Đang tải... (xem toàn văn)
Nghiên cứu một số đặc điểm sinh học và khả năng sản xuất của lợn bảo lạc, huyện bảo lạc, tỉnh cao bằng .pdf
1 MỞ ĐẦU Lý chọn đề tài Lạc (Arachis hypogaea L.) cơng nghiệp ngắn ngày, có giá trị kinh tế cao Cây lạc gieo trồng phổ biến 100 nước với diện tích 22 triệu [12] Hạt lạc nguồn thực phẩm chứa nhiều chất béo protein cần thiết cho phần ăn người Ngoài ra, hạt lạc cịn chứa vitamin nhóm B lượng hydratcacbon định Hạt lạc nguyên liệu để sản xuất dầu ăn, bánh kẹo, fomát mặt hàng xuất có giá trị Các phụ phẩm lạc (khô dầu, thân, lá) dùng làm thức ăn cho gia súc hay phân bón tốt rẻ tiền Trồng lạc có tác dụng cải tạo đất phù hợp với cấu chuyển đổi kinh tế nông nghiệp [11], [12] Ở Việt Nam, lạc đóng vai trị quan trọng cấu nơng nghiệp, đặc biệt nơi khí hậu thường xuyên biến động điều kiện canh tác gặp nhiều khó khăn Trong năm gần đây, việc tổng kết kinh nghiệm thực tiễn ứng dụng khoa học tiên tiến vào sản xuất góp phần tăng suất lạc cách đáng kể [15] Năm 2005, suất bình quân đạt 18 tạ/ha, sản lượng đạt 485,610 nghìn tấn, so với 1995 suất 13 tạ/ha Tuy nhiên, sản xuất lạc nước ta nhiều yếu tố hạn chế, nhân tố có ảnh hưởng đến suất chất lượng lạc khô hạn [16] Để hạn chế ảnh hưởng hạn tới suất trồng nói chung, lạc nói riêng, ngồi biện pháp tưới tiêu hợp lý cần sử dụng giống có khả chịu hạn cao, đặc biệt vùng đất không chủ động nước Vì vậy, nghiên cứu khả chịu hạn giống lạc cần thiết Kỹ thuật chọn dòng biến dị soma cho phép thu dịng tế bào có khả chống chịu cao với điều kiện bất lợi môi trường [30], [43] Đây hướng nghiên cứu có nhiều triển vọng sử dụng nhiều Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn nước giới tạo giống trồng có khả chống chịu cao thời gian rút ngắn so với phương pháp truyền thống [30], [51] Từ lý trên, chọn đề tài nghiên cứu: “Đánh giá khả chịu hạn tạo vật liệu khởi đầu cho chọn dòng chịu hạn từ giống lạc L08, L23, L24, LTB, LCB, LBK kỹ thuật nuôi cấy in vitro” Mục tiêu nghiên cứu - Đánh giá khả chịu hạn giống lạc L08, L23, L24, LTB LCB, LBK giai đoạn hạt nảy mầm, giai đoạn non mức độ mô sẹo - Tạo vật liệu khởi đầu cho chọn dòng chịu hạn giống lạc L08, L23, L24, LTB LCB, LBK Nội dung nghiên cứu - Phân tích số tiêu hoá sinh hạt tiềm sinh giống L08, L23, L24, LTB LCB, LBK - Xác định ảnh hưởng hạn sinh lý đến hoạt độ số enzym chất tan tương ứng giai đoạn hạt nảy mầm - Đánh giá khả chịu hạn giai đoạn non phương pháp gây hạn nhân tạo - Đánh giá khả chịu hạn giống lạc mức độ mô sẹo thông qua xử lý thổi khô - Tạo vật liệu khởi đầu cho chọn dòng chịu hạn giống lạc L08, L23, L24, LTB LCB, LBK kỹ thuật nuôi cấy in vitro: Xác định ngưỡng chọn lọc, tái sinh cây, tạo hoàn chỉnh, trồng đồng ruộng - Sử dụng kỹ thuật RAPD để đánh giá ADN genome số dịng có nguồn gốc từ mơ sẹo chịu nước so với giống gốc Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn Chƣơng TỔNG QUAN TÀI LIỆU 1.1 Giá trị kinh tế, đặc điểm nơng sinh học tình hình sản xuất lạc giới Việt Nam 1.1.1 Giá trị kinh tế lạc Hạt lạc chiếm 40% – 58% lipit, 16% – 43% protein, 6% – 24% gluxit, 2,5% cellulose Trong 100g lạc có 60 UI vitamin A, 300 UI vitamin B, lượng PP đủ dùng cho người lớn ngày cung cấp 578,6 calo [5] Protein lạc có đủ loại axit amin không thay thế, đặc biệt hạt lạc có chất lecithin (phosphattidyl choline) có tác dụng làm giảm lượng cholesterol máu, chống tượng xơ vữa mạch máu [9] Thức ăn lạc khắc phục tình trạng thiếu protein cho người [8] Dầu lạc hỗn hợp glyxerin chứa 80% axit béo khơng no, có độ nhớt thấp, mùi thơm Dầu lạc sử dụng y học, kỹ nghệ dầu máy, sản xuất xà phòng [5] Hạt lạc mặt hàng xuất có giá trị cao, năm nước ta xuất khoảng 80 – 120 ngàn tấn, chiếm 30%– 50% tổng sản lượng [11] Các phụ phẩm lạc khô dầu, thân dùng để chế biến thức ăn cho gia súc hay phân bón có giá trị dinh dưỡng cao rẻ tiền Một kg khô dầu lạc chứa 400 gam protein, 80 gam lipit [9], [11] Trồng lạc cịn có tác dụng chống sói mòn cải tạo đất Nhờ hoạt động vi khuẩn nốt sần mà sau vụ lạc để lại đất từ 40 – 60 kg N/ha [38] Mặt khác, lạc có thời gian sinh trưởng ngắn (từ 90 – 125 ngày), nên xen canh, gối vụ với trồng khác làm tăng giá trị kinh tế đơn vị diện tích đất trồng 1.1.2 Đặc điểm nông sinh học lạc Rễ lạc thuộc loại rễ cọc, có nhiều rễ phụ Trên rễ lạc có nhiều nốt sần, tạo thành vi khẩn Rhizobium sống cộng sinh, lạc có khả cố định nitơ phân tử khơng khí thành đạm cung cấp cho đất trồng [38] Thân lạc thường cao khoảng 25cm - 50cm, lúc Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn cịn non thân lạc hình trịn, già có cạnh rỗng [12] Lá lạc loại kép lông chim, có chét mọc đối nhau, hình trái xoan ngược [38] Hoa lạc mọc thành chùm, có từ – 15 hoa Lạc tự thụ phấn nghiêm ngặt, hoa nở tự thụ phấn xong [9] Quả lạc có hình kén, dài – cm, rộng 0,5 – 2cm, đầu dính với tia, thắt ngăn hạt, vỏ cứng có gân mạng, chứa từ – hạt; hạt bọc vỏ lụa mỏng, hình trứng [11] Về mặt sinh thái học, lạc chịu ảnh hưởng nhiều nhân tố sinh thái như: Nhiệt độ, nước, độ ẩm, ánh sáng, đất chất khoáng [8], [9], [15], [38] Dựa vào thời gian sinh trưởng, lạc chia làm hai loại: giống chín sớm có thời sinh trưởng từ 90 – 125 ngày, giống chín muộn có thời gian sinh trưởng từ 140 – 160 ngày Dạng chín muộn trội hồn tồn so với dạng chín sớm [8] 1.1.3 Tình hình sản xuất lạc giới Việt Nam Trong lấy dầu, lạc có diện tích, sản lượng đứng thứ hai sau đỗ tương trồng khắp châu lục Châu Á, nơi có diện tích trồng, sản lượng lạc cao nhất, chiếm 60% sản lượng lạc giới Châu Phi đứng thứ hai chiếm 30%, châu lục khác (châu Mỹ 5%, châu Âu 0,22%) [9] Trong số nước trồng lạc Ấn Độ, Trung Quốc, Mỹ nước có sản lượng lạc hàng năm cao (trên 1triệu tấn/năm) Một số nước Dimbabue, Camơrun (Châu Phi) có sản lượng lạc thấp, đạt 0,17 triệu tấn/năm [11] Ấn Độ quốc gia có diện tích trồng lạc đứng đầu giới (8,1 triệu ha) song sản lượng hàng năm thấp, đạt 5,4 triệu suất lạc đạt 6,9 – 9,98 tạ/ha Trung Quốc có diện tích trồng lạc nửa Ấn Độ (4,3 triệu ha) hàng năm đạt 11,89 triệu tấn, đứng đầu giới Cịn Mỹ có diện tích gieo trồng thấp (0,59 triệu ha) nhờ có giống lạc cao sản nên sản lượng hàng năm cao (đạt 1,8 triệu tấn/năm) đứng thứ giới [9], [11], [12] Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn Trong 25 nước trồng lạc châu Á, Việt Nam đứng vị trí thứ năm sản lượng lạc hàng năm Trong thập kỷ 60, 70, 80 kỷ XX diện tích, suất sản lượng lạc nước ta thấp Đến thập kỷ 90 kỷ XX, diện tích, suất, sản lượng lạc nước ta tăng nhanh, vòng 10 năm suất lạc tăng gần 30% [12] Ở Việt Nam lạc có mặt 59/61 tỉnh thành, chia thành khu vực chính: Vùng Trung du miền núi phía Bắc, với tổng diện tích 41.000 ha; Khu vực Bắc Trung Bộ vùng trọng điểm sản xuất lạc với 71.000 ha, đạt 68,7 – 93,4 nghìn lạc/năm; Khu vực Nam Trung Bộ có khoảng 29.000 ha; Vùng Cao nguyên Nam Bộ với 18.680 ha; Vùng Đơng Nam Bộ có 6.800 [38] 1.2 Tính chịu hạn thực vật 1.2.1 Hạn hình thức hạn ảnh hƣởng đến trồng Hạn tác động môi trường gây nên nước thực vật [18] Có hình thức hạn ảnh hưởng đến trồng hạn đất, hạn khơng khí hạn tổ hợp [18] Hạn đất xảy lượng nước đất thiếu nhiều không đủ cho rễ hút để cung cấp cho Vì thế, bị héo chết Tuy nhiên, có trường hợp đủ nước mà héo, nguyên nhân hạn sinh lý gây nên Hạn khơng khí thường xảy khơng khí mơi trường có nhiệt độ cao độ ẩm thấp, ví dụ gió nóng Israel, gió Lào miền Trung nước ta làm cho thoát nước mạnh, vượt xa mức bình thường dẫn tới tượng nước, rễ hút vào không bù đủ lượng nước đi, làm phận non thiếu nước Hạn tổ hợp phối hợp thiếu nước đất khơng khí 1.2.2 Tác hại hạn lên thực vật 1.2.2.1 Tác hại hạn lên thực vật Thiếu nước gây nên hậu lớn hoạt động sống Trước tiên ảnh hưởng đến cân nước cây, từ ảnh hưởng đến chức sinh lý khác quang hợp, hơ hấp, dinh dưỡng khống cuối Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn ảnh hưởng đến sinh trưởng phát triển thực vật dẫn đến giảm suất Khi gặp hạn trạng thái chất nguyên sinh tế bào thay đổi mạnh, ảnh hưởng đến tính chất hố lý chất ngun sinh tính thấm, mức độ thuỷ hố keo, thay đổi pH, độ nhớt, dẫn đến thay đổi vị trí thành phần cấu tạo nên chất nguyên sinh, cuối ảnh hưởng đến trình trao đổi chất bình thường thể [13] Trong thời gian bị hạn, hàm lượng nước tự giảm xuống hàm lượng nước liên kết lại tăng lên Chất ngun sinh tế bào có tính đàn hồi lớn có khả chịu hạn cao [42] Hạn cịn ảnh hưởng đến hơ hấp Trong thời gian khô hạn, trung sinh thường tăng cường hô hấp Nhờ gia tăng hô hấp mà giữ độ ngậm nước keo nguyên sinh chất [13] Sự tăng cường trình thuỷ phân gặp điều kiện khô hạn nguyên nhân tăng cường hô hấp Khi nước ban đầu hô hấp tăng, sau giảm đột ngột, tình trạng thiếu nước kéo dài [42] Thiếu nước ảnh hưởng đến quang hợp Hạn hán ảnh hưởng xấu đến trình hình thành diệp lục, phá hoại lạp thể nên hiệu suất quang hợp giảm xuống nhanh chóng Theo Buxigon, trúc đào bị hạn cường độ quang hợp giảm 40% [42] Hạn ảnh hưởng đến hoạt động hút khống hệ rễ, dẫn đến tình trạng thiếu nguyên tố dinh dưỡng quan trọng trình trao đổi tổng hợp chất hữu khác thể thực vật [13] Hạn ảnh hưởng trực tiếp đến trình sinh trưởng tế bào, đặc biệt pha giãn tế bào, từ mà ảnh hưởng đến q trình sinh trưởng tồn [42] 1.2.2.2 Ảnh hƣởng hạn đến lạc Trong thời kỳ sinh trưởng, lạc có khả chịu hạn mức độ định Biểu bề nhận thấy rõ rệt lạc bị hạn tất thời kỳ sinh trưởng Khi độ ẩm đất giảm, lạc nhỏ Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn dày, màu từ xanh đậm chuyển dần sang xanh nhạt diệp lục bị phá hủy [15] Trong điều kiện bị hạn tức thời, giữ nguyên kích thước sức trương tế bào giảm, khí khổng khép lại, bị rũ xuống [8] Thời kỳ trước hoa thời kỳ lạc chịu hạn lớn nhất, giai đoạn nhu cầu nước lạc khơng lớn lắm, độ ẩm thích hợp từ 60% - 65% Bị hạn thời kỳ trước hoa ảnh hưởng đến tốc độ sinh trưởng lạc, làm cho trình phát triển bị chậm lại [38] Ở giai đoạn hoa, thiếu nước làm giảm số hoa, tỷ lệ hoa có ích, đợt rộ khơng hình thành, kéo dài thời gian hoa - chín lạc, gây ảnh hưởng đáng kể tới suất Tuy nhiên, tưới kịp thời lượng hoa nở hàng ngày phục hồi nhanh chóng [8] Trong giai đoạn hình thành quả, diện tích đạt cao nhất, tốc độ chất khơ tích lũy cao cần lượng nước lớn Nếu thiếu nước giai đoạn làm giảm số chắc, giảm trọng lượng hạt, dẫn đến giảm suất [38] 1.2.3 Cơ sở sinh lý, sinh hóa di truyền tính chịu hạn thực vật 1.2.3.1 Cơ sở sinh lý tính chịu hạn Nước có ý nghĩa định đến đời sống thực vật Thiếu nước chết non giảm sức sống, giảm suất Do thiếu nước môi trường, nhiệt độ thấp hay nhiệt độ cao gây tượng nước Để đáp ứng thiếu hụt nước điều kiện cực đoan, bắt buộc phải có chế thích ứng đặc biệt giúp trì tồn bị hạn Ở thực vật, đề cập chế chịu hạn người ta thường ý đến vai trò rễ khả điều chỉnh áp suất thẩm thấu tế bào Về vai trò rễ: Những chịu hạn có rễ khoẻ, dài, mập, có sức xuyên sâu giúp hút nước tầng đất sâu Bộ rễ lan rộng, có nhiều rễ phụ có nhiều mơ thơng khí, với hệ mạch dẫn phát triển giúp cho việc thu nhận cung cấp nước tới phận khác điều kiện khó khăn nước Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn Về khả điều chỉnh áp suất thẩm thấu: Khi tế bào bị nước dần dần, chất hịa tan tích lũy tế bào chất (như: đường, axit hữu cơ, axit amin, ion chủ yếu ion K+ ), chất có tác dụng điều chỉnh áp suất thẩm thấu Áp suất thẩm thấu tăng lên giúp cho tế bào rễ thu nhận phân tử nước ỏi cịn đất Bằng chế vậy, thực vật chịu nước thời gian ngắn [18] Ngồi ra, thực vật cịn có khả chống chịu hạn biến đổi hình thái cuộn lại thành ống, có nhiều lơng, cu tin dày để giảm thoát nước [13] 1.2.3.2 Cơ sở sinh hóa di truyền tính chịu hạn Khi phân tích thành phần hóa sinh chịu hạn, nghiên cứu cho rằng, gặp hạn có tượng tăng lên hoạt độ enzyme, hàm lượng ABA, hàm lượng proline, nồng độ ion K+, loại đường, axit hữu cơ, giảm CO2, protein axit nucleic [1], [6],[19], [31] Nghiên cứu đa dạng hoạt động enzyme điều kiện gây hạn nhiều tác giả quan tâm Trần Thị Phương Liên (1999) nghiên cứu đặc tính hóa sinh số giống đậu tương có khả chịu nóng, hạn nhận xét áp suất thẩm thấu cao ảnh hưởng rõ rệt tới thành phần hoạt độ protease, kìm hãm phân giải protein dự trữ [18] Một số nghiên cứu đối tượng lạc, lúa, đậu xanh, đậu tương cho thấy, có mối tương quan thuận hàm lượng đường tan hoạt độ enzyme α - amylase, hàm lượng protein hoạt độ protease [17], [27], [35] Đường tan chất tham gia điều chỉnh áp suất thẩm thấu tế bào Sự tăng hoạt độ α - amylase làm tăng tăng hàm lượng đường tan làm tăng áp suất thẩm thấu tăng khả chịu hạn trồng [20], [31] Những thay đổi hóa sinh khác hạn gây nhiều tác giả quan tâm nghiên cứu, có biến đổi hàm lượng axit amin proline Nghiên cứu khả chịu hạn số giống lúa cạn địa phương vùng núi phía Bắc, tác giả Chu Hoàng Mậu Cs (2005) nhận xét, khả Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn chịu hạn lúa cạn phụ thuộc tuyến tính vào hàm lượng proline [25] Xử lý hạn dung dịch sorbitol 5% số dịng lúa tái sinh từ mơ sẹo chịu nước, tác giả Đinh Thị Phòng (2001) cho thấy, hàm lượng proline dòng chọn lọc bị xử lý sorbitol tăng lên vượt xa so với đối chứng (khơng bị xử lý) [31] Tính chống chịu tính trạng đa gen, biểu khác giai đoạn phát triển Trên thực tế chưa tìm gen thực định tính chịu hạn mà tìm thấy gen liên quan đến tính chịu hạn Vì nghiên cứu chế phân tử tính chịu hạn chủ yếu vào hướng nghiên cứu biểu chức chất gen tương ứng liên quan đến khả bảo vệ tế bào khỏi tác động stress Một nhóm gen liên quan đến điều kiện nước gen mã hóa nhóm protein có tên gọi LEA (Late embryogenesis abundant protein) LEA khơng đóng vai trị điều chỉnh trình nước sinh lý hạt chín, mà cịn hạn chế nước bắt buộc điều kiện ngoại cảnh bất lợi hạn, nóng lạnh Mức độ phiên mã LEA điều khiển ABA độ nước tế bào Ngồi ra, nhóm chất protein sốc nhiệt (HSP - heat shock protein), MGPT (molecular chaperone), ubiquitin đặc biệt quan tâm nghiên cứu [18] Như vậy, chế chịu hạn thực vật phức tạp, khơng liên quan đến đặc điểm hình thái giải phẫu thực vật, mà liên quan đến thay đổi thành phần hoá sinh tế bào, điểu chỉnh hoạt động gen 1.3 Một số thành tựu nuôi cấy mô tế bào thực vật vào việc đánh giá khả chịu hạn chọn dịng biến dị xoma Kỹ thuật ni cấy mơ tế bào thực vật ứng dụng rộng rãi lĩnh vực nghiên cứu khả chống chịu trồng chịu hạn, chịu muối, chịu nhơm [22], [24], [41] Chu Hồng Mậu, Ngơ Thị Liêm, Nguyễn Thị Tâm (2006) tiến hành xử lý thổi khô mô sẹo giống lạc MĐ7, L17, L14, L18, ĐBG, nhận thấy mơ Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn 10 sẹo giống lạc bị nước nhanh, khả chịu nước giống có khác rõ rệt, cao giống ĐBG thấp L18 [24] Nguyễn Tường Vân, Lê Trần Bình, Lê Thị Muội (1994) tiến hành đánh giá khả chịu muối (NaCl) giống lúa CR203, Lốc, C8, Co mức độ mô sẹo, sau chuyển vào môi trường có bổ sung NaCl 1% 2% Sau 12 tuần theo dõi cho thấy khả chịu muối giống Co cao giống CR203 có khả chịu muối thấp [40] Bằng kỹ thuật nuôi cấy mô sẹo in vitro, Nguyễn Văn Vinh, Lê Duy Thành cộng (1995) nghiên cứu khả chịu nhôm axit giống lúa: ĐC3, CM10, Pokaly, Cườm, Chiêm Bầu, CR203, NN8, OM 86120, OM 296 Tép lai, thu dịng mơ sẹo giống Pokaly Cườm có khả chịu AlCl3 600ppm pH 2,71 Mô sẹo giống Tép lai, CR203 chịu AlCl3 400ppm pH 2,98 [41] Tác giả Bùi Thu Thuỷ (2006) tiến hành thổi khô mô sẹo giống lúa TM, CR 203, U17, KD18 BT nhận thấy giống lúa bị nước nhanh xử lý thổi khơ Khả chịu nước có khác rõ rệt, cao giống TM, thấp giống U17 [36] Nguyễn Thị Tâm (2004), xử lý nhiệt độ cao giai đoạn mô sẹo số giống lúa tạo 197 dịng mơ có khả chịu nóng 400C, 420C 520 dịng xanh Từ 33 dòng qua hệ chọn dòng bật HR128 với đặc điểm thấp cây, số hạt chắc/bông cao, hàm lượng protein, đường tan, axit amin liên kết hạt cao, có khả chịu nóng, cứng dịng HR499 với khả đẻ nhánh hữu hiệu, số hạt chắc/bông, suất khóm, có khả chịu nóng cao so với giống gốc [33] Với hoàn thiện kỹ thuật điều kiện nuôi cấy mở nhiều triển vọng cho việc nghiên cứu khả chịu hạn chọn dòng chịu hạn cho nhiều đối tượng trồng Sự đời giống lúa DR1, DR2 có khả chịu hạn cao thời gian ngắn kỹ thuật nuôi cấy mô tế bào thực vật chứng cho chọn tạo dòng chống chịu kỹ thuật in vitro [30] Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn 61 (a) Có 6/10 cho tính đa hình (b) Hệ số sai khác di truyền dòng chịu nước so với giống gốc LCB từ 0,0318 - 0,2055 Điều khẳng định dịng có nguồn gốc từ mơ sẹo chịu nước có thay đổi ADN genome Đề nghị Tiếp tục theo dõi, phân tích dòng giống lạc L24, LCB, L23, LBK, LTB, L08 hệ đặc điểm nơng học, hóa sinh, khả chịu hạn để chọn dịng triển vọng có khả chịu hạn cao CƠNG TRÌNH ĐÃ CƠNG BỐ Nguyễn Thu Giang, Nguyễn Thị Tâm, Chu Hoàng Mậu (2008), "Đặc điểm phản ứng giống lạc L24, LCB, L23, LBK, LTB,L08 điều kiện hạn sinh lý giai đoạn hạt nảy mầm", Tạp chí Khoa học Cơng nghệ, Số 2(46), tr 97- 104 Nguyễn Thu Giang, Nguyễn Thị Tâm, Chu Hồng Mậu (2008), " Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn 62 TÀI LIỆU THAM KHẢO Lê Trần Bình, Lê Thị Muội (1998), Phân lập gen chọn dòng chống chịu ngoại cảnh bất lợi lúa, Nxb Đại học Quốc gia, Hà Nội Lê Trần Bình, Lê Thị Muội, Hồ Hữu Nhị (1997), Công nghệ sinh học thực vật cải tiến giống trồng, Nxb Nông nghiệp, Hà Nội Phạm Thị Trân Châu, Nguyễn Thị Hiền, Phùng Gia Tường (1998), Thực hành hóa sinh học, Nxb Giáo dục, tr - 27 Phạm Thị Trân Châu, Trần Thị Áng (1999), Hóa sinh học, NXB Giáo dục, tr.14 - 77 Nguyễn Khoa Chi (1987), Cây đậu phộng, Nxb Thành phố Hồ Chí Minh, tr - 59 Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn 63 Nguyễn Hữu Cường, Nguyễn Thị Kim Anh, Đinh Thị Phòng, Lê Thị Muội, Lê Trần Bình (2003), " Mối tương quan hàm lượng proline tính chống chịu lúa", Tạp chí Cơng nghệ sinh học (1), tr 85 - 95 Nguyễn Lân Dũng (1979), Một số phương pháp nghiên cứu vi sinh vật học, tập 3, Nxb Hà Nội, tr 116 - 120 Ngô Thế Dân, Nguyễn Xuân Hồng, Đỗ Thị Dung, Nguyễn Thị Chinh, Trần Đình Long, Nguyễn Thị Đào, Phạm Văn Toản, Gowda C L (2000), Kỹ thuật đạt suất lạc cao Việt Nam, Nxb Nông nghiệp, Hà Nội, tr - 138 Lê Song Dự, Nguyễn Thế Côn (1979), Giáo trình lạc, Nxb Nơng nghiệp, Hà Nội, tr - 44 10 Lê Xuân Đắc, Đinh Thị Phòng, Lê Thị Muội, Lê Trần Bình (1999) "Sử dụng kỹ thuật RAPD để đánh giá tính đa hình ADN số dịng chọn lọc từ mơ sẹo giống lúa C71" Hội nghị Cơng nghệ Sinh học tồn quốc, Nxb Khoa học Kỹ thuật, Hà Nội, tr 1341-1347 11 Trần Văn Điền (1990), Giáo trình lạc, Trường Đại học Nông nghiệp , Nxb Nông Nghiệp, Hà Nội, tr - 81 12 Nguyễn Danh Đông, Ngô Ngọc Đăng, Nguyễn Thế Côn, Dương Văn Nghĩa, Lê Quang Hanh, Ngô Đức Dương (1984), Cây lạc, Nxb Hà Nội, tr - 239 13 Trần Kim Đồng, Nguyễn Quang Phổ, Lê Thị Hoa (1991), Giáo trình sinh lý trồng, Nxb Giáo dục 14 Điêu Thị Mai Hoa, Trần Thị Thanh Huyền (2007), "Sự biến đổi hàm lượng amino acid proline rễ đậu xanh tác động tress muối NaCl", Báo cáo khoa học hội nghị toàn quốc, Nxb KH&KT, tr 482-485 15 Nguyễn Xuân Hồng, Đỗ Thị Dung, Nguyễn Thị Chính, Vũ Thị Đào, Phạm Tồn Thắng, Trần Đình Long (2000), Kỹ thuật đạt suất lạc cao, Nxb Nơng nghiệp, Hà Nội Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn 64 16 Trần Văn Lài (1991), Yếu tố sinh học hạn chế sản xuất lạc Việt Nam, tiến kỹ thuật trồng lạc đậu đỗ Việt Nam, Nxb Nông nghiệp, Hà Nội 17 Ngô Thị Liêm, Chu Hoàng Mậu (2006), "Đặc điểm phản ứng giống lạc điều kiện hạn sinh lý", Tạp chí Nông nghiệp PTNT, (84), tr 82-87 18 Trần Thị Phương Liên (1999), Nghiên cứu đặc tính hóa sinh sinh học phân tử số giống đậu tương có khả chịu nóng, chịu hạn Việt Nam, Luận án Tiến sĩ Sinh học, Hà Nội, tr 18 - 36 19 Trần Thị Phương Liên, Nông Văn Hải (2005), "Protein dự trữ protease hạt trồng", Tạp chí Cơng nghệ Sinh học, 3(4), tr 37 -45 20 Trần Thị Phương Liên, Lê Thị Muội (2004), Nghiên cứu thành phần đường tan chọn giống đậu tương, Báo cáo khoa học - Những vấn đề nghiên cứu khoa học sống, Nxb Khoa học & Kỹ thuật, tr 473 -475 21 Lê Đình Lương, Quyền Đình Thi (2002), Kỹ thuật di truyền ứng dụng, Nxb Đại học Quốc Gia, Hà Nội 22 Nguyễn Hồng Lộc, H T T Ngọc, Lê Trần Bình, Lê Thị Muội (1992), "Nghiên cứu khả chịu nước mô sẹo thuốc nuôi cấy in vi tro", Tạp chí sinh học, (14), tr 31- 37 23 Nguyễn Văn Mã, Cao Bá Cường, Nguyễn Thị Thanh Hải (2005), Một số tiêu sinh lý giống lạc chịu hạn, Những vấn đề nghiên cứu khoa học sống, Nxb Khoa học & Kỹ thuật, tr 504 - 507 24 Chu Hồng Mậu, Ngơ Thị Liêm, Nguyễn Thị Tâm (2006), "Đánh giá khả chịu hạn số giống lạc kỹ thuật nuôi cấy in vitro", Hội nghị Khoa học Cơng nghệ Tồn quốc 2006, Nxb KH&KT, tr 202 -209 25 Chu Hoàng Mậu, Nguyễn Thị Vân Anh (2005), "Khảo sát chất lượng hạt khả chịu hạn số giống lúa cạn địa phương vùng núi phía Bắc", Tạp chí Nơng nghiệp PTNT, (17), tr 19 -23 26 Nguyễn Văn Mùi (2001), Thực hành hóa sinh học, NXB Đại học Quốc Gia, Hà Nội, tr 86 - 127 Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn 65 27 Nguyễn Thị Thu Ngà, Nguyễn Thị Tâm (2007), "Ảnh hưởng hạn sinh lý đến số tiêu sinh hóa giai đoạn nảy mầm số giống lạc", Tạp chí Nơng nghiệp PTNT, (6), tr 34 - 39 28 Nguyễn Thị Thu Ngà, Nguyễn Thị Tâm (2007), "Đánh giá khả chịu hạn mức độ mô sẹo giai đoạn non giống lạc", Báo cáo khoa học hội nghị toàn quốc 2007 - Những vấn đề nghiên cứu khoa học sống, Nxb KH&KT, tr 805 - 808 29 Phạm Thị Thanh Nhàn, Chu Hoàng Mậu, Nguyễn Thị Tâm (2007), "Một số đặc trưng chịu hạn số giống ngô nếp (Zea may L.) địa phương giai đoạn mô non", Báo cáo khoa học hội nghị toàn quốc 2007 - Những vấn đề nghiên cứu khoa học sống, Nxb KH&KT, tr 784 - 787 30 Đinh Thị Phịng, Nguyễn Văn Tĩnh, Lê Trần Bình, Lê Thị Muội (1998), "Kết chọn tạo triển khai sản xuất hai giống lúa DR1 DR2 cơng nghệ tế bào thực vật", Tạp chí Khoa học Công nghệ, (36), tr 1- 31 Đinh Thị Phòng (2001), Nghiên cứu khả chịu hạn chọn dịng chịu hạn lúa cơng nghệ tế bào thực vật, Luận án Tiến sĩ Sinh học, Viện Công nghệ Sinh học, Hà Nội 32 Nguyễn Vũ Thanh Thanh (2003), Nghiên cứu thành phần hóa sinh hạt tính đa dạng di truyền số giống đậu xanh có khả chịu hạn khác nhau, Luận văn thạc sĩ Sinh học, Trường Đại học Sư phạm- Đại học Thái Nguyên, tr 48 - 67 32 Nguyễn Thị Tâm (2004), Nghiên cứu khả chịu nóng chọn dịng chịu nóng lúa cơng nghệ tế bào thực vật", Luận án Tiến sĩ Sinh học, Viện Công nghệ Sinh học, Hà Nội 34 Bùi Văn Thắng, Trần Văn Dương, Đinh Thị Phòng, Nguyễn Văn Thắng, Lê Thị Muội, Lê Trần Bình (2003), "Đánh giá tính đa dạng số dịng lạc tập đồn chống chịu bệnh gỉ sắt kỹ thuật RAPD", Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn 66 Báo cáo khoa học, Hội nghị Công nghệ Sinh học Toàn Quốc, Nxb KH&KT, Hà Nội, tr 805-809 35 Bùi Thị Thu Thủy, Nguyễn Thị Tâm, Nguyễn Mạnh Quỳnh (2006), "Ảnh hưởng hạn sinh lý đến số tiêu hóa sinh hạt nảy mầm số giống lúa", Tạp chí Nơng nghiệp PTNT, 12(2), tr 29 - 33 36 Bùi Thị Thu Thủy, Nguyễn Thị Tâm (2006), "Tạo vật liệu khởi đầu cho chọn dịng chịu hạn số giống lúa cơng nghệ tế bào thực vật", Tạp chí Nơng nghiệp PTNT, (17), tr 29 - 32 37 Bùi Thị Thu Thủy, Nguyễn Thị Tâm (2006), "Đánh giá đa hình ADN số dịng lúa có nguồn gốc từ mơ sẹo thổi khơ giống U17", Tạp chí Khoa học Công nghệ, Đại học Thái Nguyên, 39, tr 65 - 71 38 Chu Thị Thơm, Phan Thị Lài, Nguyễn Văn Tó (2006), Kỹ thuật trồng chăm sóc lạc, Nxb Lao Động, Hà Nội, tr - 86 39 Nguyễn Hải Tuất, Ngô Kim Khôi (1996), Xử lý thống kê kết nghiên cứu thực nghiệm nông, lâm, ngư nghiệp máy vi tính, Nxb Nơng nghiệp, Hà Nội 40 Nguyễn Tường Vân, Lê Trần Bình, Lê Thị Muội (1994), Chọn dòng chịu muối lúa công nghệ nuôi cấy tế bào thực vật, Kỷ yếu viện CNSH, Nxb KH&KT, Hà Nội, tr 19 - 27 41 Nguyễn Văn Vinh, Lê Duy Thành, Lê Trần Bình, Lê Thị Muội (1995), "Nghiên cứu khả chịu nhôm acid giống lúa DDC3,CM10, Pokaly, Cườm, Chiêm Bầu, C202, NN8, OM861-20, OM296 Tép lai", Tạp chí Di truyền học ứng dụng, (4), tr 23 - 26 42 Vũ Văn Vụ, Vũ Thanh Tâm, Hoàng Minh Tấn (1997), Sinh lý học thực vật, Nxb Giáo dục, Hà Nội, tr 125 - 224 Tiếng nƣớc 43 Adkind S W., Kunanuvatchaidach R., Godwin I D., 1995 Somaclonal variation in rice- drought tolerant and other agronomic characters Australia journal of Botany, (2), tr.201-209 Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn 67 44 Bates L.S., (1973), Rapid determination of free protein for water-stress studies, Plant and Soil, 39, pp.205-207 45 Delauney A., Verma DPS., (1993), Proline biosynthesis and osmoregulation in plan, Plant J, 4, pp 215 – 223 46 Doyle J.J and J.L Doyle, 1987 Phytochemistry Bulletin, pp 11-15 47 Dinh Thi Phong, Le Thi Muoi, Le Tran Binh (2001), RAPD variability in rice (Oryza sativa L.) plants derived from desisccation-tolerance calli, Euphytica 00, pp.1-7 48 Foolad M R., Siva A., and Rodriguer L R, (1995) Application of polymerase chain reaction (PCR) to plant genome analysis In: Plant Cell, Tissue and Organ Culture Fundamental methods Springer Verlag, Berlin, Heideberg, p 281-298 49 Hu ACA., Delauney AJ., Verma DPS (1992), A bifunctional enzyme (P5CS) catalyses the first two steps in proline biosynthesis in plants, Proc Natl Acad Sci USA, 83, pp 1203 – 1207 50 Raina SN V, Kojima T, Ogihara Y, Singh KP, Devarumath RM (2001), "RAPD and ISSR figerprints as useful genetic markers for analysis of genetic diversity, varietal identification, and phylogenetic relationships in peanut (Arachis hypogaea L.) cultirs and wild species" Genome, 44(5), 763- 772 51 Zheng K L., Zhou Z M., Wang G L., Lou Y K., Xiong Z M., (1989) Somatic cell culture of rice cultivars with difference grain types: Somaclonal variation in some grain quality characters Plant cell, tissue and organ culture 18: 201 - 208 Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn 68 LỜI CAM ĐOAN Tôi xin cam đoan cơng trình nghiên cứu riêng tơi Các số liệu, kết nghiên cứu luận văn trung thực chưa công bố Tác giả Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn 69 Nguyễn Thu Giang LỜI CẢM ƠN Tơi xin bày tỏ lịng biết ơn sâu sắc tới TS Nguyễn Thị Tâm tận tình hướng dẫn, bảo tạo điều kiện giúp đỡ tơi hồn thành cơng trình nghiên cứu Tơi xin chân thành c ảm ơn PGS TS Chu Hoàng Mậu - Đại học Thái Nguyên, Ban lãnh đ ạo Trường Đại học Sư phạm - Đại học Thái Nguyên, Ban chủ nhiệm khoa Sinh - Kỹ thuật Nông nghiệp thầy cô giáo, cán Khoa, giúp đỡ Ths Nguyễn Thị Thu Ngà, KTV Đào Thu Thủy (Phòng thí nghiệm Cơng nghệ Tế bào), CN Nguyễn Ích Chiến (Phịng thí nghiệm Di truyền học) CN Nguyễn Thị Hồng Liên giúp đỡ tơi hồn thành cơng trình nghiên cứu Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn 70 Tôi xin cảm ơn Trung tâm thực nghiệm đậu đỗ - Viện Khoa học Nông nghiệp Việt Nam, Sở Nông nghiệp Phát triển Nông thôn tỉnh Cao Bằng, Bắc Kạn, Thái Bình cung c ấp giống lạc có chất lượng cao làm vật liệu nghiên cứu cho đề tài luận văn Tôi xin chân thành c ảm ơn Ban giám hiệu trường Đại học Y khoa Thái Nguyên, Bộ Mơn Hóa Sinh - Khoa Khoa học bản, gia đình, bạn bè đồng nghiệp tạo điều kiện giúp đỡ, động viên khích lệ tơi suốt q trình học tập hồn thành luận văn Tác giả luận văn Trang MỞ ĐẦU Chƣơng Tổng quan tài liệu 1.1 Giá trị kinh tế, đặc điểm nông sinh học tình hình sản xuất lạc giới Việt Nam 1.2.Tính chịu hạn thực vật 1.3 Một số thành tựu nuôi cấy mô tế bào thực vật vào việc đánh giá khả chịu hạn chọn dòng biến dị soma………………………… 11 1.4 Kỹ thuật RAPD phân tích hệ gen thực vật…………………… Chƣơng Vật liệu phƣơng pháp 13 2.1 Vật liệu 13 2.2 Hóa chất, thiết bị địa điểm nghiên cứu……………………………………… 13 2.3 Phương pháp nghiên c ứu…………………………………………………… 14 2.3.1 Phương pháp hóa sinh……………………………………… 14 Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn 71 2.3.2 Phương pháp sinh lý……………………………………… 17 2.3.3 Phương pháp nuôi c in vitro……………………………………… 18 2.3.4 Phương pháp nghiên c ứu đồng ruộng ………………………………… 20 2.3.5 Phương pháp sinh học phân tử ……………………………………………… 20 Chƣơng Kết thảo luận……………………………………… 22 3.1 Hàm lượng protein lipit giống lạc nghiên cứu …………… 22 3.2 Khả chịu hạn giống lạc L24, LCB, L23, LBK, LTB, L08 …………… 23 3.2.1 Khả chịu hạn giống lạc L24, LCB, L23, LBK, LTB,L08 giai đoạn 23 hạt nảy mầm………………………………………………………………………… 3.2.2 Khả chịu hạn giống lạc L24 , LCB, L23, LBK, LTB,L08 giai đoạn non 32 phương pháp gây hạn nhân tạo 3.2.3 Khả chịu hạn giống lạc L24, LCB, L23 , LBK, LTB,L08 giai đoạn mô 39 sẹo 3.2.4 Phân nhóm giống lạc nghiên cứu dựa phản ứng giai đoạn mô sẹo, giai 43 đoạn hạt nảy mầm giai đoạn non………………………………………………… 3.3 Tạo vật liệu khởi đầu cho chọn dòng chịu hạn giống lạc kỹ thuật 45 nuôi cấy in vitro 3.3.1 Kết sàng lọc dòng tế bào chịu hạn kỹ thuật thổi khô, tái sinh 45 tạo hoàn chỉnh 3.3.2 Phân tích mức độ biến động di truyền số đặc điểm nông học quần thể R0 45 3.3.3 Nhận xét chọn dòng tế bào chịu nước đặc điểm nông học quần thể 50 R0 3.4 Đánh giá thay đổi ADN genome số dịng lạc có nguồn gốc từ mơ sẹo chịu nước 51 3.4.1 Kết tách chiết ADN tổng số 51 3.4.2 Phân tích đa hình ADN kỹ thuật RAPD 52 3.4.3 Nhận xét đa hình ADN số dịng lạc có nguồn gốc từ mô sẹo chịu nước KẾT LUẬN VÀ ĐỀ NGHỊ CƠNG TRÌNH ĐÃ CƠNG BỐ TÀI LIỆU THAM KHẢO Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên 58 60 61 62 http://www.lrc-tnu.edu.vn 72 Bảng 2.1 Trình tự nucleotit 10 mồi RAPD sử dụng nghiên cứu Bảng 3.1 Hàm lượng protein, lipit c giống lạc nghiên cứu Bảng 3.2 Hoạt độ - amylase giai đoạn hạt nảy mầm xử lý sorbitol 5% Bảng 3.3 Hàm lượng đường tan giống nghiên cứu giai đoạn nảy mầm Bảng 3.4 Trang 21 22 Tương quan hoạt độ - amylase hàm lượng đường giai đoạn hạt nảy mầm Bảng 3.5 Hoạt độ protease giai đoạn hạt nảy mầm xử lý sorbitol 5% Bảng 3.6 Hàm lượng protein tan giống nghiên cứu giai đoạn nảy mầm Bảng 3.7 Tương quan hoạt độ enzyme protease hàm lượng protein giai đoạn hạt nảy mầm Bảng 3.8 Khối lượng tươi, khô rễ non sau xử lý hạn Bảng 3.9 Khối lượng tươi, khô thân non sau xử lý hạn Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn 24 26 27 28 30 31 32 33 73 Bảng 3.10 Tỷ lệ sống, khả giữ nước số chịu hạn tương đối giống lạc …………………… …………………………………………… Bảng 3.11 Biến độ ều kiện hạn nhân tạo Bảng 3.12 Biến độ ều kiện hạn nhân tạo Bảng 3.13 Tương quan hàm lượng proline số chịu hạn Bảng 3.14 Độ nước mô sẹo phôi lạc (%) … … … … Bảng 3.15 Tỷ lệ sống sót mơ sẹo sau xử lý nước (%)… … … … … Bảng 3.16 Khả tái sinh c mơ sẹo sống sót sau xử lý thổi khô (%) Bảng 3.17 Hệ số khác biểu kiểu hình giống lạc………… Bảng 3.18 Bảng 3.19 Bảng 3.20 Bảng 3.21 Bảng 3.22 Bảng 3.23 35 36 37 38 40 41 42 44 Mức độ biến động di truyền quần thể R0 giống lạc LCB 46 Độ hàm lượng ADN mẫu lạc nghiên cứu 52 Tổng số phân đoạn ADN nhân mẫu lạc phân tích với 10 mồi ngẫu nhiên 53 Phân tích đa hình phân đoạn ADN nhân với 10 mồi ngẫu nhiên 54 Giá trị tương quan kiểu hình (r) theo cách tính hệ số tương đồng 56 Hệ số sai khác di truyền dòng giống gốc 57 DANH MỤC CÁC HÌNH Trang Hình 3.1 Định tính hoạt độ - amylase giống L24 LT B giai đoạn hạt nảy mầm 1, 3, 5, ngày Hình 3.2 Biến động hàm lượng đường tan giống giai đoạn nảy mầm Hình 3.3 29 Biến động hàm lượng protein giống lạc giai đoạn nảy mầm… Hình 3.5 26 Định tính hoạt độ protease giống L24 LT B giai đoạn hạt nảy mầm Hình 3.4 25 30 Đồ thị hình rada thể khả chịu hạn giống lạc giai đoạn non 35 Hình 3.6 Hàm lượng proline thân điều kiện hạn nhân tạo 36 Hình 3.7 Hàm lượng proline rễ giống lạc nghiên cứu điều kiện hạn nhân tạo Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên 37 http://www.lrc-tnu.edu.vn 74 Hình 3.8 Độ nước mô sẹo phôi lạc xử lý thổi khơ (%) 40 Hình 3.9 Tỷ lệ sống sót mơ sẹo sau xử lý thổi khơ (%)…………… 42 Hình 3.10 Sơ đồ mơ tả quan hệ giống lạc dựa biểu kiểu hình 72 tính trạng 44 Hình 3.11 Một số hình ảnh biến dị dòng chọn lọc từ giống LBK 49 Hình 3.12 Một số hình ảnh dịng tái sinh có nguồn gốc từ mơ sẹo chịu nước giống L CB ngồi đồng ruộng 50 Hình 3.13 Hình ảnh điện di sản phẩm PCR-RAPD mẫu lạc với mồi DTN15 DTN19 55 Hình 3.14 Hình ảnh điện di sản phẩm PCR-RAPD mẫu lạc với mồi USP31và UPH04………………………………………………… Hình 3.15 55 Sơ đồ hình thể mối quan hệ di truyền dòng chọn lọc giống gốc 58 NHỮNG CHỮ VIẾT TẮT 2,4D 2,4-Dichlorphenoxyacetic acid ABA Axit abscisic ADN Axit deoxyribonucleic ASTT Áp suất thẩm thấu bp Base paire (Cặp bazo) BAP – Benzyl Amino Purin Cs Cộng ĐVHĐ Đơn vị hoạt độ ĐVMS Đơn vị mô sẹo HSPL Hệ số pha lỗng kb Kilobase Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn 75 LEA Late Embryogenesis Abundant Protein (Protein tổng hợp với số lượng lớn giai đoạn cuối q trình hình thành phơi) MS Murashige – Skoog NAA Naphthyl Acetic Acid PCR Polymerase Chain Reaction PIC Polymorphism Information Content PP Pellagra Preventive (Vitamin PP) RAPD Random Amplified Polymorphic DNA (Đa hình phân đoạn ADN nhân ngẫu nhiên) TAE Tris acetate EDTA TGXL Thời gian xử lý Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn ... giống nghiên cứu có khác rõ rệt, cao giống L24, thấp giống L08 (2) Những mơ sẹo sống sót có khả tái sinh Khả tái sinh mơ sẹo sống sót sau xử lý ngưỡng cao so với ngưỡng cịn lại Số hóa Trung tâm Học. .. cho nghiên cứu (3) Quần thể R0 có mức độ biến động di truyền lớn đặc điểm nông học (chiều cao cây, số cành/cây, số chắc/cây, kích thước quả, số lượng chiều dài rễ, thời gian sinh trưởng ) Đây đặc. .. Ssv: Số mơ sống sót; NT : Tổng số mơ xử lý Tỉ lệ tái sinh đánh giá sau tuần nuôi cấy, theo công thức : Rc (%) Trong đó: Nr x100% N sv R c: Khả tái sinh (%); Nr: Số mô tái sinh cây; Nsv: Số mơ sống