Đang tải... (xem toàn văn)
Chitin và các dẫn xuất của nó có các đặc tính qúi như kháng nấm, kháng khuẩn, rất dễ phân hủy sinh học, bởi vậy chitin và các dẫn xuất đã được ứng dụng trong nhiều lĩnh vực khác nhau [1, 2, 3]. Trong những năm gần đây các hoạt tính hạ cholesterol và kháng viêm của các dẫn xuất từ chitin được nhiều nhà nghiên cứu quan tâm [4]. Ðối với các muối của glucosamin như glucosamin hydroclorid, glucosamin sulfat, glucosamin photsphat... thì hoạt tính kháng viêm được thể hiện tương đối mạnh, đặc biệt là viêm khớp. Các muối này tan rất tốt trong nước và có khả năng xâm nhập vào khớp rất nhanh do đó có hiệu quả một cách nhanh chóng [5]. Trong khuôn khổ công trình này chúng tôi nghiên cứu hoạt tính kháng viêm của glucosamin hydroclorua (Glu-1). Các hoạt tính chống viêm khớp của glucosamin hydroclorid, glucosamin sulfat (Glu-2) và glucosamin phosphat (Glu-3) đã được chúng tôi nghiên cứu và sẽ báo cáo trong các công trình tiếp theo.
HOẠT TÍNH KHÁNG VIÊM CỦA CÁC MUỐI GLUCOSAMIN LƯU VĂN CHÍNH1 - NGƠ BÍCH ANH2 TRẦN VŨ HÙNG2 - VŨ MẠNH HÙNG3 VŨ HÀ3 - NGÔ THỊ THUẬN2 - CHÂU VĂN MINH1 Viện Hóa học hợp chất thiên nhiên-TTKHTN&CNQG Trờng Ðại học khoa học tự nhiên - ĐHQG Hà Nội Học viện Quân y - Bộ Qc phịng I MỞ ÐẦU Chitin dẫn xuất có đặc tính qúi kháng nấm, kháng khuẩn, dễ phân huỷ sinh học, chitin dẫn xuất ứng dụng nhiều lĩnh vực khác [1, 2, 3] Trong năm gần hoạt tính hạ cholesterol kháng viêm dẫn xuất từ chitin nhiều nhà nghiên cứu quan tâm [4] Ðối với muối glucosamin glucosamin hydroclorid, glucosamin sulfat, glucosamin photsphat hoạt tính kháng viêm thể tương đối mạnh, đặc biệt viêm khớp Các muối tan tốt nước có khả xâm nhập vào khớp nhanh có hiệu cách nhanh chóng [5] Trong khn khổ cơng trình chúng tơi nghiên cứu hoạt tính kháng viêm glucosamin hydroclorua (Glu-1) Các hoạt tính chống viêm khớp glucosamin hydroclorid, glucosamin sulfat (Glu-2) glucosamin phosphat (Glu-3) nghiên cứu báo cáo công trình II PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU Tổng hợp glucosamin hydroclorid Glucosamin hydroclorid tổng hợp cách thuỷ phân chitin dung dịch HCl đặc (37%) nồi cách thuỷ Sản phẩm kết tinh tinh chế lại đến độ cần thiết Phổ glucosamin hydroclorid Phổ 1H-NMR 13C-NMR Glu-1 đo máy AVANCE 500 Bruker Viện Hố học - Trung tâm KHTN & CNQG, dung mơi sử dụng CDCl3.(D2O) Hoạt tính kháng viêm glucosamin hydroclorid Các nghiên cứu hoạt tính kháng viêm Glu-1 bao gồm nghiên cứu tác dụng giảm đau quặn, giảm đau mơ hình gây đau nóng, tác dụng ức chế tăng tính thấm thành mạch, tác dụng ức chế phù viêm cấp tác dụng ức chế viêm mạn thực nghiệm chuột nhắt trắng chuột cống trắng [6] - Tác dụng giảm đau quặn nghiên cứu theo mơ hình gây đau quặn Vander Wende C, Witkin LB, Anderson KW chuột nhắt trắng - Tác dụng giảm đau mơ hình gây đau nóng nghiên cứu theo phương pháp Woolfe G Mc Donald AD - Khả ức chế tăng tính thấm thành mạch khảo sát với chuột nhắt trắng theo mơ hình Jayne cộng sự, thuốc chuẩn sử dụng Diclofenac - Khả ức chế phù viêm cấp Glu-1 nghiên cứu theo phương pháp Piccini cộng chuột cống trắng - Tác dụng ức chế viêm mạn thực nghiệm áp dụng theo mô hình gây u hạt thực nghiệm chuột cống trắng theo phương pháp Winter Poster III KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 1- Kết tổng hợp xác định cấu trúc Các liệu phổ 1H-NMR 13C-NMR Glu-1 minh chứng cấu trúc đưa hình bảng : Dựa vào phổ 13C-NMR ta tính hàm lượng dạng : 89,67 : 10,33 Hình 1: Phổ 1H-NMR 13C-NMR Glucosamin hydroclorid Dạng ghế (ppm) 5,50 3,50 Proton H1 H2 H3,H4,H5,H6 Cac bon C1 C2 C3 3,54 - 3,9 Dạng ghế (ppm) Cac bon 89,570 C4 54,729 C5 70,031 C6 J (Hz) JH1-H2 : 3,6 JH1-H2 : 3,6 JH2-H3 : 10,6 Dạng ghế (ppm) 5,00 3,05 Proton H1 H2 J (Hz) JH1-H2 : 8,4 JH1-H2 : 8,4 JH1-H2 : 10,6 H3,H4,H5,H6 (ppm) 70,134 72,021 60,607 Cac bon C1 C2 C3 3,05 - 3,9 Dạng ghế (ppm) Cac bon 93,166 C4 57,168 C5 72,449 C6 (ppm) 76,602 70,135 60,960 Bảng 1: Các kiện cấu trúc glucosamin hydroclorid 2- Kết nghiên cứu hoạt tính kháng viêm Glu-1 a) Kết tác dụng ức chế phù viêm cấp Hiệu tác dụng ức chế phù viêm cấp Glu-1 diclofenac mơ hình gây phù viêm cấp chân chuột trình bày bảng Bảng 2: Thể tích phù viêm chân chuột thời điểm sau gây viêm Nhóm nghiên cứu Nhóm chứng NMSL (n=12) Thể tích ban đầu 5,41 ±0,37 6,98 ±0,42 Thể tích chân chuột thời điểm sau gây viêm * giờ giờ 24 8,39 9,35 9,52 10,08 7,67 ±0,49 ±0,45 ±0,42 ±0,56 ±0,46 48 6,96 ±0,52 Nhóm dùng Glu-1 (n=15) Nhóm dùng Diclofenac (n=15) 5,53 ±0,57 6,64 ±0,46 7,54 ±0,58 8,18 ±0,43 8,39 ±0,53 8,74 ±0,64 7,19 ±0,51 6,56 ±0,58 5,57 ±0,54 6,49 ±0,56 7,18 ±0,48 7,85 ±0,49 7,98 ±0,58 8,21 ±0,56 6,42 ±0,62 6,36 ±0,48 Ðơn vị đo thể tích chân chuột đơn vị tính thể tích kế Kết bảng cho thấy, mức độ phù viêm cấp chân chuột nhóm điều trị Glu-1 thời điểm sau dùng thuốc thấp so với nhóm chứng khơng dùng Tuy nhiên, mức độ phù viêm chân chuột khơng giảm nhiều nhóm dùng diclofenac Tỷ lệ % ức chế phù viêm cấp cụ thể trình bày bảng Bảng 3: Mức độ ức chế phù viêm cấp chân chuột nhóm nghiên cứu (X) (I %: tỷ lệ % ức chế phù viêm cấp chân chuột, V: thể tích chân (ttc); n: số chuột) Thời điểm sau gây viêm Sau Sau Sau Sau Sau Sau 24 Sau 48 Mức độ ức chế phù viêm thời điểm sau điều trị Nhóm dùng diclofenac (n = 15) Nhóm dùng Glu-1 (n=15) (2) (3) Nhóm chứng (n=12) Vc (1) 1,57 2,69 3,94 4,11 4,67 2,26 Vt Vc-Vt I (%) Vt Vc-Vt I (%) 1,11 1,81 2,65 2,86 3,21 1,16 0,64 0,98 1,36 1,39 1,52 0,84 29,3 24,3 35,1 30,4 31,2 47,8 1,11 1,81 2,65 2,86 3,21 1,16 0,92 1,61 2,28 2,45 2,61 0,95 41,4 40,1 42,1 40,3 44,1 57,9 1,55 1,03 0,56 33,5 1,03 0,79 49,0 X ± SD 33,05 ± 4,24 44,9 ± 5,97 p1-2 < 0,05 ; p1-3< 0,05 với p độ không tin cậy SD: độ lệch chuẩn Mức độ phù viêm cấp chân chuột nhóm điều trị Glu-1 với mức liều 50mg/kg thể tích chân chuột giảm 33,05% thấp diclofenac với mức liều sừ dụng 30mg/kg 44,9% điều kiện Như Glu-1 có tác dụng ức chế viêm cấp rõ mức độ (so với diclofenac) b) Kết nghiên cứu tác dụng ức chế tăng tính thấm thành mạch mạc treo ruột Kết nghiên cứu tác dụng ức chế tăng tính thấm thành mạch mạc treo ruột chuột cách tiêm phúc mạc trình bày bảng Bảng 4: Hiệu ức chế tăng tính thấm thành mạch mạc treo ruột Glu-1 Liều độ Nhóm Đường Nồng độ thuốc Tỷ lệ ức STT nghiên n dùng chất mầu P chế (%) (kg thể cưu thuốc (x10 M) trọng) Nhóm 12 Tiêm 0,587 chứng phúc ±0,083 NMSL mạc Glu-1 12 ml 0,453 22,82 p1-2* < diclofenac 12 2,0 g ±0,072 0,415 ±0,073 29,31 0,05 p2-3* < 0,05 p1-2*: So Sánh nhóm dùng Glu-1 nhóm chứng p2-3 *: So sánh nhóm dùng Glu-1 diclofenac Kết nghiên cứu cho thấy, Glu-1 có tác dụng ức chế 22,8% lượng chất màu khỏi lịng mạch so với nhóm chứng (P0,05) c) Tác dụng ức chế phát triển viêm mạn thực nghiệm Hiệu lực ức chế phát triển u hạt thực nghiệm Glu-1 diclofenac trình bày bảng Bảng 5: Tác dụng giảm trọng lượng u hạt thực nghiệm thuốc Trọng Tỷ lệ lượng giảm Nhóm Đường Liều độ STT nghiên n dùng trung trọng P thuốc * bình u lượng u cứu thuốc hạt hạt (%) Nhóm 148,21 chứng 14 ±11,63 NMSL Tiêm Nhóm 114,82 dùng phúc 16 50 mg 22,52 < 0,05 ±12,56 mạc Glu-1 Nhóm 98,82 dùng 16 30 mg 33,32 < 0,05 ±4,62 diclofenac * Liều độ thuốc tính theo kg thể trọng chuột ngày, chia lần Bảng cho thấy Glu-1 dùng liên tục ngày (50mg/kg/thể trọng/ngày), có tác dụng giảm trọng lượng u hạt thực nghiệm 22,52% so với nhóm chứng (P 0,05 ±5,37 ±4,29 diclofenac Nhóm 16,59 26,87 dùng 15 mg 61,51 < 0,05 ±4,56 ±7,78 morphin Trên mô hình Glu-1 diclofenac khơng có tác dụng giảm đau Các thông số đau thời điểm trước sau dùng thuốc khơng có ý nghĩa thống kê (p>0,05), mức độ giảm đau morphin 61,51% V KẾT LUẬN - Ðã tổng hợp Glu-1 xác định cấu trúc phương pháp đại, có độ xác cao - Ðã nghiên cứu hoạt tính kháng viêm Glu-1 chuột nhắt trắng chuột cống trắng Kết cho thấy Glu-1 có khả kháng viêm rõ rệt so với diclofenac thuốc chuẩn dùng điều kiện thử nghiệm Summary Glucosamine salts were synthesized from chitin The structure of these compounds were elucidated by spectral methods The results of study on anti-inflammatory activity showed that these derivatives have significant activity in comparision with diclofenac in the same experimental conditions Tài liệu tham khảo Keisuke Kurita (1988), Chemistry and Application of Chitin and Chitosan, Polymer Degradation and Stability, 59, pp 117-120 Chempluvier, B; F Marchal and P.G Rouxhet (1987) Immobilization of lactase on yeast cells retained in a glass woll matrix, Enzyme Microb Technol 11(7), pp 422 - 430 Muzzarelli R.A.A (1983) Chitin and its derivatives: New trends of applied research, Carbohydrate polymers, 3, pp 53 - 57 Lưu Văn Chính, Châu Văn Minh , Phạm Hữu Ðiển, Vũ Mạnh Hùng, Ngô Thị Thuận (2000) Tổng hợp nghiên cứu tác dụng hạ cholesterol máu N,N,N-trimetylchitosan, Tạp chí Dược học số 9, Tr - 11 5.Mc Alindon T (2001) Glucosamine for osteoarthritis: dawn of a new era? Lancet 357: pp 251 256 Lê Minh Hà (2002) Nghiên cứu thành phần hóa học xà sàng (Cnidium monnieri (L.) Cuss.) gấc (Momordica cochinchinensis (Lour.) Spreng.) Việt Nam Luận án tiến sĩ Hóa học _ Tạp chí Dược học -Số 4/2003Trang 21-24 ... 1: Các kiện cấu trúc glucosamin hydroclorid 2- Kết nghiên cứu hoạt tính kháng viêm Glu-1 a) Kết tác dụng ức chế phù viêm cấp Hiệu tác dụng ức chế phù viêm cấp Glu-1 diclofenac mơ hình gây phù viêm. .. nghiên cứu hoạt tính kháng viêm Glu-1 chuột nhắt trắng chuột cống trắng Kết cho thấy Glu-1 có khả kháng viêm rõ rệt so với diclofenac thuốc chuẩn dùng điều kiện thử nghiệm Summary Glucosamine... ức chế tăng tính thấm thành mạch mạc treo ruột Kết nghiên cứu tác dụng ức chế tăng tính thấm thành mạch mạc treo ruột chuột cách tiêm phúc mạc trình bày bảng Bảng 4: Hiệu ức chế tăng tính thấm
