Nghiên cứu sự đa dạng di truyền của nấm Metarhizium anisopliae dựa vào trình tự gen Pr1 và vùng rDNA-ITS

Thông tin tài liệu

 TR   *************  S Metarhizium anisopliae  GEN Pr1 -ITS   SINH HC : 2003 - 2007 :   9/2007  TR   ************* KHO Metarhizium anisopliae  GEN Pr1 -ITS : : ThS.   TS.   9/2007 iii N         TS, ThS. , CN. Lu Ph L     ,     , i  .   iv T  Metarhizium anisopliae Pr1 -ITS  .   Metarhizium anisopliae .  Pr1 -ITS  -  Metarhizium anisopliae Metarhizium anisopliae var. anisopliae. - Pr1 10 Metarhizium anisopliae. Pr1 10 . Pr1 7 1091bp. -   Metarhizium anisopliae trong  . 95-100%,  g 94-99% Pr1 -  4  2  9 . 1. - 5.8S v2 Metarhizium anisopliae  .  99-100%  92-100% ng rDNA-ITS. v M  TRANG   .iii  iv  v  .viii  . ix  x 1.  1 1.1.  . 1 1.2.   2 1.2.1.  2 1.2.2.  2  . 2 2.  3 2.1. Metarhizium anisopliae . 3 2.2.  . 6 2.3.  . 7 2.4.  2.5. Metarhizium anisopliae  . 8 2.5.1.  . 8 2.5.2.  . 9 2.6. Pr1 10 2.7. Pr1 . 10 vi 2.8.-rDNA . 10 2.8.1.  10 2.9. Metarhizium anisopliae Pr1 -ITS . 12 2.9.1.  . 12 2.9.2.  14 2.10. Pr1 -ITS . 14 3.  . 16 3.1.  . 16 3.1.1.  . 16 3.1.2.  16 3.2.  . 16 3.2.1.  16 3.2.2.  17 3.2.3.  17 3.3.  . 18 3.4.  18 3.4.1. Metarhizium anisopliae . 18 3.4.2. Pr1 . 18 3.4.3. -ITS . 21 3.5. Pr1  22 3.6.  22 3.7. Tinh s . 24 3.8.  24 4.  . 26 4.4. Metarhizium anisopliae  vii  . 26 4.5.  28 4.6. 1-5.8S-ITS2. 28 4.7. ITS1-5.8S-ITS2 29 4.8.  Pr1 .36 4.9. Pr1………………………………………………………36 5.  42 5.4.  42 5.4.2. Pr1 . 42 5.4.3. -ITS 42 5.5.  . 43 5.6.  . 43 6.  44 7.  . 47 viii      RBCQ9  BDQ96 n 9 6 BDTV5  BDTN  BDBD7 :   7 SCLLLA  RNBT  RNLA :  ng : nano gram nm : nano mol g : micro gram m : micro mol M  l : micro  TE : tris EDTA dNTP : deoxyribonucleotide  5  trphosphate TAE : tris acetic EDTA UI : unit international bp : base pair Kb : kilo base ctv  PCR : Polymerase Chains Reaction Rpm : Revolutions per minute ix NG  TRANG  2.1 Metarhizium anisopliae . 3  3.1  Metarhizium anisopiae  16  3.2  Pr1 METPR1/METPR4 . 19  3.3  Pr1 METPR2/METPR5 . 20  -ITS .21 Bng 3.5  23 Bng 4.1  Metarhizium anisopliae -ITS. 30 4.2 Metarhizium anisopliae trong A-ITS . 31 Bng 4.3 Metarhizium anisopliae trong  -ITS .33 4.4 Metarhizium anisopliae Pr1 . 37 4.5 Metarhizium anisopliae trong Pr1 38 Bng 4.6 Metarhizium anisopliae trong  Pr1 40 x   TRANG Metarrhizium anisopliae  nhau 5 2.2  . 12 3.1 Pr1 18 3.2  . 21 3.3  24 3.4  . 25 DNA tng Metarrhizium anisopliae 26 4.2 Metarhizium anisopliae  . 27 4.3 Metarhizium anisopliae  . 28  rDNA-ITS 28 Metarhizium anisopliae c d -ITS 32 Metarhizium anisopliae  gi-ITS 34 i gen Pr1 . 36 Metarhizium anisopliae c d gen Pr1 39 4.9 Metarhizium anisopliae  gigen Pr1 . 41 [...]... những đặc điểm trên, đƣợc sự cho phép và phân công của Bộ môn Công Nghệ Sinh Học chúng tôi đã tiến hành thực hiện đề tài Nghiên cứu sự đa dạng di truyền của nấm Metarhizium anisopliae dựa vào trình tự gen Pr1 và vùng rDNAITS “ 1.2 Mục tiêu và yêu cầu đề tài 1.2.1.Mục tiêu Nghiên cƣ́u sƣ̣ đa da ̣ng di truyề n của nhƣ̃ng dòng nấ m Metarhizium anisopliae đƣơ ̣c phân lâ ̣p trên nhiề u đố i tƣơ... anisopliae 2 Nghiên cứu sự đa dạng di truyền của nấm Metarhizium anisopliae dựa vào trình tự vùng rDNA-ITS và gen Pr1 3.4 Phƣơng pháp nghiên cứu 3.4.1 Kiể m tra DNA tổ ng số đƣơ ̣c ly trích tƣ̀ các dòng nấ m Metarhizium anisopliae DNA tổ ng số đƣơ ̣c kiể m tra bằ ng kỹ thuâ ̣t điê ̣n di trên gel agarose 1% với hiê ̣u điê ̣n thế 100V trong 20 phút 3.4.2 Khuếch đại gen Pr1 Hình 3.1: Sơ... của gen gây đô ̣c Pr1 và vùng rDNA-ITS 1.2.2 Yêu cầu đề tài - Kiể m tra DNA đƣơ ̣c ly trích tƣ̀ nhƣ̃ng dòng nấ m Metarhizium anisopliae đƣơ ̣c sƣ̉ du ̣ng trong nghiên cƣ́u - Xác định gen gây độc Pr1 và vùng rDNA-ITS bằ ng kỹ thuâ ̣t PCR - Xác định trình tự gen Pr1 và vùng rDNA -ITS và tìm sƣ̣ khác biê ̣t về trình tƣ̣ giƣ̃a các dòng nấ m Metarhizium anisopliae 1.3 Đối tƣợng nghiên cứu. .. trình tƣ̣ của ribosomal RNA trong giống nấm Metarhizium 2.9.2 Nghiên cƣu trong nƣớc ́ Nhƣ̃ng nghiên cƣ́u về sƣ̣ đa da ̣ng di truyề n trong quầ n thể nấ m Metarhizium anisopliae dƣ̣a vào gen Pr1 và vùng rDNA -ITS ở Việt Nam có rất ít Phầ n lớn nhƣ̃ng nghiên cƣ́u về sƣ̣ đa da ̣ng di truyề n của quầ n thể nấ m Metarhizium anisopliae chỉ dừng lại ở mức độ đa nh giá hình thái của bào... lại (37 chu kỳ) Ủ 3.5 Tiến hành giải trình tự gen gây độc Pr1 và vùng ITS trên nấm Metarhizium anisopliae Sau khi chạy PCR chúng tôi tiến hành đọc trình tự sản phẩm PCR vừa khuếch đại để xác định chính xác đây là đoạn gen gây độc Pr1 và vùng ITS1 – 5.8S – ITS2 nhằm xác định trình tự nucleotide của đoạn gen độc này, từ đó so sánh với nhƣ̃ng trình tƣ̣ trên Genbank Đầu tiên để đạt đƣợc kết quả... sƣ̉ du ̣ng kỹ thuâ ̣t RFLP, giải trình tự và AFLP để phân tích vùng ITS của 50 dòng nấm Beauveria bassiana Trình tự vùng ITS đã chỉ ra sự khác biệt về trình tự của các dòng B.bassiana thấ p hơn 2% Mavridou và ctv (1998) đa phân tich sƣ̣ đa hinh trong loài ́ ̀ Metarhizium anisopliae var anisopliae bằ ng cách sƣ̉ du ̣ng phân tích RFLP đố i với phƣ́c hơ ̣p gen rDNA và mtDNA Dƣ̣a vào viê... 5,8S) và một vùng không phiên mã (NTS) Trong vùng phiên mã, ITS đƣợc tìm thấy trên gen 5,8S rRNA bao gồm ITS1 và ITS2 Hình 2.2: Sơ đồ của các vùng trên rDNA 2.9 Mô ̣t số nghiên cƣu trong và ngoài nƣớc về sƣ ̣ đa da ̣ng của nấ m ́ Metarhizium anisopliae dƣ ̣a vào gen Pr1 và vùng rDNA-ITS 2.9.1 Nghiên cƣu nƣớc ngoài ́ Savita Bagga, Gang Hu, Steven E Screen, Raymond J St.Leger đa phân tich... điện di ngang HorizonR 558 (Life Technologies), máy PCR (BIO-RAD), máy vortex, máy chụp hình gel Bio –Rad, máy đọc trình tự ABI PRISM 3100, các loại pipette 0,5 μl – 10 μl và 10 μl – 100 μl, các loại đầu tip 0,5 μl – 10 μl và 10 μl – 100 μl 3.3 Nội dung nghiên cứu 18 1 Sử dụng kỹ thuật PCR phát hiện gen liên quan tới tính độc (gen Pr1 )và vùng rDNA-ITS của nấm Metarhizium anisopliae 2 Nghiên. .. M .anisopliae và đã chia thành 4 nhóm: Nhóm I gồm có Pr1C Nhóm II đƣợc chia thành hai nhóm phụ có hoạt tính extracellular 13 Nhóm phụ I: gồ m có Pr1A, Pr1B, Pr1G, Pr1I, Pr1K Nhóm phụ II gồm có Pr1D, Pr1E, Pr1F, Pr1J Nhóm III gồm có Pr1H có hoạt tính endocellular Cheng Wang, Milton A Typas, Tariq M Butt (2002) đa sƣ̉ du ̣ng kỹ thâ ̣t Nested-PCR để xác đi ̣nh nhƣ̃ng đô ̣t biế n ở hai gen. .. cách hiệu quả và an toàn hơn Trong các loại vi sinh vật gây hại cho côn trùng đa ng chú ý nhất là ngành phụ nấm bất toàn mà đại di n tiêu biểu là nấm Metarhizium anisopliae- một trong những loài có đặc tính di t côn trùng mạnh nhất Trên thế giới nấm Metarhizium anisopliae là đối tƣợng nghiên cứu của rất nhiều công trình khoa và đã đƣợc thƣơng mại hóa từ lâu – nhƣ là một loại thuốc trừ sâu .  Metarhizium anisopliae var. anisopliae. -  Pr1 10  Metarhizium anisopliae.  Pr1 10 ..  Metarhizium anisopliae  : M. anisopliae var. major   14,0 (18,0) M. anisopliae var. anisopliae

Ngày đăng: 17/11/2012, 09:44

Xem thêm: Nghiên cứu sự đa dạng di truyền của nấm Metarhizium anisopliae dựa vào trình tự gen Pr1 và vùng rDNA-ITS, Nghiên cứu sự đa dạng di truyền của nấm Metarhizium anisopliae dựa vào trình tự gen Pr1 và vùng rDNA-ITS, Đối tƣợng nghiên cứu. Giới thiệu nấm Metarhizium anisopliae., Sơ lƣợc về phƣơng thức xâm nhiễm của nấm ký sinh trên côn trùng., Nghiên cứu trong nƣớc Nghiên cứu ngoài nƣớc, Hoạt tính sinh học. Giới thiệu gen Pr1 Vai trò của protease Pr1 Phƣơng pháp phát hiện gen Pr1 và vùng rDNA-ITS, Khuếch đại gen Pr1 Khuếch đại vùng ITS, Nội dung nghiên cứu Tinh sạch sản phẩm PCR, Phƣơng pháp phân tích trình tự Kết qua ̉ tinh sa ̣ch DNA tởng sớ, Kết quả khếch đại vùng rDNA-ITS Kết quả giải trình tự vùng ITS1-5.8S - ITS2, Kết quả khuếch đại gen Pr1 Kết quả đọc trình tự gen Pr1