Đang tải... (xem toàn văn)
Sự đa dạng sinh học của nấm B.cinerea đã được tiến hành nghiên cứu trên các mẫu nấm phân lập từ các cây hoa thược dược, cà chua và lạc bị bệnh thối xám vào các thời điểm khác nhau ở Đồng bằng Sông Hồng, tại phòng thí nghiệm thuộc bộ môn Chẩn đoán và Giám định dịch hại và thiên địch, Viện Bảo vệ thực vật.
Kết nghiên cứu khoa học BVTV - Sè 5/2018 nghiên cứu bảo vệ thực vật tập Nxb Nông nghiệp Hà Nội tr 46-57 Altschul S.F., Gish W., Miller W., Myers E.W., Lipman D.J., 1990 Basic local alignment search tool J Mol Biol 215:403-410 Booth C., 1971 The Genus Fusarium Commonwealth Mycological Institute, Eastern Press Limited, Kew Surrey Doyle J.J and Doyle J.L.,1990 Isolation of plant DNA from fresh tissue Focus 12:13-15 Kumar S., Stecher G., Tamura K., 2016 MEGA7: Molecular Evolutionary Genetics Analysis Version 7.0 for Bigger Datasets Mol Biol Evol 33(7):1870-1874 Luo S., Chen Z., 1989 Study on the Fusarium wilt disease of medicinal Indian mulberry Journal of Fujian Agricultural College 18(4):526-531 Shi X and Chi P., 1988 Identification of the pathogen causing wilt disease of the medicinal herb Indian mulberry (Morinda officinalis How.) Acta Phytopathologica Sinica 18(3):137-142 White T.J., Burns T., Lee S and Taylor J.W., 1990 Amplification and direct sequencing of fungal ribosomal RNA genes for phylogenetics In: Innis MA, Gelfald DH, Sninsky JJ and White TJ (eds) PCR Protocol: A Guide to Methods and Applications (pp 315-322) Academic press, New York, USA Phản biện: TS Hà Minh Thanh NGHIÊN CỨU ĐẶC ĐIỂM SINH HỌC CỦA NẤM Botrytis cinerea Pers GÂY BỆNH THỐI XÁM TRÊN THƢỢC DƢƠC, CÀ CHUA VÀ LẠC TẠI ĐỒNG BẰNG SÔNG HỒNG Study on Biological Characteristics of Botrytis cinerea Pers Causing Gray Mold Disease on Dahlia, Tomato and Groundnut in Red River Delta 1 Mai Văn Quân , Trịnh Xuân Hoạt , Đặng Vũ Thị Thanh , Lê Quang Mẫn , Ngô Quang Huy Ngày nhận bài: 08.08.2018 Ngày chấp nhận: 27.08.2018 Abstract Botrytis cinerea is an important pathogen that causes gray mold disease in different crop in Viet Nam In present study, a total of 15 isolates were isolated from tomato (Solanum lycopersicum L.), dahlia (Dahia pinnata Cav.), groundnut (Arachis hypogae L.) in the Red River delta The morphological characteristics were based on characters such as conidiophore and conidial length; and the results indicated that all isolates belonged to Botrytis cinerea PCR with universal primer pair ITS4/ITS5 amplified DNA fragments of about 700 bp from all isolates The DNA sequencing and phylogenetic analysis based on ITS confirmed that B cinerea is the causal agent of gray mold disease on crop The effect of various culture conditions on mycelium growth, sporulation, sclerotia formation of B cinerea was performed CR is an oftimal medium for production of mycelium, spores and sclerotia The growth of mycelium cultured on CR as the fastest with the production of mycelium, fungal spores and sclerotia The optimal conditions for mycelium growth and o sporulation of B cinerea isolated from dahlia was 15-20 C on PDA medium The optimal conditions for mycelium growth was the 12:12 (CL:D) cycles of 12 hours light and 12 hours darkness; and the continous Viện Bảo vệ thực vật, Hội KHKT Bảo vệ thực vật Việt Nam darkness was optimum condition for sporulation Keywords: B cinerea, gray mould disease, biological characteristic and molecular identification 73 BVTV - Sè 5/2018 Kết nghiên cứu khoa học ĐẶT VẤN ĐỀ Là loài ký sinh đa thực, nấm Botrytis cinerea gây hại tất giai đoạn sinh trưởng phận nhiều loại trồng, đặc biệt phận non mềm Nấm gây triệu chứng mốc xám lá, thân, hoa, quả, củ Ở Việt Nam, đến năm 2016, nấm B.cinerea phát gây hại 50 loại trồng thuộc 28 họ thực vật (Mai Văn Quân nnk, 2016) Sự đa dạng sinh học nấm B.cinerea tiến hành nghiên cứu mẫu nấm phân lập từ hoa thược dược, cà chua lạc bị bệnh thối xám vào thời điểm khác Đồng Sông Hồng, phòng thí nghiệm thuộc mơn Chẩn đốn Giám định dịch hại thiên địch, Viện Bảo vệ thực vật VẬT LIỆU VÀ PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 2.1 Vật liệu nghiên cứu Mẫu nấm phân lập từ hoa thược dược, cà chua, lạc có triệu chứng bị bệnh thối xám thu thập vùng trồng hoa Bắc Từ Liêm (Hà Nội) phụ cận thuộc Đồng sông Hồng từ năm 2008 đến 2017 Mẫu nấm phân lập từ thược dược ký hiệu từ Bo.HN05 đến Bo.HN09, mẫu nấm phân lập từ cà chua ký hiệu từ Bo.CC165 đến Bo.CC169, mẫu nấm phân lập từ lạc ký hiệu từ Bo.L111 đến Bo.L115 2.2 Phƣơng pháp nghiên cứu Các nguồn nấm gây bệnh thối xám nghiên cứu phân lập làm đơn bào tử (Burgess et al, 1997): Sử dụng kim khêu nấm gạt nhẹ bề mặt tản nấm có chứa bào tử nấm, hòa lỗng bào tử nấm ml nước cất khử trùng lần Dùng pipet hút 50µl dung dịch bào tử nấm trang đĩa petri có chứa mơi trường WA Để khơ bề mặt mơi trường, quan sát bào tử nấm kính hiển vi độ phóng đại 40 lần để tách đơn bào tử nấm Tách chiết DNA tổng số theo phương pháp sử dụng dung dịch CTAB (Cetyl Trimethyl Ammonium Bromide) (Doyle & Doyle 1990) Phản ứng PCR sử dụng cặp mồi ITS4 (5’74 TCCTCCGCTTATTGATATGC-3’)/ITS5(5’GGAAGTAAAAGTCGTAACAAGG-3’) để xác định nấm Botrytis cinerea theo nghiên cứu White et al (1990) Sản phẩm PCR, sau kiểm tra agarose gel, tinh kit QIAquick PCR Purification (Qiagen, Đức) giải trình tự trực tiếp hai chiều theo phương pháp Sanger Hàn Quốc Kết trình tự mẫu so sánh với Ngân hàng Gen phần mềm trực tuyến http:blast.ncbi.nlm.nih.gov/ Blast.cgi Cây phả hệ xây dựng theo phương pháp Neighbor-Joining với khoảng cách di truyền trình tự xác định dựa mơ hình thay Kimura hai tham số, độ tin cậy nhánh xác định giá trị bootstrap, biểu di n giá trị %, với 1000 lần lặp lại phần mềm MEGA 6.0 (Tamura et al., 2013) Nghiên cứu đặc điểm sinh học nguồn nấm Botrytis cinerea thu thập ký chủ (1) môi trường nhân tạo PDA, Cà rốt (CR), Bột đậu (BĐ) Czapek; (2) mức o nhiệt độ 10, 15, 20, 25, 30 C môi trường PDA; (3) điều kiện chiếu sáng hoàn toàn, tối hoàn toàn, 12 sáng 12 tối nhiệt o độ 20 C môi trường PDA Trong thí nghiệm, theo dõi đặc điểm hình thái, kích thước tản nấm hình thành bào tử, hạch nấm KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 3.1 Triệu chứng gây hại B.cinerea nấm Nấm thường gây hại chồi non, lá, nụ hoa Gặp điều kiện ẩm ướt, nấm thường làm cho phận bị bệnh trở nên thối nhũn bề mặt vết bệnh có lớp mốc xám bao phủ Trên cà chua, nấm gây hại lá, chồi non, chồi bị thối, gãy, d bị rụng Trên thược dược, hoa bị nấm gây hại cánh hoa bị héo thối nhũn trời ẩm ướt Trên lạc, nấm gây hại lá, non hay phần thân sát mặt đất non làm khô héo thối nhũn không phát triển (hình 1) Kết nghiên cứu khoa học BVTV - Sè 5/2018 Hình Triệu chứng bệnh thối xám số trồng; (A): cà chua; (B): thược dược; (C): lạc Cành bào tử mọc đơn lẻ, thẳng, đa bào, cành phân nhánh ngắn, đỉnh phân nhánh phình to thành hình cầu, có đính núm nhỏ Cành khơng màu hay có màu nâu nhạt Bào tử đính núm nhỏ, hình trứng hay bầu dục, đơn bào, khơng màu Kích thước bào tử môi o trường PDA, điều kiện nhiệt độ 20 C, cà chua 9,78 x 6,67µm, thược dược 9,15 x 6,32 µm, lạc 10,02x 6,79 µm 3.2 Xác định nấm B cinerea kỹ thuật sinh học phân tử Hình Cây phả hệ đƣợc xây dựng theo phƣơng pháp Neighbor-Joining (Viện Bảo vệ thực vật, 2017) So sánh 15 trình tự đoạn gen 12 loài nấm khác từ Ngân hàng Gen, mã số Ngân hàng Gen đặt dấu ngoặc đơn; Bo.CC166: mẫu nấm gây bệnh thối xám phân lập cà chua, Bo.L155: mẫu nấm gây bệnh thối xám phân lập lạc, Bo.HN06: mẫu nấm gây bệnh thối xám phân lập thược dược Gốc nhánh giá trị thống kê bootstrap với 1.000 lần lặp (chỉ ghi giá trị lớn 80%) Phytophthora phaseoli loài khác với Botrytis 75 BVTV - Sè 5/2018 Kết nghiên cứu khoa học Các mẫu nấm phân lập từ cà chua, thược dược, lạc bị bệnh thối xám sau làm sử dụng để tách chiết DNA tổng số làm mạch khuôn phản ứng PCR sử dụng cặp mồi chung ITS4/ITS5 để khuếch đại vùng ITS Sản phẩm PCR tất mẫu nấm có kích thước xấp xỉ 700 bp Giải trình tự hai chiều tồn số mẫu thu kết đồng Trình tự gen chủng nấm Bo.HN06, Bo.L115, Bo.CC166 chọn làm đại diện để BLAST so sánh Ngân hàng gen NCBI Trình tự 14 đoạn gen 12 loài nấm thuộc Botrytis sp (B convoluta, B fabiopsis, B byssoidea, B prunorum, B tulipae, B elliptica, B sinoallii, B squamosa, B fabae, B eucalypti, B aclada B cinerea) chọn lựa từ Ngân hàng Gen trình tự gen nguồn nấm Bo.HN06, Bo.L115, Bo.CC166 sử dụng để xây dựng phát sinh lồi (Hình 2) Phân tích vị trí phả hệ nguồn nấm Bo.HN06, Bo.L115, Bo.CC166 cho thấy gen mã hóa vùng ITS nguồn nấm có giá trị bootstrap 99% với mẫu KU145381.1; AJ422103.1 KU936083.1 nấm B cinerea (Hình 2) Kết phân tích trình tự gen khẳng định bệnh thối xám thược dược, cà chua lạc vùng đồng Sông Hồng nấm B.cinerea gây ra, kết định danh dựa vào đặc điểm hình thái nấm trước xác 3.3 Sự phát triển nấm B.cinerea môi trƣờng dinh dƣỡng Môi trường dinh dưỡng ảnh hưởng đến phát triển nguồn nấm khác Sau ngày nuôi cấy, nguồn nấm phân lập từ thược dược có kích thước tản nấm lớn môi trường BĐ 8,5cm, nguồn nấm phân lập từ cà chua lạc có kích thước tản nấm đạt 8,5cm môi trường CR Các nguồn nấm có kích thước tản nấm nhỏ mơi trường Czapek, sau ngày kích thước tản nấm nguồn nấm phân lập thược dược, cà chua, lạc có kích thước 6,57; 6,67 7,1cm (bảng 1) Nuôi cấy môi trường dinh dưỡng sau 37 ngày nấm hình thành bào tử Nguồn nấm phân lập từ cà chua lạc hình thành bào tử môi trường PDA, CR, BĐ sau ngày Trên mơi trường Czapek thời gian hình thành bào tử nguồn nấm phân lập cà chua ngày, nguồn nấm phân lập từ lạc ngày Nguồn nấm phân lập từ thược dược khơng hình thành bào tử mơi trường PDA, BĐ, Czapek mà hình thành bào tử môi trường CR sau ngày nuôi cấy Bảng Sự phát triển nguồn nấm B cinerea môi trƣờng (Viện Bảo vệ thực vật, 2016) Môi trường PDA CR BĐ Czapek Ký chủ nấm Thược dược Cà chua Lạc Thược dược Cà chua Lạc Thược dược Cà chua Lạc Thược dược Cà chua Lạc Kích thước tản nấm sau ngày (mm) 8,13±0,03 7,23±0,03 8,23±0,03 7,53±0,03 8,50±0,00 8,50±0,00 8,50±0,00 7,70±0,00 7,70±0,00 6,57±0,07 6,67±0,07 7,10±0,00 Thời gian hình thành Bào tử Hạch (ngày) (ngày) 7 5 3 Tất nguồn nấm thí nghiệm hình thành hạch môi trường PDA CR, môi trường BĐ nguồn nấm phân lập từ cà chua lạc khơng hình thành hạch nấm mơi 76 Sự sinh trưởng hạch nấm Số KTTB (mm) Phân bố lượng 1,97×1,90 61 Đồng tâm 3,83×2,35 112 Đồng tâm 2,88×1,44 78 Mép đĩa 2,56×2,20 16 Rải rác 2,20×1,96 61 Đồng tâm 1,83×1,50 77 Đồng tâm 2,53×1,86 72 Rải rác 5,25×2,58 178 Đồng tâm 2,45×2,08 87 Rải rác 2,40×1,90 - trường Czapek nguồn nấm phân lập từ lạc hình thành hạch Nguồn nấm phân lập từ thược dược đạt kích thước hạch 5,25×2,58 mm số lượng hạch lớn môi trường Czapek Kết nghiên cứu khoa học BVTV - Sè 5/2018 kích thước hạch nhỏ môi trường PDA 1,79 x 1,90 mm, nguồn nấm phân lập từ cà chua có kích thước số lượng hạch lớn mơi trường PDA 3,83×2,35 mm mọc dạng đồng tâm hay rải rác môi trường, nhiên nguồn nấm phân lập từ lạc lại mọc tập chung mép đĩa petri môi trường PDA (bảng 1) 3.4 Sự phát triển nấm B.cinerea mức nhiệt độ Nuôi cấy môi trường PDA nhiệt độ o 10 C nguồn nấm phát triển yếu Sau ngày kích thước tản nấm đạt từ 1,67- 2,43 cm Nguồn nấm phân lập từ thược dược có kích thước tản nấm nhỏ 1,67 cm, nguồn nấm phân lập từ lạc có kích thước tản nấm lớn 2,43 cm Ở ngưỡng nhiệt độ nguồn nấm khơng hình thành bào tử hạch nấm (bảng 2) o Ở nhiệt độ 15 C, nguồn nấm phát triển nhanh có khả hình thành bào tử hạch nấm Sau ngày ni cấy, kích thước tản nấm đạt từ 5,33-6,03 cm, nguồn nấm phân lập từ cà chua hình thành bào tử sau ngày nguồn nấm phân lập từ thược dược sau ngày Sau ngày hạch nấm hình thành, nguồn nấm phân lập từ thược dược có kích thước số lượng hạch nấm lớn 3,70×2,53 mm 93 hạch nấm, nguồn nấm phân từ cà chua nhỏ (3,00×2,60 mm 23 hạch nấm) Hạch nấm nguồn nấm phân lập từ thược dược cà chua phân bố đồng tâm, nguồn nấm phân lập từ lạc phân bố rải rác o Ở mức nhiệt độ 20 C, nấm sinh trưởng phát triển nhanh Sau ngày kích thước tản nấm đạt từ 7,10-8,00 cm Sau ngày nguồn nấm phân lập từ cà chua lạc hình thành bào tử, nguồn nấm phân lập từ thược dược khơng hình thành bào tử Hạch nấm nguồn nấm hình thành sau 5-6 ngày, kích thước hạch nguồn nấm phân lâp từ cà chua lớn (3,20×2,63 mm), số lượng hạch nguồn nấm phân lập từ thược dược lớn (122 hạch nấm) Nguồn nấm phân lập từ lạc có kích thước hạch nhỏ (3,17×2,50mm) phân bố rải rác, nguồn nấm phân lập từ thược dược cà chua phân bố dạng đồng tâm (bảng 2) o Ở mức nhiệt độ từ 25 C trở lên, nguồn nấm phát triển hơn, kích thước tản nấm ngày ni cấy đạt 1,87 - 4,93 cm, khả hình thành bào tử hạch nấm giảm sút Ở o mức 25 C nấm sản sinh bào tử có nguồn nấm phân lập từ cà chua, lạc hình thành bào tử sau ngày Nguồn nấm phân lập từ thược dược khơng hình thành bào tử Tất nguồn nấm khơng hình bào tử mức o 30 C từ nhiệt độ 25 C trở lên nấm khơng hình thành hạch (bảng 2) Bảng Sự phát triển nấm B cinerea mức nhiệt độ khác (Viện Bảo vệ thực vật, 2016-2017) Mức nhiệt độ o 10 C o 15 C o 20 C o 25 C o 30 C Ký chủ Thược dược Cà chua Lạc Thược dược Cà chua Lạc Thược dược Cà chua Lạc Thược dược Cà chua Lạc Thược dược Cà chua Lạc KTTB tản nấm sau ngày (cm) 1,67±0,03 1,90±0,00 2,43±0,09 5,37±0,03 6,03±0,03 5,33±0,03 7,10±0,00 8,00±0,00 7,67±0,00 3,53±0,00 4,93±0,00 3,73±0,00 1,97±0,00 1,87±0,00 2,53±0,00 Thời gian hình thành Bào tử Hạch (ngày) (ngày) 6 6 2 - Sự sinh trưởng hạch KTTB Số Phân bố (mm) lượng 3,70×2,53 93 Đồng tâm 3,00×2,60 23 Đồng tâm 3,17×2,50 27 Rải rác 3,17×1,77 122 Đồng tâm 3,20×2,63 31 Rải rác 2,03×1,57 15 Rải rác - 77 BVTV - Sè 5/2018 Kết nghiên cứu khoa học Hình 3: Sự phát triển nấm B cinerea phân lập từ cà chua sau ngày ni cấy Hình bên trái: phát mơi trường dinh dưỡng khác nhau; hình bên phải: phát triển nấm mức nhiệt độ khác 3.5 Sự phát triển nấm B.cinerea điều kiện chiếu sáng nuôi cấy nguồn nấm phân lập từ ký chủ khác có kích thước tản nấm đạt từ 6,87- 7,83 cm nấm phát triển không tuân theo nhịp điệu sinh trưởng Nguồn nấm phân lập từ lạc có kích thước tàn nấm lớn 7,83 cm đồng thời có thời gian hình thành bào tử ngắn ngày, nấm khơng hình thành hạch Nguồn nấm phân lập từ thược dược cà chua hình thành hạch sau ngày (bảng 3) Nguồn nấm phân lập từ thược dược có kích thước hạch đạt 3,40×3,02 mm số lượng hạch lớn 55 hạch Nuôi cấy môi trường PDA điều kiện 20 C, thời gian chiếu sáng ảnh hưởng đến khả hình thành bào tử, hình thành hạch nhịp điệu sinh trưởng nguồn nấm thí nghiệm Ảnh hưởng thời gian chiếu sáng tới nấm khác tùy thuộc vào khác biệt nguồn nấm mức độ chiếu sáng Ở điều kiện chiếu sáng hoàn toàn, sau ngày Bảng Sự phát triển nấm B cinerea thời gian chiếu sáng khác (Viện Bảo vệ thực vật, 2016-2017) Thời gian chiếu sáng Sáng hoàn toàn 12h sáng/ 12h tối Tối hoàn toàn 78 Ký chủ Thược dược Cà chua Lạc Thược dược Cà chua Lạc Thược dược Cà chua Lạc 6,87±0,03 7,27±0,03 7,83±0,03 7,63±0,03 8,43±0,03 Khơng Khơng Khơng Có Có 6 8 Sự hình thành hạch nấm Số KTTB lượng hạch (mm) hạch 3,40×3,02 55 2,52×2,24 26 2,80×1,40 32 3,10×2,83 30 8,33±0,03 7,27±0,03 8,47±0,03 8,47±0,03 Khơng Khơng Khơng Khơng 5 2,45×1,50 2,85×2,50 3,08×2,30 KTTB tản Nhịp sinh nấm (cm) sau trưởng ngày Thời gian hình thành Bào tử (ngày) Hạch nấm (ngày) 212 76 66 Phân bố hạch Rải rác Rải rác Rải rác Rải rác Rải rác Rải rác Rải rác Kết nghiên cứu khoa học Điều kiện chiếu sáng 12 sáng tối xen kẽ, ảnh hưởng lớn đến sinh trưởng phát triển nguồn nấm so với điều kiện chiếu sáng liên tục Sau ngày ni cấy kích thước tản nấm nguồn nấm phân có kích thước trung bình từ 7,63-8,43 cm Đặc biệt điều kiện chiếu sáng 12 sáng tối xen kẽ, sinh trưởng nguồn nấm phân lập từ thược dược cà chua tuân theo nhịp điệu sinh trưởng, nguồn nấm phân lập từ lạc không tuân theo quy luật BVTV - Sè 5/2018 Nguồn nấm phân lập từ thược dược không hình thành bào tử, nguồn nấm phân lập từ cà chua lạc hình thành bào tử sau ngày Sau ngày nguồn nám phân lập từ thược dược cà chua hình thành hạch nấm, nguồn nấm phân lập từ lạc khơng hình thành hạch Nguồn nấm phân lập từ cà chua có kích thước hạch lớn (3,10×2,83 mm), lại có số lượng hạch nguồn nấm phân lập từ thược dược Hình 4: Sự phát triển nấm B cinerea phân lập từ cà chua sau ngày nuôi cấy điều kiện chiếu sáng khác Ở điều kiện tối hoàn toàn, sinh trưởng nguồn nấm phân lập từ ký chủ khác không tuân theo nhịp điệu sinh trưởng, kích thước tản nấm sau ngày nuôi cấy từ 7,27- 8,47 cm Nguồn nấm phân lập từ thược dược khơng hình thành bào tử, nguồn nấm phân lập từ cà chua có thời gian hình thành bào tử sớm ngày Các nguồn nấm hình thành hạch sau 5-6 ngày Nguồn nấm phân lập từ lạc có kích thước hạch lớn 3,08×2,30 mm, nguồn nấm phân lập từ thược dược có kích thước hạch nhỏ (2,45×1,50 mm) lại có số lượng hạch nhiều 212 hạch điều kiện tối hoàn toàn, nguồn nấm phân bố rải rác môi trường PDA KẾT LUẬN Bệnh thối xám thược dược, cà chua, lạc nấm Botrytis cinerea gây ra, bệnh gây hại phận non chồi non, lá, nụ hoa Đặc điểm sinh học nguồn nấm B.cinerea gây bệnh thối xám thược dược, cà chua lạc vùng đồng Sông Hồng đa dạng Mặc dù ảnh hưởng nhiệt độ tới phát triển nguồn nấm khơng có nhiều khác biệt, nguồn nấm B.cinerea phân lập từ ký chủ khác có nhu cầu dinh dưỡng, thời gian chiếu sáng để hoàn thành giai đoạn phát triển nấm khác Nguồn nấm B.cinerea phân lập từ cà chua lạc hình thành bào tử mơi trường PDA, BD Czapek, sau 3-6 ngày, nguồn nấm phân lập từ thược dược khơng hình thành bào tử môi trường Nguồn nấm phân lập từ thược dược hình thành hạch nhiều mơi trường Czapek, nguồn nấm phân lập từ cà chua hình thành hạch nhiều môi trường PDA Nguồn nấm phân lập từ thược dược cà chua tuân theo quy luật phát triển theo nhịp điệu sinh trưởng gặp điều kiện chiếu sáng, tối xen kẽ, nguồn nấm phân lập từ lạc không tuân theo quy luật Nguồn nấm phân lập từ thược dược hình thành bào tử điều kiện 79 BVTV - Sè 5/2018 Kết nghiên cứu khoa học chiếu sáng hoàn toàn, nguồn nấm phân lập từ cà chua lạc hình thành bào tử tất điều kiện sáng hoàn toàn, sáng tối xen kẽ tối hoàn toàn TÀI LIỆU THAM KHẢO Mai Văn Quân, Dương Thị Nguyên, 2017 Kết giám định số đặc điểm nấm Botrytis cinera Pers Gây bệnh thối xám hoa thược dược (Dahia pinnata Cav.) Việt Nam Tạp chí khoa học cơng nghệ nơng nghiệp Việt Nam, số (80), tr87-91 Đặng Vũ Thị Thanh, Vũ Duy Hiện, Mai Văn Quân, 2007 Nghiên cứu đặc điểm sinh học nấm Botrytis cinerea gây bệnh thối xám đào, hoa hồng, hoa lily vùng Sa Pa, Lào Cai Những nghiên cứu khoa học sống NXB Nông nghiệp, Hà Nội, tr 370-380 Đặng Vũ Thị Thanh, Vũ Duy Hiện, Mai Văn Quân, 2010 Nghiên cứu phổ ký chủ nấm Botrytis cinerea Pers gây bệnh thối xám trồng Tạp chí Bảo vệ thực vật, số 1, tr 8-9 Viện Bảo vệ thực vât, 1997 Phương pháp nghiên cứu bảo vệ thực vật tập NXB Nông nghiệp Hà Nội, tr 46-57, Doyle J.J and Doyle J.L., 1990 Isolation of plant DNA from fresh tissue Focus 12, 13-15 Liu, J., Tian, S., Meng, X., & Xu, Y., 2007 Effects of chitosan on control of postharvest diseases and physiological responses of tomato fruit Postharvest Biology and Technology, 44(3), 300-306 Ferrada, E E., Latorre, B A., Zoffoli, J P., & Castillo, A., 2016 Identification and Characterization of Botrytis Blossom Blight of Japanese Plums Caused by Botrytis cinerea and B prunorum sp nov in Chile Phytopathology, 106(2), 155-165Mai Văn Quân, Trịnh Xuân Hoạt, Đặng Vũ Thị Thanh, Trần Thị chi, Hà Văn Dũng, Lê Thị Thanh Thuỷ, Nguy n Công Thành, 2016 Một số kết nghiên cứu nấm Botrytis cinerea Pers gây bệnh thối xám trồng Tạp chí Bảo vệ thực vật, số 6/2016, tr 37-41 Tamura, K., Stecher, G., Peterson, D., Filipski, A., Kumar, S., 2013 MEGA6: Molecular Evolutionary Genetics Analysis version 6.0 Molecular Biology and Evolution 30: 2725-2729 Williamson, B., B Tudzynski, P Tudzynski and J A van Kan, 2007 "Botrytis cinerea: the cause of grey mould disease." Molecular plant pathology 8(5): 561-580 10 White, T J., Bruns, T., Lee, S J W T., & Taylor, J L., 1990 Amplification and direct sequencing of fungal ribosomal RNA genes for phylogenetics PCR protocols: a guide to methods and applications, 18(1), 315-322 Phản biện: TS Nguyễn Huy Chung KẾT QUẢ ĐÁNH GIÁ KHẢ NĂNG CHỐNG CHỊU VỚI BỆNH HÉO XANH VI KHUẨN (Ralstonia solanacearum Smith) CỦA TẬP ĐOÀN DÕNG/GIỐNG LẠC Evaluation the Resistance of Groundnut Lines/Varieties to Bacterial Wilt Disease (Ralstonia solanacearum Smith) Lê Thị Phƣơng Lan , Nguyễn Xuân Thu , Lê Tuấn Tú , Nguyễn Thị Tho Tạ Hồng Lĩnh Ngày nhận bài: 10.08.2018 Ngày chấp nhận: 18.09.2018 Abstract Bacterial wilt disease, caused by Ralstonia solanacearum Smith, is one of the key biotic constraints affecting groundnut production Planting resistant cultivars is the most important solution for controlling of bacterial wilt disease The high toxic bacterium Phu Cuong 11 isolates was used in pathogenicity assays for Viện Bảo vệ thực vật evaluation the resistance of the tested lines/varieties Viện Cây lương thực Cây thực phẩm The result indicated that among 100 lines/varieties of Viện Khoa học Nông nghiệp Việt Nam 80 ... dược, cà chua, lạc nấm Botrytis cinerea gây ra, bệnh gây hại phận non chồi non, lá, nụ hoa Đặc điểm sinh học nguồn nấm B .cinerea gây bệnh thối xám thược dược, cà chua lạc vùng đồng Sông Hồng đa dạng... 15 C o 20 C o 25 C o 30 C Ký chủ Thược dược Cà chua Lạc Thược dược Cà chua Lạc Thược dược Cà chua Lạc Thược dược Cà chua Lạc Thược dược Cà chua Lạc KTTB tản nấm sau ngày (cm) 1,67±0,03 1,90±0,00... KU936083.1 nấm B cinerea (Hình 2) Kết phân tích trình tự gen khẳng định bệnh thối xám thược dược, cà chua lạc vùng đồng Sông Hồng nấm B .cinerea gây ra, kết định danh dựa vào đặc điểm hình thái nấm trước