Đang tải... (xem toàn văn)
Mục đích của luận án nhằm Xây dựng được tiêu chuẩn chất lượng cho các nguyên liệu TEZ, IAT, IBT và ICT tổng hợp được. Thiết lập được chất chuẩn TEZ, tạp chuẩn IAT, tạp chuẩn IBT, tạp chuẩn ICT và ứng dụng trong kiểm nghiệm
BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ Y TẾ TRƯỜNG ĐẠI HỌC DƯỢC HÀ NỘI ĐỖ THỊ THANH THUỶ NGHIÊN CỨU TỔNG HỢP, THIẾT LẬP CHẤT CHUẨN VÀ TẠP CHUẨN DÙNG TRONG KIỂM NGHIỆM TERAZOSIN Chuyên ngành: KIỂM NGHIỆM THUỐC VÀ ĐỘC CHẤT Mã số: 62720410 TÓM TẮT LUẬN ÁN TIẾN SĨ DƯỢC HỌC HÀ NỘI, năm 2019 Cơng trình hoàn thành tại: Trường Đại học Dược Hà Nội Viện Kiểm nghiệm thuốc Trung Ương Người hướng dẫn khoa học: PGS TS Đoàn Cao Sơn GS TS Nguyễn Hải Nam Phản biện 1: Phản biện 2: Phản biện 3: Luận án bảo vệ trước Hội đồng đánh giá luận án cấp Trường họp Vào hồi .phút .ngày tháng năm 2019 Có thể tìm hiểu luận án tại: Thư viện Quốc gia Việt Nam Thư viện Trường Đại học Dược Hà Nội MỞ ĐẦU Tính cấp thiết luận án Bệnh phì đại lành tính tuyến tiền liệt (BPH) cao huyết áp bệnh gặp nhiều nam giới trung niên Terazosin chất ức chế α1adrenergic thuộc nhóm -zosin có đồng thời hai tác dụng điều trị phì đại lành tính tuyến tiền liệt điều trị tăng huyết áp Vì vậy, terazosin hay định điều trị phì đại lành tính tuyến tiền liệt đặc biệt trường hợp có kèm theo tăng huyết áp Ngồi ra, số cơng bố terazosin cịn có tác dụng như: điều trị ung thư tuyến tiền liệt, điều trị chứng xuất tinh sớm, làm giảm triệu chứng đường tiết niệu BPH gây nên, đặc biệt cải thiện triệu chứng đau, khó chịu bệnh nhân đặt stent niệu quản giảm lượng thuốc giảm đau phải sử dụng bệnh nhân Sử dụng terazosin cho bệnh nhân bị BPH có kèm cao huyết áp mà cắt bỏ tuyến tiền liệt huyết áp kiểm soát tốt giảm nhanh triệu chứng đường tiết niệu Hiện terazosin lưu hành nước ASEAN nhiều nước khác giới nhiều dạng biệt dược khác với nhiều hàm lượng khác Để đảm bảo chất lượng thuốc cho người sử dụng, việc kiểm tra nguyên liệu đầu vào trước sản xuất kiểm tra chất lượng thành phẩm lưu hành yêu cầu bắt buộc Khi kiểm tra chất lượng nguyên liệu thành phẩm thuốc nói chung cần đến chất chuẩn tạp chuẩn số lượng chất chuẩn đặc biệt tạp chuẩn thiết lập Việt Nam hạn chế Trong số vài trăm chất chuẩn thiết lập Việt Nam có gần chục tạp chuẩn nghiên cứu đóng góp thêm chất chuẩn, tạp chuẩn cho quỹ chuẩn nước cần thiết Đối với terazoin, kiểm tra chất lượng nguyên liệu thành phẩm chứa terazosin yêu cầu người, trang thiết bị, thuốc thử cần phải có chất chuẩn terazosin tạp chuẩn A, B, C terazosin để thực phép thử quan trọng định tính, định lượng, độ hòa tan xác định giới hạn tạp chất Tuy nhiên, chất chuẩn, tạp chuẩn chưa thiết lập Việt Nam mà đặt mua nước ngồi giá thành cao khơng chủ động thời gian đặt hàng lâu Vì vậy, việc nghiên cứu tổng hợp, thiết lập chất chuẩn terazosin tạp chuẩn terazosin góp phần cung cấp thêm chất chuẩn, tạp chuẩn cho quỹ chuẩn nước tạo thuận lợi cho việc kiểm nghiệm terazosin thúc đẩy nghiên cứu phát triển phương pháp kiểm nghiệm terazosin Đề tài: “Nghiên cứu tổng hợp, thiết lập chất chuẩn tạp chuẩn dùng kiểm nghiệm terazosin” thực với mục tiêu sau: Mục tiêu 1: Tổng hợp nguyên liệu terazosin hydroclorid (TEZ), tạp chất A terazosin dạng muối dihydroclorid (IAT), tạp chất B terazosin (IBT) tạp chất C terazosin dạng muối dihydroclorid (ICT) để thiết lập chuẩn Mục tiêu 2: Xây dựng tiêu chuẩn chất lượng cho nguyên liệu TEZ, IAT, IBT ICT tổng hợp Mục tiêu 3: Thiết lập chất chuẩn TEZ, tạp chuẩn IAT, tạp chuẩn IBT, tạp chuẩn ICT ứng dụng kiểm nghiệm Những đóng góp luận án Đã xây dựng phương pháp tinh chế terazosin sắc ký cột làm nguyên liệu thiết lập chuẩn phù hợp với quy mô sản xuất nguyên liệu thiết lập chuẩn Đã xây dựng quy trình tổng hợp với tạp chất A, B, C terazosin làm nguyên liệu thiết lập tạp chuẩn Lần tạp chất A, B, C terazosin tổng hợp Việt Nam với hiệu suất quy mơ phù hợp với mục đích thiết lập chuẩn Lần tiêu chất lượng cho nguyên liệu thiết lập chuẩn gồm TEZ, IAT, IBTvà ICT xây dựng Việt Nam phương pháp kiểm nghiệm IAT, IBT, ICT định tính TLC, định tính, định lượng, xác định tạp chất liên quan HPLC phương pháp phân tích chưa cơng bố tài liệu Lần chất chuẩn TEZ tạp chuẩn IAT, IBT, ICT thiết lập Việt Nam theo dõi độ ổn định điều kiện bảo quản - C, tất tiêu chất lượng với chu kỳ tháng lần Các sản phẩm chất chuẩn, tạp chuẩn ứng dụng để kiểm tra tiêu chất lượng nguyên liệu TEZ thành phẩm TEZ, đặc biệt tiêu giới hạn tạp chất liên quan mà trước chưa thể tiến hành Việt Nam thiếu tạp chuẩn A, B, C TEZ Cấu trúc luận án Luận án gồm 150 trang, 103 bảng, 79 hình Bố cục gồm phần: Đặt vấn đề (2 trang); Tổng quan (34 trang); Nguyên liệu, trang thiết bị phương pháp nghiên cứu (9 trang); Kết nghiên cứu (75 trang); Bàn luận (28 trang); Kết luận kiến nghị (2 trang); Danh mục cơng trình cơng bố liên quan đến luận án (1 trang) Luận án có 116 tài liệu tham khảo (gồm 33 tài liệu tiếng Việt, 72 tài liệu tiếng nước ngoài, 11 trang web) 29 phụ lục Chương TỔNG QUAN Đã tổng quan nội dung liên quan đến luận án gồm có: - Tổng quan terazosin: đặc điểm cấu tạo, tính chất, tạp chất có terazosin, tác dụng dược lý, định, liều dùng, tác dụng không mong muốn terazosin, sản phẩm chứa terazosin lưu hành thị trường, số phương pháp tổng hợp terazosin giới Việt Nam, tình hình thiết lập chất chuẩn terazosin giới - Tổng quan tạp chất A terazosin: Đặc điểm cấu tạo, nguồn gốc, quy định giới hạn tạp A nguyên liệu thành phẩm TEZ theo số dược điển, số phương pháp tổng hợp tạp A dẫn chất có cấu trúc tương tự tạp A giới, tình hình thiết lập tạp chuẩn A giới - Tổng quan tạp chất B terazosin: Đặc điểm cấu tạo, qui định giới hạn tạp B nguyên liệu thành phẩm TEZ theo số dược điển, số phương pháp tổng hợp dẫn chất có cấu trúc tương tự tạp B giới, tình hình thiết lập tạp chuẩn B giới - Tổng quan tạp chất C terazosin: Đặc điểm cấu tạo, quy định giới hạn tạp C nguyên liệu thành phẩm TEZ theo số dược điển, số phương pháp tổng hợp dẫn chất có cấu trúc tương tự tạp C giới, tình hình thiết lập tạp chuẩn C giới - Tổng quan kiểm nghiệm terazosin tạp chất A, B, C terazosin: Một số phương pháp kiểm nghiệm nguyên liệu, thành phẩm terazosin; số phương pháp định lượng đồng thời terazosin thuốc ức chế ức chế α1-adrenergic, định lượng terazosin dịch sinh học; số phương pháp phân tích tạp chất A terazosin; số phương pháp phân tích tạp chất B terazosin; số phương pháp phân tích tạp chất C terazosin Trên giới công bố nhiều phương pháp kiểm nghiệm TEZ phân tích tạp chất A, B, C TEZ Các phương pháp định lượng TEZ đa dạng phương pháp tạo màu đo quang, phương pháp HPLC detecter UV, phương pháp HPLC với detector huỳnh quang, phương pháp HPTLC, phương pháp đo Các đối tượng mẫu chứa TEZ nghiên cứu để kiểm nghiệm công bố gồm nguyên liệu, viên nén, viên nang dịch sinh học (huyết tương nước tiểu) Bên cạnh phương pháp định lưong TEZ riêng biệt nhiều phương pháp định lượng đồng thời TEZ thuốc thuốc ức chế α1-adrenergic khác nghiên cứu Hầu hết phương pháp kiểm nghiệm dù đối tượng mẫu khác cần sử dụng đến chất chuẩn terazosin hydroclorid, số phương pháp phân tích cịn u cầu chất chuẩn terazosin hydroclorid tạp chuẩn A, B, C terazosin Các phương pháp phân tích tạp chất A, B, C terazosin chủ yếu phương pháp HPLC với loại detector khác detector UV, detector khối phổ cho đối tượng mẫu nguyên liệu thành phẩm TEZ hay nguyên liệu tạp chuẩn Đa số phương pháp dùng tạp chuẩn A, B, C terazosin nồng độ khác Ngoài ra, tạp chuẩn A tạp chuẩn C dùng để kiểm nghiệm doxazosin hoạt chất khác thuộc nhóm ức chế α14 adrenergic lưu hành rộng rãi Việt Nam - Tổng quan chất chuẩn đối chiếu: Khái niệm, vai trò, phân loại chất chuẩn đối chiếu, qui trình thiết lập chất chuẩn DĐVN - Tình hình thiết lập chất chuẩn, tạp chuẩn Việt Nam nay: Theo thống kê Việt Nam thiết lập 500 chất chuẩn đối chiếu hóa học Viện Kiểm nghiệm thuốc Trung ương (VKNTTƯ) cung cấp 300 chất chuẩn, Viện Kiểm nghiệm thuốc thành phố Hồ Chí Minh (VKNTPHCM) cung cấp 200 chất chuẩn Số lượng tạp chuẩn thiết lập Việt Nam chưa nhiều, có khoảng gần chục tạp chuẩn thiết lập danh mục chất chuẩn VKNTTƯ VKNTPHCM Các nguyên liệu thiết lập chất chuẩn đối chiếu hóa học hoạt chất chủ yếu dùng nguyên liệu dược dụng mua nước ngồi, cịn ngun liệu thiết lập tạp chuẩn có số nghiên cứu tổng hợp tạp chất làm nguyên liệu thiết lập tạp chuẩn nước chưa có nghiên cứu tổng hợp thiết lập chất chuẩn tạp chuẩn dùng kiểm nghiệm terazosin - Tổng quan thẩm định phương pháp phân tích ngun liệu hóa dược: Các tiêu phải thẩm định theo loại quy trình phân tích; khái niệm cách xác định độ đặc hiệu, độ tuyến tính, độ đúng, độ xác, giới hạn phát hiện, giới hạn định lượng Chương NGUYÊN LIỆU, TRANG THIẾT BỊ, PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 2.1 NGUYÊN LIỆU 2.1.1 Chất chuẩn, tạp chuẩn - Chất chuẩn terazosin hydroclorid Hội đồng Dược điển Mỹ, lô G0F290, hàm lượng nguyên trạng 91,9% - Tạp chuẩn A Hội đồng Dược điển Mỹ dạng muối dihydroclorid, lô F0C245, hàm lượng nguyên trạng 90,0% - Tạp chuẩn B terazosin Hội đồng Dược điển Mỹ, lô F0C218, hàm lượng nguyên trạng 100% - Tạp chuẩn C terazosin Hội đồng Dược điển Mỹ dạng muối dihydroclorid, lô H0M084, hàm lượng nguyên trạng 95,0% 2.1.2 Nguyên liệu - 2-cloro-6,7-dimethoxyquinazolin-4-amin (ACDQ) PA, SigmaAldrich, lô STBC3541V, hàm lượng nguyên trạng 99,7% - Nguyên liệu terazosin tổng hợp Bộ môn Hóa Dược, trường Đại học Dược Hà Nội, hàm lượng ngun trạng 90,2% 2.1.3 Dung mơi, hóa chất Các hóa chất, dung môi sử dụng nghiên cứu hãng Merck (Đức), hãng Fisher Chemical (Mỹ) hãng Xilong (Trung Quốc) đạt tiêu chuẩn tinh khiết phân tích Các dung mơi dùng chạy HPLC đạt tiêu chuẩn dùng cho HPLC 2.2 TRANG THIẾT BỊ Sử dụng trang thiết bị dùng cho tổng hợp phân tích Trường Đại học Dược Hà Nội, VKNTTƯ, Trung tâm Kiểm nghiệm Vĩnh Phúc, Phịng thí nghiệm Khoa Hóa học, Trường Đại học Khoa học tự nhiên - Đại học Quốc gia Hà Nội Viện Hóa học - Viện Hàn lâm Khoa học Công nghệ Việt Nam 2.3 PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 2.3.1 Phương pháp tổng hợp 2.3.1.1 Phương pháp tổng hợp terazosin hydroclorid Tổng hợp terazosin hydroclorid theo TLTK [17] theo sơ đồ “Hình 1.10” phần “Tổng quan” tiến hành đến giai đoạn tạo terazosin thơ Hóa chất điều kiện: a) CH3OH, H2SO4, 25 - 35 C/4 giờ, b) Piperazin, CH3COOH 5%/dioxan, đun hồi lưu 12 c) dioxan, hồi lưu 12 giờ, d) HCl/EtOH; TEA, ethylacetat, 60 – 65 C Hình 1.10 Sơ đồ tổng hợp terazosin Việt Nam 2.3.1.2 Phương pháp tổng hợp tạp chất A Tổng hợp tạp chất A từ ACDQ piperazin (Hình 2.2 ) Hình 2.2 Sơ đồ tổng hợp IAT 2.3.1.3 Phương pháp tổng hợp tạp chất B Tổng hợp tạp chất B từ terazosin phản ứng diazo hóa tạo muối diazoni sau thủy phân muối diazoni thu mơi trường acid yếu chiết ethyl acetat thu sản phẩm thơ (Hình 2.3) Hình 2.3 Sơ đồ tổng hợp IBT 2.3.1.4 Phương pháp tổng hợp tạp chất C Tổng hợp tạp chất C terazosin từ IAT base ACDQ (Hình 2.4) Hình 2.4 Sơ đồ tổng hợp ICT 2.3.1.5 Phương pháp tinh chế Tinh chế sản phẩm thô phương pháp sắc ký cột sử dụng silica gel 60 dùng cho sắc ký cột (kích thước 63 - 200 µm) với hệ dung mơi rửa giải phù hợp tùy sản phẩm Sử dụng phương pháp nhồi cột ướt, tỷ lệ 50 g silicagel nhồi cột cho g mẫu thô cần tinh chế 2.3.2 Phương pháp kiểm tra độ tinh khiết sản phẩm tổng hợp 2.3.2.1 Phương pháp sắc ký lớp mỏng (TLC) Các sản phẩm kiểm tra độ tinh khiết phương pháp TLC luận án xây dựng, sử dụng hệ dung môi pha động khác cho sản phẩm, với nồng độ chất phân tích phù hợp, phát vết soi đèn UV 254 nm 312 nm Riêng sản phẩm IAT kiểm tra độ tinh khiết hệ dung môi pha động khác hệ phát vết soi đèn UV 254 nm 312 nm, hệ để kiểm tra piperazin tồn dư phát vết thuốc thử Nihydrin 2.3.2.2 Phương pháp phân tích nhiệt trọng lượng (TGA) Xác định hàm ẩm sản phẩm sử dụng máy phân tích nhiệt trọng lượng Labsys TG 1600, SETARAM (Pháp), với tốc độ dịng khí bảo vệ 2,5 lít/giờ, tốc độ gia nhiệt oC/phút, trì nhiệt độ 105 oC giờ, lượng mẫu thử khoảng 10 mg 2.3.3 Phương pháp phân tích cấu trúc 2.3.3.1 Phương pháp đo phổ hồng ngoại (IR) Được đo máy Shimazdu FTIR Afinity - 1S máy đo phổ IR 670-FTIR Nicolet-NEXUS với kỹ thuật viên nén KBr vùng 4000-400 cm-1 2.3.3.2 Phương pháp đo phổ khối lượng (MS) Được đo máy khối phổ LTQ ORBITRAP XL phương pháp đưa mẫu trực tiếp với dung môi methanol, kỹ thuật ESI để ion hóa chất cần đo 2.3.3.3 Phương pháp đo phổ cộng hưởng từ hạt nhân (NMR) Được ghi máy cộng hưởng từ Bruker Ascend 500 MHz máy cộng hưởng từ Bruker AVANCE 500 MHz, dung môi DMSO8 - Áp dụng test F để so sánh phương sai - Áp dụng test T để so sánh giá trị hàm lượng trung bình Xác định giá trị hàm lượng chất chuẩn, tạp chuẩn công bố chứng - Tính giá trị trung bình phịng thí nghiệm (X) - Tính độ lệch chuẩn (S) - Tính độ lệch chuẩn tương đối (RSD) - Tính độ không đảm bảo đo chuẩn phép đo: U (x) = SX - Tính độ khơng đảm bảo đo mở rộng giá trị hàm lượng: U = k U(x) = k S(x) - Tính giá trị cơng bố chứng phân tích: X U Chương KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU 3.1 TỔNG HỢP TERAZOSIN VÀ CÁC TẠP CHẤT A, B, C 3.1.1 Tổng hợp terazosin hydroclorid Kế thừa qui trình tổng hợp TEZ Việt Nam Nguyễn Hải Nam cộng đến giai đoạn tạo TEZ dang muối hydroclorid thô, phương pháp tinh chế khác sắc ký cột sử dụng silica gel dùng cho sắc ký cột (63-200 µm) với hệ dung môi rửa giải diclorometan - aceton - methanol tỷ lệ (8: 8: 1), (8: 12: 1), (8: 12: 2) thực Dịch rửa giải phân đoạn sau kiểm tra TLC có TEZ tập trung lại, loại dung môi cất quay chân không sấy chân không 60 C giờ, thu sản phẩm bột kết tinh màu trắng, tnc: 273,1C hiệu suất tinh chế 92,2%; Rf = 0,44 (hệ 1T); 0,66 (hệ 2T); 0,33 (hệ 3T) IR (KBr), νmax (cm -1): 3420 (NH2); 3080 (C-H vòng thơm); 2961 (CH2); 1630 (C=O); 1591 (C=C vòng thơm); 1244 (CH3O-); 991 (C-H vòng thơm) Hệ số tương đồng phổ IR sản phẩm TEZ chất chuẩn TEZ USPRS: 99,44% ESI-MS (CH3OH), m/z: 388,1993 [M+H]+, 1H-NMR (500 MHz, DMSO-d ), δ(ppm): 1,85-1,88 (2H, m, H22); 1,98-2,11 (2H, m, H21); 3,57-3,81 (8H, m, H23, H13, H15, H16); 3,84 (3H, s, H17), 3,87(3H, s, H18); 3,89-3,96 (2H, m, H12); 4,734,76 (1H, m, H20); 7,60 (1H, s, H8); 7,76 (1H, s, H5); 8,67 (1H, s, 11 NH); 8,94 (1H, s, NH); 12,42 (1H, s, NH) 13C-NMR (125 MHz, DMSO-d6), δ(ppm): 25,73 (C22); 28,40 (C21); 41,21 (C15), 44,39 (C13), 44,67 (C16), 45,28 (C12), 56,54 (C18), 56,74 (C17), 68,75 (C23); 75,36 (C20); 99,66 (C8); 102,19 (C9); 105,45 (C5); 136,70 (C10); 147,28 (C7); 151,82 (C2); 155,70 (C6); 161,75 (C4); 170,21 (C19) 3.1.2 Tổng hợp tạp chất A terazosin Hòa tan hoàn toàn 0,89 g (0,01 mol) piperazin ml alcol isoamylic (IAM), thêm 0,50 g 2-cloro-6,7-dimethoxyquinazolin-4amin (ACDQ) (0,002 mol), siêu âm 15 phút để đồng hỗn hợp Duy trì 120 C có khuấy từ hồi lưu, sau hạ nhiệt độ xuống 70 C, trì 15 Lọc nóng lấy tủa, rửa tủa IAM nóng, sấy khơ tủa 60 C chân không thu tạp A dạng base bột kết tinh màu trắng với hiệu suất 82,6% Hòa tan lượng tạp A dạng base với 100 ml MeOH, thêm ml HCl đặc, trì 60 C có khuấy từ hồi lưu, sau quay chân khơng thu cắn Hịa tan cắn 400 ml nước lọc để loại tạp không tan nước Bay dịch lọc cất quay chân không thu cắn Sấy cắn thu chân không 60 C 12 thu sản phẩm IAT thô bột kết tinh màu trắng với hiệu suất 78,7% Triển khai sắc ký cột để tinh chế IAT thô sử dụng silicagel dùng cho sắc ký cột (63200 µm) làm pha tĩnh với hệ dung mơi rửa giải diclomethan methanol tỷ lệ (9: 1), (7: 3), (6: 4) Dịch rửa giải phân đoạn sau kiểm tra TLC có IAT tập trung lại, loại dung môi cất quay chân không sấy chân không 60 C 12 thu sản phẩm bột kết tinh màu trắng, t : 219,2 C; nc hiệu suất 71,1%; Rf = 0,41 (hệ 1A); 0,47 (hệ 2A); 0,42 (hệ 3A); 0,38 (hệ 4A) IR (KBr), νmax (cm -1): 3436 (NH2); 3317 (NH); 3166 (C-H vòng thơm); 2944 (CH2); 1651 (C=C vòng thơm); 1266 (CH3O-); 834 (C-H vòng thơm) Hệ số tương đồng phổ IR sản phẩm IAT chất chuẩn IAT USPRS: 99,38% ESI-MS (CH3OH), m/z: 290,1600 [M+H]+, 1H-NMR (500 MHz, DMSO-d6), δ(ppm): 3,27 (4H, s, H13, 12 H15); 3,86 (3H, s, H18); 3,88 (3H, s, H17); 4,18 (4H, s, H12, H16); 7,71 (1H, s, H5); 7,81 (1H, s, H8); 8,72 (1H, s, NH); 9,06 (1H, s, NH); 9,71 (2H, s, NH2); 12,86 (1H, s-br, NH) 13C-NMR (125 MHz, DMSO-d6), δ(ppm): δ 42,25 (C13); 42,38 (C15); 49,06 (C12, C16); 56,56 (C18); 56,79 (C17); 99,69 (C5); 102,32 (C8); 105,45 (C9); 136,71 (C10) ; 147,42 (C6); 151,84 (C2); 155,74 (C7); 161,84 (C4) 3.1.3 Tổng hợp tạp chất B terazosin Hịa tan hồn tồn 0,5 g terazosin hydroclorid (1,1 mmol) 25 ml nước cất Cho thêm g KBr, siêu âm để hỗn hợp tan hoàn toàn Thêm vào hỗn hợp 10 ml dung dịch NaNO2 chuẩn bị cách hòa tan 1,52 g natri nitrit (22 mmol) 10 ml nước 22 ml acid sulfuric M (110 mmol), trộn Khuấy từ nhiệt độ - C Điều chỉnh hỗn hợp phản ứng tới pH NaOH 40% Khuấy từ hồi lưu 60 C Loại dung môi cất quay chân không thu cắn Hòa tan cắn 250 ml ethyl acetat, lọc Cất quay dịch lọc chân không thu cắn Sấy cắn chân không 60 C 12 thu sản phẩm IBT thô bột màu trắng, hiệu suất 92,4% Triển khai sắc ký cột để tinh chế IBT thô sử dụng silicagel dùng cho sắc ký cột (63-200 µm) làm pha tĩnh với hệ dung môi rửa giải acetonitril - cloroform - n-hexan - methanol tỷ lệ (5: 4: 1: 0), (5: 4: 0: 0), (5: 4: 0: 1), (5: 3: 0: 2) Dịch rửa giải phân đoạn sau kiểm tra TLC có IBT tập trung lại, loại dung môi cất quay chân không sấy chân không 60 C 12 thu sản phẩm bột kết tinh màu trắng; tnc: 247,3 C; hiệu suất 78,3%; Rf = 0,46; (hệ 1B); 0,69 (hệ 2B); 0,51 (hệ 3B); IR (KBr), νmax (cm-1): 3502 (-OH phenol); 3125 (C-H vòng thơm); 2959 (-CH2); 1666 (C=O); 1262 (CH3O-); 836 (C-H vòng thơm) Hệ số tương đồng phổ IR sản phẩm IBT với tạp chuẩn IBT USPRS: 98,70% ESI-MS (CH3OH), m/z: 387,1671 [MH]- 1H-NMR (500 MHz, DMSO-d6), δ(ppm): 1,85-1,88 (2H, m, H22); 1,99-2,09 (2H, m, H21); 3,53-3,66 (8H, m, H12, H13, H15, H16); 3,75-3,79 (2H, m, H23); 3,81 (3H, s, H18); 3,86 (3H, s, H17); 13 4,71-4,73 (1H, m, H20); 6,82 (1H, s, H5); 7,30 (1H, s, H8); 11,38 (1H, br, OH) 13C-NMR (125 MHz, DMSO-d6), δ(ppm): 25,71 (C22); 28,44 (C21); 41,36 (C15); 44,71 (C13); 45,27 (C16); 45,76 (C12); 56,02 (C18); 56,21 (C17); 68,71 (C23); 75,36 (C20); 105,96 (C5-C8); 109,97 (C9-C10); 146,37 (C6); 150,84 (C2); 155,35 (C7); 162,97 (C4); 170,07 (C19) 3.1.4 Tổng hợp tạp chất C terazosin Hòa tan 0,82 g ACDQ (0,0034 mol) bình cầu dungg tích 100 ml 35 ml DMF, thêm 0,50 g IAT base (0,0017 mol), siêu âm 15 phút để đồng hỗn hợp Duy trì nhiệt độ 100 ± C có khuấy từ hồi lưu, sau lọc nóng khối phản ứng thu tủa, sấy khơ tủa chân không 60 C 24 thu tạp C dạng base bột kết tinh màu trắng với hiệu suất 89,8% Thêm vào lượng tạp C dạng base 50 ml methanol 3,5 ml HCl đặc, trì 60 C có khuấy từ hồi lưu Loại dung môi cất quay chân không thu cắn Rửa cắn để loại HCl H2O đến pH dịch rửa trung tính dịch rửa âm tính phản ứng với dung dịch thuốc thử AgNO3 0,1 N Sấy cắn chân không 60 C 12 thu ICT thô bột kết tinh màu trắng, hiệu suất 84,6% Triển khai sắc ký cột để tinh chế ICT thô sử dụng silicagel dùng cho sắc ký cột (63-200 µm) làm pha tĩnh với hệ dung môi khai triển CHCl3 - MeOH tỷ lệ khác (10: 2), (8: 4), (6: 6) Dịch rửa giải phân đoạn sau kiểm tra TLC có ICT tập trung lại, cất quay loại dung môi thu lấy cắn, sấy cắn chân không 60 C 12 thu sản phẩm bột kết tinh màu trắng, tnc 305,7 C; hiệu suất 62,1%; Rf = 0,41 (hệ 1C); 0,37 (hệ 2C); 0,68 (hệ 3C) IR (KBr), νmax (cm-1): 3590 (NH2); 3327 (NH); 3202 (C-H vòng thơm); 2853 (CH2); 1639 (-C=C vòng thơm); 1248 (CH3O-); 851 (C-H vòng thơm) Hệ số tương đồng phổ IR sản phẩm ICT với tạp chuẩn ICT USPRS: 99,45% ESI-MS (CH3OH), m/z =493,2302 [M+H]+ 1H-NMR (500 MHz, DMSO-d6), δ(ppm): 3,77 (4H, s, H12, H16, H13, H15); 3,79 (3H, s, H17, H30); 3,84 (3H, s, H18, H29); 6,75 (1H, s, H5, H22 ); 14 7,12 (2H, s, 4-NH2, 21-NH2 ); 7,45 (1H, s, H8, H25) 13C-NMR (125 MHz, DMSO-d6), δ(ppm): 43,67 (C12, C15, C13, C16); 55,38 (C18, C29); 55,85 (C17, C30); 102,91 (C9, C27); 103,78 (C8, C25); 105,17 (C5, C22); 144,87 (C7, C24); 148,82 (C10, C28); 154,17 (C6, C23); 158,59 (C2, C19); 161,09 (C4, C21) Xác định tỷ lệ mol HCl kết hợp sản phẩm ICT HPLC với detector đo độ dẫn Kết cho thấy tỷ lệ mol HCl kết hợp sản phẩm ICT 2:1 3.2 XÂY DỰNG TIÊU CHUẨN CHẤT LƯỢNG CHO CÁC NGUYÊN LIỆU TỔNG HỢP ĐƯỢC 3.2.1 Xây dựng tiêu chuẩn chất lượng cho nguyên liệu terazosin hydroclorid - Các tiêu chất lượng cho sản phẩm TEZ xây dựng theo USP 40 BP 2017 gồm tiêu: +Tính chất: Bột kết tinh màu trắng vàng + Độ màu sắc dung dịch: Dung dịch 1% phải + Định tính: IR, HPLC, phản ứng ion Cl+ Mất khối lượng làm khô (TGA): ≤ 1% + Tạp acid tetrahydro-2-furancarboxylic (GC): ≤ 0,1% + Tạp 1-[(tetrahydro-2-furanyl)carbonyl] piperazin: ≤ 0,1% + Tạp chất liên quan: Tạp A ≤ 0,3%; Tạp C ≤ 0,4%; Tạp rửa giải trước TEZ ≤ 0,3%; Tạp khác ≤ 0,1%; Tổng tạp ≤ 0,6% + Định lượng (HPLC): 98,0 – 102,0% hàm lượng khan - Theo qui định tiêu chất lượng nguyên liệu terazosin xây dựng phương pháp thử theo chuyên luận nguyên liệu terazosin USP 40 BP 2017 dược điển tham chiếu nên không yêu cầu thẩm định phương pháp phân tích 3.2.2 Xây dựng tiêu chuẩn chất lượng cho nguyên liệu tạp A - Xây dựng thẩm định phương pháp định tính IAT TLC - Xây dựng thẩm định phương pháp định tính, định lượng IAT HPLC 15 - Xây dựng thẩm định phương pháp xác định tạp chất IAT HPLC - Các tiêu chất lượng nguyên liệu IAT + Tính chất: Bột kết tinh màu trắng + Định tính: IR, TLC, HPLC, phản ứng ion Cl+ Nhiệt độ nóng chảy: 217 – 221 C + Mất khối lượng làm khô (TGA): ≤ 3% + Tạp chất liên quan: Tạp đơn ≤ 0,5%; Tổng tạp ≤ 1,0% + Định lượng (HPLC): 98,0 – 102,0% hàm lượng khan 3.2.3 Xây dựng tiêu chuẩn chất lượng cho nguyên liệu tạp B - Xây dựng thẩm định phương pháp định tính IBT TLC - Xây dựng thẩm định phương pháp định tính, định lượng IBT HPLC - Xây dựng thẩm định phương pháp xác định tạp chất IBT HPLC - Các tiêu chất lượng nguyên liệu IBT + Tính chất: Bột kết tinh màu trắng + Định tính: IR, TLC, HPLC + Nhiệt độ nóng chảy: 245 – 249 C + Mất khối lượng làm khô (TGA): ≤ 1% + Tạp chất liên quan: Tạp đơn ≤ 0,5%; Tổng tạp ≤ 1,0% + Định lượng (HPLC): 98,0 – 102,0% hàm lượng khan 3.2.4 Xây dựng tiêu chuẩn chất lượng cho nguyên liệu tạp C - Xây dựng thẩm định phương pháp định tính ICT TLC - Xây dựng thẩm định phương pháp định tính, định lượng ICT HPLC - Xây dựng thẩm định phương pháp xác định tạp chất ICT HPLC - Các tiêu chất lượng nguyên liệu ICT + Tính chất: Bột kết tinh màu trắng + Định tính: IR, TLC, HPLC, phản ứng ion Cl+ Nhiệt độ nóng chảy: 303 - 307 C 16 + Mất khối lượng làm khô (TGA): ≤ 1% + Tạp chất liên quan: Tạp đơn ≤ 0,5%; Tổng tạp ≤ 1,0% + Định lượng (HPLC): 98,0 – 102,0% hàm lượng khan 3.3 THIẾT LẬP CHẤT CHUẨN TERAZOSIN VÀ CÁC TẠP CHUẨN A, B, C CỦA TERAZOSIN Thiết lập chất chuẩn, tạp chuẩn Chất chuẩn TEZ tạp chuẩn IAT, IBT, ICT tiến hành thiết lập theo qui trình thiết lập chuẩn DĐVN gồm bước: - Xây dựng thường qui kỹ thuật thiết lập chuẩn - Kiểm tra chất lượng nguyên liệu theo tiêu chuẩn chất lượng xây dựng Kết nguyên liệu TEZ, IAT, IBT ICT đạt tiêu chuẩn quy định để sản xuất chuẩn - Đóng lọ: Sử dụng buồng đóng chuẩn chuyên dụng (Glove box Labconco) có kiểm sốt nhiệt độ, độ ẩm buồng đóng, nạp khí nitơ buồng đóng, với điều kiện đóng lọ thực tế là: Độ ẩm ≤ 2%, nhiệt độ: 25,0 oC, nạp khí nitơ độ tinh khiết: 99,99% - Đánh giá độ đồng chất chuẩn, tạp chuẩn: Kết giá trị RSD giá trị hàm lượng lọ kiểm tra < 1,0%, lô sản phẩm chuẩn TEZ, IAT, IBT, ICT đồng hàm lượng quy trình đóng ống ổn định - Kiểm tra chất lượng sản phẩm chuẩn đánh giá liên phịng thí nghiệm: Tiến hành phịng thí nghiệm đạt tiêu chuẩn GLP ISO 17025 Khoa Thiết lập chất chuẩn, chất đối chiếu Khoa Vật lý đo lường VKNTTƯ Dùng test F so sánh phương sai dãy kết hàm lượng, dùng test T để so sánh giá trị hàm lượng trung bình Kết cho thấy, kết định lượng phòng thí nghiệm khác khơng có ý nghĩa thống kê - Tính giá trị cơng bố chứng chỉ: + Chất chuẩn terazosin có SKS: WS.0118347.01; hàm lượng nguyên trạng: 99,35%; độ không đảm bảo đo mở rộng: U: ± 0,12% với hệ số phủ k = độ tin cậy 95% + Tạp chuẩn IAT có SKS: WS.0117344.01; hàm lượng nguyên trạng: 17 97,26%; độ không đảm bảo đo mở rộng: U: ± 0,23% với hệ số phủ k = độ tin cậy 95% + Tạp chuẩn IBTcó SKS: WS.0117345.01; hàm lượng nguyên trạng 98,80%; độ không đảm bảo đo mở rộng: U: ± 0,15% với hệ số phủ k = độ tin cậy 95% + Tạp chuẩn ICT có SKS: WS.0118350.01; hàm lượng nguyên trạng: 99,45%; độ không đảm bảo đo mở rộng: U: ± 0,12% với hệ số phủ k = độ tin cậy 95% Đánh giá độ ổn định sản phẩm chất chuẩn, tạp chuẩn Các sản phẩm chất chuẩn, tạp chuẩn thiết lập được, đánh giá độ ổn định điều kiện bảo quản 2-8 C, định kỳ tháng lần đầy đủ tiêu chất lượng xây dựng Thời gian đánh giá tùy thuộc vào thời gian cho phép thực luận án Kết cho thấy sản phẩm chất chuẩn, tạp chuẩn ổn định khoảng thời gian đánh giá (TEZ từ tháng đến tháng; IAT từ tháng đến 15 tháng; IBT từ tháng đến 15 tháng; ICT từ tháng đến tháng) Sử dụng chất chuẩn, tạp chuẩn thiết lập kiểm nghiệm terazosin Sử dụng chất chuẩn TEZ thiết lập để kiểm nghiệm mẫu viên nén TEZ theo USP 40 gồm tiêu: định tính đo quang, định tính HPLC, xác định độ hòa tan đo quang, định lượng, xác định tạp hữu HPLC; kiểm nghiệm mẫu viên nén TEZ theo tiêu chuẩn nhà sản xuấ Abbott gồm tiêu: định tính HPLC, xác định độ hòa tan đo quang, định lượng HPLC; kiểm nghiệm mẫu nguyên liệu TEZ theo USP 40 gồm tiêu: định tính IR, định tính HPLC, định lượng HPLC, xác định tạp chất liên quan HPLC Kết mẫu viên nén TEZ đạt tiêu kiểm nghiệm; mẫu nguyên liệu TEZ không đạt hàm lượng tiêu giới hạn tạp chất liên quan Chương BÀN LUẬN 4.1.VỀ TỔNG HỢP CÁC NGUYÊN LIỆU THIẾT LẬP CHUẨN Trên giới thấy có cơng bố tổng hợp tạp A dạng base, 18 tạp B tạp C chưa thấy có cơng bố Chủ yếu TLTK đề cập đến tổng hợp dẫn chất IAT, IBT, ICT Riêng nguyên liệu TEZ có nhiều phương pháp tổng hợp khác công bố giới với cách tiến hành phức tạp Ở Việt Nam chưa có nghiên cứu tổng hợp nguyên liệu thiết tạp chuẩn IAT, IBT ICT Riêng nguyên liệu TEZ có nhiều quy trình tổng hợp cơng bố giới với nhiều quy trình khác với cách tiến hành phức tạp Trong nghiên cứu tổng hợp TEZ Việt Nam tác giả sử dụng cách tinh chế phương pháp kết tinh lại dung mơi ethyl acetat lọc nóng qua màng lọc celite Đây quy trình tổng hợp ứng dụng sản xuất nguyên liệu làm thuốc Việc đun nóng lặp lặp lại dung môi tinh chế tạo tạp A tạp C vượt mức quy định, khó kiểm sốt Trên sở kế thừa quy trình tổng hợp đến giai đoạn tạo terazosin hydroclorid thô, luận án đã đưa phương pháp tinh chế sắc ký cột quy mơ phịng thí nghiệm Các quy trình tổng hợp tinh chế nguyên liệu để thiết lập chuẩn mà luận án đưa thực dễ dàng với quy mơ phịng thí nghiệm phù hợp với mục tiêu tổng hợp nguyên liệu thiết lập chuẩn Để thu quy trình tổng hợp phù hợp cho nguyên liệu, luận án khảo sát điều kiện tổng hợp dung môi phản ứng, nhiệt độ phản ứng, tỷ lệ mol chất phản ứng, thời gian phản ứng So với công bố tổng hợp tạp A thời gian phản ứng giảm gần 3/4 độ tinh khiết cao Quy trình tổng hợp tạp B luận án dựa nguyên tắc diazo hóa amin thơm bậc (terazosin) thủy phân muối diazoni tạo IBT dẫn chất phenol có tiến hành đơn giản so với phương pháp tổng hợp dẫn chất phenol khác tài liệu tham khảo lại tận dụng nguyên liệu terazosin tổng hợp Quy trình tổng hợp ICT từ tạp A dạng base ACDQ dễ dàng thực tận dụng nguyên liệu tạp A dạng base mà luận án tổng hợp Để đạt độ tinh khiết cao cho nguyên liệu thiết lập chuẩn, phương pháp tinh chế qua cột tiến hành, sử dụng silica gel pha thuận dùng cho sắc ký cột 19 (kích thước 63 - 200 µm) làm pha tĩnh loại nguyên liệu rẻ tiền thị trường so với loại nguyên liệu làm pha tĩnh cho sắc ký cột khác silica gel pha đảo, sephadex…Hiệu suất quy trình tổng hợp đủ lớn quy mơ sản xuất phù hợp tiến hành ứng dụng sản xuất nguyên liệu thiết lập chuẩn Độ tinh khiết sản phẩm xác định phương pháp HPLC có sử dụng chất chuẩn TEZ tạp chuẩn IAT, IBT, ICT USPRS cho kết tin cậy, xác 4.2 VỀ CẤU TRÚC CỦA CÁC SẢN PHẨM Cấu trúc sản phẩm khẳng định phản ứng hóa học phương pháp đo phổ đại (IR, HRMS, NMR) phù hợp với lý thuyết Với TEZ IAT phổ 1H-NMR xuất pic NH HCl kết hợp, với ICT độ tan nên đo phổ 1H-NMR không lên pic –NH HCl kết hợp tỷ lệ HCl kết hợp xác định phương pháp HPLC sử dụng detector đo độ dẫn 4.3 VỀ VIỆC XÂY DỰNG TIÊU CHUẨN CHẤT LƯỢNG CHO CÁC NGUYÊN LIỆU THIẾT LẬP CHUẨN Quá trình thiết lập chất chuẩn tạp chuẩn cần phải có phương pháp phân tích tin cậy để kiểm tra chất lượng nguyên liệu dự kiến sử dụng thiết lập chuẩn đánh giá độ đồng nhất, kiểm tra thành phẩm đánh giá độ ổn định sản phẩm Tiêu chuẩn nguyên liệu TEZ xây dựng theo chuyên luận terazosin USP 40 BP 2017 Tiêu chuẩn nguyên liệu IAT, IBT, ICT xây dựng dựa đặc điểm lý hóa tạp chất kết khảo sát thực nghiệm Các phương pháp TLC HPLC luận án xây dựng để định tính, định lượng phân tích tạp chất nguyên liệu tạp chất tổng hợp (IAT, IBT, ICT) chưa công bố tài liệu phương pháp đơn giản; sử dụng hóa chất, dung mơi rẻ tiền, dễ kiếm; thao tác dễ thực với trang thiết bị sẵn có hầu hết phịng kiểm nghiệm nước Các tiêu chất lượng nguyên liệu tổng hợp với phương 20 pháp thử luận án xây dựng thẩm định theo quy định tài liệu thống hướng dẫn ASEAN, IC, USP đạt yêu cầu, sử dụng để xây dựng thường quy kỹ thuật thiết lập chuẩn cho chất chuẩn TEZ tạp chuẩn IAT, IBT, ICT từ ứng dụng để kiểm tra chất lượng nguyên liệu TEZ, IAT, IBT, ICT trước thiết lập chuẩn đánh giá độ đồng nhất, kiểm tra thành phẩm đánh giá độ ổn định sản phẩm chất chuẩn, tạp chuẩn thiết lập 4.4 VỀ QUY TRÌNH THIẾT LẬP CÁC CHẤT CHUẨN, TẠP CHUẨN 4.4.1 Về quy trình thiết lập chuẩn, tạp chuẩn Quy trình thiết lập chất chuẩn TEZ tạp chuẩn IAT, IBT, ICT thực theo thủ tục thiết lập hiệu chuẩn chất chuẩn VKNTTW (VKN/TT/21.20) quy trình thiết lập chất chuẩn DĐVN Quá trình sản xuất chuẩn thực điều kiện nghiêm ngặt, đóng chuẩn điều kiện khí Nitơ (99,99%), độ ẩm ≤ 2%, thực nhiệt độ phịng thí nghiệm sau bảo quản nhiệt độ 2-8 C để đảm bảo chất chuẩn ổn định thời gian dài Kết kiểm tra độ đồng hàm lượng lô cho thấy hàm lượng lô chuẩn đồng q trình đóng chuẩn ổn định Đánh giá liên phịng thí nghiệm tiến hành độc lập KTN đạt tiêu chuẩn ISO-IEC 17025 GLP VKNTTƯ Khoa thiết lập chất chuẩn, chất đối chiếu Khoa Vật lý, đo lường sử dụng chất chuẩn TEZ, IAT, IBT ICT USPRS để xác định hàm lượng Các giá trị hàm lượng xử lí thống kê để đưa giá trị hàm lượng công bố chứng chất chuẩn, tạp chuẩn đảm bảo tính khách quan tin cậy So sánh với chất chuẩn TEZ tạp chuẩn IAT, IBT, ICT Hội đồng dược điển Mỹ giá thành thị trường gần triệu đồng cho lọ chất chuẩn TEZ USPRS 200 mg, gần 30 triệu đồng lọ tạp chuẩn IAT USPRS tạp chuẩn IBT USPRS 50 mg gần 30 triệu đồng cho lọ tạp chuẩn ICT USPRS 25 mg chất chuẩn TEZ tạp chuẩn IAT, IBT, ICT 21 thiết lập Việt Nam giá thành giảm nhiều góp phần chủ động chất chuẩn, tạp chuẩn cho công tác kiểm tra chất lượng thuốc cho nghiên cứu phương pháp phân tích phát triển sản phẩm 4.4.2 Về độ ổn định sản phẩm Chất chuẩn TEZ tạp chuẩn IAT, IBT, ICT đánh giá độ ổn định điều kiện bảo quản - oC tất tiêu chất lượng, định kỳ tháng lần Kết chất chuẩn TEZ tạp chuẩn IAT, IBT, ICT ổn định, khơng có tạp chất sinh trình bảo quản Các giá trị hàm lượng giới hạn tạp chất chứng phân tích sản phẩm công bố lại 4.5 VỀ ỨNG DỤNG CÁC SẢN PHẨM CHẤT CHUẨN, TẠP CHUẨN THIẾT LẬP ĐƯỢC TRONG KIỂM NGHIỆM Chất chuẩn TEZ tạp chuẩn IAT, IBT, ICT thiết lập được sử dụng để kiểm nghiệm số tiêu chất lượng mẫu viên nén TEZ nguyên liệu TEZ gồm tiêu: định tính, định lượng, giới hạn tạp chất, độ hòa tan Theo số Dược điển, tạp chuẩn A tạp chuẩn C terazosin việc sử dụng để kiểm tra tiêu tạp chất liên quan nguyên liệu thành phẩm chứa terazosin sử dụng để kiểm tra tiêu tạp chất liên quan nguyên liệu doxazosin, hoạt chất lưu hành rộng rãi Việt Nam.Việc thiết lập chất chuẩn TEZ tạp chuẩn IAT, IBT, ICT đóng góp thêm chất chuẩn, tạp chuẩn cho quỹ chuẩn Việt Nam trước tình hình số lượng chất chuẩn đặc biệt tạp chuẩn thiết lập nước hạn chế Điều khơng góp phần nâng cao tính chủ động cơng tác kiểm nghiệm thuốc mà cịn thúc đẩy cơng tác nghiên cứu phương pháp phân tích nghiên cứu phát triển sản phẩm có sử dụng đến chất chuẩn, tạp chuẩn theo quy định nay, sản phẩm muốn đăng ký lưu hành Việt Nam mà kiểm tra chất lượng nguyên liệu dược chất thành phẩm có 22 sử dụng chất chuẩn tạp chuẩn hồ sơ chất lượng yêu cầu bắt buộc phải có kết phép thử có sử dụng chất chuẩn, tạp chuẩn KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ KẾT LUẬN Đề tài đạt đươc mục tiêu đề Đã tổng hợp nguyên liệu terazosin hydroclorid (TEZ), tạp chất A terazosin dạng muối dihydroclorid (IAT), tạp chất B terazosin (IBT) tạp chất C terazosin dạng muối dihydroclorid (ICT) để thiết lập chuẩn đó: - Đã tổng hợp terazosin hydroclorid quy mơ phịng thí nghiệm với phương pháp tinh chế sắc ký cột thu 8,5 g nguyên liệu terazosin hydroclorid đủ độ tinh khiết để thiết lập chuẩn - Đã đưa quy trình tổng hợp tạp chất A terazosin qui mơ phịng thí nghiệm tổng hợp 2,2 g nguyên liệu tạp A đủ độ tinh khiết để thiết lập tạp chuẩn - Đã đưa quy trình tổng hợp tạp chất B terazosin qui mơ phịng thí nghiệm tổng hợp 2,5 g nguyên liệu tạp B đủ độ tinh khiết để thiết lập tạp chuẩn - Đã đưa quy trình tổng hợp tạp chất C terazosin qui mơ phịng thí nghiệm tổng hợp 2,5 g ngun liệu tạp C đủ độ tinh khiết để thiết lập tạp chuẩn - Đã khẳng định cấu trúc nguyên liệu tổng hợp với cấu trúc lý thuyết phương pháp phổ đại IR, MS, NMR, phương pháp HPLC với detector đo độ dẫn phản ứng hóa học Đã xây dựng tiêu chuẩn chất lượng cho nguyên liệu thiết lập chuẩn TEZ, IAT, IBT, ICT tổng hợp - Đã xây dựng tiêu chất lượng phương pháp kiểm nghiệm cho sản phẩm TEZ, IAT, IBT ICT - Đã thẩm định phương pháp định tính nguyên liệu IAT TLC - Đã thẩm định phương pháp định tính, định lượng, xác định tạp chất 23 liên quan nguyên liệu IAT HPLC - Đã thẩm định phương pháp định tính nguyên liệu IBT TLC - Đã thẩm định phương pháp định tính, định lượng, xác định tạp chất liên quan nguyên liệu IBT HPLC - Đã thẩm định phương pháp định tính nguyên liệu ICT TLC - Đã thẩm định phương pháp định tính, định lượng, xác định tạp chất liên quan nguyên liệu ICT HPLC Các tiêu chất lượng nguyên liệu thiết lập chuẩn thẩm định theo qui định tiêu chí thẩm định đều đạt yêu cầu Đã thiết lập chất chuẩn terazosin hydroclorid tạp chuẩn A, B, C terazosin đó: - Đã thiết lập được: 150 lọ chất chuẩn TEZ 50 mg/lọ 100 lọ tạp chuẩn IAT 20 mg/lọ 120 lọ tạp chuẩn IBT 20 mg/lọ 110 lọ tạp chuẩn ICT 20 mg/lọ - Đã đánh giá độ ổn định sản phẩm chất chuẩn, tạp chuẩn điều kiện bảo quản - C phạm vi thời gian cho phép đề tài, chu kỳ tháng lần kết cho thấy chất chuẩn, tạp chuẩn thiết lập ổn định chất lượng đến thời điểm kiểm tra - Đã sử dụng sản phẩm chất chuẩn, tạp chuẩn để kiểm nghiệm mẫu viên nén TEZ mẫu nguyên liệu TEZ KIẾN NGHỊ Tiếp tục nghiên cứu độ ổn định chất chuẩn, tạp chuẩn thiết lập Mở rộng qui mô sản xuất chất chuẩn TEZ tạp chuẩn IAT, IBT, ICT Tiến tới thiết lập chất chuẩn TEZ, tạp chuẩn IAT, IBT, ICT DĐVN chuẩn ASEAN, thương mại hóa thị trường có nhu cầu Tiếp tục nghiên cứu ứng dụng chất chuẩn, tạp chuẩn thiết lập kiểm nghiệm hoạt chất khác Doxazosin 24 DANH MỤC CÁC CÔNG TRÌNH ĐÃ CƠNG BỐ Đỗ Thị Thanh Thuỷ, Phạm Văn Quang, Nguyễn Hải Nam, Đoàn Cao Sơn (2017), “Nghiên cứu tổng hợp tạp chất B terazosin bước đầu đánh giá giới hạn tạp chất sản phẩm”, Tạp chí Dược học , 57(500), tr 40-43 D.T Thanh-Thuy, T.X Nguyen, H.N Nguyen, C.S Doan (2018), “Synthesis and content determination of impurity A of terazosin for use to establish a reference standard for terazosin drug quality control”, Pharmaceutical Sciences Asia, 45(2), tr 77-92 Đỗ Thị Thanh Thuỷ, Phạm Văn Quang, Nguyễn Hải Nam, Đoàn Cao Sơn (2018), “Xây dựng phương pháp định tính, định lượng tạp chất B terazosin”, Tạp chí Kiểm nghiệm thuốc, 16(59), tr 18-23 Đỗ Thị Thanh Thuỷ, Diêm Thị Mến Huyền, Nguyễn Hải Nam, Đoàn Cao Sơn (2019), “Tổng hợp tạp chất C terazosin dùng kiểm nghiệm”, Tạp chí Dược học , 59 (514), tr 51-54 Đỗ Thị Thanh Thuỷ, Đoàn Lâm Oanh, Nguyễn Hải Nam, Đoàn Cao Sơn (2019), “Xây dựng phương pháp định tính, định lượng nguyên liệu tạp chất C terazosin phương pháp sắc ký lỏng hiệu cao”, Tạp chí Dược học , 59 (515), tr 11-15 Đỗ Thị Thanh Thuỷ, Lê Trần Tiến, Nguyễn Hải Nam, Đoàn Cao Sơn (2019), “Tinh chế terazosin làm nguyên liệu thiết lập chất chuẩn”, Tạp chí Dược học , 59 (517), tr 40-44 Đỗ Thị Thanh Thuỷ, Đoàn Cao Sơn (2019), “Xây dựng phương pháp xác định tạp chất liên quan nguyên liệu tạp chất A terazosin sắc ký lỏng hiệu cao”, Tạp chí Dược học, 59 (521), tr 47-50 Đỗ Thị Thanh Thuỷ, Nguyễn Hải Nam (2019), “Xây dựng phương pháp định tính nguyên liệu tạp chất A terazosin sắc ký lớp mỏng”, Tạp chí Dược học, 59 (521), tr.68-71 ... liệu dược dụng mua nước ngồi, cịn ngun liệu thiết lập tạp chuẩn có số nghiên cứu tổng hợp tạp chất làm nguyên liệu thiết lập tạp chuẩn nước chưa có nghiên cứu tổng hợp thiết lập chất chuẩn tạp chuẩn. .. phẩm đánh giá độ ổn định sản phẩm chất chuẩn, tạp chuẩn thiết lập 4.4 VỀ QUY TRÌNH THIẾT LẬP CÁC CHẤT CHUẨN, TẠP CHUẨN 4.4.1 Về quy trình thiết lập chuẩn, tạp chuẩn Quy trình thiết lập chất chuẩn. .. nghiên cứu tổng hợp, thiết lập chất chuẩn terazosin tạp chuẩn terazosin góp phần cung cấp thêm chất chuẩn, tạp chuẩn cho quỹ chuẩn nước tạo thuận lợi cho việc kiểm nghiệm terazosin thúc đẩy nghiên