KHOA CHĂN NUÔI – THÚ Y MÔN HỌC: VI SINH THÚ Y Chuyên đề: LISTERIA GVHD: Lịch sử phát Phân loại Đặc điểm chung Listeria Đặc điểm sinh học Vi khuẩn Listeria monocytogenes Khả gây bệnh Phần I: Lịch sử phát   Năm 1918, loại vi khuẩn phân lập từ dịch não tủy quân nhân người Pháp Trải qua nhiều năm nghiên cứu dịch bệnh năm 1920-1930 nhà khoa học Pirie đề xuất tên cho chủng Listeria monocytogenes Phần I: Lịch sử phát triển Những năm sau, người ta tìm thấy lồi xác định:        Listeria monocytogenes Listeria invanovii Listeria innocua Listeria wells Listeria seeligeli Listeria grayi Listeria denitrificans Phần II: Phân loại Phân loại Listeria.spp giới vi sinh vật sau:  Giới: Bacteria  Ngành : Fitmicutes  Lớp: Bacilli  Họ: Listeriaceae  Giống: Listeria  Loài: Listeria monocytogenens Phần III: Đặc điểm chung Listeria  Khuẩn Gram dương  Hình que, kích thước ngắn nhỏ, mãnh  Hiếu khí yếm khí tùy nghi, dương tính với Catalase, âm tính với Oxidase có khả lên men đường  Không tạo bào tử Phần IV: Vi khuẩn listeria monocytogenes Đặc điểm sinh vật học: Đặc điểm hình thái:  Listeria trực khuẩn Gram(+), kích thước ngn (0,4- 0.5ì0,5-2.0 àm) Khụng to giỏp mụ v khụng sinh bào tử Phần IV: Vi khuẩn listeria monocytogenes Đặc điểm sinh vật học: Đặc điểm hình thái   Có lơng xung quanh thân Di động nhờ lơng (flagella) nhiệt độ phịng (200 25 C)  Ở 37 C không tạo lông nên không di động Phần IV: Vi khuẩn listeria monocytogenes Đặc điểm sinh vật học: Đặc điểm hình thái:  Trong bệnh phẩm, chúng nằm tế bào, có hình thể to ngắn (xâm nhập vào tế bào nhờ chùm lơng actin phía đầu)  Trong mơi trường ni cấy thường xếp hàng rào có hình thể dài Phần IV: Vi khuẩn listeria monocytogenes Đặc điểm sinh vật học: Đặc điểm cấu tạo:  Nhân: chưa có màng, khơng có hình dạng cố định  Ribosome: chiếm 70% nằm tự tế bào chất  Lông (khuẩn mao): sợi lông mảnh  vi khuẩn bám vào giá thể (KN thân O)  Màng tế bào: lớp phospholipid (chiếm 30-40%), đầu phosphate tích điện phân cực, ưa nước Đầu hydrocacbon khơng tích điện, không phân cực kỵ nước  Tiên mao: sợi lông dài  khả phương pháp di động Phần IV: Vi khuẩn listeria monocytogenes Đặc điểm sinh vật học: Đặc điểm cấu tạo: Tăng trưởng tế bào vi khuẩn Tế bào đ.vật có vũ nhiễm vi khuẩn L.monocytogenes Phần IV: Vi khuẩn listeria monocytogenes Đặc điểm sinh vật học: Yếu tố độc lực: Tổ hợp gen quy định:  PrfA, plcA, plcB, hly, mpl, actA , inIA, inIB Trong gen prfA có vai trị yếu tố điều hồ nhằm ổn định hoạt đơng gen cịn lại Độc tố Listeriolysin A (LLO):  Listeriosin A (LLO): độc tố protein tiết L.monocytogenes khỏi khơng bào thực bào chủ hình thành chuỗi polypeptide gồm 529 amino acid LLO thuộc nhóm độc tố gắn liền với cholesterol hoạt hóa nhóm thiol tạo hầu hết vi khuẩn Gram dương Chính độc tố xúc tiến q trình ly giải khơng bào vi khuẩn xâm nhập vào tế bào chất Phần IV: Vi khuẩn listeria monocytogenes Đặc điểm sinh vật học: Yếu tố độc lực: Vai trò yếu tố độc lực:  Listeria monocytogenes xâm nhập vào tế bào thể vật chủ thông qua chế thực bào  Sau phân giải không bào, Listeria monocytogenes phóng thích vào Cytosol, chúng phát triển nhân lên, giai đoạn đòi hỏi phải có protein bề mặt khác ActA để di chuyển từ tế bào sang tế bào khác, tổng hợp actin Đuôi actin cho phép vi khuẩn xâm nhập vào tế bào chủ khác, phụ thuộc vào hoạt động cảu PC-PLC Mpl Phần V: Vi khuẩn listeria monocytogenes Đặc điểm sinh vật học: Tính chất ni cấy:  Vi khuẩn phát triển điều kiện yếm khí (Nhiệt độ 30-37 C, pH 7,2-7,4) Phát triển môi trường nuôi cấy thông thường  Thường sử dụng môi trường thạch máu điều kiện 5-10% CO2 Cho khuẩn lạc trịn bóng, màu trắng, đường kính 0,51mm gây dung huyết Beta Phần IV: Vi khuẩn listeria monocytogenes Đặc điểm sinh vật học: Tính chất ni cấy:  Trên mơi trường Trytose agar: Tạo khóm sáng, trắng mờ có màu xanh lam (màu bluegreen) quan sát ánh sáng nghiêng  Trên mơi trường LSA (Listeria selective agar) Tạo vịng đen quanh khóm phân giải Esculin sau 2448 Phần IV: Vi khuẩn listeria monocytogenes Đặc điểm sinh vật học: Tính chất sinh hóa:  Lên men chậm loại đường glucose, rhamnose, salicin, levulose, không lên men mannitol, xylose, lactose, saccarose  Phản ứng Catalase dương tính: Phần IV: Vi khuẩn listeria monocytogenes Đặc điểm sinh vật học: Tính chất kháng nguyên: KN thân O: bền nhiệt Vi khuẩn có kháng nguyên KN thân H: không bền nhiệt  Căn vào loại kháng nguyên này, Listeria monocytogenes chia thành loại huyết I, II, III, IV  Thường gặp loại I IV Vi khuẩn không tiết ngoại độc tố có nội độc tố gây hoại tử Phần IV: Vi khuẩn listeria monocytogenes Khả gây bệnh: Đề kháng: Tồn ngoại cảnh lâu có sức đề kháng cao:  0 Vi khuẩn bị diệt 60 C 30 phút 72 C 15 giây Vi khuẩn đề kháng với khơ hạn Có thể sống sót thực phẩm đất bị diệt chất sát trùng thông thường  Nhay cảm với nhiều loại kháng sinh tetracycline cho kết tốt Người ta kết hợp Trimethoprim với Sulphamethazol điều trị, vi khuẩn kháng lại với Quinolones Erythromycine, ampicillin dùng điều trị bệnh cho người Phần IV: Vi khuẩn listeria monocytogenes Khả gây bệnh: Miễn dich:  Cơ thể thú hình thành miễn dịch sau nhiễm  Miễn dịch trung gian tế bào chủ yếu  Hai loại vaccine chết nhược độc.( Thường sử dụng: 1a 4b đạt kết cừu) Phần V: Vi khuẩn listeria monocytogenes Khả gây bệnh: Các bệnh L.monocytogenes gây ra: Listeria monocytogenes gây bệnh cho nhiều loài động vật, lây sang người, chủ yếu gây bệnh trẻ sơ sinh gặp người lớn  Làm cho phụ nữ mang thai, trẻ sơ sinh, người già bị suy yếu miễn dịch  Phụ nữ mang thai có triệu chứng giống cúm nhẹ thai nhi bị nhiễm trùng -> xảy thai, thai lưu  Bại huyết, viêm màng não tỷ lệ chết > 25% Phần IV: Vi khuẩn listeria monocytogenes Chuẩn đoán: Chuẩn đoán phương pháp truyền thống: Bệnh phẩm: gan , lách , não, thai bị sảy… Nuôi cấy môi trường LSA Nhuộm gram Chon khuẩn lạc Test ANTON Thỏ bị nhiễm Listeria Tiêm não thỏ (chết sau 2-3 ngày) Kiểm tra máu thỏ (bạch cầu đơn nhân tăng 420-820/mm ) Phần IV: Vi khuẩn listeria monocytogenes Chuẩn đoán: Chuẩn đoán kỹ thuật gen:  Kỹ thuật PCR: PCR (Polymerase Chain Reaction) phản ứng nhân trình tự DNA test tube Kmullis phát minh PCR năm 1985 Nguyên tắc: PCR kỹ thuật invitro dùng để khuếch đại trình tự gen DNA dựa nguyên tắc phản ứng sinh hóa nhờ hoạt động enzym polymerse Nguyên liệu: DNA quan tâm, enzym tổng hợp DNA chịu nhiệt, đoạn mồi nucleotit, loại dNTP, dung dịch đệm cho phản ứng, Mg 2+ Phần IV: Vi khuẩn listeria monocytogenes Chuẩn đoán: Chuẩn đoán kỹ thuật gen: Các bước thực hiện: o Giai đoạn 1: biến tính ( denateration), nhiệt độ 94-95 C 30-60s o Giai đoạn 2: bắt cặp (annealation), nhiệt độ 40-70 C o Giai đoạn 3: kéo dài (enlongation) nhiệt độ 72 C 1-2 phút CẢM ƠN CÔ VÀ CÁC BẠN ĐÃ THEO DÕI BÀI THUYẾT TRÌNH CỦA NHĨM EM ... Listeria invanovii Listeria innocua Listeria wells Listeria seeligeli Listeria grayi Listeria denitrificans Phần II: Phân loại Phân loại Listeria. spp giới vi sinh vật sau:  Giới: Bacteria  Ngành... học Pirie đề xuất tên cho chủng Listeria monocytogenes Phần I: Lịch sử phát triển Những năm sau, người ta tìm thấy lồi xác định:        Listeria monocytogenes Listeria invanovii Listeria. .. IV: Vi khuẩn listeria monocytogenes Đặc điểm sinh vật học: Đặc điểm hình thái:  Listeria trực khuẩn Gram(+), kớch thc ngn (0,4- 0.5ì0,5-2.0 àm) Khụng to giỏp mô không sinh bào tử Phần IV: Vi