Đề TÀi: Xây dựng phương án Tách dòng gen tổng hợp protein endo-beta-1,4-glucanase từ chủng Aspergillus được phân lập từ vườn đậu tương Việt Nam  Tổng quan về ENDO-BETA-1,4-GLUCANASE Là enzyme thuộc nhóm glycosyl hydrolase Có khả thủy phân cellulose và một số polysaccharide thành monosaccharide và oligosaccharide Có số loài nấm mốc, nấm men và vi khuẩn Quy trình Tìm kiếm các gen nguồn NCBI  Sử dụng Clustal Omega để xác định vùng bảo thủ phân ly Thiết kế Primer bằng BLAST- Chạy thử PCR ảo Đánh giá sản phẩm sau PCR primer bằng SMSPCR BLAST Tìm kiếm gen nguồn CSDL NCBI Tìm kiếm được 5 trình tựu FASTA mã hóa cho protein Endo-beta-1,4-glucanase từ chủng Aspergillus khác nhau ở đối tượng phân lập thời gian khác nhau: Trình tự 1: chủng Aspergillus caelatus  phân lập từ  vườn lạc Châu Trình tự 2: chủng Aspergillus pseudotamarii    Âu vào ngày 26-05-2020 phân lập từ vườn trà Nhật Bản vào  ngày 26-05-2020 Trình tự 3: chủng Aspergillus homomorphus phân lập từ đất Isarel vào ngày 11-07- Trình tự 4: chủng Aspergillus aculeatinus phân lập từ mơ thực vật chết(chưa rõ quốc 2018 gia)ngày 11-07-2018 Trình tự 5: chủng Aspergillus caelatus  phân lập từ  vườn lạc tại Châu Âu vào ngày 26-05-2020 (cùng nguồn với trình tựu thứ nhất)         Chọn trình tự thứ làm khn ảo thiết kế mồi bởi vì: • Thỏa mãn điều kiện chủng Aspergillus ta quan tâm • Được phân lập từ vườn lạc, đối tượng loài đều cùng là hai mầm đậu tương • Có thời gian tìm thấy gần Clustal omega  - Chọn vùng bảo thủ của trình tự đưa vào thiết kế mồi (đoạn Nu từ 81-102) Thiết kế mồi BLAST-Primer Tạo tổng cộng đoạn mồi chọn đoạn thứ sản phẩm tạo có kích thước gần giống với gen mã hóa ta quan tâm  Tiến hành chạy PCR ảo s o meo n e@ exa mp le c o m Kết thu sau PCR ảo: s o meo n e@ exa mp le c o m Insert trình tự sản phẩm sau PCR ĐÁNH GIÁ SẢN PHẨM SAU pcr BẰNG BLAST someone@example.com Kết thu được xếp theo tương đồng từ cao đến thấp Cấu trúc có độ tương đồng cao nhất có khả mã hóa cho protein ENDO- Sản phẩm từ cấu trúc mã hóa có tính chất giống với ENDO-BETA-1,4- BETA-1,4-GLUCANASE GLUCANASE Kĩ thuật tách dịng gen dự kiến: • • Vector tách dịng là pRSET A • Tế bào chủ chủng E.coli BL21 Gen đích: tách chiết mARN mã hóa protein ENDO-BETA-1,4GLUCANASE ... với? ?ENDO- BETA- 1,4- BETA- 1,4- GLUCANASE GLUCANASE Kĩ thuật tách dịng gen dự kiến: • • Vector tách dịng là pRSET A • Tế bào chủ chủng E.coli BL21 Gen đích: tách chiết mARN mã hóa protein? ?ENDO- BETA- 1, 4GLUCANASE. .. kiếm? ?được? ?5 trình tựu FASTA mã hóa cho protein? ?Endo- beta- 1,4- glucanase từ chủng Aspergillus khác nhau ở đối tượng phân lập thời gian khác nhau: Trình tự 1: chủng? ?Aspergillus caelatus  phân lập từ? ?... từ? ? vườn lạc Châu Trình tự 2:? ?chủng? ?Aspergillus pseudotamarii    Âu vào ngày 26-05-2020 phân? ?lập? ?từ? ?vườn trà Nhật Bản vào  ngày 26-05-2020 Trình tự 3: chủng? ?Aspergillus homomorphus phân lập? ?từ