Báo cáo: Công nghệ thực hành vi sinh Báo cáo thực hành SVTH: Phan Thị Thảo Hiếu Môn: Công nghệ vi sinh Lớp: 06S Công nghệ vi sinh phận quan trọng công nghệ sinh học, môn nghiên cứu hoạt động sống VSV nhằm khai thác tốt khả kỳ diệu VSV vào quy trình sản xuất quy mơ cơng nghiệp, để đạt điều ta phải từ hiểu biết VSV phương pháp để phân lập, nhân giống, bảo quản… giống VSV quy mơ phịng thí nghiệm, Nội dung trình bày cách cụ thể trình phân lập, tuyển chọn, nghiên cứu hình thái, ứng dụng chủng vi khuẩn lactic sản xuất số sản phẩm lên men truyền thống Báo cáo thực hành Trang Báo cáo thực hành SVTH: Phan Thị Thảo Hiếu Môn: Công nghệ vi sinh Lớp: 06S CHUẨN BỊ DỤNG CỤ NUÔI CẤY VI SINH VẬT: 1.Các loại hoá chất, dụng cụ, vật liệu Hoá chất để rửa dụng cụ: - Dung dịch Sulfurbicromate - Cồn 900 - Xà phòng - Chlorine 3% Dụng cụ, vật liệu: Dụng cụ, vật liệu Số lượng Dụng cụ, vật liệu Số lượng Ống nghiệm 27 Đĩa petri 18 Pipet(1-10-20ml) 18(1 ml), Bình tam giác(100-250 2(100 ml) 8(250 20 ml) 2(500 ml) Đũa thuỷ tinh Que cấy vòng Cối, chày sứ Que gạt Phiến kính Lá kính Bình định mức (100- 1(100 Cốc thuỷ tinh (100- 2(100 1000 ml) 1(500 1000 ml) 2(500 1(1000 ml) 2(1000ml) Phễu thuỷ tinh Ống đong (100-1000 ml) 1(100ml) 1(1000ml) Bông khơng thấm nước Giấy báo Bóp cao su Rổ nhựa Tủ sấy Dao nhỏ 2.Chuẩn bị dụng cụ nuôi cấy vi sinh vật Nguyên tắc chung - Các loại dụng cụ dùng để nuôi cấy vi sinh vật phải đạt độ trung tính, thật trong, không bị nứt mẻ - Dụng cụ bao gói phải đảm bảo thật khơ - Bao gói phải thật kín cẩn thận để dụng cụ sau khử trùng phải đảm bảo vô trùng lớp giấy gói lấy sử dụng dễ dàng - Sau khử trùng cần phải đảm bảo vô trùng cho dụng cụ Tiến hành: Các ống nghiệm, đĩa petri, pipet cũ bị nhiếm khuẩn phải hấp khử trùng 121 C 15 phút sau rửa lại thật kỹ sau mang bao gói Phương pháp bao gói dụng cụ gồm khâu : -Làm nút cho ống nghiệm, bình tam giác, pipet… -Bao gói cho hầu hết dụng cụ thuỷ tinh Cách làm nút bông: *Với ống nghiệm: -Lấy miếng không thấm nước cuộn lại -Dùng ngón tay ấn vào cuộn bơng Báo cáo thực hành Trang Báo cáo thực hành SVTH: Phan Thị Thảo Hiếu Môn: Công nghệ vi sinh Lớp: 06S *u cầu: nút có kích thước dộ chặt vừa phải -Đầu nút trịn, phần ngồi lớn phần ống nghiệm -Lấy nút hay đóng vào dễ dàng *Với bình tam giác, chai lọ có kích thước lớn, làm tương tự với ống nghiệm lượng bơng sử dụng phải nhiều Cách bao gói dụng cụ: Tất dụng cụ sau làm nút bơng phải bao gói cẩn thận, phần có nút giây dầu hay giấy A4 để hấp khử trùng nút không bị ướt đảm bảo điều kiện vô trùng tốt Cách làm: Cắt bao giấy hinh chữ nhật tuỳ theo kích thước dụng cụ cần bao gói Gấp cạnh băng giấy, quấn băng giấy quanh đầu có nút bơng đặt đầu gấp vào phía thành miệng dụng cụ, gấp mép băng giấy cho kín, gập ống giấy sát vào nút mặt trước hai bên, gập phần giấy lại cài sâu vào Dùng tờ giấy báo lớn bao gói ống nghiệm (khoảng 20-50 ống bọc) Đối với dụng cụ như: pipet, que gạt, đũa thuỷ tinh, cối chày sứ… phải dùng giấy báo bao kín tồn Với đĩa petri bao gói 5-10 đĩa kích cớ bọc giấy báo *Yêu cầu: Phần giấy bao ngồi phải chặt, kín Phương pháp khử trùng: Sử dụng phương pháp khử trùng sức nóng khơ( dùng tử sấy) Cho dụng cụ bao gói vào tủ sấy, đóng tủ, bật cơng tắc để tủ hoạt động Xoay núm để điều chỉnh kim đồng hồ nhiệt độ kim đồng hồ thời gian với số nhiệt độ 165oC (hoặc 170oC), 2h( 1,5h) Sau sấy, phải để nguội tới 60oC lấy dụng cụ ra, tránh lấy dụng cụ nhiệt độ tủ cao dụng cụ thuỷ tinh dễ nứt vớ Các dụng cụ sau sấy mà giấy bao có màu vàng *Yêu cầu với dụng cụ nuôi cấy vi sinh vật: Các dụng cụ nuôi cấy vi sinh vật phải đạt độ trung tính, thật khơng bị nứt mẻ Dụng cụ bao gói phải đảm bảo thật khơ Bao gói phải thật kín cẩn thận để dụng cụ sau khử trùng phải đảm bảo vô trùng lớp giấy gói lấy sử dụng dễ dàng Sau khử trùng cần phải đạt vô trùng tuyệt đối cho dụng cụ cách bảo quản tủ sấy 30oC, cần dùng lấy dùng Báo cáo thực hành Trang Báo cáo thực hành SVTH: Phan Thị Thảo Hiếu Môn: Công nghệ vi sinh Lớp: 06S CHUẨN BỊ MÔI TRƯỜNG ĐỂ PHÂN LẬP TUYỂN CHỌN GIỐNG VI KHUẨN LACTIC 1.Mục tiêu: Chuẩn bị môi trường để tuyển chọn, phân lập chủng vi khuẩn lactic Môi trường đặc thù: Môi trường cà chua Khử trùng môi trường áp suất cao nồi hấp *Dụng cụ thiết bị: • Tủ vơ trùng • Nồi hấp áp lực • Cân kỹ thuật, cân phân tích • Bếp điện • Đèn cồn Môi trường phân lập: 500ml mơi trường có CaCO3 Mơi trường ni cấy: 600ml mơi trường khơng có CaCO3 Mơi trường 1l Mơi trường phân cấy (600ml) trường 500ml)( có CaCO3 ) Glucose(g/l) 10 Cao nấm men(g/l) 10 CaCO3(g/l) 2.5 Nước ép cà chua(lọc kỹ)(ml 400 200 240 2.5 Dung dịch muối A(ml): − K2HPO4: 2,5g − KH2PO4: 2,5g − nước cất 250m Dung dịch muối B(ml): 2.5 − MgSO4: 10g − NaCl: 0,5g 0,5g − FeSO4: − MnSO4: 0,5g − Nước cất: 250m Nước cất 600 300 360 Thạch 20 10 12 pH 6.9 6.9 6.9 *Môi trường chuẩn bị theo trình tự: Cà chua đem thái lát, băm nhỏ, dùng vải lọc vắt lấy nước, lấy phần nước đun bếp điện lị vi sóng, sau dùng thấm nước lọc lấy nước trong, đong lượng nước ca chua cần thiết cho loại môi trường Với cốc thuỷ tinh khác, cho thạch vào thêm nước cất, khuấy đều, đun sôi bếp điện, dùng đũa thuỷ tinh khuấy cho thạch tan hết Song song dùng cốc thuỷ tinh khác cho nước cất vào cho thành phần lại, đun bếp điện đun cho tan hết Thành phần Báo cáo thực hành Trang Báo cáo thực hành SVTH: Phan Thị Thảo Hiếu Môn: Công nghệ vi sinh Lớp: 06S Chú ý: tổng nước cất dùng nước cất chuẩn bị phần chuẩn bị hố chất (tuỳ theo mơi trường kê theo bảng) Hồ trộn thành phần trên, ta mơi trường cần dùng Nhanh chóng phân phối mơi trường dinh dưỡng vào ống nghiệm có nút bơng vơ trùng phễu để tránh môi trường bám vào ống nghiệm( lượng môi trường cho vào khoảng 1/3 ống nghiêm- không cho q nhiều mơi truờng) mơi trường có CaCO3 phân phối vào bình tam giác loại 250ml có nút bơng vơ trùng Chú ý: mơi trường cà chua mơi trường cung cấp khống, vitamin, có độ pH thích hợp với đa số VSV (pH ≈ 6,9 ) nên không cần phải chuẩn pH, cịn mơi trường khác khoai tây dinh dưỡng nhiều khơng có độ pH thích hợp nên khơng sử dụng nhiều, sử dụng phải chuẩn pH môi trường đến 6,9 * Chuẩn bị nước cất để pha lỗng mẫu thí nghiệm: Dùng pipét 10 – 20ml, hút xác vào ống nghiệm vô trùng ống 9ml nước cất Đậy chặt nút không thấm nước Dùng ống đong cho vào bình tam giác loại 250ml có nút bơng vơ trùng bình 99ml nước cất * Khử trùng môi trường, làm thạch nghiêng thạch đĩa: *Phương pháp khử trùng môi trường: Sử dụng nồi hấp áp lực cao, cách tiến hành sau: − Bật công tắc nguồn nồi hấp − Mở nắp nồi cho nước vào nồi hấp đến mức quy định ( ngang ngang đáy nồi được) − Xếp dụng cụ chứa môi trường vào giỏ đưa vào nồi hấp − Đóng chặt nắp nồi hấp − Gạt cần sang chế độ Lock − Cài đặt chế độ hấp khử trùng mode 2( 1210C 25phút) − Để nồi tự động, nhiệt độ giảm xuống khoảng 600 lấy mơi trường làm thạch nghiêng thạch đứng… chờ thạch nguội cho vào tủ ấm bảo quản để sử dụng dần − Các ống nghiệm chứa mơi trường đặc làm thạch nghiêng để cấy chuyền bảo quản giống *Cách làm thạch nghiêng: Các ống nghiệm khử trùng xong đặt tư nghiêng góc cho mặt nghiêng phần thạch sâu dạt yêu cầu Có thể dùng pipét lớn nhỏ khác đặt mặt phẳng bàn để làm bề mặt nghiêng tuỳ theo lượng môi trường ống nghiêm nhiều hay Để yên môi trường đặc lại, bề mặt thạch nghiêng phải nhẵn, phẳng, không gồ ghề liên tục, thạch không dính nút bơng Đối với mơi trường thạch đứng ống nghiệm sau lấy khỏi nồi hấp, dựng thẳng đứng thạch đông cứng đượcoảmoi trường khoảng 1/3 ống nghiệm) Báo cáo thực hành Trang Báo cáo thực hành SVTH: Phan Thị Thảo Hiếu Môn: Công nghệ vi sinh Lớp: 06S PHÂN LẬP GIỐNG VI KHUẨN LACTIC: Mẫu: nem chua Chuẩn bị mẫu: Nem chua bóc vỏ, lấy phần khơng có ớt , tỏi hay tiêu, loại có chứa chất kháng sinh thực vật( fitoxit có tỏi chẳng hạn) ảnh hưởng gây ức chế VSV cần phần lập Cân 1g nem cho vào cối sứ, nghiền mịn, mịn tốt Pha loãng mẫu thập phân: Qúa trình pha lỗng mẫu tiến hành tủ cấy vô trùng, Thực lửa đèn cồn, điều kiện vô trùng -Chuẩn bị dụng cụ cho vào tủ cấy: Đèn cồn Đĩa petri, Pipet Ống nghiệm chứa môi trường ống nghiệm chứa nước cất trùng kỹ Giá ống nghiệm, Bình tam giác -Bật đèn tử ngoại tủ cấy cấy vô trùng khoảng 30-60 phút( thao tác lặp lại trước lần cấy chuyền) Nhớ che chắn cẩn thận tia tử ngoại có hại -Sau tắt đèn tử ngoại, bật quạt gió, lúc sau tiến hành cấy Cho toàn nem cối vào ống nghiệm (chứa 9ml nước cất chuẩn bị trên) lắc nhẹ ống nghiệm cách tay cầm nghiêng ống nghiệm, lắc nhẹ đáy ống lên lòng bàn tay kia, khoảng 2-3 phút cho đều, ta mẫu pha loãng 10-1, tiếp tục pha loãng mẫu nồng độ 10-2 , 10-3, 10-4, 10-5, 10-6- dựa vào sơ đồ dưới: Dùng pipet loại 1ml hút 1ml mẫu ống nghiệm thứ cho vào ống nghiệm chứa nước cất vô trùng thứ hai, Trộn dung dịch cách hút lên thổi xuống 3-5 lần nhờ bóp cao su gắn đầu pipet., ta có độ pha lỗng 10-2 -Tiếp tục thao tác tương tự để có độ pha lỗng 10-3, 10-4, 10-5, 10-6 Báo cáo thực hành Trang Báo cáo thực hành SVTH: Phan Thị Thảo Hiếu Môn: Công nghệ vi sinh Lớp: 06S Cách gieo cấy mẫu để tách khuẩn lạc vi khuẩn: Phương pháp tạo hộp đổ: -Lấy ống nghiệm có độ pha lỗng 10-3, 10-5, 10-6, ống lấy 1ml, (dùng pipet 1ml) cho lên bề mặt đĩa petri, Tương ứng với độ pha loãng thực đĩa petri -Việc phân phối mẫu môi trường vào đĩa petri phải thực tủ cấy vô trùng -Đĩa petri phải hồn tồn vơ khuẩn -Tiến hành song song với kỹ thuật vô trùng -Dùng thạch trơ chuẩn bị bình tam giác (sau đun nóng, làm nguội đến khoảng 500C) rót trực tiếp mơi trường phân lập( mơi trường có CaCO3 ) đĩa petri vừa cấy mẫu xong, đổ lớp mỏng vừa phải, bề mặt thạch thật khô -Lưu ý nắp đĩa mở phần cho môi trường vào đĩa -Đậy nắp lại, xoay đĩa tròn theo1 hướng nhẹ nhàng để tránh môi trường dấy lên thành nắp đĩa, đồng thời nhằm phân bố vi sinh vật môi trường sau dễ quan sát, tách khuẩn lạc -Để yên môi trường nguội đặc lại -Dùng giấy báo gói đĩa petri thật kỹ, ghi đầy đủ tên mẫu, độ pha lỗng, ngày cấy…rồi đem lật ngược ni tủ ấm 37oC, sau khoảng 24-48 TUYỂN CHỌN, CẤY CHUYỂN VÀ BẢO QUẢN GIỐNG VI KHUẨN LACTIC 1.Mục tiêu Tuyển chọn giống vi khuẩn lactic có hoạt lực mạnh Cấy chuyền bảo quản giống môi trường thạch nghiêng 2.Tuyển chọn cấy chuyền giống vi khuẩn lactic: *Tuyển chọn: Sau nuôi tủ ấm 24-48 khuẩn lạc xuất Mơi trường cà chua dùng mơi trường tập trung nên có khuẩn lạc vi khuẩn lactic lẩn khuẩn lạc lồi vi khuẩn khác, acêtic(hình giọt-núi lứa-nhăn nheo), hay nấm mốc… Khuẩn lạc vi khuẩn lactic khuẩn lạc có vịng phân giải CaCO3 , hình giọt, hình dẹt, trơn nhẵn, màu trắng đục Tiến hành tuyển chọn khuẩn lạc mọc tách biệt có vịng phân giải CaCO3 lớn để cấy chuyền vào ống nghiệm thạch nghiêng, hay đĩa petri nhằm thí nghiệm Nhận xét chủng lactic phân lập từ nem có hoạt lực mạnh chủng lactic phân lập từ mẫu giá, sữa chua nước dưa cải Do đĩa mẫu nem khuẩn làc lactic mọc nhiều dộ pha lỗng 10-6-, khuẩn lạc mọc to, vịng phân giải CaCO3 lớn, môi trường suốt đĩa petri có độ pha lỗng 10-3 *Cấy chuyền giống sang ống nghiệm thạch nghiêng: Chuẩn bị dụng cụ bỏ vào tủ cấy: Đèn cồn Đĩa petri, Pipet Ống nghiệm chứa môi trường ống nghiệm chứa nước cất trùng kỹ Giá ống nghiệm, Bình tam giác Báo cáo thực hành Trang Báo cáo thực hành SVTH: Phan Thị Thảo Hiếu Môn: Công nghệ vi sinh Lớp: 06S -Bật đèn tử ngoại tủ cấy cấy vô trùng khoảng 30-60 phút( thao tác lặp lại trước lần cấy chuyền) Nhớ che chắn cẩn thận tia tử ngoại có hại Sau tắt đèn tử ngoại, bật quạt gió, lúc sau tiến hành cấy -Sát trùng tay kỹ với cồn trước vào cấy -Đốt đỏ que cấy lửa đền cồn Dùng tay trái mở nắp đĩa petri vừa đủ cho que cấy vào, tay phải cầm que cấy chạm vào bề mặt thạch cho nguội lấy giống vịng que cấy Đậy nắp đĩa petri lại Tay trái cầm ống nghiệm thạch nghiêng, tay phải mở nút bơng kẻ ngón tay hơ miệng ống nghiệm lửa đền cồn, đưa que cấy có giống vào tận đáy ống nghiệm Nhẹ nhàng để đầu que cấy tiếp xúc với bề mặt thạch đưa từ lên theo đường zích zắc cấy theo đường vệt thẳng Thao tác phải nhanh, xác, ý suốt q trình cấy ln ln để ống nghiệm nghiêng góc khoảng 450 để tránh vi sinh vật khác rơi vào ống nghiệm Các thao tác thực trước lửa đèn cồn Hơ lại miệng ống nghiệm nút lửa đèn cồn Ghi tên mẫu, ngày cấy chuyền, nhóm thực giấy bao gói nút bơng ống nghiệm Chuyển ống nghiệm vào nuôi tủ ấm 370C, sau 24-48 giống phát triển đem bảo quản tủ lanh để tủ ấm đến lần thí nghiệm thời gian ngắn PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU ĐẶC ĐIỂM HÌNH THÁI, SINH LÝ, SINH HỐ CỦA VI KHUẨN 1.Mục đích: Làm tiêu giọt ép vi sinh vật Nhuộm Gram, phân biệt tế bào gram âm, gram dương Xác định số đặc điểm sinh lý, sinh hoá chủng lactic phân lập 2.Quan sát đặc điểm hình thái: 2.1 Tiêu giọt ép: Dùng que cấy pipet vô trùng lấy lượng nhỏ tế bào vi khuẩn ống giống để làm vết bôi Làm vết bôi hiến kính: Cho giọt dịch chứa vi khuẩn đầu que cấy lên mặt phiến kính sạch, vi khuẩn trạng thái sinh khối phải hoà sinh khối với giọt nước cất vô khuẩn để tạo huyền phù Đặt kính lên giọt huyền phù vi khuẩn cho khơng tạo bọt khí Quan sát tiêu kính hiển vi điện tử 2.2 Nhuôm Gram: Nguyên tắc: Khi nhuôm Gram, vi khuẩn Gram dương có lớp vỏ dày tạo peptidoglican giữ phức chất tạo thành tím gentian iot có màu tím cộng thêm màu thuốc nhm bổ sung có màu tím hồng Vi khuẩn Gram âm có lớp vỏ mỏng hơn, không giữ phức chất nên có màu hồng thuốc nhuộm bổ sung Báo cáo thực hành Trang Báo cáo thực hành SVTH: Phan Thị Thảo Hiếu Môn: Công nghệ vi sinh Lớp: 06S Hố chất: -Dung dịch a: Tím gentian 1g Rượu etylic96% 10ml -Dung dịch b: Phenol tinh chế lại 5g Nước cất 100ml Trộn dung dịch a b với -Dịch lugol: KI 2g Iot tinh thể 1g Hoà 2g KI vào 5ml nước cất, sau cho thêm 1g iot, chờ cho iot tan hết thêm nước cho đủ 300ml -Thuốc nhuộm :lấy 1ml thuốc nhuộm fuchsin trộn với 9ml nước cất Tiến hành: Chuẩn bị mẫu: Lấy ống giống vi khuẩn lactic có sinh khối tương đối nhiều, lấy nước cất cho vào ống, lắc tay cho tế bào vsv hồ vào nước, pha lỗng mẫu tuỳ theo lượng sinh khối ống nghiệm cho làm tiêu tế bào vsv không nhiều Dùng đũa thuỷ tinh lấy giọt vsv pha loãng dàn phiến kính tạo vết bơi, chiều dày vết bôi không nên vượt chiều dày tb vi khuẩn Cố định vết bôi lửa đèn cồn., tránh vết bôi tiếp xúc trực tiếp với lửa Nhỏ thuốc nhuộm tím gentian lên vết bơi vsv, giữ khoảng 1-2 phút Đổ thuốc nhuộm thừa phiến kính đi, rửa nước cất, nhỏ dịch lugol lên vết bơi giữ từ 1,5-2 phút, (hoặc quan sát vết gentian bi bong khỏi phiến kính lên dịch lugol )rồi đổ Dùng cồn rửa mẫu khoảng 30s, rửa lâu làm tế bào vsv biến dạng, khó quan sát Rửa tiêu lại nước cất sau làm khơ lửa đèn cồn Nhỏ thuốc nhuộm bổ sung (fuchsin)lên chỗ vết bôi giữ khoảng phút Rửa nước sau đợi khơ, đem quan sát kín hiển vi Tế bào gram dương bắt màu tím gram âm bắt màu tím hồng 2.1.Kết quả: Các tế bào vi khuẩn lactic có màu tím hồng đậm, có hình que, hình hạt đậu, có tế bào phân chía, hầu hét có thành tế bào màu Tím hồng Báo cáo thực hành Trang Báo cáo thực hành SVTH: Phan Thị Thảo Hiếu Môn: Công nghệ vi sinh Lớp: 06S 3.Xác định đặc điểm sinh lý,sinh hố: 3.1Hoạt tính catalaza: Hoạt tính catalaza đặc điểm đặc trưng đa số vsv hiếu khí, vsv kị khí bắt buộc nhiều loại vsv ưa khí khơng sinh catalaza Catalaza phân huỷ H2O2 thành O2 nước: H2O2 →H1O2 +O2 Nhỏ giọt oxy già (H2O2 10%) lên khuẩn lạc vi khuẩn lactic, dùng khuẩn lạc đĩa petri ni cấy thí nghiệm trước Kết quả: Có nhiều bọt khí giọt ỗy già phí khuẩn lạc làm giọt dịch có màu trắng, chứng tơ vi khuẩn lactic có enzym catalaza tế bào vk lactic 3.2 Quan hệ với ôxy: Dùng môi trường thạch đứng cấy vk lactic vào cách cấy, quy trình tương tự thạch nghiêng dùng que cấy đầu nhọn cấy theo kiểu chích sâu thạch đứng, đưa que cấy sát thành ống nghiệm ý khơng để dính thành ống, đưa que cấy thọc sâu xuống thạch phần sát thành ống nghiệm xuống sâu đáy ống nghiệm, thọc vị trí dối xứng quanh ống thạch *Kết quả: Sau ngày, sinh khối vsv xuất đường cấy dạng vệt trắng, từ bề mặt thạch xuống đáy ống nghiệm dọc theo chiều dày môi trường, chứng tỏ lactic vsv kỵ khí khơng bắt buộc Báo cáo thực hành Trang 10 Báo cáo thực hành SVTH: Phan Thị Thảo Hiếu Môn: Công nghệ vi sinh Lớp: 06S ỨNG DỤNG LÊN MEN LACTIC TRONG QUÁ TRÌNH MUỐI CHUA DƯA CẢI: Vật liệu hoá chất: -Dưa cải bẹ -NaCl -Đường -Dung dịch KmnO4 2% -Dung dịch AgNO3 amoniac -Dung dịch H2SO4 10% Các bước tiến hành: *Quy trình nhân giống: Giống gốc: ống nghiệm Giống cấp1: bình tam giác 250ml +Thành phần mơi trường nhân giống cấp 1: Môi trường rau cải Nước rau cải: 1000ml Đường kính: 20g Cải muỗng cắt nhỏ, cân 300g cho vào lít nước, đun sơi, lọc lấy nước trong, lọc bơng thấm nước Sau bổ sung thêm nước đến 1000ml Phân môi trường vào bình tam giác 250ml, cấy vào bình ống giống gốc Sau ni tủ ấm 370C 48 *Muối chua dưa cải: Dưa cải bẹ rửa sạch, để héo, cắt khúc Có thể làm chua nhanh cách sử dụng dịch dưa cải lần trước Cải bẹ: 1Kg Pha 1000ml dung dịch nước muôi với thành phần : NaCl: 30g Đường kính 10g Xếp khúc cải vào thẩu nhựa ếm chặt Đổ từ từ dung dịch nước muối vào thẫu đến ngập cải Lên men nhiệt độ phòng từ 2-3 ngày *Định lượng acit lactic: Dùng dung dịch NaOH 0,1 với chất thị phenolphtalein 1% Cho vào bình tam giác dung tích 100ml: 10ml dịch lên men vi khuẩn (nước dưa cải) thêm vào 2-3 giọt phenolphtalein 1%.và 20ml nước cất trung tính chuẩn độ dung dịch NaOH 0,1 N xuát màu hồng nhạt bền vững Ghi thể tích NaOH tiêu tốn V Thực mẫu đối chứng nước cất Ghi thẻ tích NaOH tiêu tốn Vo Kết quả: (V − Vo ) × 90 Tính kết theo cơng thức: = (V − Vo ) × 0,9 ∑a = 10 Kết thu được: V=6,5; Vo= 0,01 Thay số vào ta hàm lượng acid tổng số ∑ a =(V − Vo) × 0,9 = (6,5 − 0,01) × 0,9 = 5,84 g / l Báo cáo thực hành Trang 11 Báo cáo thực hành SVTH: Phan Thị Thảo Hiếu Môn: Công nghệ vi sinh Lớp: 06S ỨNG DỤNG LÊN MEN LACTIC TRONG SẢN XUẤT SỮA CHUA Sơ đồ quy trinh : Sản xuất sữa chua quy mô gia đinh, dùng giống sữa chua Sữa đặc pha loãng theo tỷ lệ: sữa:3 nước Cho lon nước đun sôi vào chậu, cho sữa vào, khuấy đều, sữa nguội khoảng 45-50oC, cho giống hộp sữa chua vào, khuấy đều., phân phối vào hũ nhựa, nuôi nhiệt độ phịng, khoảng 10-12h ta có sản phẩm sữa chua ăn liền, ngon ăn lạnh Báo cáo thực hành Trang 12 Báo cáo thực hành SVTH: Phan Thị Thảo Hiếu Môn: Công nghệ vi sinh Lớp: 06S ĐỊNH LƯỢNG TẾ BÀO VI SINH VẬT Định lượng trực tiếp buồng đếm hồng cầu (Goriaoep) Buồng đếm hồng cầu Gơriaep có tất 25 lớn, lớn lại có 16 nhỏ, diện tích nhỏ= 1/400m2 Chuẩn bị mẫu: Pha loãng mẫu nấm men tới 10-2 f Lau kính thật miếng bơng thấm nước có tẩm cồn Lấy miếng bơng có thấm nước chùi sơ khe buồng đếm, để phiến kính dễ dính Cho dịch tế bào lên kính, dậy kính lên khe buồng đếm, cho bọt khí khu vực buồng đếm, lấy bơng thấm dịch nước bên buồng đếm có Đưa buồng đếm đặt lên khay kính hiển vi, quan sát vật kính x40, chỉnh vi ốc ánh sáng để thấy rõ Tế bào nấm men lên buồng đếm hình cầu trong, sáng có màng tế bào bao quanh, nguyên sinh chất suốt Có tế bào riêng biệt có tê bào nảy chồi cịn dính với Tiến hành đếm tế bào theo đường chéo buồng đếm hình vng Quan sát vật kính x40 lớn chiếm hầu hết diện tích vi trường nên khó xác định đếm, ta phải xác định góc, sau xác định kề Kết quả- xử lý kết quả: b Số tế bào tính theo cơng thức: X TB / ml = × 4000 × 1000 c Trong đó: a: số tế bào ô lớn, a= 22 b: độ pha lỗng mẫu , b= 10-2 c: số nhỏ có lớn chọn , c=16x5=80 Vậy: X = 22 × 10 −2 × 4000 × 1000 = 11000tb / ml 80 Định lượng gián tiếp – phương pháp MNP: Đếm khuẩn lạc, đếm tế bào sống nên sai số lớn Báo cáo thực hành Trang 13 Báo cáo thực hành SVTH: Phan Thị Thảo Hiếu Môn: Công nghệ vi sinh Lớp: 06S Báo cáo thực hành Trang 14 ... khuẩn lạc, đếm tế bào sống nên sai số lớn Báo cáo thực hành Trang 13 Báo cáo thực hành SVTH: Phan Thị Thảo Hiếu Môn: Công nghệ vi sinh Lớp: 06S Báo cáo thực hành Trang 14 ... chủng vi khuẩn lactic sản xuất số sản phẩm lên men truyền thống Báo cáo thực hành Trang Báo cáo thực hành SVTH: Phan Thị Thảo Hiếu Môn: Công nghệ vi sinh Lớp: 06S CHUẨN BỊ DỤNG CỤ NUÔI CẤY VI SINH. . .Báo cáo thực hành SVTH: Phan Thị Thảo Hiếu Môn: Công nghệ vi sinh Lớp: 06S Công nghệ vi sinh phận quan trọng công nghệ sinh học, môn nghiên cứu hoạt động sống