BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƯỜNG ĐẠI HỌC SƯ PHẠM HÀ NỘI HOÀNG ĐỨC THUẬN NGHIÊN CỨU THÀNH PHẦN HĨA HỌC VÀ HOẠT TÍNH SINH HỌC CỦA CÂY RÂU MÈO (ORTHOSIPHON STAMINEUS BENTH.) VIỆT NAM Chuyên ngành: Hóa Hữu Mã số: 9.44.01.14 LUẬN ÁN TIẾN SĨ HÓA HỌC Người hướng dẫn khoa học: PGS.TS Vũ Quốc Trung TS Nguyễn Phi Hùng HÀ NỘI – 2020 LỜI CAM ĐOAN Tơi cam đoan cơng trình nghiên cứu, hướng dẫn PGS.TS Vũ Quốc Trung TS Nguyễn Phi Hùng Kết nghiên cứu công bố luận án trung thực Các tài liệu sử dụng luận án có nguồn gốc, xuất xứ rõ ràng Người cam đoan Hoàng Đức Thuận LỜI CẢM ƠN Luận án hoàn thành phịng thí nghiệm phịng Phân tích hóa học, Viện Hóa học Các hợp chất thiên nhiên, Viện Hàn lâm Khoa học Công nghệ Việt Nam Bộ môn Hóa hữu cơ, Khoa Hóa học, Trường Đại học Sư phạm Hà Nội Tơi xin bày tỏ lịng kính trọng, biết ơn chân thành sâu sắc tới PGS.TS Vũ Quốc Trung (Bộ mơn Hóa hữu cơ, Khoa Hóa học, Trường Đại học Sư phạm Hà Nội) TS Nguyễn Phi Hùng (Phịng Phân tích hóa học, Viện Hóa học Các hợp chất thiên nhiên, Viện Hàn lâm Khoa học Công nghệ Việt Nam) giao đề tài, tận tình hướng dẫn khoa học, tạo điều kiện tốt cho tơi suốt q trình nghiên cứu hồn thành Luận án Tơi xin chân thành cảm ơn thầy giáo, giáo mơn Hóa hữu cơ, Khoa Hóa học; Phịng Sau Đại học; Ban Giám hiệu Trường Đại học Sư phạm Hà Nội Tôi xin cảm ơn cán bộ, nhà khoa học công tác phịng Hóa học phân tích, Viện Hóa học Các hợp chất thiên nhiên, Viện Hàn lâm Khoa học Công nghệ Việt Nam; Trung tâm nghiên cứu chế biến thuốc Hà Nội – Viện Dược liệu (Ngũ Hiệp, Thanh Trì, Hà Nội) tạo điều kiện, giúp đỡ suốt trình học tập, nghiên cứu Tôi xin trân trọng cảm ơn tới Ban Giám đốc Sở Giáo dục Đào tạo Hà Nội; Ban Giám hiệu tồn thể thầy giáo, giáo, nhân viên Trường Bồi dưỡng cán giáo dục Hà Nội tạo điều kiện tốt để hồn thành nhiệm vụ cơng tác hồn thành Luận án Đặc biệt, xin gửi lời cảm ơn tới gia đình, bạn bè đồng nghiệp ln khích lệ, động viên, chia sẻ giúp đỡ trình học tập nghiên cứu khoa học để tơi hồn thành Luận án MỤC LỤC LỜI CAM ĐOAN LỜI CẢM ƠN DANH MỤC HÌNH MỞ ĐẦU 1 Lý chọn đề tài Đối tượng nghiên cứu Nhiệm vụ nghiên cứu 4 Phương pháp nghiên cứu .4 Những đóng góp luận án .5 Cấu trúc luận án CHƯƠNG TỔNG QUAN 1.1 Giới thiệu Chi Orthosiphon Râu mèo (Orthosiphon stamineus) 1.1.1 Sơ lược chi Orthosiphon 1.1.2 Sơ lược Râu mèo (Orthosiphon stamineus Benth.) 1.2 Tình hình nghiên cứu Râu mèo 10 1.2.1 Tình hình nghiên cứu nước 10 1.2.2 Tình hình nghiên cứu nước Râu mèo 26 Tiểu kết chương I 28 CHƯƠNG ĐỐI TƯỢNG, PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU VÀ THỰC NGHIỆM 30 2.1 Đối tượng nghiên cứu 30 2.2 Phương pháp nghiên cứu .30 2.2.1 Điều tra, nghiên cứu phân bố, thu thập mẫu thực vật bảo quản 30 2.2.2 Phương pháp xử lý chiết mẫu 30 2.2.3 Phương pháp phân lập tinh chế hợp chất 31 2.2.4 Phương pháp xác định cấu trúc hóa học hợp chất 32 2.2.5 Phương pháp nghiên cứu tác dụng sinh học 32 2.3 Hóa chất thiết bị 34 2.3.1 Hoá chất .34 2.3.2 Thiết bị 34 2.4 Phân tích thống kê kết 36 2.5 Phân lập tinh chế hợp chất từ Râu mèo 37 2.5.1 Phân lập tinh chế hợp chất từ phân đoạn BuOH 39 2.5.2 Phân lập tinh chế hợp chất từ phân đoạn EtOAc 42 2.5.3 Phân lập tinh chế hợp chất từ phân đoạn CHCl3 45 CHƯƠNG KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 47 3.1 Kết thu thập xác định tên khoa học mẫu thực vật 47 3.2 Kết phân lập tinh chế hợp chất 49 3.3 Xác định cấu trúc hóa học hợp chất phân lập từ phân đoạn BuOH 51 3.3.1 Hợp chất B1 (OSB-7.4.2): Lithospermic acid .51 3.3.2 Hợp chất B2 (OSB-7.4.4): Hợp chất 54 3.3.3 Hợp chất B3 (OSB-7.5.4): 9-Methyl  lithospermate 58 3.3.4 Hợp chất B4 (OSB-3.3.1): (S)-()-rosmarinic acid .61 3.3.5 Hợp chất B5 (OSB-3.3.2): (R)-()-rosmarinic acid .62 3.3.6 Hợp chất B6 (OSB-3.3.3): methyl rosmarinate 63 3.3.7 Hợp chất B7 (OSB-7.1.2): Clinopodic acid A .64 3.3.8 Hợp chất B8 (OSB-7.4.2.1): Clinopodic acid B 65 3.3.9 Hợp chất B9 (OSB-7.1.1): Astragalin 67 3.3.10 Hợp chất B10 (OSB-1.1.1): 3-(3,4-dihydroxyphenyl)lactic acid 69 3.3.11 Hợp chất B11 (OSB-1.2.0): Protocatechuic acid .70 3.3.12 Hợp chất B12 (OSB-1.2.1): Dihydrocaffeic acid 70 3.3.13 Hợp chất B13 (OSB-1.2.2): p-hydroxybenzoic acid 71 3.3.14 Hợp chất B14 (OSB-2.1.1): Oresbiusin A 72 3.3.15 Hợp chất B15 (OSB-2.1.2): Caffeic acid 73 3.3.16 Hợp chất B16 (OSB-2.3.1): Methyl 3,4-dihydroxycinnamate 74 3.3.17 Hợp chất B17 (OSB-2.3.2): Vanillic acid 76 3.4 Xác định cấu trúc hóa học hợp chất phân lập từ phân đoạn EtOAc 78 3.4.1 Hợp chất E18 (OSEA-12.1.1): 3,7,3′,4'-tetramethylquercetin 78 3.4.2 Hợp chất E19 (OSEA-11.9): 3,5-dihydroxy-7,4'-dimethoxyflavone 80 3.4.3 Hợp chất E20 (OSEA-11.6.3): 5,7,4'-trimethoxyflavone hay 5,7,4'trimethylapigenin 81 3.4.4 Hợp chất E21 (OSEA-11.1.5.1): pentamethylquercetin 82 3.4.5 Hợp chất E22 (OSEA-11.1.4.0): 5-hydroxy-3,7,4′-trimethoxyflavone 83 3.4.6 Hợp chất E23 (OSEA-11.1.4.1): 3,5,7,4'-tetramethoxyflavone 84 3.4.7 Hợp chất E24 (OSEA-10.6.1): 5,7,2′,5′-tetramethoxyflavone 86 3.4.8 Hợp chất E25 (OSEA-10.5.1): 3-hydroxy-5,7,4′-trimethoxyflavone 87 3.4.9 Hợp chất E26 (OSEA-10.5.2): 5,7,3′,4′-tetramethoxyflavone 88 3.4.10 Hợp chất E27 (OSEA-10.2.1): 7-hydroxy-3,5,3′,4′-tetramethoxyflavone 90 3.4.11 Hợp chất E28 (OSEA-10.2.2): 7,3′,4′-trimethylquercetin 91 3.4.12 Hợp chất E29 (OSEA-9.6.1): 3,5,3′-trihydroxy-7,4′-dimethoxyflavone 93 3.4.13 Hợp chất E30 (OSEA-9.6.2): 5,7,3′,4′-tetramethylquercetin 94 3.4.14 Hợp chất E31 (OSEA-9.6.3): 5,7,4′-trimethylquercetin 95 3.4.15 Hợp chất E32 (OSEA-9.6.11): 5,6,7,3',4'-pentamethoxyflavanone 96 3.4.16 Hợp chất E33 (OSEA-9.6.12): 5′-hydroxy-5,7,3′,4′-tetramethoxyflavanone 98 3.5 Xác định cấu trúc hóa học hợp chất phân lập từ phân đoạn CHCl3 100 3.5.1 Hợp chất C34 (OSC-1.5): orthosiphol F 100 3.5.2 Hợp chất C35 (OSC-1.4.4): siphonol D 102 3.5.3 Hợp chất C36 (OSC-1.4.3): siphonol B .105 3.5.4 Hợp chất C37 (OSC-1.5.3): orthosiphol I 107 3.5.5 Hợp chất C38 (OSC-1.5.2): orthosiphol G 108 3.5.6 Hợp chất C39 (OSC-1.3.2): orthosiphol B 110 3.5.7 Hợp chất C40 (OSC-1.3.1): orthosiphol N 112 3.6 Kết đánh giá hoạt tính sinh học hợp chất 114 3.6.1 Hoạt tính sinh học hợp chất phenylpropanoids (B1B17) phân lập từ phân đoạn BuOH .114 3.6.2 Hoạt tính sinh học hợp chất flavonoids (E18E33) phân lập từ phân đoạn EtOAc 119 3.6.3 Hoạt tính sinh học hợp chất pimarane-diterpenes (C34C40) phân lập từ phân đoạn CHCl3 122 KẾT LUẬN 127 DANH MỤC CƠNG TRÌNH CƠNG BỐ LIÊN QUAN ĐẾN LUẬN ÁN 131 TÀI LIỆU THAM KHẢO 132 DANH MỤC KÝ HIỆU VÀ CHỮ VIẾT TẮT Từ viết tắt Tiếng Anh Tiếng Việt 13 Carbon-13 Magnetic Resonance Phổ cộng hưởng từ hạt nhân carbon- Spectroscopy 13 Proton Magnetic Resonance Phổ cộng hưởng từ hạt nhân proton C-NMR H-NMR Spectroscopy ACN Acetonitrile Acetonitrile CC Column Chromatography Sắc kí cột FC Flash Chromatography Sắc ký cột nhanh HPLC High Performance Liquid Sắc ký lỏng hiệu cao Chromatography CTPT Molecular formula Công thức phân tử Đ.n.c Melting point Điểm nóng chảy DEPT Distortionless Enhancement by Phổ DEPT Polarisation Transfer DMSO Dimethylsulfoxide Dimethylsulfoxide EI-MS Electron Impact-Mass Phổ khối va chạm electron Spectroscopy ESI-MS Electron Spray Ionzation-Mass Phổ khối lượng phun mù electron Spectroscopy HMBC Heteronuclear Multiple Bond Phổ tương tác dị hạt nhân qua nhiều Correlation liên kết H→C HR-ESI- High Relution-Electron Spray Phổ khối lượng phân giải cao phun MS Impact Mass Spectroscopy mù electron HSQC Heteronuclear Single Quantum Phổ tương tác dị hạt nhân trực tiếp Correlation H→C Inhibitory concentration at 50% Nồng độ ức chế 50% đối tượng thử IC50 nghiệm IR Infrared Spectroscopy Phổ hồng ngoại J (Hz) Hằng số tương tác tính Hz KLPT Molecular weight Khối lượng phân tử MDA468 Human breast cancer cell line Tế bào ung thư vú di ác tính MeOH Methanol Methanol MS Mass Spectroscopy Phổ khối lượng ppm parts per million Phần triệu RT retention time Thời gian lưu TLC Thin Layer Chromatography Sắc kí lớp mỏng TLTK Reference Tài liệu tham khảo TMS Tetramethylsilan Tetramethylsilan TT Số thứ tự δC Carbon chemical shift Độ chuyển dịch hóa học carbon δH Proton chemical shift Độ chuyển dịch hóa học proton br s Broad singlet singlet tù d Doublet doublet dd Doublet of doublet doublet doublet dt Doublet of triplet doublet triplet m Multiplet multiplet s Singlet singlet t Triplet Triplet PTP1B Protein Tyrosine Phosphatase 1B Enzyme protein tyrosine phosphatase 1B 2-NBDG 2-deoxy-2-[(7-nitro-2,1,3benzoxadiazol-4-yl)amino]-Dglucose PL-96 Phụ lục 190 Phổ 13 Phụ lục 191 Phổ 13 C NMR hợp chất C38 C NMR hợp chất C38 PL-97 Phụ lục 192 Phổ HMBC NMR hợp chất C38 Phụ lục 193 Phổ HMBC NMR hợp chất C38 PL-98 Phụ lục 194 Phổ HMBC NMR hợp chất C38 Phụ lục 195 Phổ HMBC NMR hợp chất C38 PL-99 Phụ lục 196 Phổ HMBC NMR hợp chất C38 Phụ lục 197 Phổ HMBC NMR hợp chất C38 PL-100 39 Phụ lục phổ hợp chất C39 (OSC-1.3.2): orthosiphol B Phụ lục 198 Phổ 1H NMR hợp chất C39 Phụ lục 199 Phổ 1H NMR hợp chất C39 PL-101 Phụ lục 200 Phổ H NMR hợp chất C39 Phụ lục 201 Phổ 13 C NMR hợp chất C39 PL-102 Phụ lục 202 Phổ 13C NMR hợp chất C39 Phụ lục 203 Phổ HSQC NMR hợp chất C39 PL-103 Phụ lục 204 Phổ HSQC NMR hợp chất C39 Phụ lục 205 Phổ HSQC NMR hợp chất C39 PL-104 Phụ lục 206 Phổ COSY NMR hợp chất C39 Phụ lục 207 Phổ HMBC NMR hợp chất C39 PL-105 Phụ lục 208 Phổ HMBC NMR hợp chất C39 Phụ lục 209 Phổ HMBC NMR hợp chất C39 PL-106 Phụ lục 210 Phổ HMBC NMR hợp chất C39 Phụ lục 211 Phổ HMBC NMR hợp chất C39 PL-107 Phụ lục 212 Phổ HMBC NMR hợp chất C39 Phụ lục 213 Phổ HMBC NMR hợp chất C39 PL-108 40 Phụ lục phổ hợp chất C40 (OSC-1.3.1): orthosiphol N Phụ lục 214 Phổ 1H NMR hợp chất C40 Phụ lục 215 Phổ 1H NMR hợp chất C40 PL-109 Phụ lục 216 Phổ H NMR hợp chất C40 Phụ lục 217 Phổ 13 C NMR hợp chất C40 PL-110 Phụ lục 218 Phổ 13 C NMR hợp chất C40 ... hóa học hoạt tính sinh học Râu mèo (Orthosiphon stamineus Benth) Việt Nam? ?? để nghiên cứu Đối tượng nghiên cứu Đối tượng nghiên cứu chọn toàn phần mặt đất Râu mèo thu hái Trung tâm nghiên cứu. .. hình nghiên cứu ngồi nước 1.2.1.1 Các nghiên cứu thành phần hóa học Râu mèo Các nghiên cứu thành phần hóa học Râu mèo thực từ sớm, có khoảng 120 hợp chất hóa học phân lập nhận dạng từ Râu mèo. .. nghiên cứu thành phần hóa học từ lồi Râu mèo bị chững lại Đến năm 2013, nhóm nghiên cứu Nhật Bản khác Kato- Noguchi cộng trường Đại học Kagawa tiếp tục nghiên cứu thành phần hóa học lồi Râu mèo