LỜI CAM ĐOAN Em Lê Văn Tuấn Vũ xin cam đoan khóa luận tốt nghiệp em thực hướng dẫn TS Nguyễn Thị Hai không chép ĐA/KLTN ai, hình thức nào, số liệu trích dẫn KLTN em thu thập qua trình thực nghiệm phịng TN khoa CNSH – TP MT trường Đại Học Cơng Nghệ TPHCM hồn tồn trung thực Tp Hồ Chí Minh, ngày 30 tháng năm 2014 Sinh viên thực Lê Văn Tuấn Vũ LỜI CẢM ƠN  Trong suốt trình học tập trường ĐH Công Nghệ TPHCM em nhận giúp đỡ từ Ban giám hiệu nhà trường, hướng dẫn tận tình từ giảng viên, chia từ bạn bè hồn thành khóa luận tốt nghiệp Em xin gửi lời cảm ơn chân thành đến Ban giám hiệu nhà trường tất thầy cô giáo khoa CNSH – TP – MT ln giúp đỡ em q trình học tập vừa qua Đặc biệt, em xin gửi lời cảm ơn chân thành đến cô Nguyễn Thị Hai người tận tình dạy cho em suốt trình học tập thực đề tài Con xin cảm ơn Bố mẹ gia đình ủng hộ năm tháng học tập khó khăn nguồn động viên tinh thần lớn cho Mặc dù cố gắng nhiều quá trình thực đề tài khó tránh khỏi sai sót Rất mong quý thầy cô bạn xem xét góp ý để em rút kinh nghiệm q báu cho q trình cơng tác học tập sau Em xin chân thành cảm ơn! Tp Hờ Chí Minh, tháng 06, 2014 Sinh viên Lê Văn Tuấn Vũ Đồ án tốt nghiệp MỤC LỤC DANH MỤC CÁC TỪ VIẾT TẮT .iii DANH MỤC CÁC BẢNG iv DANH MUC CÁC HÌNH v MỞ ĐẦU 1 Đặt vấn đề Mục tiêu đề tài Đối tượng phạm vi nghiên cứu đề tài Phương pháp nghiên cứu CHƯƠNG TỔNG QUAN 1.1 Lịch sử nghiên cứu biện pháp sinh học 1.1.1 Nghiên cứu biện pháp sinh học sâu hại giới 1.1.2 Nghiên cứu biện pháp sinh học phòng trừ sâu hại Việt Nam 11 1.2 Giới thiệu sâu khoang ăn tạp (Spodoptera litura Fabricus) 12 1.2.1 Phân loại 12 1.2.2 Phân bố ký chủ 12 1.2.3 Đặc điểm gây hại 13 1.2.4 Biện pháp phòng trị 13 1.3 Khái quát virus gây bệnh côn trùng 15 1.3.1 Phân loại nhóm virus diệt côn trùng 15 1.3.2 Đặc điểm hình thái cấu trúc NPV gây bệnh côn trùng 20 1.3.3 Cơ chế xâm nhiễm NPV 23 1.3.4 Ưu nhược điểm việc sử dụng chế phẩm NPV phòng trừ dịch hại 25 1.4 Nghiên cứu sử dụng chất chống tia cực tím để bảo vệ NPV 26 1.4.1 Kết nghiên cứu chất chống tia cực tím cho virus diệt côn trùng nước 29 1.4.2 Nam Kết nghiên cứu chất chống tia cực tím cho virus diệt trùng Việt 30 CHƯƠNG VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 33 2.1 Thời gian , địa điểm nghiên cứu 33 Trang i Đồ án tốt nghiệp 2.2 Vật liệu nghiên cứu 33 2.3 Nôi dung nghiên cứu 34 2.4 Phương pháp nghiên cứu 34 2.4.1 Đánh giá hiệu lực diệt sâu chế phẩm NPV bổ sung loại dịch chiết qua thời gian bảo quản điều kiện phòng thí nghiệm 34 2.4.2 Đánh giá hiệu lực diệt sâu chế phẩm NPV qua tháng bảo quản phun trồng chậu 37 2.5 Phương pháp xử lý số liệu 38 CHƯƠNG KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU VÀ THẢO LUẬN 40 3.1 Kết đánh giá hiệu lực diệt sâu chế phẩm NPV bổ sung loại dịch chiết qua thời gian bảo quản 40 3.1.1 Hiệu lực diệt sâu NPV trước bảo quản 40 3.1.2 Hiệu lực diệt sâu NPV sau tháng bảo quản 42 3.1.3 Hiệu lực diệt sâu NPV sau tháng bảo quản 43 3.1.4 Hiệu lực diệt sâu NPV sau tháng bảo quản 45 3.1.5 Hiệu lực diệt sâu NPV sau tháng bảo quản 46 3.1.6 Hiệu lực diệt sâu NPV sau tháng bảo quản 48 3.1.7 Hiệu lực diệt sâu NPV sau tháng bảo quản 50 3.2 Kết thí nghiệm đánh giá hiệu lực diệt sâu chế phẩm NPV qua tháng bảo quản phun trồng chậu 54 CHƯƠNG KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 60 4.1 Kết luận 60 4.2 Kiến nghị 60 TÀI LIỆU THAM KHẢO 62 PHỤ LỤC Trang ii Đồ án tốt nghiệp BmNPV DANH MỤC CÁC TỪ VIẾT TẮT Bombyx mori Nucleopolyherosis virus BPSH Biện pháp sinh học Bt Bacillus Thurigiensis BVTV Bảo vệ thực vật CV Coeff of variation CPV Cytoplasmic polyhedrosis virus DNA DeoxyriboNucleic Acid DNP DeoxyriboNucleo protein DV Denso virus ĐC Đối chứng EPN Tuyến trùng ký sinh côn trùng EV Entomopox virus ĐTSH Đấu tranh sinh học GV Granulosis virus HaNPV Helicoverpa armigera Nucleopolyherosis virus IB Inclusion Body IPM Intergrated Pest Managerment IV Irido virus MNPV Mutiple nucleocapsid NPV Nucleopolyherosis virus RNA Ribonucleic acid PIB Plyhedar inclusion body SAT Sâu ăn tạp SNPV Single nucleocapsid TP HCM Thành phồ Hồ Chí Minh SpltNPV Spodoptera litura Nucleopolyhedrosis virus VSV Vi sinh vật Trang iii Đồ án tốt nghiệp DANH MỤC CÁC BẢNG Bảng 2.1 Công thức bố trí thí nghiệm Bảng 2.2 Theo dõi tỷ lệ sâu chết Bảng 3.1 Hiệu lực diệt sâu NPV trước bảo quản Bảng 3.2 Hiệu lực diệt sâu NPV sau tháng bảo quản Bảng 3.3 Hiệu lực diệt sâu NPV sau tháng bảo quản Bảng 3.4 Hiệu lực diệt sâu NPV sau tháng bảo quản Bảng 3.5 Hiệu lực diệt sâu NPV sau tháng bảo quản Bảng 3.6 Ảnh hưởng công thức đến hiệu lực diệt sâu NPV Bảng 3.7 Hiệu lực diệt sâu NPV sau tháng bảo quản Bảng 3.8 Ảnh hưởng công thức đến hiệu lực diệt sâu NPV Bảng 3.9 Hiệu lực diệt sâu NPV sau tháng bảo quản Bảng 3.10 Ảnh hưởng công thức đến hiệu lực diệt sâu NPV Bảng 3.11 Hiệu lực diệt sâu công thức NPV sau thời gian bảo quản Bảng 3.12 Mật độ sâu khoang (con/m2) cơng thức thí nghiệm Bảng 3.13 Hiệu lực trừ sâu cơng thức thí nghiệm Bảng 3.14 Ảnh hưởng công thức đến hiệu lực diệt sâu NPV Bảng 3.15 Ảnh hưởng NPV thuốc hóa học đến mật độ bọ rùa trước sau phun Trang iv Đồ án tốt nghiệp DANH MUC CÁC HÌNH Hình 1.1 sâu khoang (Spodoptera litura) Hình 1.2 hoa màu bị phá hại sâu khoang Hình 1.3 Cấu trúc thể vùi Hình 1.4 Sơ đồ lây nhiễm, xâm nhập phát triển NPV thể sâu chủ Hình 1.5 Ánh sáng tia cực tím hấp thụ làm đứt gãy cấu trúc DNA làm vi sinh vật trở nên bất hoạt Hình 3.1 Đồ thị hiệu lực diệt sâu NPV trước bảo quản Hình 3.2 Đồ thị hiệu lực diệt sâu NPV sau tháng bảo quản Hình 3.3 Đồ thị hiệu lực diệt sâu NPV sau tháng bảo quản Hình 3.4 Đồ thị hiệu lực diệt sâu NPV sau tháng bảo quản Hình 3.5 Đồ thị hiệu lực diệt sâu NPV sau tháng bảo quản Hình 3.6 Đồ thị hiệu lực diệt sâu NPV sau tháng bảo quản Hình 3.7 Đồ thị hiệu lực diệt sâu NPV sau tháng bảo quản Hình 3.8 Đồ thị mật độ sâu qua ngày theo dõi sau phun Hình 3.9 Đồ thị hiệu lực diệt sâu công thức ngày sau phun Hình 3.10 Đồ thị mật độ bọ rùa trước sau phun Trang v Đồ án tốt nghiệp MỞ ĐẦU Đặt vấn đề Việt Nam nước nơng nghiệp có khí hậu nhiệt đới nóng ẩm nên thuận tiện cho trồng phát triển Đồng thời với loại trồng phát triển sâu bệnh hại phát sinh, chúng gây hại đáng kể đến suất Trong đó, đáng đề cập đến loài sâu khoang ăn tạp (Spodoptera litura), gây hại với 112 loại trồng thuộc 44 họ thực vật (Chari Patel, 1983) bao gồm loại rau quả, thực phẩm, lương thực, cảnh, Để phòng trừ làm giảm thiệt hại gây sâu, bệnh hại nói chung lồi sâu khoang ăn tạp (Spodoptera litura) nói riêng người nơng dân sử dụng nhiều biện pháp phịng trừ canh tác thủ công, luân canh, chuyên canh, chọn tạo giống mới, dùng thuốc hóa học Trong biện pháp sử dụng thuốc hóa học xem phổ biến dễ áp dụng, có hiệu ngay, kịp thời hiệu cao mà giá thành lại rẻ Nhưng mặt trái thuốc hoá học thể chỗ sử dụng thuốc không hợp lý, không đúng, sử dụng lâu dài kéo theo hàng loạt vấn đề như: ảnh hưởng tới sức khoẻ người động vật, tăng khả hình thành tính kháng thuốc sâu bệnh, tiêu diệt hệ thiên địch, phá vỡ cân sinh học, gây nhiều vụ dịch hại mới, gây hậu xấu tới môi trường Do vậy, sử dụng thuốc hóa học biện pháp tình Đứng trước thực trạng thì biện pháp sinh học giải pháp đánh giá có hiệu cao, khơng khơng gây hại cho người, an tồn cho gia súc, khơng ảnh hưởng đến lồi sinh vật có ích mà cịn góp phần cải thiện mơi trường,… Trong số này, đáng kể Nucleopolyhedrosis virus (NPV) Virus gây bệnh côn trùng nhà khoa học giới phát 1000 lồi, các lồi thuộc nhóm Baculovirus có tác dụng diệt sâu cao (Phạm Thị Thùy, 2004) Virus đa diện nhân Nucleopolyhedrosis virus (NPV) biết giới tác nhân gây bệnh phổ biến Trang Đồ án tốt nghiệp sâu ăn tạp, công nhận tiềm cho việc quản lý trùng có hiệu lực diệt sâu cao, có tính chun tính cao, đặc biệt hấp dẫn tính an tồn môi trường sinh vật khác Một số nơi gới sản xuất thành công chế phẩm NPV, Việt Nam có nhiều nghiên cứu NPV, nhiên chưa tạo chế phẩm hoàn chỉnh hiệu lực NPV giảm nhanh sau thời gian bảo quản Mặt khác, phun đồng virus NPV bị hoạt tính nhanh tác động tia cực tím có nắng mặt trời Các nghiên cứu nước tập trung nâng cao hiệu lực sản xuất chế phẩm NPV chưa có nghiên cứu sâu chất phụ gia có khả lọc tia cực tím có nguồn gốc thực vật bảo quản chế phẩm NPV Trên sở nghiên cứu trước Nguyễn Cao Đẳng (2013) Phan Công Vẹn (2013) chất phụ gia ( trà xanh, bã cà phê acid boric) bổ sung vào chế phẩm NPV có khả lọc tia cực tím trì hiệu lực ban đầu chế phẩm NPV, câu hỏi đặt liệu chất phụ gia có trì hiệu lực chế phẩm NPV bảo quản thời gian dài điều kiện bình thường hay không? Để trả lời cho câu hỏi trên, sinh viên tiến hành thực đề tài: “Xác định thời gian bảo quản chế phẩm NPV (Nucleopolyhedrosis virus)” Mục tiêu đề tài Chọn lọc loại dịch chiết phụ gia thích hợp dùng bảo quản chế phẩm NPV Đối tượng phạm vi nghiên cứu đề tài Nuclear polyhedrosis virus – NPV cung cấp từ phịng thí nghiệm Khoa Cơng Nghệ Sinh Học – Thực Phẩm – Môi Trường, trường đại học Công Nghệ thành phố Hồ Chí Minh Nguồn sâu khoang ăn tạp Spodoptera litura dùng để nhân nhiễm virus NPV từ Ninh Thuận TP Hồ Chí Minh Trang Đồ án tốt nghiệp Các thí nghiệm tiến hành nghiên cứu phịng thí nghiệm Khoa Cơng Nghệ Sinh Học – Thực Phẩm – Môi Trường, trường đại học Công Nghệ thành phố Hồ Chí Minh số ruộng rau cải huyện Củ Chi, HCM Phương pháp nghiên cứu Đánh giá hiệu lực diệt sâu chế phẩm NPV sở phương pháp nhúng lá điều kiện phịng thí nghiệm phương pháp phun đồng ruộng Xử lý số liệu chương trình Microsoft excel Statgraphic centurion Tính hiệu lực diệt sâu virus theo công thức Abbott Henderson-Tilton Trang Đồ án tốt nghiệp CHƯƠNG KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 4.1 Kết luận Bổ sung dịch chiết trà xanh %, dịch chiết bã cà phê % acid boric nồng độ 1% vào chế phẩm NPV sau tháng bảo quản điều kiện thường, kết cho thấy: - Dịch chiết trà xanh % dich chiết acid boric % trì hiệu lực NPV tốt, có xu hướng rút ngắn thời gian ủ bệnh sâu, trà xanh % cho hiệu trì hiệu lực tốt khơng có khác biệt cơng thức NPV + trà xanh NPV + acid boric - Đối với dịch chiết bã cà phê % bổ sung vào chế phẩm NPV sau tháng bảo quản hiệu lực giảm 25,0 % so với hiệu lực ban đầu - Chế phẩm NPV không bổ sung dịch chiết phụ gia sau tháng bảo quản hiệu lực có dấu hiệu giảm rõ đạt 81,6 % Kết thử nghiệm trồng chậu sau tháng bảo quản chế phẩm NPV cho thấy: - Hiệu lực diệt sâu NPV liều 2x106 PIB/ml cho hiệu lực trừ sâu tương đương với thuôc Sherpa 0,2 % thấp hẳn so với liều 5x106 PIB/ml 107 PIB/ml - Bổ sung dịch chiết trà xanh % vào NPV nồng độ x 106 PIB/ml có xu hướng trì hiệu lực diệt sâu NPV - Chế phẩm NPV phun trồng chậu không ảnh hưởng xấu đến Bọ rùa bắt mồi, thuốc hóa học tiêu diệt gần tồn Bọ rùa có 4.2 Kiến nghị Do thời gian có hạn nên đề tài khảo sát đến tháng bảo quản chế phẩm NPV điều kiện phịng thí nghiệm, đến tháng bảo quản đối Trang 60 Đồ án tốt nghiệp với chế phẩm NPV phun cây, nên tiếp tục khảo sát thời gian bảo quản chế phẩm NPV tháng Trang 61 Đồ án tốt nghiệp TÀI LIỆU THAM KHẢO Tài liệu Tiếng Việt: [1] Chu Thị Thơm, Phan Thị Lài Nguyễn Văn Tó (2006), Tìm hiểu chế phẩm vi sinh vật dùng nông nghiệp, Tủ sách khuyến nông phục vụ người lao động, Nhà xuất lao động, Hà Nội [2] Chu Thị Thơm, Phan Thị Lài, Nguyễn Văn Tó (2006) Ứng dụng cơng nghệ sinh học sản xuất đời sống Nhà xuất Lao động, Hà Nội [3] Ngô Trung Sơn (1999), Nghiên cứu sử dụng HaNPV phòng trừ tổng hợp sâu xanh hại Ninh Thuận Luận án tiến sỹ nông nghiệp, Viện Khoa học Kỹ thuật Nông nghiệp Việt Nam [4] Nguyễn Cao Đẳng (2013), Lựa chọn chất phụ gia có ng̀n gốc thực vật, bổ sung vào chế phẩm NPV, Đồ án tốt nghiệp, Đại học Công Nghệ Thành Phố Hồ Chí Minh, TP Hồ Chí Minh [5] Nguyễn Cơng Thuật (1996), Phịng trừ tổng hợp sâu bệnh hại trồng Nghiên cứu ứng dụng, NXB Nông nghiệp [6] Nguyễn Đức Khiêm, 2006 Giáo trình Cơn trùng nông nghiệp NXB Nông nghiệp Hà Nội [7] Nguyễn Thị Hai Sâu hại thiên địch chúng Sách: Kết nghiên cứu khoa học (1976-1996) Nxb Nơng nghiệp, Tp Hồ Chí Minh, tr.108-120 1996 [8] Nguyễn Thị Kiều Khuyên (2002), Tình hình thiên địch sâu ăn tạp (Spodoptera litura Fab.), sâu xanh da láng (Spodoptera exigua Hubner.) số đặc điểm hình thái, sinh học sâu xếp Trang 62 Đồ án tốt nghiệp (Lamprosenma indica Fab.), Cần Thơ, Luận văn tốt nghiệp, Đại học Cần Thơ [9] Nguyễn Văn Huỳnh (1999), Côn trùng nông nghiệp, Đại học Cần Thơ [10] Nguyễn Văn Huỳnh & Lê Thị Sen (2004), “Côn trùng gây hại trờng đờng sơng Cửu Long”, Giáo trình côn trùng nông nghiệp, phần B, Đại học Cần Thơ, 34 – 39 [11] Phạm Huỳnh Thanh Vân & Lê Thị Thùy Minh (2001), Sâu ăn tạp Spodoptera litura: Một số đặc điểm sinh học, sinh thái thành phần, tác động thiên địch điều kiện vùng đồng sông Cửu Long, Luận văn tốt nghiệp, Đại học Cần Thơ [12] Phạm Thị Thùy (2004), Công nghệ sinh học bảo vệ thực vật, Nhà xuất Đại học Quốc Gia Hà Nội [13] Phạm Văn Lầm Biện Pháp sinh học phịng chống dịch hại Nơng nghiệp, Nxb Nông nghiệp, Hà Nội 1995 [14] Phạm Văn Lầm Nghiên cứu phát triển biện pháp sinh học phòng chống dịch hại nông nghiệp Việt Nam Báo cáo trình bày Hội thảo Quốc gia Khoa học vào công nghệ BVTV kỷ niệm 50 năm ngày bắt đầu hoạt động BVTV Việt Nam, ngày 7-8/01/2003, Hà Nội, 16 tr 2003 [15] Phan Công Vẹn (2013), Nâng cao hiệu lực diệt sâu chế phẩm NPV (nucle polyhedrosis virus), Đồ án tốt nghiệp, Đại học Công Nghệ Thành Phố Hồ Chí Minh, TP Hồ Chí Minh [16] Quang Chân Chân (2002), Siêu vi khuẩn thiên địch Baculovirus hiệu sử dụng nông nghiệp, Luận văn tốt nghiệp, Đại học Cần Thơ Trang 63 Đồ án tốt nghiệp [17] Trần Thị Thùy Dung (2008), Quy trình chế biến thức ăn nhân tạo khảo sát ảnh hưởng Spodoptera litura nucleopolyhedrovirus sâu ăn tạp (Spodoptera litura Fabricius) phịng thí nghiệm, Luận văn tốt nghiệp, Đại học Cần Thơ [18] Trần Văn Mão (2002), Sử dụng trùng vi sinh vật có ích, Tập II: Sử dụng vi sinh vật có ích, Nhà xuất Nông nghiệp Hà Nội [19] Trần Thị Thùy Dùng (2008), Quy trình chế biến thức ăn nhân tạo khảo sát ảnh hưởng nucleopolyhedrovirus sâu ăn tập (Spodoptera litura Fabricius) phịng thí nghiệm, Luận văn tốt nghiệp, Đại học Cần Thơ [20] Vũ Mai Nam (2001), “Những nhà khoa học trẻ miệt mài với lồi sâu” Tạp chí Khoa học Đời sống, Số 35 Tiếng nước ngoài: [21] Adam, J R DNA Mc Clintock, J T, 1991 Baculoviridae Nuclear polyherosis viruses Part Nuclear polyherosis viruse of insects, in atlas of invertebrate virus CRC BoCa Raton, FL, p 87-204 [22] Albert, H U DNA N E Alger (2003), “Nosema bombycis algerae: Infection of the white mouse by a mosquito parasite” Journal of Invertebrate Pathology, Volume 83, Issue 1, May, Pages 51-59 [23] B S Ravishankar DNA M G Venkatesha (2010) “Effectiveness of SlNPV of Spodoptera litura (Fab.) (Lepidoptera: Noctuidae) on different host plants” Journal of Biopesticides (1 Special Issue) 167 - 171 [24] Bergold, G H (1963a), “Fine structure of some insect viruses”, Journal Insect Pathology, 5, 111 - 128 Trang 64 Đồ án tốt nghiệp [25] Bergold, G H (1963b), “The molecular structure of some insect virus inclusion bodies”, Journal Ultrastructs Res., 8, 360 - 378 [26] Chukhrij M.G Biologia Baculovirusov i vius txitoplazmatichexkovo poliedroza Kishinhev, 1988 [27] Coppel H.C., J.W Mertins Biological Insect Pest Suppression Springer- Verlag Berlin Heidelberg, New York 1977 [28] Crook, N E DNA Jarrett P (1991), “Viral DNA bacterial pathogens of insects” Socirty for Applied Bacteriology 20: 91-96 [29] DeBach P Biological control by natural enemies Cambridge University Press 1974 [30] DeBach P Biological control of Insect Pest DNA Weeds Reinhold Publishing Corp New York 1964 [31] DeBach P, Rosen D Biological control by natural enemies (2nd ed.) Cambridge University Press 1991 [32] Doutt R The Historical development of biological control In: Biological control of insect pests DNA weeds New York Reinhold, p.2142 1964; [33] El Salamouny S., Shapiro M., Ling K S DNA Shepard B M (2009a) Black tea DNA lignin as Ultraviolet protectants for the beet armyworm nucleopolyhedrovirus Journal of Entomological Science 44(1): 50-58 [34] El Salamouny S., Ranwala D., Shapiro M., Shepard M DNA Farrar R (2009b) Tea, coffee, DNA cocoa as ultraviolet radiation protectants for the beet armyworm nucleopolyhedrovirus Journal of Economic Entomology 102(5): (In Press) Trang 65 Đồ án tốt nghiệp [35] Fries, I (2010), Nosema ceranae in European honey bees (Apis mellifera), Journal of Invertebrate Pathology, Volume 103, Supplement 1, January, Pages S73-S79 [36] Hatakeyama, Y., H Oda, R Tsunoda, Y Imura, T Maeda, T T Xuan, T V Hai, DNA H Iwano (2009), Infection DNA phylogenetic analyses of microsporidia isolated from the common cutworm, Spodoptera litura (Lepidoptera: Noctuidae) in Vietnam Journal of Jananese Society of applied Entomology & Zoogly [37] Hidetoshi Iwano DNA Ren Ishihara, 1991 Dimorphism of Spores of Nosema bombycis spp in Cultured Cell Journal of Invertebrate Pathology 57, 211 - 219 [38] Hidetoshi Iwano, Nobuaki Shimizu, Fuji Kawahami DNA Ren Ishihara, 1993 Spore Dimorphism DNA some other biological features of a Nosema bombycis sp isolated from the lawn grass cutworm Spodoptera depravata Butler Journal of appl Entomology Zoo 29, 219-227 [39] Huffaker C.B., Messenger P S Theory DNA Practice of Biological control Academic Press, Inc New York, San Francisco, London 1976 [40] Hugh Evan & Martin Shapiro (1997), “Viruses”, Manual of Techniques in Insect Pathology, Biological Techniques, p 17-53 [41] Huter - Fujita F R., P F Entwiste, H F Evans DNA N E Cook (1998), “Insect virus DNA Pest Management”, Wiley, New York [42] Ignoffo C.M Manipulating enzootic-epizootic diseases of arthropods In: Biological control in Agricultural IPM Systems Academic Press, Inc New York, p.243-262 1985 Trang 66 Đồ án tốt nghiệp [43] Ignoffo C M., M Shapiro, W.F Hink (1971), “Replication DNA serial passage of infectious Heliothis nucleopolyhedrosisvirus in an established line of Heliothis zea cells”, J Invertebr Pathol, 18, p 131– 134 [44] Iwano, H DNA R Ishihara (1991), Dimorphism of Spores of Nosema spp in Cultured Cell, Journal of Invertebrate Pathology 57, pp 211-219 [45] KDNAybin N.V Bacterial’nye sregstva bor’by s gryzunymi i vregnymi nasekomye: teoria i practiki Agropromizgat, Moscva 1989 [46] Kelly, D C (1985), “Insect iridescent viruses”, Current Topics in Microbiology DNA Immunology, 116, 23 - 35 [47] Klee, J (2007), Widespread dispersal of the microsporidian Nosema bombycis ceranae, an emergent pathogen of the western honey bee, Apis mellifera J, Invertebr, Pathol, doi:10,1016, 2007, 02, 014 [48] Madoka Nakai, Nguyen Thi Thu Cuc, Yasuhisa Kunimi, DNA ctv 2002 Field application of an insect virus in Can Tho: Effects of nucleopolyhedrovirus on 131 Spodoptera litura DNA its parasitic natural enemies Journal of Biocontrol Science DNA Technology 15 (5), p 443-453 [49] Mariano, H (2007), “Experimental infection of Apis mellifera honeybees with Nosema bombycis ceranae (Microsporidia)”, Journal of Invertebrate Pathology,Volume 94, Issue 3, Pages 211-217 [50] McCarthy, W J DNA Gettig, R R., 1986 Current development in baculovirus serology The biology baculovirus, vol I CRC press, Boca, Raton, Florida, p 147-158 Trang 67 Đồ án tốt nghiệp [51] Ravensberg W J The use of beneficial organisms for pest control under practical condition In: Biological crop protection Bayer 45(63), p49-69.1992 [52] R Varatharajan*, M Ingobi Singh & Lreeta (2006), ”Cross infectivity of baculovirus, Spilarctia obliqua nuclear polyhedrosis virus against mulberry pest, Porthesia xanthorrhoea Kollar” Indian Journal of Experimental Biology Vol, 44, pp 419 - 421 [53] Schwarz M.R Biological DNA integrated pest DNA diseases management in the United States of Americal In: Biological crop protection Bayer AG, Vol 45(63), p.73-86 1992 [54] Simmonds F.J., J.M Franz, R.I Sailer History of biological control In: Biological control (Ed by C.B Huffaker et al.) Plenum Press, New York, p.17-39 1976 [55] Steinhaus E Microbial Diseases of insects In: Biological control of Insect Pest DNA Weeds Reinhold Publishing Corp New York, p 515547 1964 [56] Summers, M D., R Engler, L A Falcon DNA P V Vail (Eds) (1975) Baculoviruses for Insect Pest Control: Safety Considerration Amerrican Society of Microbiology, Washington [57] Tran Thi Kieu Trang DNA S Chaudhari (2002), “Bioassay of nuclear polyhedrosis virus (NPV) DNA in combination with insecticide on Spodoptera litura (Fab)” Omonrice 10: 45 – 53 [58] Tran Van Hai, Trinh Thi Xuan DNA Hidetoshi Iwano., 2009 Potential of Nosema bombycis sp (Protozoa; Microsporida) for controlling Spodoptera litura Fab (Lepidoptera; Noctuidae) in the Trang 68 Đồ án tốt nghiệp Mekong Delta of Vietnam Workshop on collaboration in advanced sciences DNA technology [59] Van Driesche R.G DNA Bellows T.S.J Biological control Chapman & Hall New York 1996 [60] Weiser J Microbiologicheskie methody borby s vrednymi náecomymi Praha 1966 Trang 69 Đồ án tốt nghiệp PHỤ LỤC Phụ lục A Một số hình ảnh thí nghiệm Trang Đồ án tốt nghiệp Phụ lục B Xử lý thống kê Kết đánh giá hiệu lực diệt sâu chế phẩm NPV bổ sung loại dịch chiết qua thời gian bảo quản Trước bảo quản ANOVA Table for hiêu luc diet sau by cong thuc Source Sum of Squares Df Mean Square Between groups ,25 ,0833333 Within groups 2,0 ,25 Total (Corr.) 2,25 11 Multiple Range Tests for hiêu luc diet sau by cong thuc Method: 95,0 percent LSD cong thuc Count NPV NPV+CA PHE NPV+TRA XANH NPV+ACID BORIC Mean 19,6667 19,6667 19,6667 20,0 Contrast NPV - NPV+ACID BORIC NPV - NPV+CA PHE NPV - NPV+TRA XANH NPV+ACID BORIC - NPV+CA PHE NPV+ACID BORIC - NPV+TRA XANH NPV+CA PHE - NPV+TRA XANH * denotes a statistically significant difference F-Ratio ,33 P-Value ,8018 Homogeneous Groups X X X X Sig Difference -,333333 ,0 ,0 ,333333 ,333333 ,0 +/- Limits ,941425 ,941425 ,941425 ,941425 ,941425 ,941425 Sau tháng bảo quản ANOVA Table for hiêu luc diet sau by cong thuc Source Sum of Squares Df Mean Square Between groups ,916667 ,305556 Within groups 11,3333 1,41667 Total (Corr.) 12,25 11 Multiple Range Tests for hiêu luc diet sau by cong thuc Method: 95,0 percent LSD cong thuc Count NPV NPV+CA PHE NPV+ACID BORIC NPV+TRA XANH Mean 19,0 19,0 19,3333 19,6667 Contrast NPV - NPV+ACID BORIC NPV - NPV+CA PHE NPV - NPV+TRA XANH NPV+ACID BORIC - NPV+CA PHE F-Ratio ,22 Homogeneous Groups X X X X Sig Difference -,333333 ,0 -,666667 ,333333 Trang +/- Limits 2,24104 2,24104 2,24104 2,24104 P-Value ,8828 Đồ án tốt nghiệp NPV+ACID BORIC - NPV+TRA XANH NPV+CA PHE - NPV+TRA XANH * denotes a statistically significant difference -,333333 -,666667 2,24104 2,24104 Sau tháng bảo quản ANOVA Table for hiêu luc diet sau by cong thuc Source Sum of Squares Df Mean Square Between groups 5,66667 1,88889 Within groups 49,3333 6,16667 Total (Corr.) 55,0 11 Multiple Range Tests for hiêu luc diet sau by cong thuc Method: 95,0 percent LSD cong thuc Count NPV NPV+CA PHE NPV+ACID BORIC NPV+TRA XANH Mean 17,6667 18,0 19,0 19,3333 Contrast NPV - NPV+ACID BORIC NPV - NPV+CA PHE NPV - NPV+TRA XANH NPV+ACID BORIC - NPV+CA PHE NPV+ACID BORIC - NPV+TRA XANH NPV+CA PHE - NPV+TRA XANH * denotes a statistically significant difference F-Ratio ,31 P-Value ,8203 Homogeneous Groups X X X X Sig Difference -1,33333 -,333333 -1,66667 1,0 -,333333 -1,33333 +/- Limits 4,67564 4,67564 4,67564 4,67564 4,67564 4,67564 Sau tháng bảo quản ANOVA Table for hiêu luc diet sau by cong thuc Source Sum of Squares Df Mean Square Between groups 5,66667 1,88889 Within groups 20,0 2,5 Total (Corr.) 25,6667 11 F-Ratio ,76 P-Value ,5495 Multiple Range Tests for hiêu luc diet sau by cong thuc Method: 95,0 percent LSD cong thuc Count NPV NPV+CA PHE NPV+ACID BORIC NPV+TRA XANH Mean 17,3333 17,6667 18,6667 19,0 Contrast NPV - NPV+ACID BORIC NPV - NPV+CA PHE NPV - NPV+TRA XANH NPV+ACID BORIC - NPV+CA PHE NPV+ACID BORIC - NPV+TRA XANH NPV+CA PHE - NPV+TRA XANH * denotes a statistically significant difference Homogeneous Groups X X X X Sig Difference -1,33333 -,333333 -1,66667 1,0 -,333333 -1,33333 +/- Limits 2,97705 2,97705 2,97705 2,97705 2,97705 2,97705 Sau tháng bảo quản ANOVA Table for hiêu luc diet sau by cong thuc Source Sum of Squares Df Mean Square Trang F-Ratio P-Value Đồ án tốt nghiệp Between groups 7,58333 2,52778 Within groups 7,33333 ,916667 Total (Corr.) 14,9167 11 Multiple Range Tests for hiêu luc diet sau by cong thuc Method: 95,0 percent LSD cong thuc Count NPV NPV+CA PHE NPV+ACID BORIC NPV+TRA XANH Mean 17,0 17,6667 18,6667 19,0 Contrast NPV - NPV+ACID BORIC NPV - NPV+CA PHE NPV - NPV+TRA XANH NPV+ACID BORIC - NPV+CA PHE NPV+ACID BORIC - NPV+TRA XANH NPV+CA PHE - NPV+TRA XANH * denotes a statistically significant difference 2,76 ,1117 Homogeneous Groups X XX XX X Sig * Difference -1,66667 -,666667 -2,0 1,0 -,333333 -1,33333 +/- Limits 1,80269 1,80269 1,80269 1,80269 1,80269 1,80269 Sau tháng bảo quản ANOVA Table for hiêu luc diet sau by cong thuc Source Sum of Squares Df Mean Square Between groups 11,5833 3,86111 Within groups 7,33333 ,916667 Total (Corr.) 18,9167 11 Multiple Range Tests for hiêu luc diet sau by cong thuc Method: 95,0 percent LSD cong thuc Count NPV NPV+CA PHE NPV+ACID BORIC NPV+TRA XANH Mean 16,3333 17,0 17,3333 19,0 Contrast NPV - NPV+ACID BORIC NPV - NPV+CA PHE NPV - NPV+TRA XANH NPV+ACID BORIC - NPV+CA PHE NPV+ACID BORIC - NPV+TRA XANH NPV+CA PHE - NPV+TRA XANH * denotes a statistically significant difference F-Ratio 4,21 P-Value , 461 Homogeneous Groups X X XX X Sig * * Difference -1,0 -,666667 -2,66667 ,333333 -1,66667 -2,0 +/- Limits 1,80269 1,80269 1,80269 1,80269 1,80269 1,80269 Sau tháng bảo quản ANOVA Table for HIEU LUC DIET SAU by CONG THUC Source Sum of Squares Df Mean Square F-Ratio Between groups 25,5833 8,52778 6,40 Within groups 10,6667 1,33333 Total (Corr.) 36,25 11 Multiple Range Tests for HIEU LUC DIET SAU by CONG THUC Method: 95,0 percent LSD CONG THUC Count NPV+CA PHE Mean 14,6667 Homogeneous Groups X Trang P-Value , 161 Đồ án tốt nghiệp NPV NPV+ACID BORIC NPV+TRAXANH 3 16,3333 17,3333 18,6667 XX XX X Contrast NPV - NPV+ACID BORIC NPV - NPV+CA PHE NPV - NPV+TRAXANH NPV+ACID BORIC - NPV+CA PHE NPV+ACID BORIC - NPV+TRAXANH NPV+CA PHE - NPV+TRAXANH * denotes a statistically significant difference Sig Difference -1,0 1,66667 -2,33333 2,66667 -1,33333 -4,0 * * * +/- Limits 2,17413 2,17413 2,17413 2,17413 2,17413 2,17413 Kết thí nghiệm đánh giá hiệu lực củachế phẩm NPV sau tháng bảo quản phun trồng chậu Analysis of Variance for hiêu luc - Type III Sums of Squares Source Sum of Squares Df Mean Square MAIN EFFECTS A:công thuc 544,783 136,196 RESIDUAL 432,142 10 43,2142 TOTAL (CORRECTED) 976,925 14 All F-ratios are based on the residual mean square error Multiple Range Tests for hiêu luc by công thuc Method: 95,0 percent LSD công thuc NPV 2000000 SHERPA 0,002 NPV 2000000 + TRA XANH NPV 5000000 NPV 10000000 Count 3 3 LS Mean 83,2133 86,233 91,5267 96,2267 100,0 Contrast NPV 10000000 - NPV 2000000 NPV 10000000 - NPV 2000000 + TRA XANH NPV 10000000 - NPV 5000000 NPV 10000000 - SHERPA 0,002 NPV 2000000 - NPV 2000000 + TRA XANH NPV 2000000 - NPV 5000000 NPV 2000000 - SHERPA 0,002 NPV 2000000 + TRA XANH - NPV 5000000 NPV 2000000 + TRA XANH - SHERPA 0,002 NPV 5000000 - SHERPA 0,002 * denotes a statistically significant difference LS Sigma 3,79536 3,79536 3,79536 3,79536 3,79536 Sig * * * P-Value 3,15 , 642 Homogeneous Groups X XX XXX XX X Difference 16,4867 7,47333 3,57333 13,0767 -9,01333 -12,9133 -3,41 -3,9 5,60333 9,50333 Trang F-Ratio +/- Limits 11,9594 11,9594 11,9594 11,9594 11,9594 11,9594 11,9594 11,9594 11,9594 11,9594 ... lực diệt sâu chế phẩm NPV bổ sung loại dịch chiết qua thời gian bảo quản 40 3.1.1 Hiệu lực diệt sâu NPV trước bảo quản 40 3.1.2 Hiệu lực diệt sâu NPV sau tháng bảo quản ... acid boric) bổ sung vào chế phẩm NPV có khả lọc tia cực tím trì hiệu lực ban đầu chế phẩm NPV, câu hỏi đặt liệu chất phụ gia có trì hiệu lực chế phẩm NPV bảo quản thời gian dài điều kiện bình... hành thực đề tài: “Xác định thời gian bảo quản chế phẩm NPV (Nucleopolyhedrosis virus)” Mục tiêu đề tài Chọn lọc loại dịch chiết phụ gia thích hợp dùng bảo quản chế phẩm NPV Đối tượng phạm vi