ĐẠI HỌC THÁI NGUYÊN TRƯỜNG ĐẠI HỌC NÔNG LÂM VƯƠNG THỊ CHUNG NGHIÊN CỨU MỘT SỐ ĐẶC ĐIỂM SINH HỌC CỦA VI KHUẨN PASTEURELLA MULTOCIDA GÂY BỆNH TỤ HUYẾT TRÙNG Ở BÒ TẠI HUYỆN THẠCH THẤT- HÀ NỘI VÀ BIỆN PHÁP PHÒNG TRỊ LUẬN VĂN THẠC SĨ THÚ Y THÁI NGUYÊN - 2019 ĐẠI HỌC THÁI NGUYÊN TRƯỜNG ĐẠI HỌC NÔNG LÂM VƯƠNG THỊ CHUNG NGHIÊN CỨU MỘT SỐ ĐẶC ĐIỂM SINH HỌC CỦA VI KHUẨN PASTEURELLA MULTOCIDA GÂY BỆNH TỤ HUYẾT TRÙNG Ở BÒ TẠI HUYỆN THẠCH THẤT- HÀ NỘI VÀ BIỆN PHÁP PHÒNG TRỊ Ngành: Thu y Mã số:8 64 01 01 LUẬN VĂN THẠC SĨ THÚ Y Người hướng dẫn khoa học: PGS.TS ĐẶNG XUÂN BÌNH THÁI NGUYÊN - 2019 i LỜI CAM ĐOAN Tôi xin cam đoan: - Số liệu kết nghiên cứu luận văn trung thực, khách quan chưa cơng bố cơng trình khoa học khác - Mọi giúp đỡ trình thực hiện, nghiên cứu, viết luận văn cảm ơn thơng tin trích dẫn, sử dụng luận văn ghi rõ nguồn gốc Thái Nguyên, ngày 04 tháng 11 năm 2019 Tác giả luận văn Vương Thị Chung ii LỜI CẢM ƠN Được cho phép Ban Giám hiệu Trường Đại học Nông Lâm Thái Nguyên Ban Chủ nhiệm khoa Thú y, tiến hành thực đề tài: “Nghiên cứu số đặc điểm sinh học vi khuẩn Pasteurella multocida gây bệnh Tụ huyết trùng bò huyện Thạch Thất - Hà Nội Biện pháp phòng trị” Trước hết, xin chân thành cảm ơn Ban Giám hiệu Nhà trường, Ban Chủ nhiệm Khoa thú y, phịng Đào tạo thầy giáo, giáo giảng dạy chương trình đào tạo thạc sĩ ngành Thú y, người truyền đạt cho kiến thức quý báu suốt thời gian học tập Nhà trường, sở quan trọng giúp tơi hồn thành nội dung đề tài Tơi xin chân thành cảm ơn Thầy giáo PGS.TS Đặng Xn Bình tận tình hướng dẫn, bảo tơi suốt thời gian thực đề tài hoàn thành luận văn Tôi xin gửi lời cảm ơn đặc biệt tới gia đình, người thân, bạn bè tơi cổ vũ, động viên đồng hành tơi suốt thời gian thực tập hồn thành đề tài tốt nghiệp Tôi xin chân thành cảm ơn! Thái Nguyên, ngày 04 tháng 11 năm 2019 Tác giả luận văn Vương Thị Chung MỤC LỤC LỜI CAM ĐOAN i LỜI CẢM ƠN ii MỤC LỤC iii DANH MỤC CÁC TỪ VIẾT TẮT vi DANH MỤC CÁC BẢNG, HÌNH vii MỞ ĐẦU 1 Đặt vấn đề Mục tiêu nghiên cứu Ý nghĩa khoa học thực tiễn đề tài Chương TỔNG QUAN TÀI LIỆU 1.1 Những hiểu biết vi khuẩn Pasteurella multocida 1.1 Hình thái 1.2 Đặc tính ni cấy 1.3 Đặc tính sinh hóa 1.4 Sức đề kháng 1.5 Kháng nguyên 1.2 Những hiểu hiểu biết bệnh Tụ huyết trùng bò 1.2.1 Dịch tễ học 1.2.2 Triệu chứng lâm sàng 10 1.2.3 Bệnh tích 10 1.2.4 Chẩn đoán bệnh 11 1.2.5 Phòng trị bệnh Tụ huyết trùng bò 12 Tình hình nghiên cứu bệnh Tụ huyết trùng bò giới Việt Nam 15 1.3.1 Trên giới 15 1.3.2 Việt Nam 16 Chương ĐỐI TƯỢNG - NỘI DUNG, PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 20 2.1 Đối Tượng nghiên cứu 20 2.2 Thời gian, địa điểm nghiên cứu 20 2.3 Nội dung nghiên cứu 20 2.4 Nguyên vật liệu 20 2.4.1 Máy móc 20 2.4.2 Dụng cụ 21 2.4.3 Mơi trường - Hóa chất - Nguyên liệu 21 2.5 Phương pháp nghiên cứu 21 2.5.1 Phương pháp nghiên cứu dịch tễ học 21 2.5.2 Phương pháp chẩn đoán lâm sàng 22 2.5.3 Phương pháp nuôi cấy, phân lập xác định vi khuẩn Pasteurella multocida 22 2.5.4 Phương pháp kiểm tra độc lực vi khuẩn Pasteurella multocida phân lập 25 2.5.5 Phương pháp thử kháng sinh đồ 25 2.5.6 Phương pháp PCR (theo Nagai et al., 1994) 26 2.5.7 Thử nghiệm phác đồ điều trị 29 Chương KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU VÀ THẢO LUẬN 30 3.1 Tình hình chăn ni trâu bị huyện Thạch Thất, thành phố Hà Nội 30 3.2 Một số đặc điểm dịch tễ học bệnh Tụ huyết trùng bò huyện Thạch Thất năm 2018 - 2019 31 3.2.1 Tình hình bệnh Tụ huyết trùng bị huyện Thạch Thất năm 2018 2019 31 3.2.2 Tỷ lệ bò mắc bệnh Tụ huyết trùng theo tháng năm 2018 2019 34 3.2.3 Tỷ lệ bò mắc bệnh bệnh Tụ huyết trùng theo lứa tuổi 37 3.2.4 Triệu chứng lâm sàng, bệnh tích đặc trưng bị mắc bệnh Tụ huyết trùng bò 39 3.2.5 Tình hình tiêm phịng vắc xin Tụ huyết trùng cho bò huyện Thạch Thất 41 3.3 Phân lập xác định đặc tính sinh vật hóa học Pasteurella multocida bệnh tụ huyết trùng bò huyện Thạch Thất 42 3.3.1 Kết phân lập xác định đặc tính sinh vật hóa học Pasteurella multocida từ dịch ngốy mũi trâu, bò khỏe từ mẫu bệnh phẩm trâu, bò nghi mắc bệnh 42 3.3.2 Kết xác định đặc tính sinh vật hóa học Pasteurella multocida từ dịch ngốy mũi trâu, bị khỏe từ mẫu bệnh phẩm trâu, bò nghi mắc bệnh 45 3.3.3 Kết giám định vi khuẩn Pasterulla multocida kỹ thuật PCR 48 3.3.4 Kết xác định độc lực chủng Pasteurella multocida phân lập 49 3.3.5 Kết thử kháng sinh đồ chủng Pasteurella multocida phân lập 51 3.4 đề Kết thử nghiệm số phác đồ điều trị bệnh tụ huyết trùng bò, xuất biện pháp phòng bệnh tụ huyết trùng bò huyện Thạch Thất 52 3.4.1 Kết thử nghiệm số phác đồ điều trị bệnh Tụ huyết trùng bò 52 3.4.2 Đề xuất biện pháp phòng bệnh tụ huyết trùng bò huyện Thạch Thất 54 KẾT LUẬN VÀ ĐỀ NGHỊ 57 Kết luận 57 Đề nghị 57 TÀI LIỆU THAM KHẢO 59 Phụ lục 68 DANH MỤC CÁC TỪ VIẾT TẮT P multocida Pasteurella multocida DNA: deoxyribonucleic acid PCR: Polymerase Chain Reaction TB: Trung bình TLMBC: Tỷ lệ mắc bệnh chung TLTV: Tỷ lệ tử vong Cs: Cộng vii 64 51 Carter G.R and De Alwis M.C.L (1989), Haemorrhagic septicaemia In ADLAM C and RUTTER J.M (eds) Pasteurella and pasteurellosis Academic Press London, pp 131 - 160 52 Chandrasekeran S, Yeap P.C., and Rohan S (1992), Production of a combined P haemolytica and P multocida oil adjuvant vaccine, Proceeding of National IRPA Semina, Kualalumpur, Malayxia, pp 481 482 53 De Alwis M.C.L.(1992a), A review, Pasteurellosis in Production Animal ACIAR proceedings No 43, pp.11 - 20 54 De Alwis M.C.L.(1999), Pasteurellosis, Pasteurellosis in Production Animal, ACIAR proceedings No 57 55 FAO (1991), Proceeding of the FAO/APHHCA workshop on haemorrhagic septicaemia, February, Kandy, SryLanka 56 Frank G.H (1989), Pasteurellosis in cattle In Adlam C and Rutter M (eds) Pasteurella and Pasteurellosis, Academic Press London, pp 117 - 122 57 Gupta B.K (1962), Studies on the cariier problem in Haemorrhagic Septicaemia in Zambia, Veterinary Journal, 107, pp.135 58 Gupta B.K (1980), Int.sym On dis.Of Liv., 13, pp 45-53 65 Heddleston K.L., Roberts P.A and Ritchie A.E (1966): Immunizing and toxin properties of particulate antigens from two immunogenic types of Pasteurella multocida of Avian origin, Journal of Immulogy, 96, pp.124 133 59 Hiramune t.and de Alwis M.C.L (1982), Haemorrhagic Septicaemia carries status of cattle and buffalos in Srilanka, Tropical Animal Heath and Production, 14, pp 91 - 92 60 Horadagoda N.U., Hodgson J.C., Monon G.M., Eckersall P.D (2001), “Roleof endotoxin in the pathogenesis of haemorrhagic septicaemia in the buffalo”, Micro.Pathog 33(3), pp.171 - 179 65 61 Hossein Jamali, Mojtaba Rezagholipour, Sepideh Fallah, Arezoo Dadrasnia, Shamini Chelliah, Rita Devi Velappan, Kelvin Swee Chuan Wei, Salmah Ismail (2014), Short Communication Prevalence, characterization and antibiotic resistance of Pasteurella multocida isolated from bovine respiratory infection.The Veterinary Journal 202, pp 381-383 62 Hunt ML, Adler B, Townsend KM (2000), Themolecular biology of Pasteurella multocida.Veterinary Microbiology, 72: 3-25 63 Jablonki P.E., Jaworski M., Hovde C.J (1996), “A minimal medium for growth of Pasteurella multocida”, FEMS Microbiol.Lett.140(2), pp.165 174 64 Jakeen K.El-Jakee, Samah SaidAli, Ashgan M.Hessain, Moussa I.Mohamed, (2016) Comparative studies for serodiagnosis of haemorrhagic septicaemia in cattle sera Saudi Journal of Biological SciencesVolume 23, Issue 1, January 2016, Pages 48-53 65 Jesse FFA, Osman AY, Adamu L, Yusof M, Syamil M,Omar AR, Saharee AA, Haron AW, Abdullah R, ZamriMS (2013e), Polymerase chain reaction detection of Pasteurella multocida type B: in mice following oralinoculation Asian Journal of Animal and Veterinary Advances, 8: 493501 66 Kawasaki M, Young JR, Suon S, (2015), The socioeconomicimpacts of clinically diagnosed haemorrhagic septicaemiaon smallholder large ruminant farmers in Cambodia.Transbound Emerg Dis.62(5): pp.535-548 67 Kumar A Vijendra P Singh, A., S.B Shivachandra, S.K Srivastava (2004) A Biswas, Prevalent V.P Singh, Serotypes of Pasteurella multocida Isolated from Different Animal and Avian Species in India Veterinary Research Communications, Volume 28, Issue 8, pp 657-667 66 68 Montserrat B., Elana G., Montserrat L., Ana M., Ignacio B., Jordi B (2002): “Pasteurella multocida exbB, exbD and tonB genes are physically linked but independently transcribed ”210 (2), pp.101 - 108 69 Namiok S and Murata M (1961b): Serological studies on Pasteurella multocida II, characteristic of the somatic “O” antigen of the organism, Cornell Veterinarian, 51, pp 507 - 512 70 Namioka S.and Mutara M.(1961a): Serological studies on Pasteurella multocida I, simplified method for capsule typing of the organism, Cornell, Veterianrian, 51, pp 458 - 507 71 Natalia L., Patten B and Syansudin A (1992): Evaluation of bovine antibody responses to haemorrhagic septicaemia vaccine using ELISA and PMPT pasteurellosis in Production Animals International Workshop, Sponsores by ACIAR proceeding No43, Indonesia, 10 - 13 August, pp 219 - 223 72 Nagai S, Someno S, Yagihashi T., (1994), Differentiation of toxigenic from nontoxigenic isolates of Pasteurella multocida by PCR J Clin Microbiol 1994 Apr;32(4):1004-10 73 Omar A.R., Cheaar P.P and Shahata C.S.(1982), The isolation of a virulent strain of Pasteurella multocida from an apparent apparent healthy buffalo, British Veterinary Journal, 118, pp 71 - 73 74 Peter E., Marth J., Carolyn J.H (1996), “A minimal medium for growth of Pasteurella multocida” FEMS mcrobiology letters 140 (2-3), pp 165 - 169 75 Rajeswari Shome, Ram Pratim Deka, Swati Sahay, Delia Grace & Johanna F Lindahl (2019) Seroprevalence of hemorrhagic septicemia in dairy cows in Assam, India Infection Ecology & Epidemiology, Vol 9, 1604064 76 Ranjan R, Panda S, Acharya A, Singh A, Gupta M (2011), Molecular diagnosis of haemorrhagic septicaemia-A review Veterinary World, 4: 189-192 77 Rimler R.B and Rhoades K.R (1987), Serogroup F, a new capsule serogroup of Pasteurella mulltocida, Journal of Clinical Microbiology, 25, pp 615 - 618 67 78 Rita, D.V., Swee, K.C.W.and Salmah, I., Shamini, C., Kang, T.L., Nurshamimi, N.R., Hussin, A.R., Nurul, K.A.(2018), Recombinant Subunit HS as a potential Vaccinefor Haemorrhagic septicaemia disease in livestock Tropical Biomedicine 35(4): 1075-1086 79 Robets R.S.(1947), An immunological study of the Pasteurella septicaemia, Journal of comparative pathology, 57, pp 261 - 278 87 38 80 Rosenbush C.T and Merchant I.A.(1939): A study of the haemorrhagic septicaemia pasteurella, Journal of the Bacteriology, 37, pp 69 81 Smith JE (1959), Studies on Pasteurella septica III strains from human beings J Comp Pathol 69, pp.231-235 82 Yami Bote, Kibeb Legesse, Asmelash Tassew (2017), Isolation, identification and antimicrobial susceptibilityof from cattle with hemorrhagic Pasteurella multocida 68 PhỤ LỤc CÁC THÔNG SỐ CHẠY THỐNG KÊ TRONG BÁO CÁO Bảng 3.1 Tình hình bệnh Tụ huyết trùng bò huyện Thạch Thất năm 2018-2019 Thực nghiệm Địa điểm (Xã) Số bò mắc Số bị khơng mắc Tổng hàng Tiến Xn 858 867 Yên Bình 18 1236 1254 Yên Trung 83 4050 4133 Tổng cột 110 6144 6254 Tiến Xuân 11.04 855.96 Yên Bình 12.45 912.23 Giá trị P 0.00744786 Tiến Xuân 14.16 918.46 Yên Trung 15.49 817.64 Giá trị P 0.00285561 Yên Trung 56.88 1219.01 Yên Bình 45.87 1415.74 Giá trị P 0.7125121 Lý thuyết 69 Bảng 3.6 Kết phân lập Pasteurella multocida từ mẫu dịch ngốy mũi bị khỏe huyện Thạch Thất Thực nghiệm Địa điểm (Xã) Số mẫu dương tính Số mẫu âm tính Tổng hàng Tiến Xuân 21 25 Yên Bình 23 25 Yên Trung 20 25 Tổng cột 11 64 75 Tiến Xuân 3.00 22.00 Yên Bình 3.00 22.00 Giá trị P 0.0215146 Tiến Xuân 4.00 20.00 Yên Trung 4.00 20.00 Giá trị P 0.0128955 Yên Trung 2.00 23.00 Yên Bình 2.00 23.00 Giá trị P 0.01753176 Lý thuyết 70 Bảng 3.7 Kết phân lập Pasteurella multocida từ bò nghi mắc bệnh Tụ huyết trùng huyện Thạch Thất Thực nghiệm Địa điểm (Xã) Số mẫu dương tính Số mẫu âm tính Tổng hàng Tiến Xn 15 21 n Bình 18 26 Yên Trung 10 20 30 Tổng 24 53 77 Tiến Xuân 6.26 19.21 Yên Bình 5.46 22.11 Giá trị P 0.0374616 Tiến Xuân 4.16 18.46 Yên Trung 5.49 17.64 Giá trị P 0.0228851 Yên Trung 6.88 19.51 Yên Bình 5.77 15.24 Giá trị P 0.0112567 Lý thuyết 71 Bảng 3.13 Kết điều trị bệnh Tụ huyết trùng bò huyện Thạch Thất Thực nghiệm Phác đồ điều trị Khỏi bệnh Không khỏi Tổng hàng 10 10 Tổng cột 17 20 8.500 1.500 8.500 1.500 Giá trị P 0.0001 Lý thuyết 72 MỘT SỐ ẢNH TRONG QUÁ TRÌNH THỰC TẬP 73 Ảnh Bò khỏe mạnh xã Tiến Xuân, Ảnh2 Chuẩn bị môi trường đĩa thạch huyện Thạch Thất, Hà Nội máu để trình phân lập P.multucida Ảnh3 Phân lập vi khuẩn Tụ huyết trùng phịng thí nghiệm Ảnh Khuẩn lạc vi khuẩn Ảnh 5: Phản ứng Indol dương tính P multocida mơi trường thạch máu Ảnh 6: Hình thái vi khuẩn P multocida chụp Ảnh 7: Vi khuẩn P Multocida kính hiển vi quang học (độ phóng đại 1000 lần) ni cấy môitrường thạch máu 457bp Ảnh Kết kháng sinh đồ củacác chủng P multocida phân lập Ảnh 9: Kết điện di sản phẩm PCR phát vi khuẩn P multocida M: Marker Giếng số đến giếng số 7: mẫu phân lập số 1, 2, 3, 4, 5, 6, Giếng số mẫu đối chứng dương Giếng số mẫu đối chứng âm Ảnh 10: Chuột nhắt trắng trước Ảnh 11: Chuồng nuôi chuột nhắt trắng tiêm vi khuẩn P multocida (Ảnh 10,11: Thử nghiệm độc lực chủng vi khuẩn P multocida chuột nhắt trắng) Hình Bản đồ hành huyện Thạch Thất, Hà Nội (Nguồn Nhà xuất tài nguyên Môi trường Bản đồ Việt Nam, 2019) ... xuất, vào sở khoa học lực quan nghiên cứu, tiến hành đề tài ? ?Nghiên cứu số đặc tính sinh học vi khuẩn Pasteurella multocida gây bệnh Tụ huyết trùng bò huyện Thạch Thất - Hà Nội biện pháp phòng trị? ??...ĐẠI HỌC THÁI NGUYÊN TRƯỜNG ĐẠI HỌC NÔNG LÂM VƯƠNG THỊ CHUNG NGHIÊN CỨU MỘT SỐ ĐẶC ĐIỂM SINH HỌC CỦA VI KHUẨN PASTEURELLA MULTOCIDA GÂY BỆNH TỤ HUYẾT TRÙNG Ở BÒ TẠI HUYỆN THẠCH THẤT- HÀ NỘI VÀ BIỆN... nghiên cứu - Xác định đặc điểm dịch tễ, lưu hành vi khuẩn Pasteurella multocida bò khỏe bò nghi mắc bệnh Tụ huyết trùng bệnh Tụ huyết trùng bò xã thuộc huyện Thạch Thất - Hà Nội - Giám định đặc