BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƯỜNG ĐẠI HỌC CÔNG NGHỆ TP HỒ CHÍ MINH ĐỒ ÁN TỐT NGHIỆP NGHIÊN CỨU ẢNH HƯỞNG CỦA CHẤT ĐIỀU HÒA SINH TRƯỞNG THỰC VẬT VÀ CHITOSAN LÊN SỰ TẠO CHỒI LAN CATTLEYA HYBRID WHITE Ngành: CÔNG NGHỆ SINH HỌC Chuyên ngành: CÔNG NGHỆ SINH HỌC Giảng viên hướng dẫn : ThS Nguyễn Thị Thu Hương Sinh viên thực : Nguyễn Gia Lộc MSSV: 1515100012 Lớp: 15HSH01 TP Hồ Chí Minh, 2016 LỜI CAM ĐOAN Tôi xin cam đoan nội dung đồ án tốt nghiệp cơng trình nghiên cứu thực hướng dẫn ThS Nguyễn Thị Thu Hương – giảng viên Trường Đại Học Công Nghệ Thành Phố Hồ Chí Minh Đề tài thực sở nghiên cứu lý thuyết tiến hành nghiên cứu thực nghiệm phịng thí nghiệm Cơng Nghệ Sinh Học Thực Vật, khoa Công Nghệ Sinh Học – Thực Phẩm – Môi Trường, thuộc Trường Đại Học Cơng Nghệ Thành Phố Hồ Chí Minh Các số liệu bảng hoàn toàn trung thực Đồ án khơng chép hình thức nào, phát có gian lận tơi xin chịu hoàn toàn trách nhiệm TP.HCM, ngày 15 tháng năm 2016 Sinh viên thực Nguyễn Gia Lộc i LỜI CẢM ƠN Với lòng biết ơn sâu sắc nhất, em xin gửi đến Quý Thầy Cô Khoa Công Nghệ Sinh Học – Thực Phẩm – Môi Trường trường Đại học Cơng nghệ Thành Phố Hồ Chí Minh với tri thức tâm huyết truyền đạt vốn kiến thức quý báu cho em suốt thời gian học tập trường Với vốn kiến thức tiếp thu trình học khơng tảng cho q trình nghiên cứu đồ án mà cịn hành trang q báu để em bước vào đời cách vững tự tin Đặc biệt cho phép em bày tỏ lòng biết ơn sâu sắc đến ThS Nguyễn Thị Thu Hương – người tận tình hướng dẫn, truyền đạt nhiều kinh nghiệm quý báu cung cấp tư liệu quý giá cho em thực tốt đồ án tốt nghiệp Cảm ơn cô tiếp thêm cho em niềm tin nghị lực để định hướng cho tương lai Qua đồ án này, em xin chân thành cảm ơn ban giám hiệu trường Đại học Công nghệ Thành Phố Hồ Chí Minh tạo điều kiện cho em tiếp cận học hỏi nhiều kinh nghiệm trình làm đồ án giúp em nắm vững kiến thức học Bên cạnh đó, em xin cảm ơn thầy Huỳnh Văn Thành thầy Nguyễn Trung Dũng cán phịng thí nghiệm giúp đỡ em suốt thời gian làm đồ án Cảm ơn bạn phịng thí nghiệm ni cấy mơ thực vật giúp đỡ, hỗ trợ suốt trình làm đồ án Cuối em kính chúc Q Thầy, Cơ dồi sức khỏe thành công nghiệp trồng người TP.Hồ Chí Minh, ngày 15 tháng năm 2016 Sinh viên thực đồ án Nguyễn Gia Lộc ii MỤC LỤC LỜI CAM ĐOAN i LỜI CẢM ƠN ii MỤC LỤC iii DANH MỤC CHỮ VIẾT TẮT v DANH MỤC BẢNG vi DANH MỤC HÌNH vii DANH MỤC BIỂU ĐỒ viii MỞ ĐẦU 1 Đặt vấn đề Mục đích đề tài Nội dung đề tài Ý nghĩa khoa học thực tiễn đề tài nguyên cứu Kết đạt đề tài Kết cấu đồ án CHƯƠNG 1: TỔNG QUAN TÀI LIỆU 1.1 Giới thiệu phương pháp nuôi cấy 1.1.1 Khái niệm phương pháp nuôi cấy mô thực vật 1.1.2 Tình hình nghiên cứu ni cấy mơ Việt Nam 1.1.3 Ứng dụng nhân giống in vitro 1.1.4 Ưu nhược điểm trình nhân giống 1.1.5 Các yếu tố ảnh hưởng đến trình nhân giống in vitro 1.2 Ý nghĩa phương pháp nuôi cấy mô tế bào thực vật iii 1.3 Sự phát sinh hình thái 10 1.4 Các chất điều hòa sinh trưởng thực vật yếu tố ảnh hưởng 11 1.5 Tình hình nghiên cứu ứng dụng chitosan 16 1.6 Giới thiệu Cattleya 18 1.6.1 Giới thiệu chung phong lan 18 1.6.2 Tình hình nghiên cứu, sản xuất phát triển phong lan giới Việt Nam 25 CHƯƠNG 2: VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP 32 2.1 Địa điểm thời gian tiến hành đề tài 32 2.1.1 Địa điểm thí nghiệm 32 2.1.2 Thời gian tiến hành thí nghiệm 32 2.2 Vật liệu 32 2.2.1 Đối tượng nghiên cứu 32 2.2.2 Môi trường nuôi cấy 32 2.2.3 Điều kiện thí nghiệm 33 2.3 Phương pháp 33 2.4 Bố trí thí nghiệm 34 2.4.1 Thí nghiệm 1: Khảo sát ảnh hưởng BA kết hợp với nồng độ cố định NAA lên tạo chồi lan Cattleya Hybrid White 34 2.4.2 Thí nghiệm 2: Khảo sát ảnh hưởng NAA kết hợp với nồng độ BA cố định lên tạo chồi lan Cattleya Hybrid White 44 2.4.3 Thí nghiệm 3: Khảo sát ảnh hưởng chitosan kết hợp với nồng độ BA, NAA cố định lên tạo chồi Cattleya Hybrid White 35 2.5 Chỉ tiêu theo dõi 36 2.6 Thống kê xử lý số liệu 37 iv CHƯƠNG 3: KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 38 3.1 Thí nghiệm 1: Ảnh hưởng BA kết hợp với nồng độ cố định NAA lên tạo chồi lan Cattleya Hybrid White sau tuần nuôi cấy 38 3.2 Thí nghiệm 2: Ảnh hưởng NAA kết hợp với nồng độ cố định BA lên tạo chồi lan Cattleya Hybrid White sau tuần nuôi cấy 45 3.3 Thí nghiệm 3: Ảnh hưởng chitosan kết hợp với nồng độ cố định BA, NAA lên tạo chồi lan Cattleya Hybrid White sau tuần nuôi cấy 51 CHƯƠNG 4: KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 58 4.1.Kết luận 58 4.2 Kiến nghị 58 TÀI LIỆU THAM KHẢO 59 PHỤ LỤC v DANH MỤC CHỮ VIẾT TẮT BA DNA 6-benzyl-aminopurine deoxyribonucleic acid MS Murashige Skoog (1962) NAA Alpha-naphtalenacetic acid TCN Trước Cơng Ngun TP HCM Thành Phố Hồ Chí Minh 2,4-D 2,4-dichlopophenoxyacetic acid vi DANH MỤC BẢNG Bảng 2.1: Khảo sát ảnh hưởng BA kết hợp với nồng độ cố định NAA lên tạo chồi lan Cattleya Hybrid White 34 Bảng 2.2: Khảo sát ảnh hưởng NAA kết hợp với nồng độ BA cố định lên tạo chồi lan Cattleya Hybrid White 35 Bảng 2.3: Khảo sát ảnh hưởng chitosan kết hợp với nồng độ BA, NAA cố định lên tạo chồi lan Cattleya Hybrid White 36 Bảng 3.1 Ảnh hưởng BA kết hợp với nồng độ cố định NAA lên tạo chồi lan Cattleya Hybrid White sau tuần nuôi cấy 39 Bảng 3.2 Ảnh hưởng NAA kết hợp với nồng độ cố định BA lên tạo chồi lan Cattleya Hybrid White sau tuần nuôi cấy 46 Bảng 3.3 Ảnh hưởng chitosan kết hợp với nồng độ cố định BA, NAA lên tạo chồi lan Cattleya Hybrid White sau tuần nuôi cấy 52 vii DANH MỤC HÌNH Hình 1.1 Hoa lan Cattleya Hybrid White 21 Hình 3.1 Ảnh hưởng BA kết hợp với nồng độ cố định NAA lên tạo chồi lan Cattleya Hybrid White sau tuần nuôi cấy, (A0; A1; A2; A3; A4; A5 tương ứng với nồng độ BA là: 0; 0,5; 1; 1,5; 2; 2,5 g/l) 41 Hình 3.2 Ảnh hưởng BA kết hợp với nồng độ cố định NAA lên tạo chồi lan Cattleya Hybrid White sau tuần nuôi cấy, (A0; A1; A2; A3; A4; A5 tương ứng với nồng độ BA là: 0; 0,5; 1; 1,5; 2; 2,5 g/l) 42 Hình 3.3 Ảnh hưởng NAA kết hợp với nồng độ cố định BA lên tạo chồi lan Cattleya Hybrid White sau tuần nuôi cấy, (B0; B1; B2; B3; B4; B5 tương ứng với nồng độ BA là: 0; 0,5; 1; 1,5; 2; 2,5 g/l) 48 Hình 3.4 Ảnh hưởng NAA kết hợp với nồng độ cố định BA lên tạo chồi lan Cattleya Hybrid White sau tuần nuôi cấy, (B0; B1; B2; B3; B4; B5 tương ứng với nồng độ BA là: 0; 0,5; 1; 1,5; 2; 2,5 g/l) 49 Hình 3.5 Ảnh hưởng chitosan kết hợp với nồng độ cố định BA, NAA lên tạo chồi lan Cattleya Hybrid White sau tuần nuôi cấy, (C0; C1; C2; C3; C4; C5 tương ứng với nồng độ BA là: 0; 5; 10; 15; 20; 25 g/l) 54 Hình 3.6 Ảnh hưởng chitosan kết hợp với nồng độ cố định BA, NAA lên tạo chồi lan Cattleya Hybrid White sau tuần nuôi cấy, (C0; C1; C2; C3; C4; C5 tương ứng với nồng độ BA là: 0; 5; 10; 15; 20; 25 g/l) 55 viii DANH MỤC BIỂU ĐỒ Biểu đồ 3.1 Ảnh hưởng BA kết hợp với nồng độ cố định NAA lên tạo chồi lan Cattleya Hybrid White sau tuần nuôi cấy, (A0; A1; A2; A3; A4; A5 tương ứng với nồng độ BA là: 0; 0,5; 1; 1,5; 2; 2,5 g/l) 40 Biểu đồ 3.2 Ảnh hưởng NAA kết hợp với nồng độ cố định BA lên tạo chồi lan Cattleya Hybrid White sau tuần nuôi cấy, (B0; B1; B2; B3; B4; B5 tương ứng với nồng độ NAA là: 0; 0,5; 1; 1,5; 2; 2,5 g/l) 47 Biểu đồ 3.3 Ảnh hưởng chitosan kết hợp với nồng độ cố định BA, NAA lên tạo chồi lan Cattleya Hybrid White sau tuần nuôi cấy, (C0; C1; C2; C3; C4; C5 tương ứng với nồng độ chitosan là: 0; 5; 10; 15; 20; 25 g/l) ix 53 C C C C Thí nghiệm 2: Khảo sát ảnh hưởng NAA kết hợp với nồng độ BA cố định lên tăng trưởng chồi lan Cattleya Hybrid White  Khối lượng tươi Class KLT Number of Observations Read Number of Observations Used Dependent Variable: Y Source Model Error Corrected Total R-Square 0.956256 Dependent Variable: Y Source KLT t Tests (LSD) for Y NOTE: This test controls the Type I comparisonwise error rate, not the experimentwise error rate Alpha Error Degrees of Freedom Error Mean Square Critical Value of t Least Significant Difference Means with the same letter are not significantly different 11 C D E E E  Khối lượng khô Class khoiluongkho Number of Observations Read Number of Observations Used Dependent Variable: Y Source Model Error Corrected Total R-Square 0.947392 Dependent Variable: Y Source khoiluongkho NOTE: This test controls the Type I comparisonwise error rate, not the experimentwise error rate Alpha Error Degrees of Freedom Error Mean Square Critical Value of t Least Significant Difference Means with the same letter are not significantly different 12 C C D D D E  Số The SAS System 00:45 Friday, August 16, 2016 The ANOVA Procedure Class Level Information Class Levels Values sola B0B1B2B3B4B5 Number of Observations Read 18 Number of Observations Used 18 The SAS System 00:45 Friday, August 16, 2016 The ANOVA Procedure Dependent Variable: Y Source Model Error Corrected Total R-Square 0.93178 Sum of DF Squares Mean Square F Value 482.6666667 96.5333333 32.78 12 35.3333333 2.9444444 17 518.0000000 Coeff Var Root MSE Y Mean 9.532991 1.715938 18.00000 The SAS System Pr > F F 482.6666667 96.5333333 32.78 F 5926.000000 1185.200000 309.18 F 5926.000000 1185.200000 309.18 F 92.26642608 18.45328522 484.91 F 92.26642608 18.45328522 484.91