Xác định hàm lượng cholesterol trong trứng và so sánh trình tự vùng điều khiển D-loop DNA ty thể của gà Ri, gà Tre, gà Ác nuôi tại Bắc Giang

Thông tin tài liệu

ĐAI HOC THAI NGUYÊN ̣ ̣ ́ TRƢƠNG ĐAI HOC SƢ PHAM ̀ ̣ ̣ ̣  VŨ THỊ NHƢ TRANG XÁC ĐỊNH HÀM LƢỢNG CHOLESTEROL TRONG TRỨNG VÀ SO SANH TRÌ NH TƢ VUNG ĐIÊU KHIÊN D-LOOP DNA TY ́ ̣ ̀ ̀ ̉ THÊ CUA GA RI, GÀ ÁC, GÀ TRE ̉ ̉ ̀ LUÂN VĂN THAC SĨ SINH HOC ̣ ̣ ̣ THÁI NGUYÊN, 2009 Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn ĐAI HOC THAI NGUYÊN ̣ ̣ ́ TRƢƠNG ĐAI HOC SƢ PHAM ̀ ̣ ̣ ̣  VŨ THỊ NHƢ TRANG XÁC ĐỊNH HÀM LƢỢNG CHOLESTEROL TRONG TRỨNG VÀ SO SÁNH TRÌNH TỰ VÙNG ĐIỀU KHIỂN D-LOOP DNA TY THÊ CUA ̉ ̉ GÀ RI, GÀ ÁC, GÀ TRE Chuyên nganh : SINH HOC THƢC NGHIÊM ̀ ̣ ̣ ̣ Mã số: 60.42.30 LUÂN VĂN THAC SĨ SINH HOC ̣ ̣ ̣ Ngƣơi hƣơng dân khoa hoc : PGS TS Nguyê n Trong lang ̀ ́ ̃ ̣ ̃ ̣ ̣ THÁI NGUYÊN, 2009 Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn Lơi cam đoan ̀ Tôi xin cam đoan la công trì nh nghiên cưu cua Các kết quả, sô ̀ ́ ̉ ́ liêu nêu luân văn la trung thưc va chưa tưng đươc công bô bât ky ̣ ̣ ̀ ̣ ̀ ̀ ̣ ́ ́ ̀ công trì nh nao khac ̀ ́ Tác giả luận văn Vũ Thị Nhƣ Trang Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn LƠI CAM ƠN ̀ ̉ Tác giả chân thành cảm ơn sự hướng dẫn tận tình PGS TS Nguyên ̃ Trọng Lạng suốt quá trình hoàn thành luận văn này Tác giả xin chân thành cảm ơn sự giúp đỡ các thầy cô giáo Khoa Sinh trương Đai hoc Sư pham Thai Ngun , phịng thí nghiệm Khoa Hóa ̀ ̣ ̣ ̣ ́ an toàn vệ sinh thực phẩm- Viện dinh dưỡng Việt Nam, phịng thí nghiệm cơng nghệ DNA ứng dụng - Viện Công nghệ Sinh học thuộc Viện Khoa học và Công nghệ Việt Nam va môt sô gia đì nh Cao Thương ̀ ̣ ́ ̉ ̣ - Tân Yên - Băc ́ Giang đa tao điêu kiên giup tân tì nh viêc nghiên cưu t ̃ ̣ ̀ ̣ ́ ̃ ̣ ̣ ́ hưc nghiêm ̣ ̣ đề tài Cuôi cung tac gia xin chân cam ơn sư giup cua Ban giam ́ ̀ ́ ̉ ̀ ̉ ̣ ́ ̃ ̉ ́ hiêu, Khoa Sau đai hoc , Ban chu nhiêm Khoa Sinh trương Đai hoc Sư pham ̣ ̣ ̣ ̉ ̣ ̀ ̣ ̣ ̣ Thái Nguyên đã cho phép và tạo điều kiện thuận lợi để tác giả hoàn thành bản luân văn ̣ ̀ Tác giả Vũ Thị Nhƣ Trang Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn Nhƣng tƣ viêt tăt ̃ ̀ ́ ́ DNA Deoxyribonucleotide acid RNA Ribonucleotide acid dNTP Deoxynucleoside triphosphate ddNTP Dideoxynucleoside triphosphate bp Base pair EDTA Ethylene diamine tetra – acetic acid EtBr Ethidium bromide Kb Kilo base PCR Polymerase Chain Reaction RNase Ribonuclease SDS Sodium Dodecyl Sulphate TAE Tris- acetate-EDTA COI Cytochrome oxidase I PBS Phosphate Buffer Saline epp eppendorf Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn Danh muc cac bang ̣ ́ ̉ Bảng 2.1 Tên bang ̉ Trang Kêt qua c hiêu cao va diên tí ch peak cholesterol chuân ́ ̉ ̀ ̀ ̣ ̉ ̉ 20 các nồng độ khác 3.1 Kêt qua chiêu cao va diên tí ch peak cholesterol trưng ́ ̉ ̀ ̀ ̣ ́ 32 các mẫu nghiên cứu 3.2 Hàm lượng cholesterol trứng các mâu nghiên cưu ̃ ́ 33 3.3 Các điểm nucleotide khác biệt mẫu gà Ác và Tre so 43 với gà Ri 3.4 Thống kê các điểm đa hình mẫu gà nghiên cứu so với 43 gà Gallus gallus gallus mã số NC 007236 và gà Gallus gallus gôc Nhât mã số AB114078 ́ ̣ 3.5 Hê sô tương đông vê tr ̣ ́ ̀ ̀ ình tự nucleotide vùng D -loop ̉ 45 mâu nghiên cưu vơi môt sô mâu GenBank ̃ ́ ́ ̣ ́ ̃ Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn Danh muc cac hì nh ̣ ́ Hình Tên hì nh Trang 1.1 Cấu trúc hoá học cholesterol 1.2 Bản đồ gen mtDNA gà nhà Gallus gallus 12 2.1 Đường chuẩn cholesterol dựa theo diện tích các peak 20 chuẩn cholesterol 2.2 Đường chuẩn cholesterol dựa theo chiều cao các peak 21 chuẩn cholesterol 3.1 Biểu đồ hàm lượng cholesterol trứng các mâu ̃ 33 nghiên cưu ́ 3.2 Kết quả điện di DNA tổng số 35 3.3 Kêt quả điện di sản phẩm PCR ́ 36 3.4 So sánh trình tự đoạn D -loop mẫu gà Ri, Ác, Tre 41 với ga Gallus gallus gallus mã số NC 007236 và gà ̀ Gallus gallus gôc Nhât mã số AB114078 ́ ̣ 3.5 Quan hệ di trùn sớ giớng gà Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên 46 http://www.lrc-tnu.edu.vn MỤC LỤC Lơi cam đoan ̀ Lơi cam ơn ̀ ̉ Danh muc cac bang ̣ ́ ̉ Danh muc cac hì nh ̣ ́ Mở đầu 1.Đặt vấn đề Mục tiêu nghiên cứu Nội dung nghiên cứu Chương TỔNG QUAN TÀI LIỆU 1.1 Nguồn gốc gia cầm 1.1.1 Gà Á 1.1.2 Gà Ri 1.1.3 Gà Tre 1.2 Cholesterol 1.2.1 Tính trạng chất lượng cholesterol trứng gà 1.2.2 Nhu cầu cholesterol người 1.2.3 Vai trò cholesterol thể 1.2.4 Tác hại cholesterol thể vượt quá mức bình thường 1.3 Đặc điểm DNA ty thể 10 1.3.1 Đặc điểm cấu trúc và trình tự DNA ty thể 10 1.3.2 Ý nghĩa về mặt tiến hoá DNA ty thể 11 1.4 Đặc điểm cấu trúc và di truyền hệ gen ty thể gà 12 1.5 Tình hình nghiên cứu DNA ty thể gà thế giới và Việt Nam 14 1.5.1 Tình hình nghiên cứu DNA ty thể gà thế giới 14 1.5.2 Tình hình nghiên cứu DNA ty thể gà Việt Nam 16 Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn Chƣơng VẬT LIỆU VÀ PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 2.1 Vật liệu 18 2.1.1 Nguồn gốc mẫu 18 2.1.2 Đị a điểm thí nghiệm 18 2.2 Hoá chất và thiết bị 18 2.2.1 Hóa chất 18 2.2.2 Thiết bị sử dụng 18 2.3 Phương pháp nghiên cứu 19 2.3.1 Phương pháp hoá sinh xác định hàm lượng cholesterol 19 2.3.2 Phương pháp sinh học phân tử 22 2.3.2.1 Tách chiết và tinh sạch DNA tổng số từ máu động vật 22 2.3.2.2 Kỹ thuật điện di DNA gel agarose 25 2.3.2.3 Nhân vùng điều khiển D- loop kỹ thuật PCR 26 2.3.2.4 Tinh sạch sản phẩm PCR 29 2.3.2.5 Phương pháp xác định trình tự DNA 31 2.3.3 Phương pháp xử lý số liệu 31 Chương KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 3.1 Hàm lượng cholesterol trứng các mẫu nghiên cứu 33 3.2 Xác định trình tự nucleotide vùng D-loop và đánh giá đa dạng di truyền mẫu gà nghiên cứu 35 3.2.1 Tách chiết và tinh sạch DNA tổng số từ máu gà 35 3.2.2 Nhân vùng điều khiển D-loop DNA ty thể 36 3.2.3 Xác định trình tự vùng điều khiển D-loop DNA ty thể 37 KÊT LUÂN VA ĐÊ NGHỊ ́ ̣ ̀ ̀ Kết luận 48 Đề nghị 48 TÀI LIỆU THAM KHẢO 50 PHỤ LỤC 54 Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn Mở đầu Đặt vấn đề Hiện nay, ngành chăn nuôi có bước phát triển mạnh mẽ với xu hướng chăn nuôi theo đường công nghiệp hoá Đặc biệt, ngành chăn nuôi gia cầm được quan tâm hàng đầu vì có khả cung cấp lượng lớn sản phẩm trứng, thịt giàu chất dinh dưỡng, dễ chế biến và phù hợp với nhu cầu tuyệt đại đa số người dân Sự phát triển nhanh chong ngành chăn nuôi gia cầm thế giới đã ́ tác động đến ngành chăn nuôi gia cầm nước ta về cấu, quy mô, loại hình chăn ni Sớ đàn gia cầm có sớ lượng lớn và sở chăn nuôi tập trung với quy mô lớn tăng lên Một sớ giớng gà nước ta có nhiều ưu điểm phẩm chất thịt, trứng thơm ngon, giá trị dinh dưỡng cao, có khả thích nghi cao với nhiều điều kiện sống địa phương, chống chịu tớt với điều kiện khí hậu khắc nghiệt Trong năm gần đây, xã hội ngày càng phát triển, đời sống vật chất và tinh thần người được nâng cao Chất lượng bữa ăn gia đình đã được cải thiện nhiều Cũng vì lí đó, người đã mắc nhiều bệnh khác Trong đó, bệnh điển hình chất lượng bữa ăn nâng cao là bệnh về tim mạch, xơ vỡ động mạch, huyết áp cao, thiểu mạch vành, nhồi máu tim, tai biến mạch máu não Những bệnh chiếm khoảng 25% tổng số nguyên nhân tử vong các nước phát triển thuộc thế giới tây phương Có nhiều nguyên nhân k hác dẫn tới bênh , nguyên nhân quan trọng là ̣ hàm lượng cholesterol thể cao Khi chế độ ăn uống thay đổi thì hàm lượng cholesterol thay đổi theo Những nguồn thực phẩm giàu cholesterol là loại thức ăn có ng̀n gớc động vật là bầu dục, não, tim, lòng đỏ trứng Do sở thích và tình hình kinh tế, nhiều người Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn 610 620 630 640 650 660 | | | | | | | | | | | | AB114078 cttcccctct ttagtccgtg atcgcggcat cttctctctt ctattgctgt tggttccttc AC RI TRE NC007236 670 680 690 700 710 720 | | | | | | | | | | | | AB114078 tctttttggg gcttcttcac aggttgccct tcacagtgcg ggtgcggagt gctattcaag AC RI TRE NC007236 .a 730 740 750 760 770 780 | | | | | | | | | | | | AB114078 tgaagcctgg actacacctg cgttgcgtcc tatcctagtc ctctcgtgtc cctcgatgag AC RI TRE NC007236 790 800 810 820 830 840 | | | | | | | | | | | | AB114078 acggtttgcg tgtatgggga atcatcttga cactgatgca ctttggatcg catttggtta AC .a RI TRE NC007236 850 860 870 880 890 900 | | | | | | | | | | | | AB114078 tggttcttcc accccccc-g gtaaatggtg ctatttagtg aatgcttgtc ggacatattt AC - RI - TRE c NC007236 c Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn 39 910 920 930 940 950 960 | | | | | | | | | | | | AB114078 ttatcaattt tcacttcctc tattttcttc acaaaactag gaaattcacc acaatttttt AC RI TRE NC007236 970 980 990 1000 1010 1020 | | | | | | | | | | | | AB114078 c-tttgttat tttttaattt tttttttatt tattaaaaac attttttaaa aaactaaatt AC - T RI - T TRE - T NC007236 t T 1030 1040 1050 1060 1070 1080 | | | | | | | | | | | | AB114078 acatacaaac taccgcataa aatccctcaa actatacaaa cgtttatcgt ataatatata AC .g RI TRE NC007236 1090 1100 1110 1120 1130 1140 | | | | | | | | | | | | AB114078 tacattattg tttattctat cattattaga gaaactccac taccaaaacc atcattaaaa AC RI TRE NC007236 1150 1160 1170 1180 1190 1200 | | | | | | | | | | | | AB114078 caaaaattta catgccactt aactcccctc acaaacaatc gttatttata ttgttaatta AC RI TRE A NC007236 Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn 40 1210 1220 | | | | AB114078 gcaaacacaa aacccgcctt cta AC A RI TRE A NC007236 Hình 3.4 So sánh trình tự đoạn D-loop mẫu gà Ri, Ác, Tre với gà Gallus gallus gallus mã số NC007236 gà Gallus gallus gôc Nhât mã số ́ ̣ AB114078 * So sánh trình tự gà Ri, gà Ác, gà Tre nuôi tại Bắc Giang với trình tự tham khảo mã số NC007236, chúng nhận thấy có 21 điểm đa hình/đột biến (tức là khác biệt nucleotide) Mẫu gà Ác có 17 điểm (chiếm 1,39%), mẫu gà Ri có 13 điểm (chiếm 1,06 %) và mẫu gà Tre có 15 điểm khác biệt so với NC007236 (chiếm 1,23 %) Trong 21 điểm khác biệt này, phần lớn là đột biến thay thế Ngoài cịn có đột biến nucleotid e tại vị trí là : tại vị trí sớ bị nucleotide A ga Ac , tại vị trí 859 mât nucleotid e C ga Ac va ga ̉ ̀ ́ ́ ̉ ̀ ́ ̀ ̀ Ri, tại vị trí 962 mât nucleotid e T gà Ri, Ác, Tre Nhưng đôt biên thay thế ́ ̉ ̃ ̣ ́ làm cho trình tự nucleotide các mẫu gà nghiên cứu khác với NC007236 sau: thay thế A C (AC) tại vị trí nucleotide sớ mẫu gà Ri và gà Tre; thay thế T thành C (TC) tại vị trí 167 gà Ri, vị trí 261, 296, 310 gà Ri, Ác, Tre; thay thế G thành A (GA) tại vị trí 212, 1216 gà Ác gà Tre, tại vị trí 281 gà Ri , Ác, Tre, tại vị trí 792 mẫu gà Ác 1193 mẫu gà Tre; thay thế C thành T (CT) tại vị trí 219 gà Tre , tại vị trí 225 gà Ri, tại vị trí 246, tại vị trí 315 gà Ác và Tre, tại vị trí 243, tại vị trí 306 gà Ri, Ác, Tre; thay thế A thành G (AG) tại vị trí 686 gà Ác, Ri, Tre, tại vị trí 1032 gà Ác * So sánh trình tự gà Ri, gà Ác, gà Tre với trình tự tham khảo mã số AB114078 chúng tơi nhận thấy có 15 điểm đa hình/đột biến Mẫu gà Ác có 11 Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn 41 điểm (chiếm 0,9%), mẫu gà Ri có điểm (chiếm 0,33%) và mẫu gà Tre có 13 điểm khác biệt so với trình tự tham khảo (chiếm 0,98%) Trong 15 điểm khác biệt này, phần lớn là đột biến thay thế Riêng mẫu gà Ác, tại vị trí nucleotide số bị nucleotide A so với trình tự tham khảo, đồng thời mẫu gà Tre tại vị trí nucleotide sớ 859 có thêm nucleotide C trình tự tham khảo, mẫu gà Ri và mẫu gà Ác khơng có nucleotide này Cịn lại là các đột biến thay thế làm cho trình tự nucleotide các mẫu gà nghiên cứu khác với trình tự tham khảo sau: thay thế A C (AC) tại vị trí nucleotide sớ mẫu gà Ri và gà Tre; thay thế C thành T (CT) tại vị trí 167, 246, 315 mẫu gà Ác và gà Tre, tại vị trí 355 cả mẫu gà Ri, Ác và Tre, tại vị trí 219 mẫu gà Tre; thay thế G thành A (GA) tại vị trí 212, 1216 mẫu gà Ác và gà Tre, tại vị trí 792 mẫu gà Ác 1193 mẫu gà Tre; thay thế T thành C (TC) tại vị trí 225 mẫu gà Ác Tre; thay thế A thành T (AT) tại vị trí 504, 992 cả mẫu gà Ri, Ác Tre; thay thế A thành G (AG) tại vị trí 1032 mẫu gà Ác Ngoài mẫu gà Ri, Ác, Tre khác biệt 11 điểm đa hình (chiếm 0,9%) Cụ thể : giưa ga Ac va ga Tre khac điêm, giưa ga ̃ ̀ ́ ̀ ̀ ́ ̉ ̃ ̀ Ác và gà Ri khác điêm va giưa ga Tre va ga Ri khac ̉ ̀ ̃ ̀ ̀ ̀ ́ điêm đa ̉ hình Như vây , trình tự nucleotide mẫu gà Ác và Tre tương đới giớng ̣ lại có nhiều điểm khác biệt so với mẫu gà Ri Sư khac biêt ̣ ́ ̣ nucleotide giưa mâu ga Ac va ga Tre so vơi ga Ri đươc thê hiên bang ̃ ̃ ̀ ́ ̀ ̀ ́ ̀ ̣ ̉ ̣ ̉ 3.3 Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn 42 Bảng 3.3 Các điểm nucleotide khác biệt mẫu gà Ác Tre so với gà Ri Vị trí nucleotide ty thể gà Ri gà Ác Tre 167 C T 212 G A 225 T C 246 C T 315 C T 1216 G A Sư sai khac nucleotid e giưa mâu ga Ri , Ác, Tre vơi trình tự tham ̣ ́ ̃ ̃ ̀ ́ khảo là NC007236 và AB114078 đươc thông kê bang 3.4 ̣ ́ ̉ ̉ Bảng 3.4 Thống kê điểm đa hình mẫu gà nghiên cứu so với gà Gallus gallus gallus ma số NC007236 gà Gallus gallus gôc Nhât mã số ̃ ́ ̣ AB114078 So với ga Gallus gallus gallus mã số ̀ NC007236 Vị Mẫu Thay đổi gà STT nucleotide trí ty So với ga Gallus gallus gôc Nhât mã ̀ ́ ̣ số AB114078 Kiểu biến Mẫu Thay đổi dị gà nucleotide Mất Ác del A Vị trí ty thể Kiểu biến dị thể Ác del A 1 nucleotide Tre, Ri AC Dị hoán Mất nucleotide Tre, AC Dị hoán CT 167 Đồng Ri TC 167 Ác, Tre GA 212 Đồng Ác, hốn Ri Tre Đờng Ác, hốn Tre Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Ngun hốn GA 212 Đờng hốn http://www.lrc-tnu.edu.vn 43 Tre CT 219 Ác, 219 243 CT 246 Tre Ác, CT 256 Tre, Ri Tre Đồng Ác, Tre Đồng Ác, Tre Đờng Ác, hốn CT Ác, hốn 225 Đờng hốn CT Tre, Ri Ác, CT Đờng hốn hốn Ri Tre hốn Đờng Tre, TC 225 Đờng hốn CT 246 Đờng hốn CT 315 Đờng hốn CT 355 Đờng hốn Ri Ác, 10 TC 261 Dị hoán Tre, Ri Ác, AT 504 Dị hoán Thêm C 859 Thêm Tre, Ri Ác, 11 Đồng Tre hoán TC 296 Tre, Ri Ác, 13 281 Tre, Ri Ác, 12 GA Đờng nucleotide Ác GA 792 hốn hốn 306 Tre, Ri Đờng Ác, hốn CT Đờng Tre, TC 992 Đờng hoán Ri Ác, 14 TC 310 Tre, Ri Ác,Tre CT 315 AG 686 Tre, Ri Ác 17 Đờng hốn Ác, Ác TC 1032 hốn 15 16 Đờng Đờng hốn Tre GA 1193 Đờng hốn Đờng hốn GA 792 Đờng hốn Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn 44 Ác, Ri del C Mât ́ 859 18 nucleotide Ác, 19 del T Tre, Ri Ác Mât ́ 962 nucleotide Tre GA 21 Đồng hốn 119 Đờng 20 103 AG hốn Đê đanh gia sư đa dang di truyên cua vung D -loop nhăm xac đị nh môi ̉ ́ ́ ̣ ̣ ̀ ̉ ̀ ̀ ́ ́ quan di truyên giưa cac mâu ga nghi ̣ ̀ ̃ ́ ̃ ̀ ên cưu , chúng đã sư dung phần ́ ̉ ̣ mềm Mega đê so sánh trình tự vùng điều khiển D-loop mẫu gà nghiên ̉ cứu với trình tự các chủng gà đã được cơng bớ là: gà Gallus gallus gallus (Cochin-Chinese Red Jungle Fowl) mã số NC 007236 [27] và Gallus gallus (gà rừng đỏ) gôc Nhât lấy trình tự GenBank mang mã số AB114078 [24] để so ́ ̣ sánh mức sai khác về trình tự nucleotide và đánh giá mối quan hệ di truyền chúng, kết quả đươc thê hiên qua bảng 3.5 và hình 3.5 ̣ ̉ ̣ Bảng 3.5 Hê sô tương đông vê trì nh tư nucleotide vùng D-loop mâu ̣ ́ ̀ ̀ ̣ ̉ ̃ nghiên cưu vơi môt sô mâu GenBank ́ ́ ̣ ́ ̃ 1 99,67 99,1 99,26 99,02 99,26 99,51 98,77 98,94 98,61 98,77 AB114078 Ri Ác Tre NC007236 0,33 0,9 0,74 0,98 0,74 0,49 1,23 1,06 1,39 1,23 Qua bảng 3.5 thấy rằng, các mẫu nghiên cứu có độ tương đồng cao so vơi cac mâu Ngân hang gen NCBI ́ ́ ̃ ̀ (98,61 - 99,67 %), mâu gà Ri có độ ̃ tương đơng cao nhât vơi mâu co ma sô AB ̀ ́ ́ ̃ ́ ̃ ́ gà Ác và mẫu gà Tre có độ tương đờng 114078 (99,67%), sau đo la mâu ́ ̀ ̃ vơi là 99,51%, căp co sô ́ ̣ ́ ̣ ́ tương đông thâp nhât la mâu ga Ac so vơi NC007236 (98,61 %) ̀ ́ ́ ̀ ̃ ̀ ́ ́ Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn 45 Tư cac kêt qua so sanh trì nh tư nucleotid e vùng D -loop cua cac mâu ga ̀ ́ ́ ̉ ́ ̣ ̉ ́ ̃ ̀ trên, chúng thê hiên kêt qua biêu đô hì nh (hình 3.5) ̉ ̣ ́ ̉ ̉ ̀ Hình 3.5 Quan hệ di truyền mợt số giống gà Kết quả thu được hình 3.5 cho thấy các giống gà được chia thành nhánh lơn: nhánh I gồm AB 114078, gà Ri, gà Ác, và gà Tre ; nhánh II chỉ co ́ ́ gà NC 007236 Trong nhanh I lai chia ́ ̣ ̀ nhánh: nhánh I gôm ga ̀ ̀ AB114078 và gà Ri có mức độ đờng về mặt di truyền cao là 99,67% Nhánh I2 gồm giống gà Ác và gà Tre, mức độ đồng về mặt di truyền chúng là 99,51 % Nhìn chung, sự sai khác các giống gà này khơng nhiều Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn 46 KÊT LUÂN VA ĐÊ NGHỊ ́ ̣ ̀ ̀ Kết luận 1.1 Hàm lượng cholesterol trứng vịt Bầu là lớn 477,7 mg/100g, sau là trứng gà Tre 465,9 mg/100g, trứng gà Ri 438 mg/100g, trứng gà Ác 340 mg/100g Hàm lượng cholesterol thấp là trứng gà Tam Hoàng 318,8 mg/100g 1.2 Tách chiết và tinh sạch được DNA tổng số từ máu gà thuộc mẫu nghiên cứu là gà Ri, Ác, Tre Nhân bản thành công vùng D-loop mẫu gà với kích thước khoảng 1,3 kb kỹ thuật PCR nhờ cặp mồi chuyên biệt là H1255-L16725 1.3 Xác định được trình tự vùng điều khiển D-loop gồm 1223 nucleotide mẫu gà nghiên cứu Ri, Ác, Tre và phát được 15 điểm đa hình về nucleotide mẫu gà nghiên cứu với trình tự tham khảo mang mã số AB114078 và 21 điêm đa hì nh mẫu gà nghiên cứu với trình tự tham ̉ khảo mang mã số NC007236 1.4 Đánh giá mối quan hệ di truyền mẫu gà nghiên cứu với số chủng gà đã được cơng bớ là gà Gallus gallus (gà rừng đỏ ) gốc Nhật Bản (mã số AB114078) lấy trình tự GenBank quốc tế, Gallus gallus gallus (Cochin-Chinese Red Jungle Fowl) mã số NC007236 lấy trình tự GenBank thấy gà Gallus gallus (gà rừng đỏ) gốc Nhật Bản mã sớ AB114078 và gà Ri có mức độ đồng về mặt di truyền cao là 99,67% Hai mẫu gà Ác và gà Tre có mức độ đồng về mặt di truyền là 99,51% Nhìn chung, sự sai khác các giống gà này không nhiều Đề nghị 2.1 Chúng mới xác định hàm lượng cholesterol trứng mẫu nghiên cứu là gà Ri, Ác, Tre, vịt Bầu, Tam Hoàng cùng điều kiện nuôi dưỡng Vậy để đánh giá cách toàn diện về hàm lượng cholesterol Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn 47 các mẫu nghiên cứu trên, chúng đề nghị xác định hàm lượng cholesterol cac mẫu nghiên cứu các điều kiện nuôi dưỡng khác ́ 2.2 Trong phạm vi nghiên cứu đề tài, chúng mới lấy mẫu máu từ cá thể thuộc giớng, chúng tơi đưa được số liệu ban đầu về các điểm đa hình vùng D-loop ty thể mẫu nghiên cứu là gà Ri, Ác, Tre thuộc loài Gallus gallus domesticus Để có thể đánh giá được toàn diện về các điểm đa hình vùng D-loop có thể đưa các kết luận đầy đủ về mối quan hệ di truyền các mẫu nghiên cứu, cần phải tiến hành nghiên cứu và phân tích sớ lượng mẫu lớn CƠNG TRÌ NH KHOA HOC ĐA CÔNG BÔ ̣ ̃ ́ Vũ Thị Như Trang , Nguyên Trong lang : Xác định trình tự vùng điều khiển ̃ ̣ ̣ D-loop DNA ty thê cua ga Ri, gà Tre, gà Ác đƣợc nuôi Bắc Giang Tạp ̉ ̉ ̀ chí Khoa học và Công nghệ Đai hoc Thai Nguyên , 2009 tâp 58, sô 10, trang ̣ ̣ ́ ̣ ́ 86-89 Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn 48 TÀI LIỆU THAM KHẢO Nguyễn Ân (1983), Di truyền học động vật, NXB Nông nghiệp, Hà Nội Hồ Huỳnh Thuỳ Dương (1997), Sinh học phân tử, NXB Giáo dục Nguyễn Hải Hà (2000), Tạo dòng phân tử đoạn gen điều khiển DNA ty thể hai loài gà Lơi đặc hữu Việt Nam, Khóa luận tốt nghiệp nghành công nghệ sinh học, Đại học Quốc Gia Hà Nội Nguyễn Duy Hoan (1999), Chăn ni gia cầm (giáo trình dùng cho cao học và nghiên cứu sinh), NXB Nông nghiệp Hà Nội Địch Thị Kim Hương (2006), Phân định số chủng gà nhà (Gallus gallus domesticus) qua DNA ty thể, Khóa luận tốt nghiệp, Trường ĐHKHTN Hà Nội Lê Đức Long (2007), Nghiên cứu khả sinh trưởng, thành phần hóa sinh thịt và đánh giá sai khác di truyền gà Mông nuôi Thái Nguyên, Luận văn thạc sĩ sinh học, Trường Đại học Sư phạm Thái Nguyên Lê Viết Ly (2001), gà Ri-chuyên khảo bảo tồn nguồn gen vật nuôi Việt Nam, tập II phần gia cầm, NXB Nông nghiệp Hà Nội Nguyễn Thị Mai (2007), Giáo trình chăn ni gia cầm dùng trường THCN, NXB Hà Nội Chu Văn Mẫn (2003), Ứng dụng tin học sinh học, NXB ĐHQG Hà Nội 10 Chu Hoàng Mậu (2005), Cơ sở và phương pháp sinh học phân tử, NXB ĐHSP 11 Kim Thị Phương Oanh (1999), Ứng dụng phương pháp sinh học phân tử nghiên cứu khác biệt di truyền số loài gà Lôi Việt Nam, Luận văn thạc sĩ sinh học, Trường ĐHSP Hà Nội Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn 49 12 Trần Thị Mai Phương (2004), Nghiên cứu khả sinh sản, sinh trưởng phẩm chất thịt giống gà Ác Việt Nam, luận án tiến sĩ chuyên nghành chăn nuôi, Viện Chăn nuôi, Hà Nội 13 Tôn Thất Sơn, Đặng Vũ Bình, Nguyễn Quang Mai (2001), Chăn nuôi- tập I, NXB Giáo dục 14 Bùi Thị Kiều Vân (2008), So sánh đặc điểm hóa sinh trứng và trình tự vùng điều khiển D-loop giống gà Ri, gà Mông và gà Sao nuôi Thái Nguyên, Luận văn thạc sĩ sinh học, Trường Đại học Sư phạm Thái Nguyên TÀI LIỆU TIẾNG ANH 15 Anderson RG., Joe Goldstein and Mike Brown (2003), “from cholesterol homeostasis to new paradigms in membrane biology”, Trends cell Biol, 13: 534-539, PMID (PubMed - indexed for MEDLINE): 14507481 16 Ascherio A, Willett WC (1995), “New directions in dietary studies or coronary heart disease”, Journal of Nutrition 17 Desjardins P., Morais R., (1990), “Sequence and gene ogranization of the chicken mitochondrial genome”, J Mol Biol, 212: 599-635 18 E Moyer (1998), Cholesterol, London: Thorston 19 E.M.Roth (1995), Good cholesterol, bad cholesterol, New York: Prima Publications 20 Fumihito A., Miyake T., Takada M., Shingu R., Endo T., Gojobori T., Kondo N., Ohno S (1996), Monophylectic origin DNA unique dispersal patterns of domestic fowls, Pro Natl Acad Sci.USA, 93 (13), pp.67926795 21 Hu FB, Manson JE, Willett WC (2001), “Types of dietary fat anh risk of coronary heart: acritical review”, Journal of the American College of Nutrition Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn 50 22 John Wiley and Sons, Inc (2005), Ref Current proticol in food analytical chemistry, D1.3 23 Kimball R.T., Braun E.L., Zwarrtjes P.W., Crowe T.M (1999), Ligon J.D.A Molecula phylogeny of the pheasants and partridges suggest that these lineages are not monophyletic, Mol Phylogenet Evol., 11(1) tr.3854 24 Komiyama T., Ikeo K., Gojobori T (2004), “The evolutionary origin of long- crowing chicken: its evolutionary relationship with fighting cocks disclosed by the mtDNA sequence analysis”, Gene 333, pp 91-99, GenBank, Accession AB114078 25 Lewin B (1997), Gene VI, Oxford University Press, 713-723& 1222 26 McPherson M.J., Quirke P., Taylor G.R (1991), PCR – A Pratical Approach, IRL Press at Oxford University Press 27 Nishibori M., Shimogiri T., HayashiT and Yasue H (2005), “Molecular evidence for hybridization of species in the genus Gallus except for Gallus varius”, Anim Genet 36 (5), 367-375, GenBank, Accession NC007236, D-loop region: 1232 28 Ockene IS, Chiriboga DE, Stanek EJ 3rd, Harmatz MG, Nicolosi R, Saperia G, Well AD, Freedson P, Merriam PA, Reed G, Ma Y, Matthews CE, Hebert JR., (2004), “Seasonal variation in serum cholesterol levels: treatment implications and possible mechanisms”, Arch Intern Med Arch Intern Med, 164: 863-870, PMID (PubMed - indexed for MEDLINE): 15111372 29 Randi E., Lucchini V., Hennache A (1997), Searching for mtDNA genetic diversity in captive Edwards’ pheasants, The Internation Studybook For The Edwards’ Pheasant (Lophura edwardsi) And Its Conservation, Paris: 117-120 Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn 51 30 Sambrook J., Russell D W (2001), Molecular Cloning: A labroratory manual, Cold Spring Harbor labroratory press, New York 31 Zhang Y., Wang J., He z., Ruan J., Dai M., Chen J., Hu C., Li S., Cong L., Fang L., Liu B., Li S., Wang L., Burt D.W., Ka G., Wong S., Yu J., Yang H., Wang J (2005), “Chick VD: A sequence variation database for the chicken genome”, Nucleic Acids Res., 33 (5), pp 438-441 Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn 52 PHỤ LỤC Ảnh 1: Gà Ri Ảnh 2: Gà Ác Ảnh 3: Gà Tre Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên Ảnh 4: Trưng ga Ac ́ ̀ ́ Trưng ga Tre ́ ̀ Trưng ga Ri ́ ̀ Trưng ga Tam Hoang ́ ̀ ̀ Trưng vị t Bâu ́ ̀ http://www.lrc-tnu.edu.vn 53 ... Xác định hàm lượng cholesterol trứng so sánh trình tự vùng điều khiển Dloop DNA ty thể gà Ri, gà Tre, gà Ác nuôi Bắc Giang? ?? Mục tiêu nghiên cứu - Xác định hàm lượng cholesterol trứng giống... 3.4 So sánh trình tự đoạn D-loop mẫu gà Ri, Ác, Tre với gà Gallus gallus gallus mã số NC007236 gà Gallus gallus gôc Nhât mã số ́ ̣ AB114078 * So sánh trình tự gà Ri, gà Ác, gà Tre nuôi. .. cholesterol trứng gà Ri, gà Ác, gà Tre - Xác định và so sánh trình tự vùng điều khiển D-loop ty thể gà Ri, gà Ác, gà Tre + Tách DNA tổng số từ máu các giống gà + Nhân vùng D-loop kĩ thuật

Ngày đăng: 13/11/2012, 08:25

Xem thêm: Xác định hàm lượng cholesterol trong trứng và so sánh trình tự vùng điều khiển D-loop DNA ty thể của gà Ri, gà Tre, gà Ác nuôi tại Bắc Giang, Xác định hàm lượng cholesterol trong trứng và so sánh trình tự vùng điều khiển D-loop DNA ty thể của gà Ri, gà Tre, gà Ác nuôi tại Bắc Giang, Gà Ác Nội dung nghiên cứu, Gà Ri Nhu cầu cholesterol ở ngƣời, Vai trò cholesterol trong cơ thể Tình hình nghiên cứu DNA ty thể gà trên thế giới, Thiết bị sử dụng

Xác định hàm lượng cholesterol trong trứng và so sánh trình tự vùng điều khiển D-loop DNA ty thể của gà Ri, gà Tre, gà Ác nuôi tại Bắc Giang

Thông tin tài liệu

Hình ảnh liên quan

Từ khóa liên quan

Tài liệu cùng người dùng

Tài liệu liên quan