Đang tải... (xem toàn văn)
Hiện nay, nấm bào ngư đang dần trở thành một trong những khẩu phần chính trong bữa ăn của người dân. Bên cạnh mùi vị thơm ngon, giàu dinh dưỡng, rất dễ chế biến, nấm còn được xem như là một loạ
BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO ĐẠI HỌC NÔNG LÂM TP HỒ CHÍ MINH BỘ MƠN CƠNG NGHỆ SINH HỌC ***000*** KHĨA LUẬN TỐT NGHIỆP NI TRỒNG VÀ XÁC ĐỊNH THÀNH PHẨN AMINO ACID CỦA MỘT SỐ LOÀI NẤM BÀO NGƢ (Pleurotus spp.) BẰNG KỸ THUẬT SẮC KÝ LỎNG CAO ÁP (High performance liquid chromatography - HPLC) Ngành học: CÔNG NGHỆ SINH HỌC Niên khóa: 2001-2005 Sinh viên thực hiện: ĐỒN BẢO QUỐC Thành phố Hồ Chí Minh Tháng 9/2005 BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO ĐẠI HỌC NÔNG LÂM TP HỒ CHÍ MINH BỘ MƠN CƠNG NGHỆ SINH HỌC ***000*** KHĨA LUẬN TỐT NGHIỆP NI TRỒNG VÀ XÁC ĐỊNH THÀNH PHẨN AMINO ACID CỦA MỘT SỐ LOÀI NẤM BÀO NGƢ (Pleurotus spp.) BẰNG KỸ THUẬT SẮC KÝ LỎNG CAO ÁP (High performance liquid chromatography - HPLC) Giáo viên hƣớng dẫn: Sinh viên thực hiện: TS LÊ ĐÌNH ĐƠN ĐỒN BẢO QUỐC Thành phố Hồ Chí Minh Tháng 9/2005 LỜI CẢM TẠ CHÂN THÀNH CẢM ƠN: Ban Giám Hiệu Trƣờng Đại học Nơng Lâm Thành phố Hồ Chí Minh Bộ môn Công Nghệ Sinh Học Bộ môn Bảo vệ Thực vật Q thầy truyền đạt kiến thức cho chúng tơi suốt q trình học trƣờng TRÂN TRỌNG BIẾT ƠN Thầy Lê Đình Đơn tận tình hƣớng dẫn, tạo điều kiện giúp đỡ hồn thành khóa luận Thầy Bùi Cách Tuyến, Thầy Bùi Minh Trí tạo điều kiện cho tơi thực tập Trung Tâm Phân Tích Thí Nghiệm Hóa Sinh Cô Trần Thị Dung, Thầy Lƣu Phúc Lợi, Thầy Nguyễn Văn Cƣờng, Anh Mai Huy Hồng giúp tơi có trang thiết bị nhƣ phịng thí nghiệm để hồn thành khóa luận Các anh chị Trung Tâm Phân Tích Thí Nghiệm Hóa Sinh, Đại Học Nơng Lâm TP Hồ Chí Minh nhiệt tình giúp đỡ tơi hịan thành khóa luận Anh Lê Viết Ngọc Viện hạt nhân Đà Lạt, anh Hoàng trƣờng Đại học Khoa Học Tự Nhiên Thành phố Hồ Chí Minh cung cấp giống nấm bào ngƣ cho tơi thực khóa luận Các thành viên lớp Công Nghệ Sinh Học 27 động viên, giúp đỡ thời gian thực tập ii TĨM TẮT Đồn Bảo Quốc, Đại học Nơng Lâm Thành phố Hồ Chí Minh Phân tích amino acid nấm bào ngƣ Pleurotus spp sắc ký lỏng cao áp - high performance liqud chromatography (HPLC) thời gian từ 14/2/2005 đến 18/8/2005 Hội đồng hƣớng dẫn: TS Lê Đình Đơn Khóa luận đƣợc thực đối tƣợng nấm bào ngƣ Pleurotus spp Đây loại nấm phổ biến thị trƣờng Việt Nam Vì thế, thành phần dinh dƣỡng chúng, đặc biệt thành phần amino acid đƣợc quan tâm Để thực phân tích amino acid nấm, tiến hành trồng nấm Trung tâm Công Nghệ Sinh Học sử dụng thiết bị sắc ký lỏng cao áp (HPLC) Trung tâm Hóa Lý thuộc Trƣờng Đại Học Nơng Lâm Thành Phố Hồ Chí Minh Những kết đạt đƣợc: Ni trồng đƣợc dịng nấm Pleurotus spp chất mùn cƣa có bổ sung thêm cám gạo, số chất khác Phân tích định lƣợng đƣợc 17 amino acid loài nấm Pleurotus flabellatus Pleurotus pulmonarius Từ chúng tơi tiến hành so sánh thành phần amino acid chúng với số rau khác, với số nấm khác so sánh chúng iii MỤC LỤC CHƢƠNG TRANG Trang tựa Lời cảm ta i Tóm tắt ii Mục lục iii Danh sách chữ viết tắt vi Danh sách hình vii Danh sách bảng viii MỞ ĐẦU 1.1 Đặt vấn đề 1.2 Mục đích 1.3 Yêu cầu 1.4 Nội dung thực 2 TỔNG QUAN 2.1 Nấm trồng 2.1.1 Khái niệm nấm 2.1.2 Sinh sản chu trình sống 2.1.3 Đặc điểm biến dƣỡng sinh lý 2.2 Nấm bào ngƣ 2.2.1 Giới thiệu 2.2.2 Một số lồi nấm bào ngƣ đƣợc ni trồng VIệt Nam 2.2.2.1 Nấm bào ngƣ Pleurotus florida 10 2.2.2.2 Nấm bào ngƣ Pleurotus sajor-caju 10 2.2.2.3 Nấm bào ngƣ Pleurotus pulmonarius 11 2.2.2.4 Nấm bào ngƣ Pleurotus abalonus 11 2.3 Phƣơng pháp sắc ký 12 2.3.1 Đặc điểm chung phƣơng pháp sắc ký 12 2.3.2 Cơ sở phƣơng pháp sắc ký 12 2.4 Một số phƣơng pháp sắc ký phân tich amino acid 13 iv 2.4.1 Sắc ký giấy (Paper chromatography) 13 2.4.2 Sắc ký lớp mỏng ( Thin layer chromatography _TLC) 14 2.4.3 High Performance Liquid Chromatography (HPLC) 15 2.4.3.1 Pha tĩnh 15 2.4.3.2 Pha động 16 2.4.3.3 Bộ dụng cụ HPLC 16 2.5 Các bƣớc phân tích amino acid 17 2.5.1 Quá trình thủy phân (Hydrolysis) 17 2.5.2 Quá trình tạo dẫn xuất (Derivatisation) 19 2.5.3 Phân tách HPLC 20 2.5.4 Phân tích tính tốn liệu 21 2.4.4.1 Định tính 21 2.4.4.2 Định lƣợng 21 2.6 Phân tích amino acid nấm bào ngƣ 23 PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 23 3.1.Thời gian địa điểm thực 23 3.1.1 Thời gian thực 23 3.1.2 Địa điểm 23 3.1.3.Vật liệu nghiên cứu 23 3.2 Hóa chất dụng cụ 23 3.2.1 Hóa chất 23 3.2.2 Dụng cụ thiết bị 24 3.3 Phƣơng pháp nhân giống trồng nấm 24 3.3.1 Môi trƣờng 24 3.3.2 Phƣơng pháp 24 3.2.2.1 Chuẩn bị môi trƣờng PGA 24 3.2.2.2 Chuẩn bị môi trƣờng hạt 24 3.3.2.3 Chuẩn bị môi trƣờng giá môi 25 3.2.2.4 Chuẩn bị môi trƣờng nuôi trồng 25 3.2.2.5 Tóm tắt quy trình 26 3.3.3 Phân tích amino acid 26 3.3.3.1.Thủy phân mẫu 26 v 3.3.3.2 Tạo dẫn xuất: 27 3.3.3.3 Phân tích HPLC 28 3.3.3.4 Phân tích tính tốn kết 28 KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 29 4.1 Kết 29 4.1.1 Kết trồng nấm 29 4.1.1.1 Sự tăng trƣởng hệ sợi môi trƣờng 29 4.1.1.2 Sự hình thành thể 30 4.1.2 Kết phân tích amino acid 32 KẾT LUẬN VÀ ĐỀ NGHỊ 35 5.1 Kết luận 35 5.2 Đề nghị 35 TÀI LIỆU THAM KHẢO 36 vi DANH SÁCH CÁC CHỮ VIẾT TẮT ACN:Acetonitril HPLC: High performance liquid chromatography TLC: Thin layer chromatography PITC: phenylisothiocyanate PTC: phenylisocarbamyl TEA: Triethylamine vii DANH SÁCH CÁC HÌNH HÌNH TRANG Hình 2.1 Cấc trúc tế bào nấm Hình 2.2 Chu kỳ sống nấm đảm Hình 2.3 Pleurotus pulmonarius 11 Hình 2.4 Pleurotus abalonus 11 Hình 2.5 Pleurotus sp 11 Hình 2.6 Pleurotus floridanus 11 Hình 2.7 Mơ hình sắc ký giấy 14 Hình 2.8 Mơ hình sắc ký lớp mỏng 14 Hình 2.9 Bộ dụng cụ HPLC 16 Hình 2.10 Thủy phân protein HCl 18 Hình 2.11 Tạo dẫn xuất amino acid PITC 20 Hình 2.12 Kết phân tích amino acid Pleurotus sp sắc ký giấy trịn 22 Hình 4.1 Sinh trƣởng môi trƣờng hạt Pleurotus floridanus, Pleurotus flabellatus, Pleurotus flabellatus 31 Hình 4.2 Pleurotus abalonus giá mơ 31 Hình 4.3 Bào tử Pleurotus abalonus 31 Hình 4.4 Bào tử đảm Pleurotus floridanus 31 Hình Bào tử đảm Pleurotus abalonus 31 Hình 4.6 Quả thể nấm Pleurotus floridanus 32 Hình 4.7 Quả thể nấm Pleurotus abalonus 32 Hình 4.8 Quả thể nấm Pleurotus flabellatus 32 Hình 4.9 Quả thể nấm Pleurotus pulmonarius 32 viii DANH SÁCH CÁC BẢNG BẢNG TRANG Bảng 2.1 Nhiệt độ thích hợp số nấm bào ngƣ 10 Bảng 2.2 Các dạng sắc ký 13 Bảng 4.1 Thời gian lan tơ đầy thiết bị dòng nấm 29 Bảng 4.2 Đặc tính thể dịng nấm 30 Bảng Thành phần amino acid Pleurotus pulmonaius, Pleurotus flabellatus 33 ix 27 3.3.3 Phân tích amino acid Mẫu nấm sau thu hoạch đƣợc đem phân tích thành phần amino acid Chúng tơi tiến hành phân tích mẫu: Pleurotus pulmonarius, Pleurotus flabellatus Q trình phân tích thành phần amino acid loại nấm đƣợc thực theo quy trình Thomas T Andersen cộng 3.3.3.1.Thủy phân mẫu - Cho g mẫu đƣợc cắt nhỏ vào tube chịu nhiệt làm khô - Thêm vào 10 ml dung dịch HCl 6N - Loại bỏ khơng khí cách thổi khí trơ vào khoảng khơng tube đựng dung dịch mẫu - Thủy phân 152oC 1h - Lấy ra, để nguội, lọc qua giấy lọc - Cho vào lọ, dán nhãn để tủ mát Với nhiệt độ cao điều kiện acid có nồng độ cao (HCl 6N), protein sê đƣợc phân cắt thành amino acid đơn (Hình 2.10) 3.3.3.2 Tạo dẫn xuất Khi phân tích thành phần amino acid HPLC, mẫu phải đƣợc tạo dẫn xuất với PITC để phát thơng qua detector Quá trình tạo dẫn xuất đƣợc thực nhƣ sau: - Hút 2µl mẫu cho vào bình lê có đáy nhọn - Làm khô hỗn hợp dung dịch ethanol, nƣớc TEA với tỷ lệ tƣơng ứng 2:2:1 Q trình đƣợc thực điều kiện có thổi khí trơ để loại bỏ acid cịn thừa lại trình thủy phân nhƣ giúp cho PITC bắt với amino acid dễ dàng Bởi dƣới tác động phức hợp đăc biệt TEA giúp cho amino bị khử proton, PITC gắn vào - Mẫu đƣợc tạo dẫn xuất với dung dịch ethanol: nƣớc: TEA: PITC = 7:1:1:1 khoảng đến 10 phút tối Khi PITC gắn vào đầu amin amino acid (Hình 2.11), Theo Molnar-Perl, (1994), phản ứng gắn bền, bảo quản điều kiện lạnh chúng ổn định tháng) 28 - Mẫu phân tích đƣợc đem thổi khơ với khí trơ Bƣớc quan trọng q trình tạo dẫn xuất loại bỏ tác nhân sau dẫn xuất Điều đƣợc thực điều kiện chân khơng thổi khí trơ trích với heptane (Thomas T Andersen, 1995) Với điều kiện phịng thí nghiệm tiến hành phƣơng pháp thổi khô với khí trơ Nếu PITC khơng đƣợc loại thải tốt làm hƣ nhƣ phá hủy cột HPLC - Mẫu đƣợc pha loãng ml dung dịch pha loãng mẫu đƣợc lọc qua phận lọc đƣờng kính 20 µm để chuẩn bị cho phân tích HPLC 3.3.3.3 Phân tích HPLC Q trình thực phân tách HPLC đƣợc thực với: Buffer A: sodium acetate TEA, pH 6,8 Buffer B: 60% acetonitile, nƣớc 40% (v/v) Cột: Pico- Tag, 3.9 mm x 15 cm Detector: Ultra-violet (UV) Tốc độ dòng: ml / phút Bƣớc sóng: 254 nm Q trình thực hiện: - Hút 20 µl dung dịch chuẩn 17 amino acid, bơm theo dõi - Lƣu lại thông số cần thiết để tiến hành định tính nhƣ định lƣợng (thời gian lƣu, diện tích peak,…) - Hút 20 µl mẫu, tiến hành tƣơng tự nhƣ chuẩn 3.3.3.4 Phân tích tính tốn kết Sau bơm chuẩn, ta có liệu thu từ máy tính nhƣ thời gian phát peak, diện tích peak thể sắc ký đồ Các thơng số đƣợc lƣu lại để tính hay để định lƣợng cho mẫu phân tích Có nhiều cách để định lƣợng amino acid đơn: Dùng chuẩn với nồng độ khác nhau, sau lập phƣơng trình hồi quy diện tích peak nồng độ với hệ số tƣơng quan xác định Từ diện tích peak mẫu biết qua q trình chạy ta tính nồng độ tƣơng ứng cho amino acid Đây phƣơng pháp xác để tính nồng độ amino acid 29 Chỉ bơm chuẩn lần, ghi lại diện tích peak thu đƣợc sắc ký đồ sau phân tích kết thúc Sau lặp tỷ lệ diện tích peak nồng độ chuẩn mẫu, từ tính đƣợc nồng độ amino acid mẫu 30 PHẦN KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 4.1 Kết trồng nấm 4.1.1 Sự tăng trƣởng hệ sợi môi trƣờng Sau thực nuôi trồng theo quy trình mục 3.2.2.5, chúng tơi đạt đƣợc số kết trình bày bảng 4.1 Bảng 4.1 Thời gian lan tơ đầy dòng nấm Dòng nấm Môi trƣờng Môi trƣờng Môi trƣờng nuôi lúa giá môi trồng Pleurotus pulmonarius 15 ngày 17 ngày 25 ngày Pleurotus flabellatus 15 ngày 18 ngày 27 ngày Pleurotus floridanus 18 ngày 20 ngày 30 ngày Pleurotus abalonus 30 ngày 40 ngày 40 ngày Nhận xét: Tất loài nấm đƣợc thực đƣợc tiến hành thiết bị giống tƣơng ứng với môi trƣờng (mơi trƣờng lúa bình tam giác, mơi trƣờng cọng mì túi ny lơng) chuyển sang mơi trƣờng nuôi trồng, thực Pleurotus floridanus, Pleurotus abalonus túi ny lông, đồng thời với hai loại Pleurotus flabellatus, Pleurotus pulmonarius thực lọ thủy tinh Vì thế, chúng tơi so sánh hai mơi trƣờng đầu với dịng nấm cịn mơi trƣờng ni trồng chúng tơi phân cặp để so sánh Với kết thu đƣợc (Bảng 4.1), nhận thấy rằng: Thời gian tăng trƣởng môi trƣờng hạt Pleurotus abalonus chậm nhất, Pleurotus floridanus; Pleurotus flabellatus Pleurotus pulmonarius có thời gian tăng trƣởng tƣơng đƣơng Cả dòng nấm Pleurotus floridanus; Pleurotus flabellatus Pleurotus pulmonarius có hệ sợi tơ trắng nhƣng Pleurotus floridanus trắng hệ sợi khơng thƣa nhƣ hai dịng cịn lại (Hình 4.1) Khi cấy sang mơi truờng giá mơi, kết giống nhƣ mơi trƣờng hạt, thời gian sinh trƣởng Pleurotus abalonus chậm Và mơi trƣờng này, nấm khác so với nấm lại đầu sợi nấm có màu đen, chứa bào tử.( Hình 4.2 Hình 4.3) 31 4.1.2 Sự hình thành thể Bảng 4.2 Đặc tính thể lồi nấm Lồi nấm Đƣờng kính trung Năng suất sản phẩm bình thể (%) Pleurotus floridanus cm 70 Pleurotus abalonus 13 cm 62 Pleurotus pulmonarius 11 cm 60 Pleurotus flabellatus 10 cm 56 Năng suất sản phẩm = Trọng lƣợng nấm tƣơi / Trọng lƣợng chất khơ Về hình thái Sau đem nhà trồng, tuới đón nấm, chúng tơi thu đƣợc hình thái dịng nấm nhƣ sau - Pleurotus floridanus (Hình 4.1) thể màu trắng, phủ lơng mịn gốc thể mọc thành chùm Khi đem quan sát duới kính hiển vi thấy đƣợc bào tử đảm (Hình 4.4) - Pleurotus abalonus (Hình 4.2) thể có màu trắng đục, dày, chắc, bề mặt có vảy nhỏ Cuống nấm to Đem quan sát dƣới kính hiển vi quang học, thấy đƣợc bào tử đảm tuơng đối lớn so với Pleurotus floridanus (Hình 4.5) - Pleurotus pulmonarius (Hình 4.3) Phiến nấm mỏng, có màu trắng ngả xám, xẻ thùy mặt phiến - Pleurotus flabellatus (Hình 4.4) phiến nấm có màu xám đậm, cánh mỏng, giống với Pleurotus pulmonarius Nhƣ , hình thái dịng nấn hồn tồn khác Pleurotus abalonus có thể to dày nhất, Pleurotus floridanus; hai loài cịn lại mặt hình thái tƣơng đối giống nhau, khác nhầumu sắc mặt phiến nấm Về suất sản phẩm: suất sản phẩm đƣợc tính trọng lƣợng nấm tƣơi/trọng ƣợng chất khô Theo bảng 4.2 suất Pleurotus floridanus cao Các dòng lại suất tƣơng đối cao 32 Hình 4.1 Sinh trƣởng tơ nấm mơi trƣờng lúa Pleurotus floridanus, Pleurotus flabellatus, Pleurotus flabellatus Thân mì Bào tử đơn Hình 4.2 Pleurotus abalonus mơi trƣờng Hình 4.3 Bào tử Pleurotus abalonus thân mì bổ sung MgSO4 ( 2%), quan sát hệ sợi tơ (bào tử đơn) KH2PO4(1 %), Cám gạo (10 %) Bào tử đảm Hình 4.4 Bào tử đảm quan sát thể nấm Pleurotus floridanus Bào tử đảm Hình Bào tử đảm quan sát thể nấm Pleurotus abalonus 33 Quả thể Quả thể Hình 4.6 Quả thể nấm Pleurotus floridanus Hình 4.7 Quả thể nấm Pleurotus abalonus túi ny lông chứa mùn cƣa có bổ sung: túi ny lơng chứa mùn cƣa có bổ sung: Cám gạo (10 %) Bột bắp (5,5 %) Cám gạo (10 %) Bột bắp (5,5 %) KH2PO4 (0,5 %) KH2PO4 (0,5%) ) Quả thể Quả thể Hình 4.8 Quả thể nấm Pleurotus flabellatus Hình 4.9 Quả thể nấm Pleurotus pulmonarius bình thủy tinh chứa mùn cƣa có bổ sung bình thủy tinh chứa mùn cƣa có bổ sung: Cám gạo (10 %) Bột bắp (5,5 %) Cám gạo (10 %) Bột bắp (5,5 %) KH2PO4 (0,5%) KH2PO4 (0,5%) 4.2 Kết phân tích amino acid Sau tiến hành phân tích, dịng nấm Pleurotus pulmonaius, Pleurotus flabellatus HPLC, thu đƣợc thành phần amino acid đƣợc liệt kê bảng 4.3 34 Hình 4.9 Sắc ký đồ chuẩn amin acid ASP: Aspartic acid; GLU Glutamate; SER: Serine; GLY: Glycine ; HIS: Histidine ARG: Arginine; THR: Threonine; ALA :Alanine; PRO: Proline; TYR: Tyrosine ; VAL: Valine ; MET: Methionine; CYS: Cysteine; ILEU: Isoleucine; LEU: Leucine; PHE : Phenylalanine; LYS: lysine Hình 4.10 Sắc ký đồ mẫu nấm Pleurotus flabellatus ASP: Aspartic acid; GLU Glucine; SER: Serine; GLY: Glycine ; HIS: Histidine ARG: Arginine; THR: Threonine; ALA :Alanine; PRO: Proline; TYR: Tyrosine ; VAL: Valine ; MET: Methionine; CYS: Cysteine; ILEU: Isoleucine; LEU: Leucine; PHE : Phenylalanine; LYS: lysine 35 Hình 4.11 Sắc ký đồ mẫu nấm Pleurotus pulmonarius ASP: Aspartic acid; GLU Gluatamate; SER: Serine; GLY: Glycine ; HIS: Histidine ARG: Arginine; THR: Threonine; ALA :Alanine; PRO: Proline; TYR: Tyrosine ; VAL: Valine ; MET: Methionine; CYS: Cysteine; ILEU: Isoleucine; LEU: Leucine; PHE : Phenylalanine; LYS: lysine Theo bảng này, dịng chứa đầy đủ 17 amino acid Trong nấm Pleurotus pulmonaius hàm lƣợng Leu chiếm với tỷ lệ cao nhất, amino acid nhƣ Val, Asp, Cys, Met, Ileu, Lys, Glu chiếm với tỷ lệ thấp, đặc biệt Glu chiếm tỷ trọng thấp 17 amino acid đƣợc phát Với nấm Pleurotus flabellatus tƣơng tự nhƣ Pleurotus pulmonaius , Leu chiếm tỷ lệ cao 17 amino acid; Val chiếm tỷ lệ thấp Trong 17 amino acid này, chứa đến amino acid thiết yếu (đƣợc in nghiêng bản) ngƣời, ngoại trừ Tryp chƣa đƣợc xác định Những amino acid thể ngƣời tổng hợp đƣợc mà phải đƣợc cung cấp từ bên Các amino acid thiết yếu chiếm đến 42 % tổng số amino acid Pleurotus pulmonaius 44 % tổng số amino acid nấm Pleurotus flabellatus Tỷ lệ cao so với nấm rơm (38,2 %) nấm mỡ (38,4 %) [Nguyễn Lân Dũng, 2002] Khi đƣợc so sánh với thành phần amino acid với thực vật nhƣ bắp, đậu nành thành phần amino acid nấm bào ngƣ cao 36 Bảng Thành phần amino acid Pleurotus pulmonaius, Pleurotus flabellatus Số thứ tự Amino acid Leucine Pleurotus pulmonarius (mg/g) 21, 15 Pleurotus flabellatus (mg/g) 17, 15 Glycine 8, 92 11, 39 Serine 7, 74 7, 85 Arginine 6, 49 5, 26 Alanine 5, 93 4, 95 Proline 4, 50 3, 08 Histidine 4, 42 5, 48 Tyrosine 3, 75 6, 78 Threonine 3, 67 2, 68 10 Phenylalanine 2, 21 0, 97 11 Valine 1, 88 0, 91 12 Asparagine 1, 88 1, 63 13 Cysteine 1, 79 2, 59 14 Methionine 1, 77 4, 49 15 Isoleucine 1, 31 13, 19 16 Lysine 1, 15 0, 89 17 Glutamate 0, 25 2, 04 Nhƣ vậy, nấm bào ngƣ đƣợc xem nhƣ thực phẩm giàu dinh dƣỡng chứa gần nhƣ đầy đủ amino acid thiết yếu Thành phần amin acid cao hầu hết loại rau Khi so sánh loài nấm, thành phần amino acid (aa) chúng tƣơng đƣơng (đều chứa 17aa) Nhƣng xét riêng amino acid, chúng có khác biệt Glu nấm Pleurotus flabellatus cao gấp lần so với Glu (chỉ phát dạng vết: 0,25 mg) Pleurotus pulmonaius, Ileu cao gấp 10 lần Tất aa lại có khác biệt khơng lớn 37 PHẦN KẾT LUẬN VÀ ĐỀ NGHỊ 5.1 Kết luận Đã trồng đƣợc loại nấm bào ngƣ Trong đó, có hai lồi chƣa đƣợc trồng Thành Phố Hồ Chí Minh: Pleurotus pulmonarius Pleurotus flabellatus Với suất sản phẩm đạt đƣợc khoảng 55- 70%, điều kiện nhiệt độ 28 20C, ẩm độ 70% Bằng sắc ký lỏng cao áp HPLC, phát định lƣợng đƣợc thành phần amino acid loài nấm Pleurotus pulmonarius Pleurotus flabellatus Hai loài chứa đầy đủ 17 amino acid, leucine chiếm tỷ lệ cao 21,15% Pleurotus pulmonarius 17,15% Pleurotus flabellatus Trong nấm Pleurotus pulmonarius Glutamate chiếm tỷ lệ thấp nhất, nhƣng nấm Pleurotus flabellatus (0,25%), Valine chiếm tỷ lệ thấp (0,91%) 5.2 Đề nghị Sau phân tích amino acid, nên tiến hành trồng loại chất khác sau phân tích tiếp amino acid để xem khác biệt ảnh hƣởng chất 38 PHẦN TÀI LIỆU THAM KHẢO TIẾNG VIỆT Nguyễn Lân Dũng, 2002 Công nghệ nuôi trồng nấm, tập Nhà xuất nông nghiệp Hà Nội 200 trang Nguyễn Lân Dũng, 2002 Công nghệ nuôi trồng nấm, tập Nhà xuất nông nghiệp Hà Nội 244 trang Lê Duy Thắng, 2001 Kỹ thuật trồng nấm, tập Nhà xuất Nông Nghiệp Nguyễn Lê Chung Sơn, 2004, Sử dụng sinh khối cấy mai dương làm nguyên liệu trồng nấm bào ngư (Pleurotus sajor- caju ) góp phần kiểm sốt xâm lấn lồi thực vật ngoại lai Khóa luận tốt nghiệp cử nhân cơng nghệ sinh học, Trƣờng Đại học Khoa Học Tự Nhiên Thành phố Hồ Chí Minh Huỳnh Hữu Tín, 2004, nghiên cứu sử dụng trấu làm nguyên liệu trồng nấm bào ngư (Pleurotus florida) Khóa luận tốt nghiệp cử nhân sinh học, Trƣờng Đại học Khoa Học Tự Nhiên Thành phố Hồ Chí Minh Hồng Trâm Anh, Đinh Hồng Anh Khoa, Lê Thúy Anh, Lê Duy Thắng, 2003 Nghiên kháng khuẩn nấm bào ngư (Pleurotus sajor- caju) Tạp chí y dƣợc học tr 201-204 Lâm Thị Nhạn, 2001 Cải tiến kỹ thuật định lượng aflatoxin thực phẩm Luận án thạc sĩ khoa học chuyên ngành hóa phân tích, Trƣờng Đại học Khoa Học Tự Nhiên Thành phố Hồ Chí Minh tr 16-19 Nam Phƣơng, 2005 Trồng thành cơng hai lồi nấm bào ngư Việt Nam Báo khoa học phổ thông số 25: tr 14 Tịa soạn báo khoa học phổ thơng, Thành phố Hồ Chí Minh TIẾNG NƢỚC NGỒI Archer J.P Martin 1952 The development of partition chromatography Nobel lecture, December 10 Alexander Efimov, 2005 HPLC introduction 11 Hans Neurath The Protein - Composition, Structure, Function 2nd edition Volume Academic Press, New York and London p 2-39 12 Royer Y Stainer, Michael Doudoroff, and Microbial World Prentice-Hall, Inc p.88-90 Edward A Adelberg The 39 13 Thomas D Brock Biology of microorganism Pretice-Hall, Inc p.684-681 14 Arthur T Henrici, M.D A handbook for students of Bacteriology Molds, Yeast, And Actinomycetes John Wiley & Sons, Inc, New York p.7-9 15 Zakia Bano, K.S Srinivasan, and H.C Srivastava, 1963 Amino acid composition of the Protein from a Mushroom (Pleurotus sp.) Appl Microbiol 11 p.184-187 16 Bernard Wathelet, 1999 Nutritional analyses for proteins and amino acids in beans (Phaseolus sp.) Biotechnol Agron Soc Environ, p 197–200 17
![Phần lớn đƣợc nhập từ nƣớc ngoài (Hình 2.3). Nhƣng gần đây, GS. Lê Xuân Thám và cộng sự (1999) phát hiện đƣợc một loại khác ở Daklak - Tây Nguyên, sau đó đƣa về Đà Lạt và đã hoàn thiện quy trình trồng trên mùn cƣa [7] - Nuôi trồng và xác định thành phần amino acid của một số loài nấm bào ngư (Pleurotus spp.) bằng kỹ thuật sắc ký lỏng cao áp HPLC](https://media.store123doc.com/figures/001/133/phan-doc-noc-nhng-doc-nguyen-thien-trong-1133468.png)
![Hình 2.10. Thủy phân protein bằng HCl [17] - Nuôi trồng và xác định thành phần amino acid của một số loài nấm bào ngư (Pleurotus spp.) bằng kỹ thuật sắc ký lỏng cao áp HPLC](https://media.store123doc.com/figures/001/133/hinh-thuy-phan-protein-bang-hcl-1133471.png)
![Hình 2.11. Tạo dẫn xuất amino acid bằng PITC [10]. - Nuôi trồng và xác định thành phần amino acid của một số loài nấm bào ngư (Pleurotus spp.) bằng kỹ thuật sắc ký lỏng cao áp HPLC](https://media.store123doc.com/figures/001/133/hinh-tao-dan-xuat-amino-acid-bang-pitc-1133472.png)
