ĐẠI HỌC QUỐC GIA HÀ NỘI TRƯỜNG ĐẠI HỌC KHOA HỌC TỰ NHIÊN Nguyễn Thị Thùy Dương NGHIÊN CỨU KHẢ NĂNG TỔNG HỢP GAMMA -AMINOBUTYRIC ACID (GABA) CỦA VI KHUẨN LACTIC TỪ BỘ GIỐNG VTCC ỨNG DỤNG TRONG LÊN MEN CHÈ GIÀU GABA LUẬN VĂN THẠC SỸ KHOA HỌC Hà Nội - 2020 ĐẠI HỌC QUỐC GIA HÀ NỘI TRƯỜNG ĐẠI HỌC KHOA HỌC TỰ NHIÊN Nguyễn Thị Thùy Dương NGHIÊN CỨU KHẢ NĂNG TỔNG HỢP GAMMA -AMINOBUTYRIC ACID (GABA) CỦA VI KHUẨN LACTIC TỪ BỘ GIỐNG VTCC ỨNG DỤNG TRONG LÊN MEN CHÈ GIÀU GABA Chuyên ngành: Sinh học thực nghiệm Mã số: 8420101.14 LUẬN VĂN THẠC SỸ KHOA HỌC NGƯỜI HƯỚNG DẪN KHOA HỌC TS ĐÀO THỊ LƯƠNG PGS.TS NGUYỄN QUANG HUY Hà Nội - 2020 LỜI CẢM ƠN Đầu tiên, tơi xin bày tỏ lịng biết ơn sâu sắc tới TS.Đào Thị Lương KS Hà Thị Hằng quan tâm, tận tình bảo, hướng dẫn tơi suốt q trình học tập thực luận văn Tôi xin gửi lời cảm ơn tới PGS.TS Nguyễn Quang Huy động viên hỗ trợ tơi nhiều q trình thực làm luận văn Tôi xin trân trọng cảm ơn thầy, cô giáo Khoa Sinh học, trường Đại học Khoa học Tự nhiên, đặc biệt thầy, giáo Bộ mơn Hóa Sinh học người tận tình giảng dạy dìu dắt tơi suốt thời gian học tập trường Cùng toàn cán Viện Vi Sinh Vật Công nghệ Sinh học (IMBT) – Đại học quốc gia Hà Nội tạo điều kiện thuận lợi để tơi hồn thành đề tài khóa luận tốt nghiệp Cuối cùng, xin gửi lời cảm ơn sâu sắc tới người thân gia đình, bạn bè ln bên cạnh ủng hộ, động viên, khuyến khích tơi nhiều suốt quãng thời gian qua Một lần xin chân thành cảm ơn! Hà Nội, tháng 03 năm 2020 Học viên Nguyễn Thị Thùy Dương MỤC LỤC MỞ ĐẦU CHƯƠNG 1: TỔNG QUAN 1.1 Tổng quan vi khuẩn axit lactic (LAB) 1.1.1 Khái niệm vi khuẩn axit lactic 1.1.2 Đặc điểm sinh lý, sinh hóa LAB 1.1.3 Chi Lactobacillus 1.2 Tổng quan γ -Aminobutyric axit (GABA) 1.2.1 Gama-Aminobutyric axit (GABA) 1.2.3 Vai trò chức GABA 19 1.2.4 Tình hình nghiên cứu GABA 21 1.2.5 Giá trị chè GABA công nghệ sản xuất chè GABA 24 CHƯƠNG 2: NGUYÊN LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP 26 2.1 Nguyên vật liệu 26 2.2 Hóa chất thiết bị 26 2.2.1 Hóa chất 26 2.2.2 Thiết bị dụng cụ 26 2.3 Các loại môi trường sử dụng nghiên cứu 26 2.4 Phương pháp nghiên cứu 27 2.4.1 Phương pháp phân tích GABA 27 2.4.2 Hoạt hóa chủng giống 31 2.4.3 Tuyển chọn chủng vi khuẩn lactic có khả sinh enzyme glutamate decarboxylase cao 31 2.4.4 Định danh phân loại chủng vi khuẩn lacticError! Bookmark not defined 2.4.5 Thử nghiệm khả lên men tạo GABA chè vi khuẩn lactic 37 2.4.6 Lựa chọn điều kiện ni cấy thích hợp cho chủng nghiên cứu 38 2.4.7 Khếch đại gen GAD vi khuẩn lactic cho việc lên men tạo GABAError! Book 2.4.8 Nghiên cứu điều kiện lên men tạo GABA chè cao việc sử dụng chủng vi khuẩn lactic 39 2.4.9 Nghiên cứu phương pháp thu hồi, ảnh hưởng, tỷ lệ phối trộn chất mang bảo quản sinh khối chủng vi sinh vật Error! Bookmark not defined CHƯƠNG 3: KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 43 3.1 Tuyển chọn chủng vi khuẩn lactic có khả sinh enzyme glutamate decarboxylase cao 43 3.2 Định danh phân loại chủng vi khuẩn lactic 44 3.2.1 Đặc điểm hình thái chủng vi khuẩn lactic 44 3.2.2 Phân loại vi khuẩn dựa phân tích trình tự rDNA 46 3.3 Thử nghiệm khả lên men tạo GABA chè 48 3.3.1 Khếch đại gen GAD vi khuẩn lactic cho việc lên men tạo GABA 48 3.3.2 Xác định GABA mẫu chè lên men phương pháp HPLC 49 3.4 Lựa chọn điều kiện nuôi cấy thích hợp cho khả sinh trưởng chủng vi khuẩn lactic 51 3.4.1 Lựa chọn môi trường thời gian ni cấy thích hợp 51 3.4.2 Lựa chọn nhiệt độ ni cấy thích hợp 52 3.4.3 Lựa chọn pH ni cấy thích hợp 53 3.4.4 Lựa chọn điều kiện cung cấp khí 54 3.4.5 Lựa chọn tỷ lệ giống thích hợp 54 3.4.6 Lựa chọn nguồn nitơ thích hợp 55 3.4.7 Lựa chọn nguồn Carbon thích hợp 56 3.4.8 Lựa chọn tỷ lệ Glutamate thích hợp 57 3.5 Nghiên cứu điều kiện lên men tạo GABA chè cao việc sử dụng chủng vi khuẩn lactic 62 3.5.1 Lựa chọn thời gian lên men thích hợp 62 3.5.2 Lựa chọn tỷ lệ giống cấy thích hợp 62 3.5.3 Lựa chọn độ ẩm lên men thích hợp 63 3.5.4 Lựa chọn chế độ lên men thích hợp 64 3.5.5 Lựa chọn tỷ lệ glutamate bổ sung thích hợp 65 3.6 Nghiên cứu phương pháp thu hồi, làm khô bảo quản sinh khối chủng vi sinh vật Error! Bookmark not defined 3.6.1 Thu hồi sinh khối chủng vi khuẩn phương pháp ly tâmError! Bookmark 3.6.2 Nghiên cứu ảnh hưởng chất mang tỷ lệ phối trộn chất mang đến khả sống vi khuẩn Error! Bookmark not defined 3.6.3 Nghiên cứu điều kiện bảo quản sinh khối vi khuẩn lactic (dạng bột)Error! Bookm KẾT LUẬN 67 TÀI LIỆU THAM KHẢO 68 DANH MỤC BẢNG Bảng 1.1.Vai trò chức sinh lý GABA 20 Bảng 2.1.Mật độ quang phổ (OD 570nm) nồng độ GABA 29 Bảng 2.2 Công thức phối trộn chất mang Error! Bookmark not defined Bảng 3.1 Sàng lọc chủng lactic có khả sinh enzyme glutamatedecarboxylase 43 Bảng 3.2 Khả lên men tạo GABA chè chủng vi khuẩn 48 Bảng 3.3 Lựa chọn môi trường thời gian nuôi vi khuẩn tạo GABA chủng VTCC-B-439 VTCC-B-411 51 Bảng 3.4 Mật độ tế bào pH sau nuôi chủng nghiên cứu pH ban đầu khác 53 Bảng 3.5 Lựa chọn tốc độ ly tâm Error! Bookmark not defined Bảng 3.6 Số lượng vi khuẩn sản phẩm sau đông khô với công thức chất mang khác Error! Bookmark not defined Bảng 3.7 Mật độ vi khuẩn sau thời gian bảo quản điều kiện khác Error! Bookmark not defined DANH MỤC HÌNH Hình 1.1: Cơng thức cấu tạo GABA [87] Hình 1.2: Phương trình phản ứng tổng hợp GABA từ Glutamate [88] 10 Hình 1.3 Con đường chuyển hóa GABA shunt [13] 12 Hình 1.4.Quy trình sản xuất chè đen chè giàu GABA 25 Hình 2.1 Đường chuẩn GABA phương pháp quang phổ 30 Hình 2.2 Đường chuẩn GABA xây dựng phương pháp HPLC 31 Hình 3.1 Hình thái khuẩn lạc (A) tế bào (B) chủng B-439 44 Hình 3.2 Hình ảnh khuẩn lạc (A), tế bào (B) chủng VTCC-B-411 45 Hình 3.3 Hình ảnh khuẩn lạc (A) tế bào (B) chủng 66 45 Hình 3.4 Hình ảnh khuẩn lạc (A) tế bào (B) chủng 67 46 Hình 3.5.Cây phát sinh chủng loại chủng nghiên cứu lồi có quan hệ họ hàng gần thuộc chi Lactobacillus dựa vào trình tự rDNA 16S 47 Hình 3.6 Phát GAD từ chủng B-411 B-439 49 Hình 3.7 Sắc kí đồ GABA HPLC a, GABA chuẩn; b, dịch lên men chủng VTCC-B-411; c, dịch lên men chủng VTCC-B-439 50 Hình 3.8 Sinh trưởng chủng nghiên cứu nhiệt độ 53 Hình 3.9 Sinh trưởng chủng điều kiện cung cấp khí 54 Hình 3.10 Sinh trưởng chủng Lactobacillus nuôi tỷ lệ giống khác 55 Hình 3.11 Sinh trưởng chủng nghiên cứu trêncác nguồn nitơ khác 56 Hình 3.12 Sinh trưởng chủng nghiên cứu nguồn carbon 57 Hình 3.13 Mật độ tế bào chủng nghiên cứu nuôi cấy môi trường có tỷ lệ glutamate khác 58 Hình 3.14 Hàm lượng GABA chè lên men với tỷ lệ giống khác 63 Hình 3.15 Hàm lượng GABA chè lên men với độ ẩm khác 64 Hình 3.16 Hàm lượng GABA chè lên men với chế độ lên men khác 64 DANH MỤC KÝ HIỆU VÀ CHỮ VIẾT TẮT PCR Polymerase chain reaction (Phản ứng chuỗi trùng hợp) DNA Deoxyribonucleic acid (axit deoxyribonucleic) RNA Axit ribonucleic GABA Gamma -aminobutyric acid GAD HPLC Glutamate decarboxylase Sắc ký lỏng hiệu cao (High-performance liquid chromatography) MỞ ĐẦU Ngày nay, với phát triển không ngừng khoa học kỹ thuật với nhu cầu sống ngày nâng cao, vấn đề sức khỏe đời sống người ngày trọng hơn, việc nghiên cứu tìm hợp chất có hoạt tính sinh học quan trọng nhận nhiều quan tâm nhà khoa học Trong đó, Axit Gamma-Aminobutyric (GABA) hợp chất nghiên cứu nhiều thời gian gần GABA amino axit phi protein có carbon, tìm thấy lồi vi khuẩn đơn giản đến trồng động vật có vú GABA phát từ nửa kỷ trước.GABA chất dẫn truyền xung thần kinh quan trọng, có nhiều hoạt tính sinh học giảm stress, chống oxy hóa, giảm thiểu nguy mắc bệnh tim mạch,tiểu đường giảm cholesterol máu GABA chủ yếu hình thành phản ứng αdecarboxylation không nghịch đảo axit L–glutamic muối nó, xúc tác enzyme decarboxylase glutamic Enzyme tìm thấy vi khuẩn Lactobacillus, Escherichia, Streptococcus, Aspergillus Neurospora; thực vật chè, cà chua, đậu nành, gạo lứt nảy mầm Tuy nhiên vi khuẩn lactic loại phổ biến để sản xuất GABA Bởi vì, vi khuẩn lactic có hoạt tính sinh lý đặc biệt xem an tồn q trình sử dụng vào mục đích chăm sóc sức khỏe cho người Chè nguồn nguyên liệu dồi việt nam, giá thành rẻ, chưa có cơng trình nghiên cứu sử dụng chè xanh nguồn ngun liệu q trình sản xuất chè GABA Do vậy, lý giúp cho q trình sản xuất chè GABA có ý nghĩa khoa học thực tiễn tạo nguồn cung cấp GABA tiện lợi với giá thành rẻ Từ lý chọn đề tài: “Nghiên cứu khả tổng hợp Gamma-aminobutyric acid (GABA) vi khuẩn lactic từ giống VTCC ứng dụng lên men chè giàu GABA.” Mục tiêu: - Sàng lọc chủng Lactobacillus có khả tổng hợp GABA cao - Xác định điều kiện ni cấy phù hợp cho q trình tạo sinh khối chủng vi khuẩn lactic lựa chọn Fermentation by Lactobacillus brevis GABA300 Int J Food Microbiol., 130, pp 12-16 41 Kim J.Y.; Lee M.Y.; Ji G.E.; Lee Y.S.; Hwang, K.T (2009) Production of γaminobutyric acid in black raspberry juice during fermentation by Lactobacillus brevis GABA100 Int J Food Microbiol 130, 12–16 42 Kleinrok Z., Matuszek M., Jesipowicz J., Opolski A., Radzikowski C (1998) GABA content and GAD activity in colon tumors taken from patients with colon cancer or from xenografted human colon cancer cells growing as S.C tumors in a thymic nu/nu mice Journal of Physiology and Pharmacology, 49, 303–310 43 Komatsuzaki N.; Shima J.; Kawamotoa S.; Momosed H.; Kimurab T (2005) Production of g-aminobutyric acid (GABA) by Lactobacillus paracasei isolated from traditional fermented foods Food Microbiol 22, 497–504 44 Kook M.C (2010), “Enhanced Production of γ-Aminobutyric Acid Using Rice Bran Extracts by Lactobacillus sakei B2-16”, J Microbiol Biotechnol, 20(4) 45 Kubicek C P., Hampel W., Rohr, M (1979) Manganese deficiency leads to elevated amino acid pools in critic acid accumulating Aspergillus niger Archives of Microbiology, 123, 73–79 46 Lacroix N., St – Gelais D., Champagne C.P., Vuillemard J.C (2013) Gammaaminobutyric acid-producing abilities of lactococcal strains isolated from oldstyle cheese starters Dairy Sci, & Technol, DOI 10.3007 47 Lee, S., Ahn, J., Kim, Y., Jung, J., Lee, H., Lee, E (2013) GammaAminobutyric Acid Production Using Immobilized Glutamate Decarboxylase Followed by Downstream Processing with Cation Exchange Chromatography Int J Mol Sci, 14, 1728-1739 48 Leite A M O., Analy MO (2015), "Probiotic potential of selected lactic acid bacteria strains isolated from Brazilian kefir grains." Journal of dairy science, 98(6), pp 3622-3632 72 49 Letort C and V Juillard (2001), “Development of a MinimalChemically Defined Medium for the Exponential Growthof Streptococcus thermophilus,” Journal of Applied Microbiology, 91(6), pp 1023-1029 50 Li H.; Cao Y (2010) Lactic acid bacterial cell factories for gamma aminobutyric acid Amino Acids 39, 1107–1116 51 Li H.; Qiu T.; Huang G.; Cao Y (2010) Production of gamma- aminobutyric acid by Lactobacillus brevis NCL912 using fed-batch fermentation Microb Cell Fact 9, 85 52 Liu M., J R Bayjanov B.; Renckens A.; Nauta and R J.Siezen (2010), “The Proteolytic System of Lactic Acid BacteriaRevisited: A Genomic Comparison,” BMC Genomics,11, pp 1-15 53 Meyers S A., S L Cuppett and R W Hutkins (1996), “Lipase Production by Lactic Acid Bacteria and Activity on Butter Oil,” Food Microbiology, 13(5), pp.383-389 54 Minuk G Y (2000) GABA and hepatocellular carcinoma Molecular and Cellular Biochemistry, 207, 105–108 55 Naser Tajabadi, Afshin Ebrahimpour, Ali Baradaran (2015) Optimization of γAminobutyric Acid Production by Lactobacillus plantarum Taj-Apis362 from Honeybees Molecules 2015, 20 ,6654-6669 56 Nathan B., Bao J., Hsu C., Aguila P.,Wu R., Yarom M., Kuo C., Wu J (1994) A membrane form of brain L-glutamate decarboxylase: Identification, isolation, and its relation to insulin-dependent mellitus Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America, 91(1), 242–246 57 Ogawa J., Kishino A Ando S.; Sugimoto K.; Miharaand S.; Shimizu (2005), “Production of Conjugated Fatty Acidsby Lactic Acid Bacteria,” Journal of Bioscience and Bioengineering, 100(4), pp 355-364 58 Okada T., Sugishita T., Murakami T., Murai H., Saikusa T., Horino T., Onoda A., Kajmoto O., Takahashi R., Takahashi T (2000) Effect of the defatted rice germ enriched with GABA for sleeplessness depression, autonomic disorder by 73 oral administration Journal of the Japanese Society for Food Science and Technology, 47(8), 596–603 59 Opolski A., Mazurkiewicz M.,Wietrzyk J., Kleinrok Z., Radzikowski C (2000) The role of GABA-ergic system in human mammary gland pathology and in growth of transplantable murine mammary cancer Journal of Experimental and Clinical Cancer Research, 19(3), 383–390 60 Palanivelu R et al (2003) Pollen tube growth and guidance is regulated by POP2, an Arabidopsis gene that controls GABA levels Cell 114, 47–59 61 Rice E W., Johnson C H., Dunnigan M E., Reasoner D J.(1993) Rapid glutamate decarboxylase assay for detection of Escherichia coli Applied and Environmental Microbiology, 59, 4347–4349 62 Saeed A Hayek, Salam A Ibrahim (2013), “Current Limitations and Challenges with Lactic Acid Bacteria: A Review”, Food and Nutrition Sciences, 4, pp 73-87 63 Sanchez S and A L Demain (2008), “Metabolic Regulation andOverproduction of Primary Metabolites,” Microbialogyand Biotechnology, 1(4), pp 283-319 64 Savijoki K., H Ingmer and P Varmanen (2006), “ProteolyticSystems of Lactic Acid Bacteria,” Applied Microbiologyand Biotechnology, 71(4), pp 394-406 65 Serraj R., Shelp B J., Sinclair T R (1998) Accumulation of g-aminobutyric acid in nodulated soybean in response to drought stress Physiologia Plantarum, 102, 79-86 66 Seyed Jalai, hosseinimehr, Fereshteh P., Ehsan Moshtaghi, Mohsen Amini (2010) Colorimetric Determination of Baclofen with Ninhydrin Reagent and Compare with HPLC Method in Tablet A.J.Chemistry 22: 522-526 67 Shigematsu T., Murakamim M., Nakajima K., Uno Y., Sakano A., Narahara Y., Hayaumi H., Ueno S., Fujii T (2010) Bioconversion of Glutamic acid to γAminobutyric acid (GABA) in Brown Rice Grains Induced by Pressure Treatment Japan Journal of Food Engineering, Vol 11, No 4, pp 189 – 199 74 68 Soo I.M.C.; Lee J.W.; Park S.M.; Lee M.Y.; Ji G.E.; Park M.S.; Heo T.R (2006) Improvement of γ-aminobutyric acid (GABA) production using cell entrapment of Lactobacillus brevis GABA 057 J Microbiol Biotechnol 16(4), 562–568 69 Su Y.C.; Wan J.J.; Lin T.T.; Pan T.M (2003) Production of the secondary metabolites gamma-aminobutyric acid and monacolin K by Monascus J Ind Microbiol Biotechnol 30, 41–46 70 Tabasco R., Paarup T.C.; Janer C.; Pelįez and T Requena (2007), “Selective Enumeration and Identification of Mixed Cultures of Streptococcus thermophilus, Lactobacillus delbrueckii subsp bulgaricus, L acidophilus, L paracaseisubsp paracasei and Bifidobacterium lactis in FermentedMilk,” International Dairy Journal, 17(9),pp 1107-1114 71 Taranto M P., M Medici G.; Perdigon A P Ruiz Holgado and G F Valdez (1998), “Evidence for Hypocholesterolemic Effect of Lactobacillus reuteri in Hypercholesterolemic Mice,” Journal of Dairy Science, 81(9), pp 2336-2340 72 Ting Qiu, Haixing Li and Yusheng Cao (2010) Pre-staining thin layer chromatography method for amino acid detection A.J.Biotechnology 9(50):8679-8681 73 Tujioka K., Ohsumi M., Horie K., Kim M., Hayase K., Yokogoshi H (2009) Dietary gamma-aminobutyric acid affects the brain protein synthesis rate in ovariectomized female rats Journal of Nutrition Science and Vitaminology, 55(1), 75–80 74 Ueno Y.; Hayakawa K.; Takahashi S.; Oda K (1997) Purification and characterization of glutamate decarboxylase from Lactobacillus brevis IFO 12005 Biosci Biotech Biochem 61, 1168-1171 75 Vazquez J A., M P Gonzalez and M A Murado (2004), “Peptones from Autohydrolysed Fish Viscera for Nisin andPediocin Production,” Journal of Biotechnology, 112(3), pp 299-311 75 76 Von Wright A and Axelsson L., (2011), “Lactic Acid Bacteria: An Introduction,” In: S Lahtinne, S Salminen, A VonWright and A Ouwehand, Eds., Lactic Acid Bacteria:Microbiological and Functional Aspects, CRC Press,London, pp 1-17 77 Wang H F., Tsai Y S., Lin M L and Shau-Mei O A (2006) Comparison of Bioactive Components in GABA Tea and Green Tea Produced in Taiwan Food Chem., 96: 648-653 78 Wang J.J.; Lee C.L.; Pan T.M (2003) Improvement of monacolin K, caminobutyric acid and citrinin production ratio as a function of environmental conditions of Monascus purpureus NTU 601 J Ind Microbiol Biotechnol 30, 669–676 79 Wegkamp A., Teusink W M De Vos and E J Smid (2010),“Development of a Minimal Growth Medium for Lactobacillus plantarum,” Letters in Applied Microbiology, 50, pp 57-64 80 Wong C G., Bottiglieri T., Snead O C (2003) GABA, gammahydroxybutyric acid, and neurological disease Annals of Neurology, 54(6), 3–12 81 Yang S.Y.; Lu F.X.; Lu Z.X.; Bie X.M.; Jiao Y.; Sun L.J.; Yu B (2008) Production of gamma-aminobutyric acid by Streptococcus salivarius subsp thermophilus Y2 under submerged fermentation Amino Acids 34, 473-478 82 Yang X R., Ye C X., Xu J K and Jiang Y M ( 2007) Simultaneous Analysis of Purine Alkaloids and Catechins in Camellia sinensis, Camellia ptilophylla and Camellia assamica var kucha by HPLC Food Chem., 300, pp 1132-1136 83 Yoshimura M., Toyoshi T., Sano A., Izumi T., Fujii T., Konishi C., Inai S., Matsukura C., Fukuda N., Ezura H., & Obata A (2010) Antihypertensive effect of a γ-aminobutyric acid rich tomato cultivar ‘DG03-9’ in spontaneously hypertensive rats Journal of Agricultural and Food Chemistry, 58, 615–619 84 Yuan Q and G T Furuta (2003), “Insights into Milk ProteinAllergy: Microenvironment Matters,” Gastroenterol, 124(1), pp 259-261 76 85 Yuan-Chi Su, Jyh-Jye Wang, Tzu-Tsen Lin, Tzu-Ming Pan (2003) Production of the secondary metabolites c-aminobutyric acid and monacolin K by Monascus J.I.M.Biotechnol 30:41-46 86 Zhao M., Ma Y.,Wei Z Z., Yuan W X., Li Y L., Zhang C H., Xue X T., Zhou H J (2011) Determination and comparison of γ-aminobutyric acid (GABA) content in pu-erh and other types of Chinese tea Journal of Agricultural and Food Chemistry, 59(8), 3641–3648 WEB 87 https://en.wikipedia.org/wiki/Gamma-Aminobutyric_acid 88 https://www.sciencedirect.com/science/article/pii/S000527280800131X 77 PHỤ LỤC Bảng 3.1 Sàng lọc chủng lactic có khả sinh enzyme glutamatedecarboxylase Lần Lần TT Tên chủng M2 1.367 M3.1 0.587 M3.2 1.592 M3.4 2.518 + 2.682 M4.1 1.277 + 1.581 M4.2 0.89 + 0.876 M4.3 1.869 + 1.778 M5.1 1.505 M5.2 0.654 10 M5.4.1 1.781 11 M5.4.2 1.519 12 M5.5 2.869 13 M5.6 1.367 14 M5.7 2.47 + 2.569 15 M5.8 2.871 16 M5.8.1 1.334 17 M5.8.2 2.166 + 2.224 18 M6 1.366 19 M7.1.1 1.213 + 1.576 20 M7.1.2 1.284 + 1.577 21 M7.2.1 2.277 + 2.569 22 M7.2.2 0.978 23 M8.1 1.103 24 M8.2 1.611 + 1.569 25 M24.4 2.277 + 1.885 26 M24.5 1.789 27 M24.6 2.202 + 2.128 OD600 Kết OD600 78 Lần Kết OD600 Lần Kết OD600 + 2.452 + 2.389 + 2.273 + 2.355 + 1.254 Kết 28 M25.1.1 1.557 + 1.741 29 M25.1.2 2.213 + 2.37 + 30 M25.2 1.303 + 1.67 + 31 M25.3 2.873 32 M25.4.1 1.536 + 1.794 + 33 M25.4.2 0.87 34 M25.5 1.052 + 1.482 35 M25.5.1 1.252 + 1.282 36 M25.5.2 1.538 + 1.982 37 MK1 1.528 + 1.075 38 MK2.1 1.898 + 1.978 39 MK2.2 2.333 40 MK3.1 2.589 + 2.606 41 MK3.2 1.463 42 MK3.3 1.167 43 MK3.4 1.584 + 1.148 44 MK6.1 1.526 + 1.693 + 45 MK6.3 1.54 46 MK8 1.49 47 MK10 2.385 48 MK11.1 1.506 49 MK13.1 1.047 + 1.482 + 1.487 50 MK13.2 1.19 + 1.064 + 1.098 51 MK13.3 1.138 + 1.482 52 MK13.4 2.606 53 MK13.5 1.554 54 MK13.6 1.227 55 MK13.7 1.292 + 1.834 56 MK13.8 1.19 57 MK14.1 1.131 + 1.606 58 MK14.2 1,199 79 2.433 + 1.662 + 1.931 + + 2.402 + 1.954 59 MK15 2.701 60 MK17.2 1.517 61 MK18.2 1.887 62 MK18.3 1.414 63 MK19.2 1.494 64 MK21.1 1.583 65 MK22 66 + 1.77 + 1.539 1.155 + 0.989 MK23 2.142 + 2.289 67 MK23.3 1.655 68 MK23.4 1.01 69 MK24.1 1.865 70 MK24.3 1.215 71 MK25.5.1 0.825 72 T5.1 1.07 73 T5.2 1.303 + 1.576 74 T6.1 1.082 75 T7.1 2.609 76 T7.2 2.482 77 T7.3 1.203 78 T7.5 2.482 79 T7.6 1.843 80 T11.4 0.779 + 0.655 81 T12.1 1.405 82 T12.1a 1.159 83 T12.2 0.898 84 T12.3 0.978 85 T12.4 1.311 86 T12.5 1.078 87 T13.1 1.818 88 T13.2 1.042 89 T13.3 1.297 80 + 1.214 + 2.072 90 Lac1 1.317 91 Lac2 1.467 92 Lac3 2.482 93 LacTQ 1.503 94 HKT1 1.127 95 M9.1 2.482 96 M9.2 2.492 97 M9.3 2.482 98 M9.4 1.03 99 M12.1 1.967 + 1.449 101 VTCC-B-399 2.571 + 2.458 102 VTCC-B-402 2.382 + 2.021 104 VTCC-B-421 2.593 + 2.611 105 VTCC-B-422 1.344 + + 1.399 + 2.017 + 2.591 + 2.591 + + 2.668 + 2.668 + 100 VTCC-B-384 1.772 103 VTCC-B-405 2.602 106 VTCC-B-423 1.624 107 VTCC-B-424 1.124 108 VTCC-B-426 1.401 109 VTCC-B-427 2.566 110 VTCC-B-430 2.57 111 VTCC-B-431 2.603 112 VTCC-B-433 2.571 113 VTCC-B-439 2.688 + 2.883 114 VTCC-B-451 2.569 + 2.608 117 VTCC-B-397 1.779 + 2.617 118 VTCC-B-411 2.42 + 2.603 119 VTCC-B-437 1.848 + 1.455 120 VTCC-B-447 + 1.664 115 VTCC-B-453 1.327 116 VTCC-B-454 0.953 1.98 81 121 VTCC-B-448 1.723 122 M21.4 1.562 123 M10.2 2.301 124 M10.3 1.044 125 M10.4 0.989 126 M10.5 1.334 127 M11.1 2.067 128 M11.3 1.638 129 M11.4 2.501 130 M11.5 1.017 131 M11.6 2.663 132 M13.1 1.552 133 M13.6.1 1.005 134 M13.6.2 1.287 135 M14.1 1.056 136 M14.2 2.031 137 M14.3 0.783 138 M16 0.934 139 M21.1 1.478 140 M21.2 2.156 141 M21.6 1.305 142 M22.1 2.021 143 M23.1 1.909 144 M23.3 1.172 145 M24.1 0.862 146 M24.2 0.993 147 M21.5 1.377 148 0.195 149 2(1) 1.281 150 2(2) 1.039 151 3(1) 2.344 + 1.616 82 152 3(2) 1.701 153 3(3) 2.345 154 2.347 155 0.668 156 2.185 157 2.349 158 8(1) 0.776 159 8(2) 2.346 160 10 2.351 161 11 2.353 162 12 2.355 163 13(1) 2.344 164 13(2) 1.508 165 14 166 + 2.258 + 2.205 2.356 + 2.338 + 2.308 + 2.298 15 2.358 + 2.368 + 2.504 + 2.633 167 16(1) 2.357 + 2.359 + 2.615 + 2.801 168 16(2) 2.401 169 17(1) 2.352 170 17(2) 2.354 171 18 2.344 172 19 1.41 173 20 1.817 174 21(1) 0.674 175 21(2) 2.131 176 22 2.344 177 23 0.624 + 1.354 178 24(1) 1.058 179 24(2) 2.344 180 25 1.246 181 26 2.344 182 28 1.235 + 1.461 + 1.126 83 183 29(1) 2.764 184 29(2) 1.253 185 30(1) 2.764 186 30(2) 1.012 + 0.998 187 31(1) 1.405 + 1.717 188 31(2) 1.413 + 1.734 189 32 2.412 190 33 2.764 + 2.651 + 191 34(1) 0.764 + 0.978 + 0.823 192 34(2) 1.106 193 35 1.874 194 36 2.764 195 37 2.764 196 38 1.764 + 1.357 + 1.846 197 39(1) 2.764 198 39(2) 1.67 199 40(1) 0.94 200 40(2) 2.764 201 41 2.764 202 42 2.764 203 43 2.764 204 44 2.764 205 46 2.764 206 47 2.256 207 48 2.764 208 49 1.556 209 50 2.764 210 51 2.764 211 52(1) 2.764 + 2.258 + 2.163 212 52(2) 1.589 213 53(1) 2.264 + 1.781 + 2.102 84 + 0.956 + 2.189 214 53(2) 1.771 215 54 1.09 216 55 2.764 217 56 2.764 218 57 2.764 219 58 2.764 220 60 2.743 221 61(1) 1.893 222 61(2) 1.892 223 62 224 + 1.013 + 1.361 + 1.372 2.089 + 2.259 + 1.504 + 1.621 63 2.281 + 1.982 + 2.172 225 64 1.709 + 1.982 + 1.819 + 1.889 226 65(1) 1.76 227 65(2) 2.281 + 2.266 + 2.207 228 66 2.564 + 2.768 + 2.661 + 2.661 + 229 67 2.442 + 2.571 + 2.648 + 2.448 + 230 68 1.979 231 69 2.515 + 2.757 + 2.183 + 2.185 232 70 2.471 + 2.275 + 2.815 + 2.821 233 71 2.53 234 72 2.505 235 73 1.656 236 74 2.468 237 75 2.501 238 76 2.606 239 77 2.477 240 78 2.767 + 2.273 + 2.132 + 2.139 241 79 1.37 + 1.119 + 1.444 242 80 2.578 243 81 1.78 244 82 1.475 85 245 83 2.468 246 84 1.688 247 85 1.768 248 86 2.25 249 87 0.983 250 88 0.685 251 89 0.595 252 91 0.542 253 92 1.403 254 93 0.569 255 94 1.533 256 95 2.05 257 96 0.771 258 97 0.98 259 98 0.882 260 99 1.289 261 100 0.697 262 KC2 2.273 263 CC4 0.992 86 ... TỰ NHIÊN Nguyễn Thị Thùy Dương NGHIÊN CỨU KHẢ NĂNG TỔNG HỢP GAMMA -AMINOBUTYRIC ACID (GABA) CỦA VI KHUẨN LACTIC TỪ BỘ GIỐNG VTCC ỨNG DỤNG TRONG LÊN MEN CHÈ GIÀU GABA Chuyên ngành: Sinh học thực... nguồn cung cấp GABA tiện lợi với giá thành rẻ Từ lý chọn đề tài: ? ?Nghiên cứu khả tổng hợp Gamma- aminobutyric acid (GABA) vi khuẩn lactic từ giống VTCC ứng dụng lên men chè giàu GABA. ” Mục tiêu:... mang đến khả sống vi khuẩn lựa chọn - Nghiên cứu điều kiện lên men chè thích hợp tạo GABA cao sử dụng chủng vi khuẩn lactic lựa chọn CHƯƠNG 1: TỔNG QUAN 1.1 Tổng quan vi khuẩn axit lactic (LAB)