 55 35 Lingwood ... 38 for isolation of Escherichia coli O157:H7 from raw vegetables J Food Mic 74: 161 - 1 63 23 Gyles C L 1992 Escherichia coli cytotoxins and enterotoxins Can J Microbiol 38 : 734 - 746...