Đang tải... (xem toàn văn)
Phân lập và định danh một số loài aspergillus trên hạt đậu phộng ở chợ xuân khánh
Trư ng ð i H c C n Thơ Lu n văn t t nghi p khóa 28 - 2007 TRƯ NG ð I H C C N THƠ KHOA NÔNG NGHI P VÀ SINH H C NG D NG B MÔN CÔNG NGH TH C PH M NGUY N THU MAI PHÂN L P VÀ ð NH DANH M T S LOÀI ASPERGILLUS TRÊN H T ð U PH NG CH XUÂN KHÁNH LU N VĂN T T NGHI P K SƯ Chuyên ngành: CÔNG NGH TH C PH M Mã ngành: 08 Ngư i hư ng d n LÂM TH VI T HÀ NGUY N B O L C Năm 2007 Ngành Công ngh th c ph m - Khoa Nông nghi p Sinh h c ng d ng i Lu n văn T t nghi p khóa 28 - 2007 Trư ng ð i H c C n Thơ Lu n văn t t nghi p ñính kèm tên ñ tài “Phân l p ñ nh danh m t s loài Aspergillus h t ñ u ph ng ch Xuân Khánh” NGUY N THU MAI th c hi n đư c thơng qua h i ñ ng báo cáo lu n văn Giáo viên hư ng d n LÂM TH VI T HÀ Giáo viên ph n bi n NGUY N CÔNG HÀ NGUY N B O L C C n Thơ, 28 tháng năm 2007 CH T CH H I ð NG LÝ NGUY N BÌNH Ngành Cơng ngh th c ph m - Khoa Nông nghi p Sinh h c ng d ng ii Lu n văn T t nghi p khóa 28 - 2007 Trư ng ð i H c C n Thơ L IC MT Em xin chân thành c m t : Quý th y cô Trư ng ð i H c C n Thơ đ c bi t Q th y B Mơn Cơng Ngh Th c Ph m nói riêng ñã t n tâm gi ng d y, truy n ñ t nh ng ki n th c kinh nghi m quý báu cho em su t nh ng năm h c qua ð c bi t em xin thành c m ơn cô Lâm Th Vi t Hà th y Nguy n B o L c - ngư i t n tình hư ng d n truy n ñ t kinh nghi m ki n th c đ giúp em hồn thành t t lu n văn t t nghi p ngành Công Ngh Th c Ph m T p th cán b phịng thí nghi m B Mơn Cơng Ngh Th c Ph m, t p th l p Công Ngh Th c Ph m K28 ñã giúp ñ trao ñ i nh ng ki n th c su t th i gian h c t p th c hi n lu n văn t t nghi p C n Thơ, ngày 14 tháng 06 năm 2007 Sinh viên th c hi n Nguy n Thu Mai Ngành Công ngh th c ph m - Khoa Nông nghi p Sinh h c ng d ng iii Lu n văn T t nghi p khóa 28 - 2007 Trư ng ð i H c C n Thơ M CL C Trang L I NÓI ð U i M C L C ii DANH M C B NG .iv DANH M C HÌNH v TÓM T T vii CHƯƠNG I: ð T V N ð i 1.1 ð T V N ð 1.2 M C TIÊU NGHIÊN C U CHƯƠNG II: LƯ C KH O TÀI LI U 2.1 H T ð U PH NG 2.1.1 C u t o h t ñ u ph ng 2.1.2 Thành ph n hóa h c giá tr dinh dư ng h t ñ u ph ng 2.2 N M M C ASPERGILLUS HI N DI N TRÊN ð U PH NG 2.2.1 ð c tính chung c a n m m c Aspergillus 2.2.2 C u t o s i n m h s i n m 2.2.3 Hình thái n m m c 2.2.4 M t s loài Aspergillus 2.2.5 Aflatoxin tác ñ ng c a đ i v i s c kh e ngư i 2.2.6 S nhi m ñ c aflatoxin ñ u ph ng bi n pháp phòng tránh 10 CHƯƠNG III: PHƯƠNG TI N VÀ PHƯƠNG PHÁP THÍ NGHI M 16 3.1 PHƯƠNG TI N NGHIÊN C U 16 3.1.1 ð a ñi m 16 3.1.2 Th i gian nghiên c u 16 3.1.3 Nguyên li u 16 3.1.4 D ng c thi t b 16 3.1.5 Hóa ch t 16 3.2 PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN C U 17 Ngành Công ngh th c ph m - Khoa Nông nghi p Sinh h c ng d ng iv Lu n văn T t nghi p khóa 28 - 2007 Trư ng ð i H c C n Thơ 3.3 N I DUNG VÀ TI N TRÌNH THÍ NGHI M 17 3.3.1 Phân l p n m m c Aspergillus 17 3.3.2 Ti n hành thí nghi m 17 a Chu n b môi trư ng nuôi c y 17 b Chu n b m u 17 c Phân l p n m m c 17 d ð nh danh 18 CHƯƠNG IV K T QU VÀ TH O LU N………………………………… 21 4.1 Aspergillus flavus 23 4.2 Aspergillus niger………………………………………………… 25 4.3 Aspergillus oryzae……………………………………………………………… 27 4.4 Aspergillus ficuum…………………………………………………………29 CHƯƠNG V K T LU N VÀ ð NGH ………………………………………30 5.1 K T LU N………………………………………………………………………30 5.2 ð NGH ……………………………………………………………………… 30 TÀI LI U THAM KH O 31 PH L C…………………………………………………………………… 32 Ngành Công ngh th c ph m - Khoa Nông nghi p Sinh h c ng d ng v Lu n văn T t nghi p khóa 28 - 2007 Trư ng ð i H c C n Thơ DANH M C B NG Trang Error! No table of contents entries found.B ng 7: Qui trình đ nh lo i m t ch ng n m m c (ñ i v i nhi u chi n m m c) 12 Ngành Công ngh th c ph m - Khoa Nông nghi p Sinh h c ng d ng vi Lu n văn t t nghi p khóa 28 - 2007 Trư ng ð i H c C n Thơ DANH M C HÌNH Trang Hình Hình thái h c n m m c 10 Hình M u h t đ u ph ng có n m m c phát tri n môi trư ng nuôi c y PGA sau - ngày, nhi t ñ 27 - 320C 21 Hình Aspergillus flavus v i nh ng gi t ti t có màu tr ng đ c xung quanh rìa khu n l c sau –5 ngày nuôi c y môi trư ng Czapek 23 Hình Aspergillus flavus có bơng hình c t v i nh ng chu i bào t r t dài 23 Hình C u t o hi n vi m t v i th bình hai t ng 23 Hình C u t o m t b ng có hình g n c u 23 Hình Các bào t k t l i thành chu i r t dài 23 Hình Bào t c a A flavus 24 Hình C u t o m t th bình hai t ng v i cu ng đính th bình có hình tr th bình có hình chai 24 Hình 10 Aspergillus niger sau ngày sau ngày nuôi c y môi trư ng Czapek, nhi t ñ 27 - 320C 26 Hình 11 C u t o s i n m A niger mang ch c sinh s n có bơng hình c u to tia 26 Hình 12 Bơng v i th bình hai t ng b ng hình c u 26 Hình 13 C u t o hi n vi m t th bình hai t ng v i l p th bình th nh t dài g p đơi th bình th hai L p th nh t có hình tr , l p th hai có hình chai 26 Hình 14 Aspergillus oryzae có màu vàng l c non chuy n sang màu vàng l c nâu già 28 Hình 15 Aspergillus oryzae có bơng hình c u non xé rách t o hình tr hay nh ng chu i tua rua già 28 Hình 16 C u t o bơng l n v i th bình hai t ng b ng có hình c u 28 Ngành Công ngh th c ph m - Khoa Nông nghi p Sinh h c ng d ng v Lu n văn T t nghi p khóa 28 - 2007 Trư ng ð i H c C n Thơ Hình 17 C u t o bơng nh v i th bình m t t ng 28 Hình 18 Aspergillus ficuum có màu nâu môi trư ng Czapek sau ngày tu i… .28 Hình 19 Aspergillus ficuum có bơng hình c u t a tia r t ñ u ñ c bi t cu ng dài 30 Hình 20 Khi già, bơng xé rách t o d ng c t 30 Hình 21 C u t o hi n vi m t bơng có b ng hình c u quan sát th y rõ th bình m t l p 30 Hình 22 Bơng đư c đính cu ng r t dài 30 Ngành Công ngh th c ph m - Khoa Nông nghi p Sinh h c ng d ng vi Lu n văn T t nghi p khóa 28 - 2007 Trư ng ð i H c C n Thơ TÓM T T ð u ph ng m t nh ng lo i h t có giá tr dinh dư ng cao m t hàng xu t kh u quan tr ng nư c ta, ñem l i ngu n thu ngo i t l n Tuy nhiên nư c ta có u ki n khí h u nhi t đ i nóng m nên r t thu n l i cho loài n m m c phát tri n gây h i ð c bi t đ u ph ng thư ng có loài Aspergillus xâm nh p gây hư h ng, ch ng nh ng th chúng ti t ñ c t gây ung thư cho ngư i ăn ph i S có m t c a lồi ph thu c vào vùng đ a lý lo i th c ph m thích h p cho s sinh trư ng c a chúng Ph n lu n văn ñư c ti n hành v i m c đích “Phân l p đ nh danh m t s Aspergillus h t ñ u ph ng ch Xuân Khánh - thành ph C n Thơ” K t qu sau phân l p ti n hành ñ nh danh ñư c b n loài Aspergillus sau: Aspergillus flavus, Aspergillus oryzae, Aspergillus niger, Aspergillus ficuum ði u cho th y loài phân b r t r ng rãi t nhiên xu t hi n ñ u ph ng v i t n s r t cao Ngành Công ngh th c ph m - Khoa Nông nghi p Sinh h c ng d ng vii Lu n văn t t nghi p khóa 28 - 2007 Trư ng ð i H c C n Thơ CHƯƠNG I: ð T V N ð 1.1 ð T V N ð ð u ph ng lo i công nghi p ph bi n th gi i nư c ta, đư c xem m t nh ng mũi nh n v chi n lư c kinh t vi c s n xu t khai thác l i th c a vùng khí h u nhi t đ i H t ñ u ph ng có giá tr dinh dư ng cao, ch a nhi u protein lipid v i hàm lư ng cao, ngu n cung c p vitamin E, K, B r t quan tr ng c ngu n thiamine niacine nh ng vitamin có r t lo i ngũ c c khác T ñ u ph ng, ngư i ta có th ch bi n thành s n ph m th c ph m bánh, m t, k o, (chi m kho ng 12% s n lư ng đ u ph ng), ngồi cịn có kho ng 6% s d ng cho chăn ni, 1% cho xu t kh u kho ng 80% s ñ u ph ng s n xu t ñư c dùng ñ s n xu t d u ăn nư c ta, s n lư ng ñ u ph ng s n xu t hàng năm ch y u dùng cho xu t kh u (70 - 80%) đem l i ngu n thu ngo i t r t quan tr ng Tuy nhiên, nư c ta ñi u ki n khí h u nhi t đ i nóng m c ng v i ñi u ki n b o qu n khơng đ m b o nên h t đ u ph ng r t d b n m m c t n công, gây hư h ng không th s d ng ñư c n a Ph n l n n m m c ñ u ph ng thu c gi ng Aspergillus, Penicillium, Fusarium s chúng l i s n sinh ñ c t Theo nghiên c u, ngư i ta k t lu n có đ c t hi n di n h t ñ u ph ng là: Aflatoxin, Citrinin, Ochratoxin A Zearalenone Aflatoxin đư c đ c bi t ý tính đ c c a S hi n di n c a n m m c nh t Aspergillus s n sinh ñ c t gây nh ng v ng ñ c, gây ch t ngư i gia súc, ð c bi t, chúng d n ñ n gây ung thư gan Vi c bi t đư c s có m t c a lồi Aspergillus đ u ph ng có ý nghĩa r t quan tr ng, đ t có hư ng ng d ng th c t (vài lồi đư c s d ng ñ s n xu t enzyme, s n ph m lên men, ), bi t ñư c s phân b c a gi ng ña d ng, ñ ng th i phòng ch ng s xâm nh p c a chúng vào h t ñ u ph ng nói riêng lo i th c ph m khơ nói chung Bám sát m c tiêu trên, tơi ti n hành th c hi n đ tài “Phân l p ñ nh danh m t s lồi Aspergillus h t đ u ph ng ch Xuân Khánh - thành ph C n Thơ” 1.2 M C TIÊU NGHIÊN C U - Phân l p làm thu n ch ng loài Aspergillus hi n di n đ u ph ng q trình t n tr s xâm nhi m trình v n chuy n h t - Xác đ nh tên g i t ng loài d a đ c m v hình thái đ c m lồi c a chúng Ngành Cơng ngh th c ph m - Khoa Nông nghi p Sinh h c ng d ng Lu n văn T t nghi p khóa 28 - 2007 Trư ng ð i H c C n Thơ d ð nh danh Ti n hành nh n xét ñ i th vi th n m m c - ð i th : quan sát đ c m hình thái s i n m b ng m t thư ng - Vi th : th c hi n tiêu b n n m m c, quan sát bào t c a v t kính 40X c u t o khu n ty D a k t qu thu nh n đư c tra khóa phân lo i, xác đ nh tên lồi n m m c tương ng Ngành Công ngh th c ph m - Khoa Nông nghi p Sinh h c ng d ng 18 Lu n văn T t nghi p khóa 28 - 2007 Trư ng ð i H c C n Thơ CHƯƠNG IV K T QU VÀ TH O LU N Sau q trình ti n hành thí nghi m, quan sát th y h t ñ u ph ng xu t hi n thư ng xun m t s lồi n m m c (đư c phân bi t ch y u d a màu s c) sau: - N m có h s i bao ph m ng lư i, phát tri n nhanh, bao trùm lên kh p ñĩa v i ñ u nh ng ch m màu ñen - N m có màu tr ng, b m t li ti b i, khơng có h s i khí sinh - N m có màu vàng nâu - N m có màu đen - N m có màu nâu - N m có màu xanh xám, b m t li ti b i, khơng có h s i khí sinh - N m có màu vàng tươi, b m t li ti b i, khơng có h s i khí sinh - N m có màu xanh l c - Các loài men d i a) b) Hình M u h t đ u ph ng có n m m c phát tri n môi trư ng nuôi c y PGA sau - ngày, nhi t ñ 27 - 320C a) M u h t không r a b) M u h t có r a Sau q trình phân l p đ nh danh, chúng tơi xác đ nh ñư c b n loài Aspergillus sau: - Aspergillus flavus - Aspergillus oryzae - Aspergillus niger - Aspergillus ficuum Ngành Công ngh th c ph m - Khoa Nông nghi p Sinh h c ng d ng 19 Lu n văn T t nghi p khóa 28 - 2007 Trư ng ð i H c C n Thơ 4.1 Aspergillus flavus TÊN: Aspergillus flavus Xu t x : H t đ u ph ng ch Xn Khánh Mơi trư ng : Czapek Tu i n m phân lo i: ngày Nhi t ñ : 27- 320C Ánh sáng: thư ng Khu n l c: T c ñ m c: Trung bình Kích thư c: - 5.5 cm D ng khu n l c: D ng b t r i Xung quanh rìa khu n l c có gi t ti t màu tr ng đ c màu ñen, Gi t ti t: Chúng ñư c ti t sau - ngày nuôi c y, b trái gi t ti t có màu ñen Màu s c: M t ph i: Ban ñ u khu n l c có màu vàng nh t sau chuy n sang màu xanh l c M t trái: Không màu S c t môi trư ng: Khơng Giai đo n vơ tính: ð u: Cách s p x p: Hình d ng: Cu ng: B ng: Th bình: Bào t : Kích thư c: Hình d ng: Kích thư c: Màu s c: Hình d ng: Kích thư c: Vùng sinh s n: Cách s p x p: L p 1: Hình d ng: Kích thư c: L p 2: Hình d ng: Kích thư c: Hình d ng: Kích thư c M c t mơi trư ng Hình c u, to tia non t o thành c t v i nh ng chu i bào t r t dài già (50 - 200) µm B m t cu ng ráp, có nhi u gai m n, đ u (380 - 800) x (12 - 18) µm Khơng màu Hình c u ñ n g n c u (35 - 50) µm Kh p m t b ng Th bình hai t ng m t t ng Có c hai lo i th bình m t bơng Hình tr (10 - 20) x (3,75 - 5) µm Hình chai (5 - 7,5) x (3,75 - 5) µm Hình c u, b m t có v trơn nh n (3 - 5) µm Ngành Cơng ngh th c ph m - Khoa Nông nghi p Sinh h c ng d ng 20 Lu n văn T t nghi p khóa 28 - 2007 Trư ng ð i H c C n Thơ Hình Aspergillus flavus v i nh ng gi t ti t có màu tr ng đ c xung quanh rìa khu n l c sau –5 ngày nuôi c y môi trư ng Czapek Hình Aspergillus flavus có bơng hình c t v i nh ng chu i bào t r t dài Hình C u t o m t b ng có hình g n c u Hình C u t o hi n vi m t v i th bình hai t ng Hình Các bào t k t l i thành chu i r t dài Ngành Công ngh th c ph m - Khoa Nông nghi p Sinh h c ng d ng 21 Lu n văn T t nghi p khóa 28 - 2007 Hình Bào t c a A flavus Trư ng ð i H c C n Thơ Hình C u t o m t th bình hai t ng v i cu ng đính th bình có hình tr th bình có hình chai Ngu n: Hình nh đư c ch p u ki n bình thư ng b mơn CNTP b môn B o V Th c V t v t kính 40X 10X t i phịng thí nghi m Ngành Công ngh th c ph m - Khoa Nông nghi p Sinh h c ng d ng 22 Lu n văn T t nghi p khóa 28 - 2007 Trư ng ð i H c C n Thơ 4.2 Aspergillus niger TÊN: Aspergillus niger Xu t x : H t đ u ph ng ch Xn Khánh Mơi trư ng : Czapek Tu i n m phân lo i: ngày Nhi t ñ : 27 - 320C Ánh sáng: thư ng Khu n l c: T c đ m c: Trung bình Kích thư c: 4,4 - 5,8 cm D ng khu n l c: D ng b t r i l m t m, tâm khu n l c l i, rìa l p tơ tr ng Không Gi t ti t: Màu s c: M t ph i: Khu n l c có màu đen than M t trái: Khơng màu S c t mơi trư ng: Khơng Giai đo n vơ tính: ð u: Cách s p x p: Hình d ng: Cu ng: B ng: Th bình: Bào t : M c t mơi trư ng Hình c u, to tia non xé rách t o d ng c t già Kích thư c: (100 - 200) µm Hình d ng: B m t cu ng nh n, khơng màu, có màu nâu g n b ng Kích thư c: (400 - 800) x (15 - 18) µm Màu s c: Khơng màu Hình d ng: Hình c u Kích thư c: (45 - 72) µm Vùng sinh s n: Kh p m t b ng Cách s p x p: Th bình hai t ng v i ñ c trưng l p th nh t dài g p đơi l p th hai L p 1: Hình d ng: Hình tr dài Kích thư c: (17,5 - 25) x (5 - 7,5) µm L p 2: Hình d ng: Hình chai Kích thư c: (5 - 8) x (3 - 3,75) µm Hình d ng: Hình c u, b m t có gai xù xì (3,75 - 5) µm Kích thư c Ngành Cơng ngh th c ph m - Khoa Nông nghi p Sinh h c ng d ng 23 Lu n văn T t nghi p khóa 28 - 2007 Trư ng ð i H c C n Thơ a) b) Hình 10 Aspergillus niger sau ngày sau ngày nuôi c y môi trư ng Czapek, nhi t ñ 27 - 320C a) sau ngày b) sau ngày Hình 11 C u t o s i n m A niger mang ch c sinh s n có bơng hình c u to tia Hình 12 Bơng v i th bình hai t ng b ng hình c u b ng có hình c u Hình 13 C u t o hi n vi m t th bình hai t ng v i l p th bình th nh t dài g p đơi th bình th hai L p th nh t có hình tr , l p th hai có hình chai Ngu n: Hình nh đư c ch p u ki n bình thư ng b mơn CNTP b môn B o V Th c V t v t kính 40X 10X t i phịng thí nghi m Ngành Công ngh th c ph m - Khoa Nông nghi p Sinh h c ng d ng 24 Lu n văn T t nghi p khóa 28 - 2007 Trư ng ð i H c C n Thơ 4.3 Aspergillus oryzae TÊN: Aspergillus oryzae Xu t x : H t ñ u ph ng ch Xuân Khánh Môi trư ng : Czapek Tu i n m phân lo i: ngày Nhi t ñ : 27 - 320C Ánh sáng: thư ng Khu n l c: T c đ m c: Trung bình Kích thư c: - cm D ng khu n l c: D ng b t r i l m t m, khu n l c tâm l i, rìa th p d n, l p tơ tr ng Không Gi t ti t: Màu s c: M t ph i: Khu n l c ban đ u có màu vàng l c sau chuy n thành màu vàng l c nâu M t trái: Không màu S c t mơi trư ng: Khơng Giai đo n vơ tính: ð u: Cách s p x p: Hình d ng: Cu ng: B ng: Th bình: Kích thư c: Hình d ng: Kích thư c: Màu s c: Hình d ng: Kích thư c: Vùng sinh s n: Cách s p x p: Hình d ng: Kích thư c: Th bình hai t ng: L p 1: Hình d ng: Kích thư c: L p 2: Hình d ng: Kích thư c: Bào t : Hình d ng: Th bình m t t ng Kích thư c: M c t mơi trư ng Hình c u, to tia non xé rách thành nh tua rua v i nh ng chu i bào t r t dài già (140 - 170) µm B m t cu ng có gai m n (400 - 550) x (6,5 - 10) µm Khơng màu Hình c u đ n g n c u (16,25 - 25) µm Kh p m t b ng Th bình m t t ng ch y u ð c bi t bơng th bình, bơng nh m t th bình ðơi có c bình m t bơng Hình chai (7 - 8.75) x (3,75 - 5) µm Hình tr dài (7,5 - 11) x (3,75 - 7,5) µm Hình chai 12,5 x (7 - 7,5) µm Hình c u, b m t có gai m n, có kích thư c l vàng nâu Khi già gai tr nên xù xì, vách dày (5 - 7) µm Ngành Cơng ngh th c ph m - Khoa Nông nghi p Sinh h c ng d ng 25 ng dãy l n hai hai th n, màu Lu n văn T t nghi p khóa 28 - 2007 Trư ng ð i H c C n Thơ Hình 14 Aspergillus oryzae có màu vàng l c non chuy n sang màu vàng l c nâu già Hình 15 Aspergillus oryzae có bơng hình c u non xé rách t o hình tr hay nh ng chu i tua rua già Hình 16 C u t o bơng l n v i th bình hai t ng b ng có hình c u Ngu n: Hình nh ñư c ch p ñi u ki n bình thư ng b môn CNTP b môn B o V Th c V t Hình 17 C u t o bơng nh v i th bình m t t ng v t kính 40X 10X t i phịng thí nghi m Ngành Cơng ngh th c ph m - Khoa Nông nghi p Sinh h c ng d ng 26 Lu n văn T t nghi p khóa 28 - 2007 Trư ng ð i H c C n Thơ 4.4 Aspergillus ficuum TÊN: Aspergillus ficuum Xu t x : H t ñ u ph ng ch Xn Khánh Nhi t đ : Mơi trư ng : Czapek Tu i n m phân lo i: ngày 27 - 320C Ánh sáng: thư ng Khu n l c: T c đ m c: Nhanh Kích thư c: cm D ng khu n l c: D ng m t cưa, khu n l c nh ng vịng trịn đ ng tâm th p d n t ngồi, rìa l p tơ tr ng Gi t ti t: Không M t ph i: Khu n l c có màu nâu nh t ñ n nâu Màu s c: M t trái: Không màu S c t môi trư ng: Không Giai đo n vơ tính: ð u: Cách s p x p: Hình d ng: Cu ng: B ng: Th bình: Bào t : Kích thư c: Hình d ng: Kích thư c: Màu s c: Hình d ng: Kích thư c: Vùng sinh s n: Cách s p x p: L p 1: Hình d ng: Kích thư c: L p 2: Hình d ng: Kích thư c: Hình d ng: Kích thư c: M c t mơi trư ng Hình c u, to tia r t đ u non xé rách t o d ng c t già (150 - 200) µm B m t cu ng nh n, khơng màu, có màu nâu g n sát b ng Cu ng có đ c trưng dài vư t tr i so v i nh ng loài (1200 - 1950) x (11 - 12,5) µm Khơng màu, có màu nâu g n sát b ng Hình c u đ n g n c u, có kích thư c l n (52 - 62) µm Kh p m t b ng Th bình m t t ng v i đ c trưng kích thư c r t ng n Hình tr ng n (8,75 - 10) x (3,75 - 5) µm Hình c u đ n g n c u, b m t có gai m n Màu nâu (3,75 - 4,5) µm Ngành Cơng ngh th c ph m - Khoa Nông nghi p Sinh h c ng d ng 27 Lu n văn T t nghi p khóa 28 - 2007 Trư ng ð i H c C n Thơ Hình 18 Aspergillus ficuum có màu nâu mơi trư ng Czapek sau ngày tu i Hình 19 Aspergillus ficuum có bơng hình c u t a tia r t đ u đ c bi t cu ng dài Hình 21 C u t o hi n vi m t bơng có b ng hình c u quan sát th y rõ th bình m t l p Hình 20 Khi già, xé rách t o d ng c t Hình 22 Bơng đư c đính cu ng r t dài Ngu n: Hình nh đư c ch p u ki n bình thư ng b môn CNTP b môn B o V Th c V t v t kính 40X 10X t i phịng thí nghi m Ngành Cơng ngh th c ph m - Khoa Nông nghi p Sinh h c ng d ng 28 Lu n văn T t nghi p khóa 28 - 2007 Trư ng ð i H c C n Thơ CHƯƠNG V K T LU N VÀ ð NGH 5.1 K T LU N Qua k t qu nghiên c u theo dõi trình phát tri n c a n m m c ñư c phân l p h t ñ u ph ng, xin rút nh ng k t lu n sau: Các loài n m m c có m t h t đ u ph ng s p hàng khác tương ñ i gi ng ði u cho th y h n m m c t n t i h t ñ u ph ng tương ñ i n ñ nh khu v c ch Xuân Khánh, Tp C n Thơ Bư c ñ u ñ nh danh ñư c nh ng loài sau: Aspergillus flavus Loài ti t ñ c t aflatoxin gây ung thư cho ngư i gây nh ng b nh c p tính ăn ph i v i s lư ng l n Aspergillus oryzae Lồi đư c s d ng ñ ch bi n th c ph m lên men truy n th ng mà ñ c trưng tương ð c bi t, cịn ñư c s d ng ch bi n s n ph m koji c a Nh t B n Aspergillus niger Lồi t o đ c t mycotoxin, ngồi cịn có m t bánh men thu c b c dùng s n xu t rư u n p than Aspergillus ficuum B n loài xu t hi n h t ñ u ph ng v i t n s r t cao, trình phân l p bao gi b t g p s hi n di n c a chúng H n m m c h t ñ u ph ng trình phân l p khơng thay đ i nhi u dù có qua q trình làm s ch b m t hay không làm s ch, ch ng t h n m m c xâm nh p vào bên h t trình canh tác v n chuy n ñ n nơi tiêu th H vi sinh v t h t ñ u ph ng ch y u n m m c n m men 5.2 ð NGH Th c hi n thí nghi m v i vi c sát khu n hoàn toàn b m t m u h t b ng natri hypochloride 3% ho c v i H2O2 4%, r a l i nhi u l n b ng nư c c t vơ trùng đ lo i hóa ch t kh trùng Sau ni c y song song v i m u h t khơng đư c sát khu n đ phát hi n nh ng loài n m m c nhi m vào bên h t trình canh tác bám b m t h t trình v n chuy n Ti p t c ti n hành phân lo i sâu ñ ñ nh danh xác lồi n m gi ng Aspergillus M r ng khu v c thí nghi m ch khác ñ kh o sát s có m t c a lồi Aspergillus khác h t đ u ph ng t bi t ñư c s phân b ña d ng c a lồi Aspergillus Tp C n Thơ Ngành Cơng ngh th c ph m - Khoa Nông nghi p Sinh h c ng d ng 29 Lu n văn T t nghi p khóa 28 - 2007 Trư ng ð i H c C n Thơ TÀI LI U THAM KH O Bùi Xuân ð ng (2004), Nguyên lý phòng ch ng n m m c mycotoxin, NXB Khoa H c K Thu t B môn B o V Th c V t (2003), Th c hành Vi Sinh H c ñ i cương, trư ng ð i H c C n Thơ Chu Th Thơm et al (2006), K thu t tr ng chăm sóc l c, NXB Lao ð ng Lâm Văn M nh (2004), Phân l p n m m c hi n di n cam - bi n pháp h n ch s phát tri n c a chúng trình b o qu n, Trư ng ðHCT Nguy n B o V Tr n Th Kim Ba (2005), Cây ñ u ph ng k thu t canh tác Sông C u Long, NXB Nông Nghi p ð ng B ng Nguy n ð c Lư ng (2004), Công ngh vi sinh h c- t p 1- Cơ s vi sinh v t công nghi p, NXB ðHQG Tp HCM Nguy n ð c Lư ng et al (2003), Thí nghi m công ngh sinh h c- t p 2- Thí nghi m vi sinh v t h c, NXB ðHQG Tp HCM Nguy n Th Hoàng Anh (1997), Nghiên c u ch bi n s a ñ u ph ng, Trư ng ðHCT Ph m Văn Kim (2000), Vi sinh h c ñ i cương, Trư ng ðHCT 10 www.vnn.vn 11 http://qppl.egov.gov.vn Ngành Công ngh th c ph m - Khoa Nông nghi p Sinh h c ng d ng 30 Lu n văn T t nghi p khóa 28 - 2007 Trư ng ð i H c C n Thơ PH L C Ph l c A: ði u ch môi trư ng nuôi c y phân l p n m m c Ph l c A.1 Môi trư ng PGA Thành ph n: Khoai tây 200 gr Glucose 20 gr Agar - Agar 15 gr Nư c c t 1000 ml pH = 6,5 - 6,8 ði u ch : Khoai tây làm s ch v , c t thành t ng s i m ng, cho vào beaker có ch a nư c c t ðun cách th y t - 4h L c l y nư c trích, cho thêm nư c c t cho đ m t lít, cho glucose vào khu y tan, đo pH mơi trư ng, ti n hành u ch nh pH mơi trư ng b ng dung d ch NaOH 1N ho c HCl 1N cho ñ n ñ t pH yêu c u Cu i cho agar vào n u tan Mơi trư ng sau u ch xong phân ph i vào bình tam giác có dung tích 500ml ti n hành trùng 1210C 15 phút Ph l c A.2 Môi trư ng Czapek Thành ph n: - NaNO3 gr - K2PO4 gr - MgSO4 0,5 gr - KCl 0,5 gr - FeSO4.7H2O 0,01 gr - Succrose 30 gr - Agar 15 gr - Nư c c t 1000 ml pH = 6,5 - 6,8 ði u ch : Dùng beaker có ch a 1000ml nư c c t, đun cách th y Cho l n lư t hóa ch t theo th t t xu ng khu y tan Sau hóa ch t tan h t, đo pH mơi trư ng ti n hành ñi u ch nh cho ñ n pH ñ t yêu c u, cho agar vào n u tan Chuy n môi trư ng vào bình tam giác 500ml trùng nhi t đ 1210C kho ng th i gian 15 phút Ngành Công ngh th c ph m - Khoa Nông nghi p Sinh h c ng d ng 31 Lu n văn T t nghi p khóa 28 - 2007 Trư ng ð i H c C n Thơ Ph l c B: Th c hi n tiêu b n quan sát n m m c dư i kính hi n vi Ph l c B.1 Tiêu b n nhu m s ng Cho m t gi t cotton blue lên m t lame s ch S d ng kim mũi giáo ho c que c y móc l y m t tơ ho c m t m nh nh th ch có khu n ty n m m c R a b t bào t n m m c b ng cách ñ t tơ n m dung d ch nư c xà phịng lỗng, khu y nh ð t sinh kh i khu n ty ñã r a vào gi t cotton blue lame, dùng hai que c y móc ho c m t que c y móc v i m t kim mũi giáo tách r i s i khu n ty dung d ch nhu m ð y l i b ng m t lamellae ð t tiêu b n lên bàn mang v t c a kính hi n vi ti n hành quan sát v t kính 10X 40X Ph l c B.2 Tiêu b n th ch C t m t m nh th ch hình ch nh t có kích thư c b ng ¼ kích thư c c a lame, đ t lên m t lame s ch Dùng que c y nh n ch m nh lên ph n ñ u s i n m ñ l y bào t , sau ñó c y n m c nh c a hình ch nh t, đ y ph n th ch l i b ng m t lamellae s ch, ñ t c lame vào ñĩa petri nhi t ñ phòng Sau kho ng th i gian 3-5 ngày, l y lame ti n hành quan sát ñ c ñi m vi h c s i n m v t kính 10X Ngành Cơng ngh th c ph m - Khoa Nông nghi p Sinh h c ng d ng 32 ... n Thơ” K t qu sau phân l p ti n hành đ nh danh đư c b n lồi Aspergillus sau: Aspergillus flavus, Aspergillus oryzae, Aspergillus niger, Aspergillus ficuum ði u cho th y loài phân b r t r ng rãi... c tiêu trên, ti n hành th c hi n ñ tài ? ?Phân l p đ nh danh m t s lồi Aspergillus h t ñ u ph ng ch Xuân Khánh - thành ph C n Thơ” 1.2 M C TIÊU NGHIÊN C U - Phân l p làm thu n ch ng loài Aspergillus. .. b) M u h t có r a Sau q trình phân l p đ nh danh, chúng tơi xác đ nh đư c b n lồi Aspergillus sau: - Aspergillus flavus - Aspergillus oryzae - Aspergillus niger - Aspergillus ficuum Ngành Công