Đang tải... (xem toàn văn)
luận văn
BỘ GIÁO DỤC VÀ ðÀO TẠO TRƯỜNG ðẠI HỌC NÔNG NGHIỆP HÀ NỘI - TRẦN QUANG HƯNG ÁP DỤNG PHƯƠNG PHÁP HĨA MƠ MIỄN DỊCH (Immunohistochemistry) TRONG CHẨN ðOÁN HỘI CHỨNG RỐI LOẠN SINH SẢN VÀ HÔ HẤP (PRRS) Ở LỢN PHÂN LẬP VIRUS PRRS TRÊN MÔI TRƯỜNG TẾ BÀO MARC 145 LUẬN VĂN THẠC SĨ NÔNG NGHIỆP Chuyên ngành : Thú y Mã số : 60.62.50 Người hướng dẫn khoa học: TS NGUYỄN THỊ LAN HÀ NỘI - 2011 LỜI CAM ðOAN Tơi xin cam đoan rằng, số liệu kết nghiên cứu luận văn trung thực chưa ñược sử dụng ñể bảo vệ học vị Tơi xin cam đoan rằng, giúp ñỡ cho việc hoàn thành luận văn ñã ñược cảm ơn, thơng tin trích dẫn luận văn ñã ñược ghi rõ nguồn gốc Hà Nội, tháng 08 năm 2011 Tác giả luận văn Trần Quang Hưng Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội - Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp ………………………… i LỜI CẢM ƠN Nhân dịp hồn thành luận văn này, cho phép tơi ñược bày tỏ lòng biết ơn sâu sắc ñến TS Nguyễn Thị Lan, người hướng dẫn khoa học ñã tận tình giúp đỡ hướng dẫn tơi suốt q trình thực đề tài hồn thành luận văn tốt nghiệp Tôi xin chân thành cảm ơn thầy cô môn bệnh lý, Khoa Thú y, Viện ðào tạo sau đại học Trường ðại học Nơng nghiệp Hà Nội, ñã tạo ñiều kiện thuận lợi giúp đỡ tơi hồn thành luận văn Tơi xin gửi lời cảm ơn chân thành ñến lãnh ñạo, anh chị bạn khoa Nông nghiệp trường ðại học Hải Phịng, đồng nghiệp Chi cục Thú y, tập thể cá nhân ñã tạo ñiều kiện thuận lợi giúp ñỡ việc thực luận văn Cuối cùng, xin bày tỏ lịng biết ơn sâu sắc đến gia đình bạn bè giúp đỡ, động viên tơi suốt thời gian qua Hà Nôi, tháng 08 năm 2011 Tác giả luận văn Trần Quang Hưng Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội - Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp ………………………… ii MỤC LỤC Lời cam ñoan i Lời cảm ơn ii Mục lục iii Danh mục bảng v Danh mục ảnh vi Danh mục chữ viết tắt viii PHẦN I: MỞ ðẦU PHẦN II: TỔNG QUAN TÀI LIỆU 2.1 Lịch sử tình hình dịch bệnh 2.1.1 Tình hình dịch PRRS giới 2.1.2 Tình hình dịch PRRS Việt Nam 2.2 Căn nguyên gây bệnh 14 2.2.1 ðặc tính hạt virus 15 2.2.2 Cấu trúc virus 17 2.2.3 Khả gây bệnh 19 2.2.4 Cơ chế sinh bệnh phương thức truyền lây 20 2.2.5 Lồi mắc bệnh 23 2.2.6 Sức đề kháng 24 2.2.7 Triệu chứng bệnh tích 24 PHẦN III: ðỐI TƯỢNG, ðỊA ðIỂM, NỘI DUNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 26 3.1 ðối tượng nghiên cứu 26 3.2 ðịa ñiểm thực ñề tài 26 3.3 Nội dung 26 3.4 Nguyên liệu 26 3.5 Phương pháp nghiên cứu 27 3.5.1 Phương pháp lấy mẫu, bảo quản mẫu làm tiêu 27 3.5.2 Phương pháp hóa mơ miễn dịch chẩn đốn PRRS 30 Trường ðại học Nơng nghiệp Hà Nội - Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp ………………………… iii 3.5.3 Phương pháp phân lập virus 31 3.5.4 Phương pháp xử lý số liệu 32 PHẦN IV: KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU VÀ THẢO LUẬN 33 4.1 Triệu chứng lâm sàng chủ yếu lợn mắc PRRS 33 4.2 Bệnh tích đại thể lợn nghi mắc PRRS 37 4.3 Bệnh tích vi thể số quan lợn nghi mắc PRRS 44 4.4 Sử dụng phương pháp hố mơ miễn dịch để chẩn đốn hội chứng rối loạn sinh sản hô hấp lợn 52 4.5 Kết phân lập PRRSv môi trường tế bào Marc 145 57 4.6 Mối tương quan bệnh tích đại thể, vi thể với kết nhuộm hố mơ miễn dịch 4.7 61 So sách kết nhuộm IHC với kết phân lập virus môi trường tế bào Marc – 145 64 PHẦN V: KẾT LUẬN VÀ ðỀ NGHỊ 66 5.1 Kết luận 66 5.2 ðề nghị 67 TÀI LIỆU THAM KHẢO Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội - Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp ………………………… 68 iv DANH MỤC CÁC BẢNG 2.1 Các nước xác định có PRRS xuất 2.2 Tổng hợp tình hình dịch PRRS tỉnh phía Bắc 2.3 Tổng hợp tình hình dịch PRRS tỉnh miền Trung 2.4 Tình hình dịch PRRS ñợt năm 2008 10 2.5 Tình hình dịch PRRS ñợt năm 2008 11 2.6 Tình hình dịch PRRS năm 2009 12 2.7 Tình hình dịch PRRS tính đến 23/5/2011 13 2.8 Arterivirus gây bệnh ñộng vật 15 2.9 Protein cấu trúc PRRSV 18 3.1 Quy trình hoạt ñộng hệ thống máy chuyển ñúc mẫu tự ñộng 28 4.1 Nguồn gốc nhóm lợn nghiên cứu 33 4.2 Triệu chứng lâm sàng lợn nghi mắc PRRS 34 4.3 Bệnh tích đại thể số quan lợn nghi mắc PRRS 38 4.4 Bệnh tích vi thể quan lợn nghi mắc PRRS 45 4.5 Kết nhuộm hố mơ miễn dịch lợn mắc PRRS 53 4.6 Kết phân lập PRRSV môi trường tế bào Marc 145 58 4.7 Mối tương quan biến ñổi ñại thể, vi thể hóa mơ miễn dịch 4.8 phổi hạch phổi lợn nghi mắc PRRS 62 So sánh kết số phương pháp chẩn đốn 65 Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội - Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp ………………………… v DANH MỤC CÁC ẢNH Ảnh1 Tổ chức phổi bị hoại tử 43 Ảnh Phổi sưng to, rìa tù 43 Ảnh Hạch Lâm ba sưng, xuất huyết 43 Ảnh Hạch màng treo ruột sưng to 43 Ảnh Thận xuất huyết điểm 43 Ảnh Xoang bao tim tích nước, tim nhão 43 Ảnh Lách nhồi huyết 43 Ảnh Nội mạc tử cung bị viêm loét xuất huyết 43 Ảnh Phế nang có nhiều tế bào viêm (HEx40) 50 Ảnh 10 Lòng phế nang chứa nhiều dịch rỉ viêm (HEx40) 50 Ảnh 11 Phổi xuất huyết (HEx20) 50 Ảnh 12 Vách phế nang ñứt nát, xuất huyết (HE x 10) 50 Ảnh 13 Gan xuất huyết (HEx10) 50 Ảnh 14 Gan thâm nhiễm tế bào viêm (HEx40) 50 Ảnh 15 Hạch Lâm ba xuất huyết (HEx10) 51 Ảnh 16 Nang Lâm ba hoại tử, thâm nhiễm tế bào viêm (HEx20) 51 Ảnh 17 Lách xuất huyết, hoại tử (HEx10) 51 Ảnh 18 Lách xuất huyết (HEx40) 51 Ảnh 19 Ruột viêm, lơng nhung ruột đứt nát (HEx10) 51 Ảnh 20 Ruột viêm, hoại tử, lông nhung ñứt nát (HEx40) 51 Ảnh 21 Virus tập trung phổi (IHCx10) 56 Ảnh 22 Virus tập trung phổi (IHCx40) 56 Ảnh 23 Virus tập trung lách (IHCx10) 56 Ảnh 24 Virus tập trung lách (IHCx40) 56 Ảnh 25 Virus phân bố thận (IHCx10) 56 Ảnh 26 Virus phân bố thận (IHCx40) 56 Ảnh 27 Virus phân bố hạch (IHCx 10) 56 Ảnh 28 Virus phân bố hạch (IHCx 40) 56 Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội - Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp ………………………… vi Ảnh 29 Tế bào Marc 145 chưa gây nhiễm virus 59 Ảnh 30 Tế bào Marc 145 sau 36h gây nhiễm virus 59 Ảnh 31 Tế bào Marc 145 sau 48h gây nhiễm virus 59 Ảnh 32 Tế bào Marc 145 sau 60h gây nhiễm virus 59 Ảnh 33 Tế bào Marc 145 sau 60h gây nhiễm virus 59 Ảnh 34 Tế bào Marc 145 sau 72h gây nhiễm virus 59 Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội - Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp ………………………… vii DANH MỤC CÁC CHỮ VIẾT TẮT PRRS : Porcine Reproductive and Respiratory Syndrome PRRSV : Porcine Reproductive and Respiratory Syndrome Virus IHC : Immunohistochemistry OIE : Office International des Epizooties HE : Hematoxylin eosin Hb : Hemoglobin HC : Hồng cầu BCTT : Bạch cầu trung tính AT : Ái toan AK : Ái kiềm H.L : Hàm lượng PQ : Phế quản cs : Cộng DMEM : Dulbessco Modifiel Eagle Medium FBS : Fetal Bovin Serum DMSO : Dimethyl Sulfoxide EDTA : Ethidium Tetra Acetat PBS : Photphat Buffer Salin TBE : Tris Borate CPE : Cell Pathology Effect KD : KiloDalton D : Dalton DAB : 3,3 – Di Amino Benzidine tetrahydrochloride Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội - Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp ………………………… viii PHẦN I MỞ ðẦU Trong thời gian vừa qua nước ta chăn ni ngành có bước phát triển mạnh mẽ hàng ñầu, nhằm phục vụ cho nhu cầu nhân dân nước xuất khẩu, góp phần lớn vào việc cải thiện đời sống nhân dân Ngồi cịn ngành ngày chiếm vị trí quan trọng chuyển dịch kinh tế, xố đói giảm nghèo làm giàu cho người dân Tuy nhiên bước ñường phát triển ngành chăn ni gặp phải khơng khó khăn ðặc biệt bệnh dịch bệnh trở ngại lớn ngành chăn nuôi Trong thời gian gần ñây bệnh “tai xanh” hay hội chứng rối loạn sinh sản hô hấp lợn (Porcine Reproductive and Respiratory Syndrome – PRRS) ñã trở thành nỗi kinh hồng người chăn ni Thời gian ñầu xuất hiện, virus gây bệnh chưa thể tác ñộng to lớn, sang năm đầu kỷ 21, hàng loạt nước có báo cáo ghi nhận thiệt hại PRRS gây Dịch ñã diễn nhiều nước trở thành dịch ñịa phương nhiều nơi giới, gây thiệt hại lớn cho ngành chăn nuôi Dịch PRRS lợn không thiệt hại người lại gây thiệt hại không nhỏ kinh tế cho ngành chăn nuôi Riêng Mỹ, nước có ngành cơng nghiệp chăn ni phát triển cơng nghệ ñại dịch PRRS năm làm thiệt hại 560 triệu USD (Neumann cs, 2005) Những báo cáo ñầu tiên PRRS ñã ñược thấy Hoa Kỳ vào cuối năm 80 kỷ trước nhiên lúc chưa rõ ngun gây bệnh Năm 1991 nhà khoa học ñã phân lập ñược nguyên gây bệnh loại virus ARN chuỗi đơn dương, có vỏ bọc ngồi gọi virus gây hội chứng rối loạn hô hấp sinh sản lợn (Porcine Respiratory and Reproductive Syndrome Virus – PRRSV) Tiếp theo báo cáo Mỹ, nhiều báo cáo khác diễn nhiều nơi giới: ðức năm 1990, Hà Lan năm 1991, nước châu Á vào Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội - Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp ………………………… ... miễn dịch để chẩn đốn hội chứng rối loạn sinh sản hô hấp lợn 52 4.5 Kết phân lập PRRSv môi trường tế bào Marc 145 57 4.6 Mối tương quan bệnh tích đại thể, vi thể với kết nhuộm hố mơ miễn dịch. .. Ảnh 29 Tế bào Marc 145 chưa gây nhiễm virus 59 Ảnh 30 Tế bào Marc 145 sau 36h gây nhiễm virus 59 Ảnh 31 Tế bào Marc 145 sau 48h gây nhiễm virus 59 Ảnh 32 Tế bào Marc 145 sau 60h gây nhiễm virus. .. ñược áp dụng hứa hẹn mang lại hiệu tích cực chẩn đốn PRRS Trong nghiên cứu chúng tơi thực đề tài “ Áp dụng phương pháp hóa mơ miễn dịch (Immunohistochemistry) chẩn đốn hội chứng rối loạn sinh sản