BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ Y TẾ TRƢỜNG ĐẠI HỌC Y HÀ NỘI BÙI THỊ MINH PHƢỢNG PHÁT HIỆN NGƢỜI LÀNH MANG GEN BỆNH VÀ CHẨN ĐOÁN TRƢỚC LÀM TỔ BỆNH HEMOPHILIA A BẰNG KỸ THUẬT MICROSATELLITE DNA LUẬN ÁN TIẾN SĨ Y HỌC HÀ NỘI - 2019 BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ Y TẾ TRƢỜNG ĐẠI HỌC Y HÀ NỘI BÙI THỊ MINH PHƢỢNG PHÁT HIỆN NGƢỜI LÀNH MANG GEN BỆNH VÀ CHẨN ĐOÁN TRƢỚC LÀM TỔ BỆNH HEMOPHILIA A BẰNG KỸ THUẬT MICROSATELLITE DNA Chuyên ngành: Hóa sinh M số: 62720112 LUẬN ÁN TIẾN SĨ Y HỌC Ngƣời hƣớng dẫn khoa học: GS.TS Tạ Thành Văn PGS.TS Trần Vân Khánh HÀ NỘI - 2019 LỜI CẢM ƠN Lời xin bày tỏ lòng biết ơn sâu sắc tới GS.TS Tạ Thành Văn, PGS.TS Trần Vân Khánh, cán hƣớng dẫn, đ tận tình bảo truyền đạt kiến thức, kinh nghiệm quý báu, tạo điều kiện tốt cho tơi suốt q trình học tập, nghiên cứu để tơi hồn thành luận án Tơi xin bày tỏ lòng biết ơn chân thành đến: Các cán viên chức Trung tâm nghiên cứu Gen-Protein trƣờng Đại học Y Hà Nội đ giúp đỡ, tạo điều kiện cho thực kỹ thuật nghiên cứu Tôi xin trân trọng cảm ơn: Đảng ủy, Ban Giám hiệu, Phòng Đào tạo Sau Đại học, Bộ mơn Hóa sinh Trƣờng Đại học Y Hà Nội Đảng ủy, Ban Giám hiệu, Phòng chức năng, Bộ mơn-khoa Hóa sinh, Trƣờng Đại học Y Dƣợc Thái Bình đ tạo điều kiện cho tơi suốt q trình học tập nghiên cứu Tơi xin bày tỏ lòng biết ơn tới Nhà khoa học hội đồng đánh giá luận án tiến sỹ cấp sở, cấp trƣờng đ đóng góp cho tơi nhiều ý kiến q báu để tơi hồn thiện luận án đƣợc tốt Cuối cùng, xin ghi nhớ công ơn sinh thành, nuôi dƣỡng tình u thƣơng cha mẹ tơi, cha mẹ chồng ủng hộ, giúp đỡ, động viên chồng hai con, ngƣời thân gia đình, bạn bè, đồng nghiệp đ động viên giúp đỡ tơi tinh thần, vật chất để tơi hoàn thành đƣợc nhiệm vụ học tập, nghiên cứu Trân trọng cám ơn! Hà Nội, tháng 11 năm 2019 Tác giả Bùi Thị Minh Phƣợng LỜI CAM ĐOAN Tôi Bùi Thị Minh Phƣợng, nghiên cứu sinh khóa 34, Trƣờng Đại học Y Hà Nội, chuyên ngành Hóa sinh, xin cam đoan: Đây luận án thân trực tiếp thực dƣới hƣớng dẫn Thầy GS.TS Tạ Thành Văn Cô PGS.TS Trần Vân Khánh Cơng trình khơng trùng lặp với nghiên cứu khác đ đƣợc công bố Việt Nam Các số liệu thơng tin nghiên cứu hồn tồn xác, trung thực khách quan, đ đƣợc xác nhận chấp thuận sở nơi nghiên cứu Tôi xin hoàn toàn chịu trách nhiệm trƣớc pháp luật cam kết này./ Hà Nội, ngày tháng năm 2019 NGƢỜI VIẾT CAM ĐOAN Bùi Thị Minh Phƣợng DANH MỤC CHỮ VIẾT TẮT BVSKTE Bảo vệ sức khoẻ trẻ em CK Creatine Kinase DMD Duchenne Muscular Dystrophy (Bệnh Duchene) DNA Deoxyribo Nucleic Acid FISH Fluorescent In Situ Hybridization ( Lai huỳnh quang) ICSI Intracytoplasmic Sperm Injection IVF In Vitro Fertilization ( Thụ tinh ống nghiệm) KB Kilo Base MLPA Multiplex Ligation Probe Amplification NST X Nhiễm sắc thể X NST Y Nhiễm sắc thể Y PCR Polymerase Chain Reaction PGD Preimplantation Genetic Diagnosis PGT Preimplantation genetic testing RNA Ribo Nucleic Acid RT – RCR Reverse Transcription PCR STR Short Tandem Repeat MỤC LỤC ĐẶT VẤN ĐỀ CHƢƠNG 1: TỔNG QUAN TÀI LIỆU 1.1 ĐẶC ĐIỂM CHUNG BỆNH HEMOPHILIA A 1.1.1 Định nghĩa 1.1.2 Lịch sử nghiên cứu 1.1.3 Dịch tễ bệnh học 1.1.4 Đặc điểm lâm sàng chẩn đoán bệnh hemophilia A 1.2 ĐẶC ĐIỂM DI TRUYỀN VÀ CƠ SỞ PHÂN TỬ HEMOPHILIA A 1.2.1 Cơ chế di truyền bệnh hemophilia A 1.2.2 Cơ sở phân tử bệnh hemophilia A 1.3 NGƢỜI LÀNH MANG GEN BỆNH HEMOPHILIA A 14 1.3.1 Đặc điểm chung ngƣời mang gen bệnh 14 1.3.2 Cơ chế di truyền ngƣời mang gen bệnh hemophilia A 14 1.3.3 Triệu chứng ngƣời mang gen 16 1.3.4 Các phƣơng pháp phát ngƣời lành mang gen bệnh 17 1.4 CHẨN ĐOÁN TRƢỚC SINH BỆNH HEMOPHILIA A 23 1.4.1 Sàng lọc thai phụ có nguy cao sinh bị bệnh hemophilia A 23 1.4.2 Xét nghiệm chẩn đoán trƣớc sinh 24 1.5 PHƢƠNG PHÁP THỤ TINH TRONG ỐNG NGHIỆM (IVF) VÀ QUY TRÌNH CHẨN ĐỐN TRƢỚC LÀM TỔ (PGD) 25 1.5.1 Phƣơng pháp thụ tinh ống nghiệm (IVF) 25 1.5.2 Quy trình chẩn đốn gen trƣớc làm tổ (PGD) 27 1.5.3 Các phƣơng pháp kỹ thuật sinh học phân tử áp dụng việc chẩn đoán trƣớc làm tổ 32 1.6 TÌNH HÌNH NGHIÊN CỨU TRONG NƢỚC VÀ TRÊN THẾ GIỚI VỀ CHẨN ĐOÁN TRƢỚC LÀM TỔ 40 1.6.1 Tình hình nghiên cứu giới Việt Nam 40 1.6.2 Tình hình nghiên cứu chẩn đoán trƣớc làm tổ bệnh hemophilia A 43 CHƢƠNG 2: ĐỐI TƢỢNG VÀ PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 47 2.1 ĐỐI TƢỢNG NGHIÊN CỨU 47 2.2 DỤNG CỤ, TRANG THIẾT BỊ VÀ HÓA CHẤT NGHIÊN CỨU 48 2.2.1 Dụng cụ trang thiết bị 48 2.2.2 Hoá chất 49 2.2.3 Trình tự mồi cho phản ứng 51 2.3 PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 52 2.3.1 Thiết kế nghiên cứu 52 2.3.2 Địa điểm nghiên cứu 54 2.3.3 Quy trình kỹ thuật sử dụng nghiên cứu 54 2.3.4 Quy trình xác định ngƣời lành mang gen bệnh hemophilia A kỹ thuật microsatellite DNA 58 2.3.5 Quy trình chẩn đốn trƣớc làm tổ 61 2.4 ĐẠO ĐỨC NGHIÊN CỨU TRONG Y HỌC 64 CHƢƠNG 3: KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU 65 3.1 KẾT QUẢ PHÁT HIỆN NGƢỜI LÀNH MANG GEN F8 BỊ ĐỘT BIẾN BẰNG KỸ THUẬT MICROSATELLITE DNA 65 3.1.1 Kết xác định marker dị hợp tử gen F8 bệnh nhân ngƣời lành mang gen bệnh kỹ thuật microsatellite DNA 65 3.1.2 Kết phát ngƣời lành mang gen bệnh hemophilia A kỹ thuật microsatellite DNA 69 3.2 KẾT QUẢ CHẨN ĐOÁN TRƢỚC LÀM TỔ BỆNH HEMOPHILIA BẰNG KỸ THUẬT MICROSATTELITE DNA 91 3.2.1 Kết kích thích buồng trứng thực ICSI 91 3.2.2 Kết chẩn đoán tiền làm tổ gia đình hemophilia A 93 CHƢƠNG 4: BÀN LUẬN 109 KẾT LUẬN 139 KHUYẾN NGHỊ 140 CÁC DANH MỤC CƠNG TRÌNH NGHIÊN CỨU CĨ LIÊN QUAN ĐẾN LUẬN ÁN TÀI LIỆU THAM KHẢO PHỤ LỤC DANH MỤC BẢNG Bảng 2.1: Trình tự mồi khuếch đại STRs sử dụng nghiên cứu 51 Bảng 2.2: Thành phần phản ứng master mix 56 Bảng 2.3: Chu trình nhiệt phản ứng PCR sequencing 56 Bảng 2.4: Thành phần điều kiện phản ứng single-PCR khuếch đại STR đặc hiệu gen F8 59 Bảng 2.5: Chu trình nhiệt phản ứng single-PCR 59 Bảng 2.6: Thành phần điều kiện phản ứng multiplex-PCR khuếch đại STR đặc hiệu gen F8 vùng gen đặc hiệu NST giới tính 62 Bảng 2.7: Chu trình nhiệt phản ứng multiplex-PCR 62 Bảng 2.8: Thành phần hóa chất sử dụng cho điện di mao quản 63 Bảng 3.1: So sánh kết phát ngƣời lành mang gen bệnh phƣơng pháp 88 Bảng 3.2: Tỷ lệ phát ngƣời lành mang gen bệnh kỹ thuật microsatellite DNA 89 Bảng 3.3: Kết đánh giá tỷ lệ phôi phát triển sau thụ tinh 91 Bảng 3.4: Kết đánh giá phát triển phôi thu đƣợc ngày 92 Bảng 3.5: Kết sinh thiết phơi chẩn đốn gen đánh giá phát triển phôi sau sinh thiết ngày 93 DANH MỤC HÌNH Hình 1.1 Hình ảnh chảy máu khớp gối bệnh nhân hemophilia A Hình 1.2 Hình ảnh chảy máu bệnh nhân hemophilia A Hình 1.3 Kiểu gen kiểu hình bố mẹ hệ sau Hình 1.4 Vai trò yếu tố VIII q trình đơng máu huyết tƣơng 10 Hình 1.5 Vị trí gen mã hóa yếu tố VIII NST X 10 Hình 1.6 Cấu trúc gen protein FVIII 11 Hình 1.7 Protein yếu tố VIII với vùng chức 12 Hình 1.8 Sơ đồ di truyền ngƣời mẹ mang gen kết với bố bình thƣờng15 Hình 1.9 Sơ đồ di truyền ngƣời mẹ bình thƣờng kết với bố bị bệnh 15 Hình 1.10 Sơ đồ phả hệ ngƣời mẹ mang gen kết hôn với bố bình thƣờng 18 Hình 1.11 Sơ đồ di truyền ngƣời mẹ mang gen kết hôn với bố bị bệnh 19 Hình 1.12 Quy trình thực thụ tinh ống nghiệm 27 Hình 1.13 Sinh thiết phơi bào giai đoạn blastomere cho chẩn đốn PGD 30 Hình 1.14 Ứng dụng kỹ thuật FISH chẩn đốn xác định giới tính số lƣợng nhiễm sắc thể 34 Hình 1.15 Sơ đồ phả hệ gia đình mang gen đột biến đảo đoạn intron 22 gây bệnh hemophilia A 44 Hình 1.16 Hình ảnh marker dị hợp tử xác định đột biến gen F8 gây bệnh hemophilia A 45 Hình 1.17 Kết multiplex PCR sử dụng marker amel, SRY, FXS1108, DXS9798, phôi bào sinh thiết 46 Hình 2.1 Kết STR lựa chọn marker dị hợp tử 59 Hình 2.2 Kỹ thuật Microsatellite DNA chẩn đốn đột biến gen gây bệnh di truyền lặn liên kết nhiễm sắc thể giới tính X 60 Hình 2.3 Kết STR xác định giới tính 63 Hình 3.1 Kết đồng hợp tử đồng hợp tử STR 65 32 Bagnall RD, Giannelli F, Green PM (2006) Int22h-related inversions causing hemophilia A: a novel insight into their origin and a new more discriminant PCR test for their detection J Thromb Haemost, 4, 591–598 33 Franchini M, Mannucci PM (2009) Multiple gene interaction and modulation of hemostatic balance Clin Chem Lab Med, 47 (2), 1455– 1460 34 Shrestha S, Dong S, Zuhua L,et al (2016) Evaluation of factor VIII polymorphic short tandem repeat markers in linkage analysis for carrier diagnosis of hemophilia A Biomedical Reports, 5, 228 -232 35 W F O Hemophilia (2012) Carriers and women with hemophilia Carriers and women with hemophilia WFH 50 years of advancing treatment for all, 36 Nguyễn Thị Mai,Nguyễn Anh Trí (2015) Ngƣời mang gen Hemophilia Hội r i lo n đ ng máu iệt nam, 1-9 37 Simpson J, et al (2005) Carriers of Hemophilia What you need to know J Natl Cancer Inst Monogr, 87-90 38 Oldenburg J, GrimmT, et al (1993) Direct and Indirect Estimation of the Sex Ratio of Mutation Frequencies in Hemophilia A Am J Hum Genet, 53, 1229-1238 39 Lƣu Vũ Dũng, Trần Huy Thinh, Tạ Thành Văn, Trần Vân Khánh CS (2014) Phát đột biến gen F8 gây bệnh hemophilia A T p chí Nghiên cứu Y học, 91(5), 13-18 40 Liliana CR, Claudia PR , Irene BL, et al (2005) Genotyping the Hemophilia Inversion Hotspot by Use of Inverse PCR Clinical Chemistry, 51, 1154–1158 41 Richard DB, Naushin W, et al (2019) Recurrent inversion breaking intron of the factorVIII gene is a frequent cause of severe hemophilia A Blood, 99 (1), 168 - 174 42 Jan PS, Cathal J.MC ELgunn, Raymon W, et al (2002) Relative quantification of 40 nucleic acid sequences by multiplex ligationdependent probe amplification Nucleic Acids Res, 30 (12), e57 43 Steptoe PC, Edwards RG (1978) Birth after the reimplantation of a human embryo Lancet, (8085), 366 44 Hamilton BE, Ventura SJ (2006) Fertility and abortion rates in the United States, 1960-2002 Int J Androl, 29, 34-45 45 Robert Schoen and Romo VC (2005) Timing effects on first marriage: twentieth-century experience in England and Wales and the USA Popul Stud (Camb), 59, 135-146 46 Nagy ZP (2000) Sperm centriole disfunction and sperm immotility Mol Cell Endocrinol,, 166, 59-62 47 Ziebe S, Petersen K, Lindenberg S (1997) Embryo morphology or cleavage stage: how to select the best embryos for transfer after in-vitro fertilization Hum Reprod, 12 (7), 1545–1549 48 Jones GM, Cram DS, Song B, et al (2008) Novel strategy with potential to identify developmentally competent IVF blastocysts Human Reproduction, 23, 1748–1759 49 Callahan TL, Hall JE, Ettner SL,et al (1994) The economic impact of multiple-gestation pregnancies and the contribution of assistedreproduction techniques to their incidence N Engl J Med, 331, 244-249 50 Wenstrom KD, Syrop CH, Hammitt DG, Van Voorhis BJ (1993) Increased risk of monozygotic twinning associated with assisted reproduction Fertil Steril, 60, 51 V van der Schoot, W Dondorp, J.C.F.M Dreesen, et al( 2019) Preimplantation genetic testing for more than one genetic condition: clinical and ethical considerations and dilemmas Human Reproduction,34 (6), 1146-1154 52 Braude P, Pickering S, Flinte F, Ogilvie CM (2002) Preimplantation genetic diagnosis Nature Reviews, 3, 941-955 53 Baruch S, Kaufman D J, Hudso K L (2008) Preimplantation genetic screening: a survey of in vitro fertilization clinics Genetics IN Medicine, 10 (9), 685–690 54 Harton G.L, Harper J.C Coonen E, et al (2010) ESHRE PGD consortium best practice guidelines for fluorescence in situ hybridization-based PGD Human Reproduction, (0), 1-8 55 Handyside AH, Hardy K, Winston RM (1990) Pregnancies from biopsied human preimplantation embryos sexed by Y-specific DNA amplification Nature, 344, 768–770 56 Handyside AH, Jonh G.L,Tarin JJ,et al (1992) Birth of a normal girl after in vitro fertilization and preimplantation diagnostic testing for cystic fibrosis N Engl J Med, 327, 905–509 57 Griffin DK, Handyside AH, Harper JC, (1994) Clinical experience with preimplantation diagnosis of sex by dual fluorescent in situ hybridization J Assist Reprod Genet, 11, 132–143 58 Harper JC, Delhanty JD (1996) Detection of chromosomal abnormalities in human preimplantation embryos using FISH J Assist Reprod Genet, 13, 137–139 59 Dr Rechitsky S, et al (2002) Preimplantation genetic diagnosis for cancer predisposition Reprod Biomed Online, 5, 148-155 60 Van de Velde, Vos AD, Sermon K et al (2000) Embryo implantation after biopsy of one or two cells from cleavage-stage embryos with a view to preimplantation genetic diagnosis Prenat Diag, 20, 1030–1037 61 De Vos A, Van Steirteghem A (2001) Aspects of biopsy procedures prior to preimplantation genetic diagnosis Prenat Diagn, 21, 767–780 62 Chen HS, Chen SU, Ma GC, et al (2017) Preimplantation genetic diagnosis and screening: Current status and future challenges Journal of the Formosan Medical Association, 1-7 63 Mertzanidou A, Wilton L, Cheng J et al (2013) Microarray analysis reveals abnormal chromosomal complements in over 70% of 14 normally developing human embryos Human Reproduction, 28, 256–264 64 Fragouli E, Alfarawati S, Daphnis D.D et al (2011) Cytogenetic analysis of human blastocysts with the use of FISH, CGH and aCGH: scientific data and technical evaluation Human Reproduction, 26, 480–490 65 Vassena R, Boue S, Gonzalez-Roca E et al (2011) Waves of early transcriptional activation and pluripotency program initiation during human preimplantation development Development, 38, 3699–3709 66 Fragouli E, Lenzi M, Ross R et al (2008) Comprehensive molecular cytogenetic analysis of the human blastocyst stage Human Reproduction, 23, 2596–2608 67 Veiga A, Sandalinas M, Benkhalifa M et al (1997) Laser blastocyst biopsy for preimplantation diagnosis in the human Zygote, 5, 351–354 68 Sermon (2002) Current concepts in preimplantation genetic diagnosis (PGD): a molecular biologist's view Hum Reprod, 8, 1–10 69 Wells D, Sherlock JK (1998) Strategies for preimplantation genetic diagnosis of single gene disorders by DNA amplification Prenat Diagn, 18, 1389–1401 70 Fiorentino F, Biricik A, Nuccitelli A (2006) Strategies and clinical outcome of 250 cycles of Preimplantation Genetic Diagnosis for single gene disorders Hum Reprod, 21 (3), 670–684 71 Woodson A.H, Muse K.I,Lin H et al (2014) Breast Cancer, BRCA Mutations, and Attitudes Regarding Pregnancy and Preimplantation Genetic Diagnosis TheOncologist, 19, 797–804 72 Mullis K, Faloona F, Scharf S et al (1986) Specific enzymatic amplification of DNA in vitro: the polymerase chain reaction Cold Spring Harb Symp Quant Biol, 51 (1), 263–273 73 Dreesen JC, Jacobs LJ, Bras M, et al (2000) Multiplex PCR of polymorphic markers flanking the CFTR gene, a general approach for preimplantation genetic diagnosis of cystic fibrosis Mol Hum Reprod, (5), 391–396 74 Ray PF, Vekemans M, Munnich A (2001) Single cell multiplex PCR amplification of five dystrophin gene exons combined with gender determination Mol Hum Reprod, (5), 489–494 75 Griffin D K, Handyside AH, Harper JC et al (1994) Clinical experience with preimplantation diagnosis of sex by dual fluorescent in situ hybridization J Assist Reprod Genet, 11, 132–143 76 Harton GL, Coonen E et al (2001) ESHRE PGD consortium best practice guidelines for fluorescence in situ hybridization-based PGD Hum Reprod, 26 (1), 25–32 77 Malmgren.H, White.I, Johansson.S et al (2006) PGD for dystrophin gene deletions using fluorescence in situ hybridization Molecular Human Reproduction, 12 (5), 353-356 78 Colls P, Escudero T, Cekleniak N et al (2007) Increased efficiency of preimplantation genetic diagnosis for infertility using „„no result rescue" Fertility and Sterility, 88, 53–61 79 Findlay I, Quirke P, Hall J & Rutherford A (1996) Fluorescent PCR: a new technique for PGD of sex and single-gene defects J Assist Reprod Genet, 13, 96–103 80 Sermon K, De Vos A, Velde HV et al(1998) Fluorescent PCR and automated fragment analysis for the clinical application of preimplantation genetic diagnosis of myotonic dystrophy (Steinert's disease) Mol Hum Reprod 4,791–796 81 Miah G, Mohd Y, Rafii et al (2013) A Review of Microsatellite Markers and Their Applications in Rice Breeding Programs to Improve Blast Disease Resistance Int J Mol Sc., 14, 22499-22528 82 Raquel M Fernández, Ana Peciña et al (2015) Experience of Preimplantation Genetic Diagnosis for Hemophilia at the University Hospital Virgen Del Rocío in Spain: Technical and Clinical Overview BioMed Research International, 1-9 83 Trần Vân Khánh, Trần Quốc Đạt, Phạm Lê Anh Tuấn cs (2016) Chẩn đoán tiền làm tổ bệnh Hemophilia A kỹ thuật microsatellite T p chí nghiên cứu y học, 100 (2), 10-17 84 Hussey ND, Donggui H, Froiland DA,et.al (1999) Analysis of five Duchenne muscular dystrophy exons and gender determination using conventional duplex polymerase chain reaction on single cells Mol Hum Reprod, (11), 1089-1094 85 Miller DT, A dam MP,Aradhya S (2010) Consensus statement: chromosomal microarray is a first-tier clinical diagnostic test for individuals with developmental disabilities or congenital anomalies Am J Hum Genet, 86, 749–764 86 Laurie AD, Hill AM, Harraway, et al (2010) Preimplantation genetic diagnosis for hemophilia A using indirect linkage analysis and direct genotyping approaches J Thromb Haemost, 8,783 -789 87 Harraway JR, Smith MP, George PM (2006) A highly informative, multiplexed assay for the indirect detection of hemophilia A using fivelinked microsatellites Hemophilia A linkage assa, 4, 587 - 590 88 Machado FB, Medina - Acosta E (2009) High-resolution combined linkage physical map of short tandem repeat loci on human chromosome band Xq28 for indirect haemophilia A carrier detection Haemophilia, 15 (1), 297-308 89 Saha A, nayak S, Mani KR et al (2011) A set of five microsatellite markers linked to F8 gene can detect haemophilia A carriers across India Haemophilia, 17, e928 - e935 90 Shrestha.S, Dong.S, Li.Z (2016) Evaluation of factor VIII polymorphic short tandem repea markers in linkage analysis for carrier diagnosis of hemophilia A BIOMEDICAL REPORTS, 5, 228 - 232 91 Slaoui M, Repesse Y, Ferrandis M ,et.al (2007) Factor VIII (FVIII) gene mutations in 120 patients with hemophilia A: detection of 26 novel mutations and correlation with FVIII inhibitor development Thrombosis and Haemostasis,, 5, 1469–1476 92 Lƣu Vũ Dũng (2014) Nghiên cứu xác định đột biến gen F8 gây bệnh hemophillia A Luận án tiến sĩ y học, 93 Ding.L.Q, Lu.Y.L,_Dai J et al (2012) Characterisation and validation of a novel panel of the six short tandem repeats for genetic counselling in Chinese haemophilia A pedigrees Haemophilia, 1-5 94 Bùi Thị Thu Hƣơng, Trần Huy Thịnh, Nguyễn Thị Hà,et al (2014) Phát ngƣời lành mang gen bệnh chẩn đoán trƣớc sinh bệnh Hemophilia A T p chí nghiên cứu y học, 88 (3), 1-9 95 Nguyễn Anh Trí, Nguyễn Thị Mai, Nguyễn Thị Nữ, et al (2012) Nghiên cứu phát hemophilia dựa vào phả hệ gia đình bệnh nhân đ đƣợc chẩn đốn viện Huyết học – Truyền máu TW Y học Việt Nam, 8, 566 - 571 96 Goodeve AC (1998) Advances in carrier detection in haemophilia Haemophilia, 4(4), 358-364 97 Shetty S, Ghosh K, Bhide A et al (2001) Carrier detection and prenatal ldiagnosis in families with hemophilia Natl Med J India, 14,81–83 98 Machado FB, Medina-Acosta E (2009) High-resolution combined linkage physical map of short tandem repeat loci on human chromosome band Xq28 for indirect haemophilia A carrier detection Haemophilia, 15(11), 297-308 99 Massaro JD, Wiezel CEV, Muniz YC et al (2011) Analysis of five polymorphic DNA markers for indirect genetic diagnosis of haemophilia A in the Brazilian population Haemophilia, 17, 936 - 943 100 Bộ trƣởng Bộ Y tế (2016) Hƣớng dẫn chẩn đoán điều trị bệnh Hemophilia A Quyết định s 4984/QD-BYT, Hà Nội, ngày 17 tháng 19 năm 2016 101 Josephson N (2013) The hemophilias and their clinical management Hematology Am Soc Hematol Educ Program, 261-267 102 World Federation of Hemophilia (2012) Carriers and women with hemophilia.WFH 50 years of advancing treatment for all 103 Gill Swallow (2013) Guideline for the Obstetric Management of Carriers of Haemophilia A and B, NHS Nottingham University Hospitals Cookie Disclaime 104 Trần Thị Liên Trần Thị Thanh Hƣơng (2014) Di truyền đơn gen, Di truyền y học Nhà xuất giáo dục, 146-149 105 Leuer M, Oldenburg J Lavergne JM (2001) Somatic mosaicism in hemophilia A: a fairly common event Am J Hum Genet, Epub 2001 Jun 14, 69(61), 75-87 106 Stuart Lavery (2008) Preimplantation genetic diagnosis of haemophilia British Journal of Haematology, 144, 303 – 307 107 Kulkarni R, Soucie JM, Lusher J,et al (2009) Haemophilia Treatment Center Network Investigators; Sites of initial bleeding episodes, mode of delivery and age of diagnosis in babies with haemophilia diagnosed before the age of years a report from The Centers for Disease, K Rao (2010) N obel Prize for scientist Professor Robert G Edwards J Hum Repro d Sci,, (3), 20 P R 201 0-10-04 (2010) The No bel Prize in Phy siology or Medicine 2010 to Robert G Edwards for the develo pment of in vitro fertilizatio n Nobel Prize S M Wang J (200 6) In vitro fertilization (IV F): a review of decades of clinical inno vation and technolog ical advancement Therapeutics an d Clinica l Risk Man agement, (4), 355-3 64 Munne.s (20 06) Chromosome abnormalities and their relations hip to morphology and development of human embry os Reproductive BioMedicine Online, 12 (2), 234-25 S C Mu nne, J (1998) Chromosome abnormalities in human embry os Hum Reprod, 4, 842-855 C S C Rub io, F Vidal,et al (2003) Chromosomal abnormalities and embry o development in recurrent miscarriage couples Hum Reprod, 18, 82–188 M S (2006) Chromosome abnormalities and their relation ship to morphology and development of human embry os Reprod Biomed Online, 12, 23 4–253 P E Mersereau JE, Zhang X, Milad MP (2008) Preimplantation genetic screening to improve in vitro fertilization pregnancy rates: a prospective randomized controlled trial Fertil Steril, 90, 287–12 88 F J Munne S, Warner A,et.al (2006) Preimplantation genetic diagnos is significantly reduces pregnancy loss in infertile coup les: a multicenter stu dy Fertil Ster il, 5, 326– 332 10 J M M Lau E C, Ball C.B,et.al (2012) Preimplantation Genetic Tes ting :Current Status and Fu ture Prospects In Vitro Fertiliz atio n, 137-154 11 G N Mo utou C, Viville S (200 3) Duplex PCR for preimplantatio n genetic diagn osis (PGD) of spinal muscular atrophy Prenat Diag n, 23, 85–689 12 P P Korzebo A, Mes h kani M , et.al (2013) Hetero zy gosity assessment of five ST R loci located at 5q13 region for preimplantation genetic diagno sis of spinal muscular atrophy Mol Biol Rep, 0, 67–7 13 W I Malmgren H, Johanss on S, et.al (2006) PGD for dy strophin gene deletions usin g fluorescence in situ hy bridization Mo lecular Human Reproduction, 12 (5), 353–35 14 H A M Laurie A.D, Harraway J.R, et.al (2010) Preimplantation genetic diagno sis for hemophilia A using ind irect lin kage analy sis and direct geno ty ping approaches Journal o f Thrombo sis a nd Haemos tasis , 8, 783 –789 15 T P Harton G, Siss on M et al (1996) Preimplantation genetic testing for Marfan sy ndrome Mol Hum Reprod, 2, 71 3–715 16 J Oldenb urg, Anany eva, N M & Saenko, E L (200 4) “Molecular basis of haemophilia A” Haemophilia, 0, 133– 139 17 B H H Graw J, Oldenburg J, et.al (2005) Haemophillia A: from mutation any lisis to new therapies natu re, 6, 488 -5 01 18 L D P Peake I.R, Bou ly jenkov V,et.al (1993) Hemophilia: s trategies for carrier detection and prenatal diagnosis Bulletin of the World Health O rgan ization, 71, 429-458 19 P I Goodeve AC (200 3) “The molecular basis of hemophilia A: genoty pe-phenoty pe relationships and inhib itor development Semin Thromb Hemos t, 29 (1), 23-3 20 D Hải (2014) 000 ng ƣời Việt mắc bệnh “hoàng gia”, A 29.7 167 167/178 248 248/260 215 215 196 196 Vƣơng Đức M Phan thị H Dì: Phan Thị Ph bác: Phan Thị Th Nguyễn Văn Đ c.4996-4997insA, 167 167 167/178 167 178 252 248/252 252/254 256 260 213 213/217 213/215 213/217 217 195 195/198 212 195/212 202 17 8.7 10,7 15.6 48.1 20.8 c.2777-78, p.907ins 9,8 12,9 20.7 41.1 37.8 23.8 10 H19 12 H22 13 H23 14 H25 15 H26 16 H27 17 H06 18 H30 H17.1 H19.0 H19.1 H22.0 H22.1 H23.0 H23.1 H23.2 H25.0 H25.1 H26.0 H26.2 H27.0 H27.2 H06.0 H06.1 H06.2 H06.3 H06.4 H06.5 H30.0 H30.1 H30.2 H30.3 H30.4 Vũ Thị L C Mẹ Nguyễn Thị MinhV Nghuễn Văn A Mẹ Lê Thị Thanh H Lâm Quang Kh Mẹ Dƣơng Thị Thu H bác ruột: Dƣơng Thị Ph Lê Minh Qu Mẹ Lê Thị H Lê Thanh Toàn em gái: Lê Thị Hồng B Nguyễn Thành B Nguyễn Thị X (con gái) Hồng Quốc V mẹ: Phạm Thị Th dì: Đặng Thị Th dì: Đặng Thị H chị em họ: Dƣơng Huyền Tr chị em họ: Dƣơng Trà M Nguyễn Thành Phát Nguyễn Thị H (mẹ) Nguyễn Thị Th Nguyễn Vân Tr (em Ph) ối Nguyễn Thị H 8.4 16.7 13.4 58.2 c2196T>A 10.2 6.7 8.9 54.7 intron22 23.7 13.8 20.9 7.9 6.1 2.6 24.3 5.4 16.9 1095-1096insG 15.1 23.9 27.9 16.9 178 167 167/178 167 167/178 176 166/176 166/177 176 166/176 176 176 177 166/177 176 166/176 176 166/176 166/176 166/176 166 166/177 177 166/177 177 256/260 244 244 252 256 224 224 256 247 247/251 256 251/256 256 256/260 252 248/256 244/260 248/252 248/252 252/260 256 251/256 256 251/256 251 215/217 215 215/217 212 215 213 213/215 213/215 214 212 214 214 215 215 212 212/214 212/214 212/214 212 212/214 214 214 214 214 214 199/202 202 198/202 202 212 200 200/216 200/216 214 214/218 208 202/208 194 194 194 194/216 198/202 198/202 198/206 198/206 208 202/208 208 202/208 202 19 H36 20 H37 21 22 H42 H44 23 H46 24 H47 25 H48 26 H49 H36.0 H36.1 H36.2 H37.0 H37.1 H37.2 H37.3 H37.4 H37.5 H42.0 H42.1 H42.2 H44.0 H44.1 H44.2 H46.0 H46.1 H47.0 H47.1 H48.0 H48.3 H48.4 H49.0 H49.1 H49.2 H49.3 H49.4 Tạ Công M mẹ: Nguyễn Thị Ng em gái: Tạ Thị L Vũ Hải Đ mẹ: Nguyễn Thị Thanh Nh Bác Nguyễn T S Bác Nguyễn Thị Y Bác Nguyễn Thanh Ng Chị họ Bùi Diệu H Nguyễn Kiên Q Mẹ Nguyễn Thị Th Bác Nguyễn Thị Th Phạm Hoàng N Mẹ Phạm Hoàng N chị gái: Phạm Lan Phƣơng Trần Sỹ Ph Mẹ Phạm Thị T Nguyễn Đức A Mẹ Phạm Thị L Nguyễn Tuấn M Lƣu Thị L(dì BN) Tạ Thị H (bà ngoại BN) Nguyễn Mạnh D Mẹ Nguyễn mạnh D dì: Nguyễn Thị H chị họ: Nguyễn Khánh L dì: Hồng Thị H 9.8 174.6 184.5 5092 T>C 34.8 23.8 30.7 31 21.9 eexon 8G>A 23.8 34.9 9.8 39.5 40.6 21.9 30.3 17.8 57.5 15.9 27.8 30.8 12.9 25.7 34.9 8.6 35.5 166 166/177 166/177 177 177 177 177 177 166 166/177 177 166 166/177 166/177 177 177 177 166/177 166 166 166/177 175 175/177 175/177 175/177 175/177 255 251/255 251/255 251 251/255 251/259 247/259 251/255 251/255 252 251 251 251 251/255 251/255 251 251/255 256 256/260 248 248/260 248/256 248 248/259 248 255/259 255/259 212 214 214 214 214 214 214 214 212 212/214 212/214 214 214/216 214/216 212 212 214 212/214 214 214 214 214 214/216 212/214 214/216 214/216 202 202/206 202/206 198 198/202 198/202 198/202 198/215 198/202 198 198/204 198/202 194 194/202 194/202 194 194/202 202 202 208 204/208 208/212 194 194/202 204 194/202 194/202 27 H50 28 H51 29 H54 30 H56 31 H57 32 H58 33 H59 H50.0 H50.1 H50.2 H50.3 H50.4 H50.5 H51.0 H51.1 H54.0 H54.1 H54.2 H56.0 H56.1 Lê Trần Tr Mẹ Lê Trần Tr chị họ: Lê Hồng L Nguyễn Hồng Nh chị họ: Nguyễn Quỳnh H bác: Nguyễn Thị H Lục Săm P mẹ: Lục Thị H Nguyễn Hoàng Ph Nguyễn Thị Kim D Nguyễn Thị H(Dì) Gia H Hồng Thị Ng (Mẹ BN) 4026G>T 24.8 29 111.9 73.2 5.4 34.5 120 23.9 149.3 82.6 43.9 27.5 167 167/178 178 167/178 167/178 167 166 166/177 177 177 177 176 176 256 252/256 252/256 248/252 252/256 252/256 252 252/260 256 256/260 256 256 256/264 213 213/215 215 213/215 213/215 213/215 212 212/214 214 214 214 212 212/214 204 195/204 195/204 195/204 202 199/202 212 206/212 202 202/204 216/218 216 214/216 H57.0 H57.1 H57.2 H57.3 H57.4 H58.0 H58.1 H58.2 H58.3 H59.0 H59.1 H59.2 Phùng Danh H(2016) Lƣơng Thị L(1979) Lƣơng Thị T (1999) Lƣơng Thị y 2004 Lƣơng Thị D 2001 Nguyễn văn Tr 1979 Nguyễn Thùy D 2003 Nguyễn Thị H 2008 Nguyễn Thị Ph1999 Nguyễn Đăng D 2008 Hoàng Thị Mỹ D 1979 Hoàng Thị L 1950 45.6 102.8 57.8 34.9 43.9 12.5 34.8 23.9 28.9 23.8 34.9 30.8 167 167/177 166/177 167/177 167/177 167 167 177 167/177 176 174/176 174 252 252/260 252/264 252/264 260/264 251 251/263 251 251/260 255 255/259 251 212 212/214 212/214 212/214 214 214 214 216 214/217 214 214/216 212 216 200/216 200/216 200/216 200/216 197 197/212 212/214 197/202 202 194/204 204 H60.0 H60.1 H60.2 H60.3 34 H60 H60.4 H60.5 H60.6 H60.7 35 H61 H61.0 H61.1 Đỗ bá Th1958 Đỗ Thị H 1979 Đỗ Thị H 1978 Đỗ Thị H 1983 Nguyễn Thị Hồng Ng (con H60.1) Nguyễn Thị Minh A 1998 Đỗ Thị Huế 1986 Lê Hƣơng Gi (con H60.3)23,9 Nguyễn Văn H Nguyễn Thị Th 75.5 23.9 34.7 45.9 176 166/176 176 176 252 252 252 252/260 214 212/214 214 214 202 194/202 202/206 202/206 23,9 23.6 14.8 176 176 176 244/252 244/252 252 214 214 214 202 202 202 176 252/260 214 202 23.9 166 255 212 202 56.7 166/177 248/255 212/214 202 ... Phát ngƣời lành mang gen bệnh chẩn đoán trƣớc làm tổ bệnh hemophilia A kỹ thuật microsatellite DNA” đƣợc đ a vào nghiên cứu với mục tiêu: Xác định người lành mang gen bệnh hemophilia A kỹ thuật. .. kỹ thuật microsatellite DNA Chẩn đoán trước làm tổ cho người mẹ mang gen bệnh hemophilia A kỹ thuật microsatellite DNA 4 CHƢƠNG TỔNG QUAN TÀI LIỆU 1.1 ĐẶC ĐIỂM CHUNG BỆNH HEMOPHILIA A 1.1.1 Định... mang gen bệnh việc sinh đ a trẻ bị bệnh đ a mang gen bệnh, đ a mang gen bệnh lại có khả sinh đ a bị bệnh Vì vậy, không quản lý hay phát đƣợc ngƣời phụ nữ mang gen bệnh hệ gia tăng tỷ lệ đ a mang