đại học cần thơ - khoa nông nghiệp giáo trình giảng dạy trực tuyến Đờng 3/2, Tp Cần Thơ Tel: 84 71 831005, Fax: 84 71 830814 Website: http://www.ctu.edu.vn/knn email: dminh@ctu.edu.vn, vtanh@ctu.edu.vn Vi sinh đại c ơnG Ch ơng 3: Sự dinh d ỡng, tăng tr ởng vi sinh vật Và ảnh h ởng điều kiện ngoại cảnh Vi sinh hc âải cỉång Chỉång CHỈÅNG III SỈÛ DINH DặẻNG, TNG TRặNG CUA VI SINH VT VAè ANH HỈÅÍNG CA ÂIÃƯU KIÃÛN NGOẢI CNH **** I SỈÛ DINH DặẻNG CUA VI SINH VT : Caùc chỏỳt dinh dỉåỵng cáưn thiãút : Cọ hai nhọm váût cháút cáưn thiãút cho sỉû säúng ca vi sinh váût, nhọm thỉï nháút l nỉåïc, l úu täú quút âënh sỉû dinh dỉåỵng ca vi sinh váût ; nhọm thỉï hai gäưm cạc váût cháút cáúu tảo båíi cạc ngun täú C, H, O, N, P, S, K, Na, Ca caïc ngun tåï ny cng cọ thãø chia cạc ngun täú täúi cáưn cho vi sinh váût v cạc ngun täú thỉï úu a/ Ngun täú täúi cáưn : C, H, O, N, P, S v K Cạc ngun täú ny hiãûn diãûn táút c cạc håüp cháút (nhỉ cháút protein, cháút bẹo, âỉåìng bäüt, ) v åí dỉåïi dảng cáúu trục giäúng táút c cạc loi vi sinh váût, c siãu vi khøn Mäüt säú ngun täú khạc cng l ngun täú täúi cáưn Ca, Na, Fe, Mg, nhiãn l cạc ngun täú täúi cáưn cho tỉìng nhọm vi sinh váût Thê dủ: Fe ráút cáưn thiãút cho vi khøn hiãúu khê, cạc vi sinh váût cọ quang håüp ráút cáưn Mg b/ Cạc cháút vi lỉåüng: Gäưm cạc ngun täú m vi sinh váût ráút cáưn thiãút cho sỉû tàng trỉåíng, nhỉng våïi säú lỉåüng ráút êt Thê dủ : Fe, Mn, Ca Ngoi cạc vitamin l nhỉỵng cháút phỉïc tảp, cng dỉû pháưn nhổợng chỏỳt vi lổồỹng vỗ chố cỏửn mọỹt lổồỹng nhoớ cng kêch thêch âỉåüc sỉû tàng trỉåíng Bãn cảnh cạc vitamin, mäüt säú acid amin ( Amino acids ) cng l cháút vi lỉåüng cáưn thiãút cho vi sinh váût Thê duû: Khi nuäi vi khuáøn Salmonella typhi, gáy bãûnh thổồng haỡn, nóỳu thióỳu mọỹt tờ tryptophan thỗ vi khuỏứn khäng mc täút âỉåüc Cạc cạch dinh dỉåỵng : Cạc vi sinh váût thüc nhọm ngun sinh âäüng váût cọ thãø tiãu thủ âỉåüc cạc váût ràõn khạc, thê dủ àn vi khøn hồûc ngun sinh âäüng váût nh hån Läúi dinh dỉåỵng ny âỉåüc gi l dinh dỉåỵng theo läúi âäüng váût (holozoic nutrition) hay thỉûc bo 24 Vi sinh hc âải cỉång Chỉång Cạc vi sinh váût khạc, vi khøn chàóng hản khäng thãø àn cạc váût ràõn âỉåüc, m chè tiãu thủ âỉåüc cạc phán tỉí tỉång âäúi nh nỉåïc, cạc cháút ny cọ thãø chui qua mng tãú bo båíi sỉû khúch tạn hồûc båíi cạc cå ngun khạc; Âáy l cạch dinh dỉåỵng theo läúi thỉûc váût (holophytic) Cạch dinh dỉåỵng ca siãu vi khøn vãư cå bn cọ khạc hån cạc vi sinh váût khạc Sỉû tiãu hoùa : Hỗnh 3.1: Sồ õọử mọ taớ caùch lỏỳy cháút dinh dỉåíng tỉì bãn ngoi mäi trỉåìng ca vi khøn A Vi khøn tiãút bãn ngoi cạc loải enzym âãø thy phán cạc cháút dinh dỉåíng B Phán tỉí dinh dỉåíng âỉåüc thy phán thnh cạc phán tỉí ngàõn hån C Cạc phán tỉí âån gin glucäz, acid amin nhåì cọ kêch thỉåïc phán tỉí nh nãn chui vo bãn tãú bo vi khøn qua cạc läù häøng åí vạch tãú bo 25 Vi sinh hc âải cỉång Chỉång Pháưn låïn vi sinh váût tiãu họa thỉïc àn bàịng cạch dng enzym thy phán thỉïc àn Nhåì cạc enzym tỉång ỉïng, thỉïc àn cháút âỉåìng bäüt, cháút bẹo v cháút ân bảch âỉåüc phán thnh cạc phán tỉí nh hån cọ thãø tan âỉåüc nỉåïc Âỉåìng bäüt âỉåüc càõt thnh cạc dảng âỉåìng âån (monosaccharide); cháút bẹo âỉåüc thy phán thnh cạc alcol, glycerol hồûc cạc acid bẹo, cn cháút ân bảch (protein) âỉåüc thy phán thnh cạc acid amin (amino acid) Cạc phán tỉí ny thỉåìng cọ kêch thỉåïc nh tan âỉåüc nỉåïc nãn cọ thãø chui qua mng tãú bo âãø vo tãú bo cháút ca vi sinh váût Sau âọ, bãn tãú bo cn cọ hãû thäúng enzym khạc, biãún cạc cháút âån gin ny âãø biãún chụng thnh nàng lỉåüng hay cạc váût cháút ca tãú bo Cạc náúm, vi khøn v mäüt säú rong tiãu họa thỉïc àn cạc enzym tiãút bãn ngoi mäi trỉåìng säúng ca chụng, enzym tiãúp xục våïi thỉïc àn v phán gii chụng âãø cọ thãø hỏỳp thu õổồỹc (hỗnh 3.1) Ngoaỡi vaùch tóỳ baỡo ca vi sinh váût ny cọ vä säú cạc läù khuút ráút nh, cọ cäng dủng nhỉỵng cại miãûng li ti, qua âọ cháút lng v cạc phán tỉí thỉïc àn âån gin v nh âi xun qua vạch tãú baìo âãø vaìo tãú baìo cháút Sau vo tãú bo, cạc phán tỉí thỉïc àn âỉåüc tãú bo vi sinh váût sỉí dủng giäúng åí tãú bo âäüng váût, thỉûc váût v cạc ngun sinh Phán loải vi sinh váût theo ngưn gäúc cung cáúp C v nàng lỉåüng : Ty theo cạch sỉí dủng thỉûc pháøm cng ngưn cung cáúp C ca thỉïc àn chụng ta cọ thãø chia vi sinh váût cạc nhọm chênh: a/ Vi sinh váût tỉû dỉåỵng (autotrophs) : gäưm cạc vi sinh váût cọ kh nàng tiãút cạc enzym lm xục tạc cho cạc phn æïng täøng håüp C tæì CO2 thaình mäüt cháút hỉỵu cå phỉïc tảp âạp ỉïng âỉåüc nhu cáưu ca tãú bo Gäưm mäüt säú vi sinh váût quan trng näng nghiãûp v cäng nghiãpû Läúi dinh dỉåỵng ny giäúng cáy xanh b/ Vi sinh váût dë dỉåỵng (heterotrophs): nhọm ny khäng cọ kh nàng täøng håüp âỉåüc cháút hỉỵu cå tỉì ngun tỉí C Nhọm ny chiãúm âải âa säú vi sinh váût Cạch dinh dỉåỵng ny giäúng åí âäüng váût c/ Vi sinh váût quang dỉåỵng (phototrophs): L cạc vi sinh váût cáưn âỉåüc chiãúu sạng bàịng ạnh sạng màût tråìi (hồûc ạnh sạng nhán tảo) måïi säúng âỉåüc, chụng cáưn láúy nàng lỉåüng tỉì ạnh nàõng hồûc ạnh sạng nhán tảo Nhọm vi sinh váût quang dỉåỵng cn cọ thãø chia lm hai: vi sinh váût quang khoạng dỉåỵng (photolithotrophs) 26 Vi sinh hc âải cỉång Chỉång láúy H tỉì nổồùc quaù trỗnh quang hồỹp õóứ khổớ O cuớa CO2; v vi sinh váût quang hỉỵu cå dỉåỵng (photoorganotrophs) lỏỳy H tổỡ H2S thay vỗ tổỡ nổồùc d/ Vi sinh váût họa dỉåỵng (chemotrophs): L cạc vi sinh váût khäng cáưn ạnh sạng váùn säúng âỉåüc Chụng láúy nàng lỉåüng tỉì cạc phn ỉïng họa hc xy bãn tãú bo Cạc vi sinh váût nhọm họa dỉåỵng, nãúu phn ỉïng láúy nàng lỉåüng càn cỉï trãn cạc cháút vä cå (thê dủ: oxyt họa cháút vä cå âãø sinh nàng lỉåüng) âỉåüc gi l họa khoạng dỉåỵng họa nàng vä cå (chemolithotrophs) (litho = âạ, cháút vä cå) Thê dủ nhỉ: NaNO2 + 1/2 O2 → NaNO3 + nàng læåüng H2S + O2 → H2SO4 + nàng læåüng CO + 1/2 O2 → CO2 + nàng lỉåüng Cạc sinh váût khạc, lải láúy nàng lỉåüng tỉì phn ỉïng äxyt họa cháút hỉỵu cå âỉåüc gi l họa khoạng dỉåỵng nàng hỉỵu cå (họa hỉỵu cå dỉåỵng = chemoorganotrophs) e/ Vi sinh váût hoải sinh (saprophytes): Gäưm cạc náúm dë dỉåỵng v cạc vi khøn, chụng láúy carbon tỉì cháút hỉỵu cå cn ngun vẻn åí chung quanh hồûc tỉì nỉåïc cäúng rnh hồûc tỉì mäüt vi sinh váût â chãút f/ Vi sinh váût k sinh (parasites): Cạc vi sinh váût vỉìa cọ thãø láúy C tỉì cháút hỉỵu cå cå thãø sinh váût cn säúng hồûc chè cọ thãø láúy C tỉì sinh váût cn säúng m thäi Trong bãûnh hc, cạc vi sinh váût k sinh l ngun nhán pháưn låïn bãûnh ca âäüng váût v thỉûc váût Trong nhọm vi sinh váût k sinh cn cọ thãø chia lm hai tiãøu nhọm, k sinh bàõt büc v k sinh ty K sinh bàõt büc l nhỉỵng vi sinh váût chè coï thãø säúng kyï sinh trãn mäüt mä cn säúng ca mäüt sinh váût khạc v khäng thãø säúng hoải sinh, tỉïc säúng trãn mä â chãút hồûc trãn váût cháút khäng l sinh váût Thê dủ: vi rụt l k sinh bàõt büc Náúm gáy bãûnh rè trãn cáy träưng cng l k sinh bàõt buọỹc vỗ chố sọỳng trón laù, thỏn cỏy coỡn sọỳng v khäng thãø säúng âỉåüc trãn mäi trỉåìmg ni cáúy nhán tảo 27 Vi sinh hc âải cỉång Chỉång K sinh ty l nhỉỵng vi sinh váût vỉìa cọ thãø k sinh trãn mä säúng ca mäüt sinh váût khạc, nhỉng cng cọ thãø säúng hoải sinh trãn mä â chãút cng trãn váût cháút thêch håüp Thê dủ: vi khøn gáy bãûnh cho ngỉåìi, gia sục v cáy träưng vỉìa säúng âỉåüc mä ca k ch, vỉìa cọ thãø ni cáúy âỉåüc (säúng âỉåüc) trãn mäi trỉåìng ni cáúy nhán tảo (váût cháút, khäng säúng) Mäi trỉåìng ni cáúy vi sinh váût : Cọ loải mäi trỉåìng ni cáúy: mäi trỉåìng tỉû nhiãn cn gi l mäi trỉåìng thỉûc nghiãûm (empirical media), mäi trỉåìng täøng håüp, mäi trỉåìng bạn täøng håüp v mäi trỉåìng säúng Cạc loải mäi trỉåìng ny khạc ráút nhióửu vóử hỗnh thổùc vaỡ thaỡnh phỏửn tuỡy theo loaỡi vi sinh váût cáưn ni cáúy cng ty thüc vo mủc âêch ca cäng tạc ni cáúy K thût v cạc nghiãn cỉïu vãư vi sinh hc â âảt âãún mỉïc ráút cao, nãn säú loải mäi trỉåìng ni cáúy vi sinh váût âỉåüc sỉí dủng ráút phong phụ, ty loi hồûc chng ca vi sinh váût cng ty theo mủc âêch Thê dủ: ni cáúy vi khuỏứn Xanthomonas campestris pv oryzae gỏy bóỷnh chaùy bỗa laù lụa, ngỉåìi ta thỉåìng dng mäi trỉåìng Wakimoto Tuy nhiãn lục cáưn phán láûp v tạch rng vi khøn tổỡ mọỹt tóỳ baỡo thỗ vi khuỏứn naỡy moỹc khọng âỉåüc täút trãn mäi trỉåìng Wakimoto Âãø thỉûc hiãûn cäng tạc ny ngỉåìi ta phi thãm vo mäi trỉåìng Wakimoto mäüt säú lỉåüng ráút nh Fe dỉåïi dảng chelat họa, gi l mäi trỉåìng Wakimoto biãún âäøi Vi khøn s mc thnh cạc khøn lảc (tỉì mäüt tãú bo) ráút täút trãn mäi trỉåìng måïi ny a/ Mäi trỉåìng ni cáúy tỉû nhiãn : Mäi trỉåìng thüc nhọm ny âỉåüc phán láûp dỉûa trãn kinh nghiãûm hån l dỉûa vo sỉû hiãøu biãút vãư thnh pháưn dinh dỉåỵng âäúi våïi vi sinh váût ni cáúy Cạc mäi trỉåìng tỉû nhiãn âỉåüc dng phäø biãún la : sỉỵa, nỉåïc trêch thët b, nỉåïc trêch cạc loải rau c hồûc mãù cäúc, Cạc loải mäi trỉåìng ny thỉåìng chỉïa âỉûng nhiãưu cháút hỉỵu cå v vä cå tan nỉåïc cọ thãø âạp ỉïng u cáưu vãư dỉåỵng cháút ca mäüt säú låïn vi sinh váût (khäng phi l táút c ) Cạc loải mäi trỉåìng nhọm ny vỉìa âãù chøn bë vỉìa r tiãưn lải cọ thãø sỉí dủng cho nhiãưu mủc âêch thäng thỉåìng nghiãn cỉïu vi sinh váût Khuút âiãøm ca loải mäi trỉåìng tỉû nhiãn l khäng thãø biãút chênh xạc thnh pháưn dinh dỉåỵng cng thnh pháưn dinh dỉåỵng ca nhỉỵng láưn chøn bë khạc nhau, s ráút khạc Do âọ âäi kãút qu ni cáúy ca cạc láưn chøn bë mäi trỉåìng khạc cọ thãø s khäng giäúng 28 Vi sinh hc âải cỉång Chỉång b/ Mäi trỉåìng ni cáúy täøng håüp: Âãø bäø sung khuút âiãøm ca mäi trỉåìng ni cáúy tỉû nhiãn, ngỉåìi ta â thiãút láûp cạc mäi trỉåìng ni cáúy täøng håüp, âọ cạc thnh pháưn dinh dỉåỵng ca mäi trỉåìng âỉåüc kiãøm soạt chàût vãư säú lỉåüng v cháút lỉåüng Ty theo loải thnh pháưn dinh dỉåỵng sỉí dủng, ta cọ: - Mäi trỉåìng ni cáúy hỉỵu cå täøng håüp : Khi pháưn låïn thnh pháưn dinh dỉåỵng l cạc cháút hỉỵu cå âån gin ( acid amin ) v tan âỉåüc nỉåïc - Mäi trỉåìng ni cáúy vä cå täøng håüp : Khi háưu hãút thnh pháưn dinh dỉåỵng l cạc cháút vä cå tan âỉåüc nỉåïc Ỉu âiãøm ca cạc loải mäi trỉåìng ni cáúy täøng håüp l ta cọ thãø biãút r cng âiãưu khiãøn thnh pháưn dinh dỉåỵng ca mäi trỉåìng mäüt cạch dãù dng Våïi biãûn phạp tàng thãm hồûc b båït cháút dinh dỉåỵng mäi trỉåìng, chụng ta cọ thãø biãút r tạc âäüng ca cháưt dinh dỉåỵng âäúi våïi vi sinh váût Ngoi ra, âáy l loải mäi trỉåìng ráút chênh xạc nhåì âọ chụng ta trạnh âỉåüc sỉû thay âäøi cạc láưn chøn bë mäi trỉåìng, cng s l mäi trỉåìng ráút täút cho cạc loải vi sinh váût â âỉåüc biãút r nhu cáưu dinh dỉåíng ca chụng Khuút âiãøm ca mäi trỉåìng täøng håüp l: ì - êt âỉåüc sỉí dủng cho mủc âêch nuọi cỏỳy thổồỡng ngaỡy nghión cổùu vi sinh vỗ : - tỉång âäúi màõc tiãưn, chøn bë khạ phỉïc tảp v máút thåìi giåì hån âäúi våïi mäi trỉåìng tỉû nhiãn - Chè sỉí dủng cho tỉìng loi vi sinh váût thêch håüp m thäi Trỉåìng håüp vi sinh váût chỉa xạc âënh, khäng thãø ni cáúy trãn mäi trỉåìng loải ny mäüt cạch bo âm c/ Mäi trỉåìng ni cáúy bạn täøng håüp : L mäi trỉåìng ni cáúy tæû nhiãn âæåüc bäø sung thãm våïi mäüt säú cháút dinh dỉåỵng âỉåüc xạc âënh Thê dủ: Mäi trỉåìng bạn täøng håüp Wakimoto dng ni cáúy vi khøn Xanthomonas campestris pv oryzae, gäưm : - Nỉåïc trêch khoai táy 200g 29 Vi sinh hc âải cỉång - Pepton - Âỉåìng cạt tràõng - Ca( NO3)2.4H2O - Na2HPO4.12H2O - Thảch ( agar ) - Næåïc cáút Chæång 5g 15g 0,5g 0,5g 20g 1000ml d/ Mäi trỉåìng ni cáúy säúng: Duìng âãø nuäi cáúy mäüt säú vi sinh váût âàûc biãût cọ k sinh bàõt büc Thê dủ: Vi rụt khäng ni cáúy âỉåüc trãn mäi trỉåìng ni cáúy nhán tảo, âọ cáưn ni cáúy chụng trãn sinh váût âang säúng Thê dủ : Âäúi våïi vi rụt gáy bãûnh âáûu ma, ngỉåìi ta ni cáúy chụng trãn b cn säúng v sau âọ thu tháûp vi rụt trãn b áúy âãø lm thúc chng bãûnh âáûu ma Pháưn låïn cạc vi rụt k sinh trãn âäüng váût chụng ta phi ni cáúy phäi ca trỉïng g läün hồûc trãn chüt, th Âäúi våïi vi rụt k sinh trãn thỉûc váût chụng ta phi ni cáúy chụng trãn k ch ca chụng Âäúi våïi vi rụt TMV gáy bãûnh khm trãn cáy thúc lạ, chụng ta cáúy chụng vo cáy thúc lạ mảnh âãø sau âọ êt láu thu tháûp láúy vi rụt áúy våïi máût säú tàng hån nhiãöu láön mä cáy thúc lạ âỉåüc chng bãûnh Âäúi våïi cạc náúm gáy bãûnh rè, thê duû náúm Phakopsora sojae gáy bãûnh rè trãn lạ cáy âáûu nnh, chụng ta phi cáúy bo tỉí náúm bãûnh trãn lạ cáy âáûu nnh mảnh âãø sau âọ êt láu thu tháûp bo tỉí måïi âỉåüc sinh tỉì cạc âäúm rè åí lạ cáy âỉåüc tiãm chng bãûnh II SỈÛ TÀNG TRỈÅÍNG CA VI SINH VÁÛT A CẠC PHỈÅNG PHẠP TINH RNG M NI CÁÚY VI SINH VÁÛT: Vi sinh váût ráút nhoí nãn quan sạt sỉû tàng trỉåíng v sỉû sinh sn ca vi sinh váût chụng ta khäng thãø quan sạt trãn mäüt cạ thãø ca vi sinh váût áúy m chè cọ thãø quan sạt trãn mäüt m cáúy (inoculum) tỉïc l gäưm nhiãưu vi sinh váût cng loi âỉåüc ni cáúy cng äúng nghiãûm hồûc mäüt dung dëch cháút dinh dỉåỵng lng Do âọ chụng ta cáưn cọ m cáúy rng âãø quan sạt Âënh nghéa: 30 Vi sinh hc âải cỉång Chỉång M cáúy rng tỉïc l m cáúy m âọ chè cọ mäüt loi, hồûc hån nỉỵa, chè mäüt chng vi sinh váût nháút säúng m thäi Nhỉ váûy m cáúy áúy phi phạt xút tỉì mäüt cạ thãø vi sinh váût m thäi L phi tinh rng m cáúy: - Mäüt m cáúy nãúu khäng rng, tỉïc cn láùn lọỹn vồùi loaỡi vi sinh vỏỷt khaùc thỗ kóỳt quaớ ca nghiãn cỉïu s khäng chênh xạc, øng máút thåìi giåì, cäng sỉïc v hao täún - Trong khäng khê v mäi trỉåìng säúng thäng thỉåìng chung quanh chụng ta cọ vä säú loi vi sinh váût hoải sinh hồûc k sinh, chụng láùn vo m cáúy, chụng cọ thãø tàng trỉåíng v sinh sn nhanh hån v láún ạt vi sinh váût ni mún ni cáúy, v lm hng m cáúy áúy Ngun tàõc ca viãûc tinh rng m cáúy: - M cáúy phi âỉåüc cáúy tỉì mäüt tãú bo âãø bo âm âỉåüc thưn chng - M cáúy phi âỉåüc thỉûc hiãûn âiãưu kiãûn vä trng - M cáúy phi âỉåüc bo qun âiãưu kiãûn khäng bë vi sinh váût lả xám nháûp vo Phỉång phạp tinh rng m cáúy: a/ Âäúi våïi vi khøn: ∝) Phỉång phạp vảch trãn màût âéa pãtri : + Mäi trỉåìng ni cáúy: Mäi trỉåìng dinh dỉåỵng thêch håüp cho vi sinh váût mún ni cáúy, thãm khong - 3% thảch cho mäi trỉåìng âỉåüc cỉïng hån s dãø vảch hån Mäi trỉåìng âỉåüc âäø thnh låïp phim mng âéa pãtri v lm khä màût + Cạch vảch âãø cọ thãø cọ khøn lảc (colony, colonies) mc tỉì mäüt tãú bo: pha loaợng vaỡ vaỷch (xem hỗnh 3.2) +Taùch lỏỳy mọỹt khøn lảc ni vo màût nghiãng äúng nghiãûm β ) Phỉång phạp âäø vo âéa pãtri :( plating method ) 31 Vi sinh hc âải cỉång Chỉång - Dng mäi trỉåìng ni cáúy kãø trãn, âun cho thảch loíng âãø nguäüi âãún 45 C o - Pha long huưn ph vi khøn nhiãưu láưn: dng 1ml huưn ph â pha, âäø 10ml mäi trỉåìng ni cáúy lng åí 45o C vo huưn ph vi khøn - Âäø táút c vo âéa pãtri, trạng cho mäi trỉåìng phúng mỷt vaỡ õỏỷy nừp õộa laỷi Hỗnh 3.2: Cạc cạch vảch trãn âéa pãtri âãø cọ cạc khøn lảc tỉì tãú bo vi khøn - Khøn lảc âỉåüc thnh láûp tỉì mäüt tãú bo âỉåüc thu tháûp vaì nuäi cáúy trãn màût nghiãng äúng nghiãûm χ) Phỉång phạp lc : - Dng mng lc mën, φ ≥ 0,5µm 32 Vi sinh hc âải cỉång Chỉång - Pha long huưn ph vi khøn nhiãưu láưn âãø cọ khong x 10 âãún x 10 tãú bo/10ml - Cho qua mng lc khong - 10ml huưn ph â pha long - Láúy mng lc âàût trãn màût phim dinh dỉåỵng âéa pãtri - Khøn lảc âỉåüc thnh láûp - Thu tháûp âãø giỉỵ trãn màût nghiãng äúng nghiãûm b) Âäúi våïi náúm: Náúm l vi sinh váût âa bo v åí dảng hỗnh sồỹi nón khọng thóứ aùp duỷng caùc bióỷn phaùp trãn âỉåüc Do âọ cọ thãø ạp dủng mäüt hai phỉång phạp sau : α)Tinh rng tỉì såüi náúm : Vêt såüi náúm nuäi cáúy nhiãöu láön trãn mäi trỉåìng thêch håüp mäùi láưn cáưn phán biãût v choün såüi náúm muäún tinh roìng âãø láúy Láûp âi láûp lải nhiãưu láưn cho âãún bo âm â tinh rng âỉåüc Phỉång phạp ny ạp dủng cho cạc náúm khọ sinh bo tỉí, hồûc cho trỉåìng håüp mún bo âm thưn chng v khäng tinh rng tỉì bo tỉí âỉåüc β ) Tinh rng tỉì bo tỉí : - Ạp dủng biãûn phạp pha long huưn ph chỉïa bo tỉí v âäø mäüt lỉåüng nh lãn màût phim dinh dỉåỵng âéa pãtri - Xoa âãø phán bäú bo tỉí náúm âãưu - - Khi khuáøn laûc moüc ra, vêt láúy, âem nuäi trãn màût nghiãng äúng nghiãûm B CẠC PHỈÅNG PHẠP ÂO LỈÅÌNG SỈÛ TÀNG TRỈÅÍNG : Máût säú ca vi sinh váût : Laì säú vi sinh váût áúy mäüt âån vë khäng gian chỉïa chụng Thäng thỉåìng ta dng säú vsv/1ml trỉåìng håüp âãúm vi sinh váût mäi trỉåìng ni cáúy lng, nỉåïc hồûc sỉỵa, Trong trỉåìng håüp vi sinh váût âáút, chụng ta thỉåìng dng säú vsv/1g âáút Trong trỉåìng håüp såüi náúm, cọ thãø dng âån vë l mg/100g dung dëch hồûc dng täúc âäü tàng trỉång l cm/ngy 33 Vi sinh hc âải cỉång Chỉång Cạc phỉång phạp âãúm vi sinh váût: Cọ ráút nhiãưu phỉång phạp âãø âãúm vi sinh váût ty theo mủc âêch, phỉång tiãûn vaì loaìi vi sinh váût Sau âáy laì mäüt vi phỉång phạp thäng thỉåìng: a/ Phỉång phạp âãúm trỉûc tiãúp: - Âãúm tãú bo säúng: Dng mäüt kênh âỉûng váût âàûc biãût cọ vảch ä vng våïi diãûn têch ä âỉåüc biãút r (hemacytometer) Ta nh lãn khong dnh âãø âãúm mäüt git huưn ph chỉïa vi sinh váût mún âãúm vo (thê dủ git mạu) Âáûy kênh âỉûng váût lải, cọ mäüt thãø têch nháút âënh chỉïa khong vng âãø âãúm Chụng ta dng kênh hiãøn vi âãø âãúm säú vi sinh váût chỉïa khong vng âãø âãúm áúy Tỉì âọ, suy máût säú, thỉåìng âãúm häưng huút cáưu mạu bàịng phỉång phạp ny Phỉång phạp ny cho phẹp âãúm c vi sinh váût cn säúng láùn â chãút v chè ạp dủng cho caùc vi sinh vỏỷt khọng cỏửn nhuọỹm maỡu (hỗnh 3.3) Hỗnh 3.3: Sồ õọử mọỹt lam õóỳm họửng cỏửu (hematocytometer): (A) nhỗn tổỡ trón; (B) nhỗn ngang; (C) phoùng to pháưn vảch chỉïa huưn ph vi khøn - Âãúm vi sinh váût â nhüm (smear count): Nh mäüt thãø têch nháút âënh ca huưn ph mún âãúm lãn mäüt dióỷn tờch nhỏỳt õởnh trón kờnh õổỷng vỏỷt ởnh hỗnh v nhüm mu, thỉåìng l våïi xanh metylen hồûc våïi loải mu ph håüp våïi vi sinh váût áúy Sau âoï, âãúm säú vi sinh váût trãn mäüt âån vë diãûn têch, tỉì âọ suy máût säú ca vi sinh váût áúy 34 Vi sinh hc âải cỉång Chỉång Phỉång phạp ny ạp dủng cho trỉåìng håüp phi âãúm cạc vi sinh váût khọ quan sạt phi nhüm mu Âãúm täøng säú vi sinh váût säúng v â chãút huưn ph - Âãúm vi sinh váût trãn mng lc (membrane filter count): Cọ thãø cho huưn ph chæïa vi sinh váût muäún âãúm âi qua mäüt phim dinh dỉåỵng âãø vi sinh váût mc thnh khøn lảc v âãúm säú khøn lảc, suy máût säú vi sinh váût huưn ph Våïi cạch ny chụng ta chè âãúm âỉåüc vi sinh váût cn säúng m thäi Chụng ta cọ thãø âãúm trỉûc tiãúp säú vi sinh váût trãn mng lc bàịng cạch nhüm mu vi sinh váût vaì laìm cho maìng loüc suäút våïi immersion oil v âãúm säú vi sinh váût dỉåïi kênh hiãøn vi - Phỉång phạp pha long : Ngun tàõc ca phỉång phạp ny l pha long huưn ph nhiãưu láưn Xong, cho vi sinh váût hiãûn lãn bàịng khøn lảc âãø âãúm säú vi sinh váût huưn ph â pha long, tỉì âọ suy máût säú ca vi sinh váût áúy huưn ph gäúc Kãút qu ca phỉång phạp ny cho chụng ta säú gáưn âụng nháút (most probable number) ca máût säú ca huưn ph chỉï khäng cọ âỉåüc säú chênh xạc Phỉång phạp ny cho phẹp âãúm vi sinh váût säúng, khäng âãúm âỉåüc vi sinh váût â chãút Sai säú thỉåìng ráút låïn, âọ phi thỉûc hiãûn âãúm hoỷc lỏửn vaỡ lỏỳy trở sọỳ trung bỗnh, õóứ giaớm bồùt sai sọỳ (hỗnh 3.4) b/ Phổồng phaùp âãúm giạn tiãúp : α/ Phỉång phạp âo âäü âủc ca huưn ph vi sinh váût (Turbidometric method): Phỉång phạp ny thỉåìng âỉåüc sỉí dủng âãø âãúm vi khøn v bo tỉí náúm åí mäüt huưn ph Ngun tàõc ca phỉång phạp ny l dng chm tia sạng âån sàõc chiãúu xun qua huưn ph chỉïa vi sinh váût mún âo, vi sinh váût lm phán tạn båït chm tia sạng nhiãưu hồûc êt ty theo máût säú ca chụng huưn ph Säú tia sạng cn lải sau xun qua huưn ph s kêch thêch mäüt tãú bo quang âiãûn (photoelectric cell) Ty theo cỉåìng âäü cn lải ca chm tia sạng m tãú bo quang âiãûn nháûn âỉåüc, mäüt cáy kim di âäüng v chè säú pháưn tràm tia sạng bë phán tạn trãn bng chố thở (hỗnh 3.5) 35 Vi sinh hoỹc õaỷi cổồng Chæång Nãúu dëch âem âãúm khäng chæïa vi sinh vỏỷt naỡo caớ (thờ duỷ nhổ nổồùc cỏỳt) thỗ tỏỳt c tia sạng xun qua v kêch thêch bọng ân quang âiãûn täúi âa Ta âiãöu chènh cho kim chè thë åí säú 100 Âỉa huưn ph âãø âo vo, vỗ coù vi sinh vỏỷt huyóửn phuỡ nón mọỹt säú tia sạng bë phán tạn âi Chè cn lải mäüt säú êt xuyãn qua vaì kêch thêch lãn tãú bo quang âiãûn Kim chè thë chè säú lỉåüng tia sạng xun qua âỉåüc So sạnh våïi bng chøn s biãút âỉåüc máût säú huưn phu Chụng ta cọ thãø ạp dủng biãûn phạp ny âäúi chiãúu våïi phỉång phạp âãúm trỉûc tiãúp âãø láûp mäüt bng chøn cho tỉìng loải vi sinh váût Ỉu âiãøm : L phỉång phạp âãúm vi sinh váût âån gin v mau lẻ nháút Khuút âiãøm : - Kãút qu l máût säú cuía caí vi sinh váût chãút láùn säúng - Phi lm cho vi sinh váût phán phäúi âãưu huưn ph β / Mạy âãúm âiãûn tỉí (electronic counter) : Våïi mạy âãúm loải ny, chụng ta cọ thãø âãúm âỉåüc hng ngn tãú bo vi sinh váût vng vi giáy Ngun tàõc l vi sinh váût âỉåüc âỉa qua tia sạng ca “màõt âiãûn tỉí“ (electronic eye), vi sinh váût cn tia sạng v ghi dáúu hiãûu trãn bäü âãúm ca mạy γ/ Âo trng lỉåüng khä ca vi sinh váût : Âáy l phỉång phạp âo cạc vi sinh váût âa bo ( thê dủ såüi náúm ni mäi trỉåìng dinh dỉåỵng lng v trỉåìng håüp náưy chụng ta thỉåìng so sạnh mỉïc âäü tàng trỉåíng hån l âãúm máût säú) Thäng thỉåìng chụng ta trêch láúy náúm áúy bàịng cạch ly tám hồûc lc, kãú âọ rỉía sảch, sáúy khä v cán troüng læåüng khä Sæû gia tàng troüng læåüng so våïi lục âáưu chỉïng t cọ sỉû tàng trỉåíng v cho biãút täúc âäü tàng trỉåíng ca náúm áúy 36 Vi sinh hoỹc õaỷi cổồng Chổồng Hỗnh 3.4: Sồ õọử mä t cạch âãúm vi khøn bàịng cạch pha long Hỗnh 3.5: Nguyón từc cuớa phổồng phaùp õo õọỹ õuỷc ca huưn ph vi khøn âãø biãút máût säú vi khøn áúy 37 Vi sinh hc âải cỉång Chỉång c) Sỉû tàng trỉåíng ca vi sinh váût : Trong mäüt m ni cáúy thêch håüp vi sinh váût thỉåìng tng trổồớng theo giai õoaỷn chờnh (hỗnh 3.6) - Giai âoaûn chuáøn bë ( latent phase): Trong giai âoản ny, tỉïc l sau ni cáúy, vi sinh váût chỉa gia tàng máût säú, cọ thãø âáy l giai âoản vi sinh váût lm quen våïi mäi trỉåìng ni cáúy måïi v chøn bë cho sỉû tàng trỉåíng vỉåüt báûc sau âo - Giai âoản tàng trỉåíng nhy vt (logarithmic phase, exponential phase): Vi sinh váût sau â am håüp våïi mäi trỉåìng måïi v chøn bë cho sỉû tàng trỉåíng vỉåüt báûc sau âọ, bàõt âáöu nhán máût säú lãn våïi täúc âäü ráút nhanh theo cáúp säú nhán Trong giai âoản ny máût säú täøng cäüng vaì máût säú vi sinh váût säúng khọng chónh lóỷch nhióửu vỗ giai õoaỷn naỡy cn nhiãưu cháút dinh dỉåỵng cung ỉïng â nhu cáưu, nãn säú vi sinh váût chãút chæa tàng cao - Giai âoản an âënh (stationary phase): Âáy l giai âoản maì máût säú vi sinh váût khäng tàng thãm maì giỉỵ an âënh åí mäüt mỉïc Lục ny máût säú vi sinh váût chãút coï tàng nãn máût säú täøng cäüng â chãnh lãûch so våïi máût säú vi sinh váût säúng Giai âoản ny cọ thãù vi sinh váût thu hụt v lm cản dáưn mäüt vi thnh pháưn dinh dỉåỵng hồûc l tạc âäüng ca vi cháút âäúi khaïng chênh vi sinh váût áúy tiãút quaù trỗnh tng trổồớng - Giai õoaỷn chóỳt (death phase): máût säú vi sinh váût säúng gim dáưn âoï máût säú vi sinh váût täøng cäüng cọ håi tàng nhẻ Âáy l giai âoản trng håüp vo lục m dỉåỵng cháút mäi trỉåìng bë hao mn dáưn hồûc l sỉû têch ly cạc cháút âäúi khạng ngy cng nhiãưu 38 Vi sinh hc âải cổồng Chổồng Hỗnh 3.6: Sồ õọử mọ taớ sổỷ phạt triãøn ca vi khøn Escherichia coli âỉåüc ni cáúy theo phỉång phạp ni cáúy liãn tủc: giai âoản chøn bë; 2, 3, giai âoản tàng trỉåíng nhy voüt; giai âoaûn an âënh; giai âoaûn chãút 39 Vi sinh hc âải cỉång Chỉång III NH HỈÅÍNG CA ÚU TÄÚ NGOẢI GIÅÏI LÃN SỈÛ TÀNG TRỈÅÍNG V SINH SN CA VI SINH VÁÛT : Nhiãût âäü : Âáy l úu täú täúi quan trng nh hỉåíng âãún sỉü sinh trỉåíng v sinh sn ca vi sinh váût Khi nhiãût âäü gia tàng, cạc họa cháút v cạc phn ỉïng ca enzyme tãú bo tàng nhanh lãn âọ sỉû sinh trỉåíng ca vi sinh váût cng tàng nhanh lãn Màût khạc, cạc cháút ân bảch, acid nhán v cạc cháút khạc tãú bo s nhảy cm våïi nhiãût âäü cao v cọ thãø tråí nãn báút âäüng Do âọ thäng thỉåìng nãúu nhiãût õọỹ tng dỏửn thỗ sổỷ tng trổồớng vaỡ bióỳn dổồợng ca vi sinh váût cng tàng theo âãún mäüt nhiãût õọỹ nhỏỳt õởnh thỗ tỏỳt caớ õỗnh laỷi Nóỳu nhióỷt õọỹ tng cao hồn nổợa thỗ hoaỷt õọỹng cuớa vi sinh váût s xúng âãún mỉïc khäng Do âọ, âäúi våïi mäùi sinh váût chụng ta cọ thãø cọ mổùc õọỹ vóử nhióỷt õọỹ (hỗnh 3-7): - Nhióỷt õọỹ täúi âã hay nhiãût âäü tháúp nháút (minimum temperature): dæåïi nhiãût âäü ny, vi sinh váût khäng hoảt âäüng âỉåüc - Nhiãût âäü täúi ho (optimum temperature): ÅÍ nhiãût âäü ny, hoảt âäûng ca vi sinh váût âảt mỉïc cao nháút - Nhiãût âäü täúi âa (maximum temperature): Trãn nhiãût âäü ny, vi sinh váût khäng hoảt âäüng âỉåüc Ba mỉïc nhiãût âäü trãn l âàûc ca tỉìng loi vi sinh váût Ngoi ba mỉïc ny cng khäng cổùng nhừc cho tổỡng loaỡi vỗ noù coù thóứ thay âäøi ty theo mäüt säú tạc nhán khạc tạc âäüng vo, thê dủ pH ca mäi trỉåìng ni cáúy v dỉåỵng cháút mäi trỉåìng áúy Do cọ ba mỉïc nhiãût âäü trãn khạc biãût chụng ta cọ thãø chia vi sinh váût lm ba nhọm: nhọm vi sinh váût chëu noïng (thermophiles), nhoïm vi sinh váût chëu lảnh (psychrophile) v nhọm vi sinh váût chëu áúm (mesophiles) (hỗnh 3-8) nhổợng vuỡng laỷnh thuọỹc haỡn õồùi, chụng ta váùn gàûp âỉåüc sỉû säúng ca vi sinh váût âáút, nỉåïc v khäng khê ÅÍ vng ny, nhiãût âäü thỉåìng xun dỉåïi 0oC 40 Vi sinh hoỹc õaỷi cổồng Chổồng Hỗnh 3-7: Sồ õọử mä t cạc mỉïc giåïi hản vãư nhiãût âäü âäúi vồùi sổỷ tng trổồớng cuớa vi sinh vỏỷt Hỗnh 3-8: Så âäư mä t mỉïc am håüp våïi tỉìng khong nhiãût âäü ca ba nhọm vi sinh váût chëu lảnh, chëu áúm v chëu nọng 41 Vi sinh hc âải cỉång Chỉång - Vi sinh váût chëu lảnh cọ kh nàng säúng âỉåüc åí 0oC v cọ thãø chia lm hai nhọm nh: vi sinh váût chëu lảnh bàõt büc (obligate psychrophiles) v vi sinh váût chëu lảnh ty yï (facultative psychrophiles) Vi sinh váût chëu laûnh bàõt büc chè cọ thãø säúng åí mäi trỉåìng lảnh cäú âënh v chụng thỉåìng chãút mau lẻ âỉa nhióỷt õọỹ bỗnh thổồỡng phoỡng, nhióỷt õọỹ tọỳi haớo ca chụng vo khong 15oC v nhiãût âäü täúi âa vo khong 20oC Cn vi sinh váût chëu lảnh ty , d cọ thãø säúng âỉåüc åí 0oC nhỉng nhiãût âäü täúi ho khong 25 - 30oC v nhiãût âäü täúi âa tỉì 35oC tråí lãn Trong thët tỉåi, sỉỵa, trại cáy, rau ci v cạc sn pháøm khạc ca sỉỵa täưn trỉỵ lảnh váùn cọ thãø bë vi sinh váût chëu lảnh lm hỉ hng Thäng thỉåìng, nhiãût âäü täưn trỉỵ cng tháúp täúc âäü hỉ hng cng cháûm lải Tuy nhiãn nãúu thỉûc pháøm âỉåüc âäng lảnh åí nhiãût âäü dỉåïi 0oC (thỉåìng l tỉì -16oC trồớ xuọỳng) thỗ sổỷ hoaỷt õọỹng cuớa vi sinh vỏỷt mồùi gỏửn nhổ bở õỗnh chố nhióỷt õọỹ laỷnh cạc phn ỉïng ca enzym bãn vi sinh váût chëu lảnh váùn cn hoảt âäüng, úu v cháûm dáưn âi theo âäü lảnh Màûc d sỉû hoảt âäüng ca vi sinh váût chëu lảnh thỉåìng ngỉng åí nhiãût âäü - 30oC, nhỉng hoảt âäüng ca enzym váùn cn v mỉïc giåïi hản m phn ỉïng sinh họa ngỉng lải l -140oC Do âọ âäng lảnh cọ thãø lm ngỉng hoảt âäüng ca vi sinh váût chỉï khäng giãút chãút vi sinh váût âỉåüc V sau vi sinh váût bë âäng lảnh, thäng thỉåìng vi sinh váût áúy cn cọ thãø säúng sọt mäüt thåìi gian láu di - Vi sinh váût chëu áúm: l cạc vi sinh vỏỷt thờch nhióỷt õọỹ trung bỗnh (mesophiles) coù nhióỷt âäü täúi ho khong tỉì 25 - 40oC Nhiãût âäü ny trng vo nhiãût âäü ạnh nàõng màût tråìi cung cáúp cho thỉûc váût, âäüng váût mạu lảnh v âáút Trong cå thãø âäüng váût mạu nọng, nhiãût âäü vo khong 37oC cng thêch håüp cho sỉû phạt triãøn ca vi sinh váût nhọm ny Do âọ táút c vi sinh váût láy bãûnh cho ngỉåìi, âäüng váût v thỉûc váût âãưu thüc nhọm ny Âäúi våïi vi sinh váût gáy bãûnh cho ngỉåìi v gia sục ni cáúy cáưn âỉåüc ụm åí nhiãût âäü 37oC Cn âäúi våïi vi sinh váût gáy bãûnh cho thỉûc váût, nhiãût âäü 28 - 30oC thêch håüp hån caí - Vi sinh váût chëu noïng (thermophiles) coï nhiãût âäü täúi ho khong tỉì 45 - 50 C Trong thiãn nhiãn nhiãût âäü khong ny, cọ thãù gàûp âáút bë ạnh nàõng chiãúu trỉûc tiãúp, khu vỉûc ca súi nỉåïc nọng, cạc âäúng rạc âang lãn men, Màût âáút bë ạnh nàõng chiãúu trỉûc tiãúp coï thãø coï nhiãût âäü trãn 50oC, coï lãn âãún 70oC åí âáút cọ mu sáûm Trong cạc låïp âáút cọ nhiãût âäü cao ny váùn cọ mäüt säú vi sinh váût säúng âỉåüc Trong nỉåïc ca súi nỉåïc nọng thỉåìng cọ nhiãưu loi vi sinh váût säúng màûc d cọ nhiãưu súi cọ nhiãût âäü ráút cao Thê dủ súi nọng Yellowstone åí M cọ nhiãût âäü o 42 Vi sinh hc âải cỉång Chỉång vo khong 99 - 100oC, hồûc cọ nåi cao hån 100oC chụt êt thãú m cọ loi vi khøn váùn säúng âỉåüc v phạt triãøn âỉåüc âiãưu kiãûn nhiãût âäü áúy Sau âáy l mäüt säú nhiãût âäü giåïi hản cao nháút ca mäüt säú nhọm vi sinh váût : - Phiãu sinh váût ( protozoa ) - Rong chán hảch - Náúm - Rong tiãưn hảch - Vi khøn 45 - 50oC 56oC 60oC 70 - 73oC 99oC Nỉåïc: Nỉåïc l mäüt úu täú täúi quan trng âäúi våïi sỉû tàng trỉåíng v sinh sn ca vi sinh váût Nhu cáưu vãư nỉåïc ca vi sinh váût cọ khạc nhiãưu ty theo âàûc háúp ca vi sinh váût v cạc úu täú tan ca mäi trỉåìng Nỉåïc háúp åí màût ngoi ca vi sinh váût cọ hỉỵu êch hay khäng ty thüc vo âäü dênh chàût v kh nàng háúp thu nỉåïc áúy ca vi sinh váût Màût khạc, cạc váût cháút tan nỉåïc s nh hỉåíng lãn hỉỵu dủng ca nỉåïc âäúi våïi vi sinh váût Mäüt âàûc ca nỉåïc âỉåüc dng âãø âàûc háúp v úu täú tan trãn l hoảt ca nỉåïc (water activity) Hoảt ca nỉåïc âỉåüc båíi cäng thỉïc: aw = RH / 100 Våïi: aw RH : Hoảt ca nỉåïc : áøm âäü tỉång âäúi ca khäng khê Hoảt ca nỉåïc l mäúi tỉång quan giỉỵa nỉåïc v áøm âäü tỉång âäúi ca khäng khê, hay hån nỉỵa, theo nhiãût âäü khäng khê vo lục áúy Ngoi hoảt ca nỉåïc cn ty thüc vo cháút tan nỉåïc áúy Hoảt ca nỉåïc säng v nỉåïc biãøn tỉång âäúi cao (låïn hån 0,9) cn åí cạc dung dëch cng âáûm âàûc hoảt ca nỉåïc dung dëch áúy cng tháúp Trong mäüt dung dëch cọ hoảt ca nỉåïc tháúp, vi sinh váût phi lm viãûc nhiãưu âãø háúp thu nổồùc ỏỳy tổỡ dung dởch Vỗ vỏỷy thọng thỉåìng dung dëch cọ hoảt nỉåïc tháúp nh hỉåíng lm cháûm sỉü tàng trỉåíng ca vi sinh váût so våïi dung dëch cọ hoảt ca nỉåïc cao hån 43 Vi sinh hc âải cỉång Chỉång Mäùi vi sinh váût cọ kh nàng chëu âỉüng âỉåüc mäüt mỉïc âäü hoảt ca nỉåïc tháúp nháút khạc nhau, ty loi Nãúu ta cọ mäüt miãúng da báưu khäng khê nọng v áøm, êt láu sau miãúng da bë mäüt låïp mäúc bao ph Cng miãúng da áúy nãúu âãø nåi khä rạo thåìi gian láu di, miãúng da váùn khäng bë mäúc Âọ l miãúng da hụt nỉåïc khäng khê (ngoải háúp) Lỉåüng nỉåïc âỉåüc miãúng da hụt vo nhiãưu hay êt, ty thüc vo áøm âäü tỉång âäúi ca khäng khê Trong âiãưu kiãûn áøm ỉåït, nỉåïc trãn miãúng da cọ hoảt cao nãn vi sinh váût cọ thãø phạt triãøn âỉåüc dãù dng Cn miãúng da âàût âiãưu kiãûn khä rạo, nỉåïc trãn miãúng da cọ hoảt ráút tháúp nãn vi sinh váût ráút khọ phạt triãøn âỉåüc Vi sinh váût âàût mäüt dung dëch phi láúy nỉåïc tỉì dung dëch áúy âãø phạt triãøn Hoảt ca nỉåïc ty thüc vo näưng âäü ca dung dëch nãúu dung dëch quạ âáûm âàûc, hoảt ca nỉåïc quạ tháúp, vi sinh váût khọ phạt triãøn âỉåüc Mún cho vi sinh váût cọ thãø phạt triãøn, näưng âäü ca dung dëch phi vỉìa phi âãø cọ hoảt ca nỉåïc cao åí mỉïc cáưn thiãút cho vi sinh váût áúy phạt triãøn Trong mäi trỉåìng khä rạo, pháưn låïn vi sinh vỏỷt khọng sọỳng õổồỹc vỗ khọng hỏỳp thu chỏỳt dinh dỉåỵng Mäüt säú vi sinh váût cọ kh nàng lỉu täưn âỉåüc âiãưu kiãûn khä rạo v thỉåìng chụng biãún âäøi thnh nhỉỵng cå quan âàûc biãût, thê dủ nhỉ: näüi bo tỉí (endospore) ca vi khøn (chi Bacillus), bỗ baỡo tổớ (clamydospore) cuớa caùc loaỡi nỏỳm (Fusarium) hồûc hảch náúm (Sclerotium), Nhåì cạc cå quan ny cọ cáúu tảo âàûc biãût nãn chụng khäng bë máút nỉåïc âiãưu âiãûn khä rạo Cạc cå quan sinh trỉåíng ca vi sinh váût thỉåìng bë máút nỉåïc, co rụt lải v tãú bo cọ thãø chãút Nãúu vi sinh váût âỉåüc âäng lảnh trỉåïc âỉa vo âiãưu kiãûn lm khä åí chán khäng, nỉåïc tãú bo bë bäúc håi mau lẻ nhỉng tãú bo váùn giỉỵ nguyón hỗnh daỷng nhổ luùc õaợ õổồỹc õọng cổùng laỷi, táút c mi phn ỉïng sinh họa bãn tãú baỡo õóửu bở õỗnh chố hoaỡn toaỡn (tóỳ baỡo ồớ tỗnh traỷng chóỳt taỷm thồiỡ ) Tuy nhión, âỉa vi sinh váût áúy vo mäi trỉåìng cọ â áøm âäü v nhiãût âäü cáưn thiãút, tãú bo áúy s hụt nỉåïc tråí lải v phủc häưi cạc phn ỉïng sinh họa bãn nọ, âäưng thåìi nãúu mäi trỉåìng bãn ngoi thûn håüp vi sinh váût áúy hoảt âäüng tråí lải Ạp sút ca mäi trỉåìng : Vi sinh váût cọ kh nàng chëu âỉåüc ạp sút bãn ngoi khạc ty loi Vi sinh váût säúng khäng khê chëu âỉåüc ạp sút thäng thỉåìng, bë âỉa xúng âạy häư sáu, chụng khäng hoảt âäüng õổồỹc vỗ aùp suỏỳt trổồỡng õaợ tng lón Trong âo,ï cạc vi sinh váût säúng dỉåïi âạy âải dỉång, ty theo âäü sáu, cọ thãø chëu âỉåüc nhỉỵng ạp 44 Vi sinh hc âải cỉång Chỉång sút ráút låïn, ạp sút åí âáy cọ thãø lãn âãún hng ngn láưn hån ạp sút nåi màût biãøn Nãúu âỉa chụng lãn màût biãøn, chụng khäng thãø säúng âỉåüc nh hỉåíng ca pH mäi trỉåìng : Mäùi vi sinh váût chè cọ thãø hoảt âäüng âỉåüc mäi trỉåìng cọ pH giåïi hản båíi pH tháúp nháút v pH cao nháút Âäưng thåìi vi sinh váût áúy hoảt âäüng mảnh nháút mäi trỉåìng cọ pH täúi ho Pháưn låïn mäi trỉåìng ngoi thiãn nhiãn cọ pH tỉì 2,5 - , v pháưn låïn vi sinh váût cọ pH täúi ho khong ny Cọ ráút êt vi sinh váût cọ thãø säúng âỉåüc mäi trỉåìng cọ pH nh hån hồûc låïn hån 10 Pháưn låïn vi khøn hoảt âäüng mảnh åí mäi trỉåìng trung hồûc håi kiãưm, trỉì mäüt säú cọ thãø säúng åí mäi trỉåìng ráút chua Màût khạc, vi sinh váût cọ kh nàng lm thay âäøi pH ca mäi trỉåìng Thê dủ mäüt säú vi khøn lãn men glucoz v cho acid lactic nãn lm gim pH ca mäi trỉåìng chụng säúng xúng âãún hai âån vë hồûc hån nỉỵa Pháưn låïn vi sinh váût lm gim pH ca mäi trỉåìng chụng säúng hån l lm tàng lãn Tuy nhiãn cng cn ty thüc loải mäi trỉåìng v loi vi sinh váût Thê dủ: Khi vi sinh váût âỉåüc ni cáúy mäi trỉåìng chỉïa âảm amoniac (NH4Cl) âãø tàng trỉåíng, s lm gim pH ca trổồỡng ỏỳy vỗ chuùng lỏỳy õi NH4 vaỡ Cl cn lải s chuøn thnh HCl Trong âọ nãúu âỉåüc ni cáúy mäi trỉåìng múi Nitrat (nhỉ NaNO3) chuùng seợ laỡm tng pH cuớa trổồỡng vỗ chuùng s láúy NO3− âãø hoảt âäüng, Na cn lải s thnh NaOH Khi ni cáúy náúm hồûc vi khøn gáy bãûnh cho cáy träưng, chụng ta nãn ni mäi trỉåìng håi chua mäüt chụt, pH khong 6,5 - 6,8 nh hỉåíng ca ạnh sạng : nh sạng màût tråìi âãún âỉåüc màût âáút chỉïa ráút nhiãưu tia cọ âäü di sọng thay âäøi, âọ màõt ca loi ngỉåìi chụng ta chè nháûn âỉåüc cạc tia cọ âäü di sọng tỉì 400- 800 nm, trãn 800nm cọ tia häưng ngoải, cn tia cỉûc têm (cn gi l tia tỉí ngoải) cọ âäü di sọng tỉì 300 - 400nm, phäø ca tia cỉûc têm tri räüng tỉì 13,6 - 400nm Ngoi ra, quang phäø ca tia cỉûc têm cọ mäüt khong giãút âỉåüc vi sinh váût, nàịm phảm vi 200 - 300nm Trong âọ, cạc tia phảm vi 230 - 280nm cọ kh nàng sạt khøn mảnh hån Trong phảm vi sạt khøn, tia cọ bỉåïc sọng 253,7 nm cọ 45 Vi sinh hc âải cỉång Chỉång tạc dủng diãût vi sinh váût mảnh nháút Nhỉ váûy ạnh sạng ca màût tråìi âãún âỉåüc bãư màût trại âáút cọ chỉïa mäüt säú êt tia cæûc têm giãút âæåüc vi sinh váût Âäúi våïi mäüt säú vi sinh váût, aïnh saïng tháúy âỉåüc cng cọ thãø lm hải vi sinh váût nãúu cỉåìng âäü chiãúu sạng cao v thåìi gian chiãúu saùng keùo daỡi Tỗnh traỷng naỡy laỡ mọỹt sọỳ mu tãú bo háúp thu ạnh sạng vo, lm õỗnh tróỷ hoaỷt õọỹng cuớa enzym coù mỷt oxy Nóỳu õióửu kiọỹn khọng coù oxy thỗ khọng coù hiãûn tỉåüng trãn xy Hiãûn tỉåüng ny âỉåüc gi l quang oxyd họa Mäüt säú loi vi sinh váût cọ chỉïa mu, thỉåìng l caroten, lải ngàn cn oxyd họa xy nh sạng tháúy âỉåüc cng ráút cáưn thiãút cho hiãûn tỉåüng quang håüp åí mäüt säú vi sinh váût cọ diãûp lủc täú, âäưng thåìi cng ráút cỏửn thióỳt cho mọỹt sọỳ tióỳn trỗnh bón vi sinh váût Mäüt säú náúm cáưn cọ ạnh sạng åí phảm vi tháúy âỉåüc måïi cọ sinh sn hỉỵu (hỗnh 3-9) Hỗnh 3-9: Sồ õọử mọ taớ trờ ca phảm vi ca ạnh sạng cọ kh nàng sạt truìng täút Taìi liãûu âoüc thãm: Frobisher, M.,1968 Fundamental of Microbiology W B Saunder Co Trang 32-55 Madigan, M T , J M Martinko & J Parker, 1997 Brock Biology of Microorganisms Prentice Hall International, Inc Trang 109-177 46 ... ỉïng sinh họa ngỉng lải l -140oC Do âọ âäng lảnh cọ thãø lm ngỉng hoảt âäüng ca vi sinh váût chỉï khäng giãút chãút vi sinh váût âỉåüc V sau vi sinh váût bë âäng lảnh, thäng thỉåìng vi sinh váût... trỉåíng v sinh sn ca vi sinh váût Nhu cáưu vãư nỉåïc ca vi sinh váût cọ khạc nhiãưu ty theo âàûc háúp ca vi sinh váût v cạc úu täú tan ca mäi trỉåìng Nỉåïc háúp åí màût ngoi ca vi sinh váût cọ... trỉåìmg ni cáúy nhán tảo 27 Vi sinh hc âải cỉång Chỉång K sinh ty l nhỉỵng vi sinh váût vỉìa cọ thãø k sinh trãn mä säúng ca mäüt sinh váût khạc, nhỉng cng cọ thãø säúng hoải sinh trãn mä â chãút cng