BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO VIỆN HÀN LÂM KHOA HỌC VÀ CÔNG NGHỆ VIỆT NAM HỌC VIỆN KHOA HỌC VÀ CÔNG NGHỆ - TRẦN THU HƯỜNG NGHIÊN CỨU THÀNH PHẦN HÓA HỌC VÀ TÁC DỤNG SINH HỌC CỦA CÂY XÁO TAM PHÂN (PARAMIGNYA TRIMERA (Oliv.) Guill.) VÀ CÂY NHĨ ĐƠNG (MORINDA LONGISSIMA Y Z Ruan) LUẬN ÁN TIẾN SỸ HÓA HỌC Hà Nội – 2020 BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO VIỆN HÀN LÂM KHOA HỌC VÀ CÔNG NGHỆ VIỆT NAM HỌC VIỆN KHOA HỌC VÀ CÔNG NGHỆ - Trần Thu Hường NGHIÊN CỨU THÀNH PHẦN HÓA HỌC VÀ TÁC DỤNG SINH HỌC CỦA CÂY XÁO TAM PHÂN (PARAMIGNYA TRIMERA (Oliv.) Guill.) VÀ CÂY NHĨ ĐƠNG (MORINDA LONGISSIMA Y Z Ruan) Chuyên ngành: Hóa học hợp chất thiên nhiên Mã số: 44 01 17 LUẬN ÁN TIẾN SỸ HÓA HỌC NGƯỜI HƯỚNG DẪN KHOA HỌC: PGS TS NGUYỄN MẠNH CƯỜNG PGS TS ĐỖ THỊ THẢO HÀ NỘI – 2020 LỜI CAM ĐOAN Tôi xin cam đoan: Đây cơng trình nghiên cứu riêng tơi hướng dẫn khoa học PGS.TS Nguyễn Mạnh Cường PGS.TS Đỗ Thị Thảo Các kết thu luận án hoàn toàn trung thực chưa cơng bố cơng trình khác Tác giả luận án LỜI CẢM ƠN Luận án hồn thành Viện Hóa học hợp chất thiên nhiên, Viện Hàn lâm Khoa học Công nghệ Việt Nam Tơi xin bày tỏ lòng biết ơn sâu sắc đến PGS.TS Nguyễn Mạnh Cường PGS TS Đỗ Thị Thảo - người Thầy dành cho hướng dẫn, bảo tận tình suốt trình thực luận án Tôi xin cảm ơn đề tài VAST.04.05/13-14 đề tài KC.10.45/14-15 hỗ trợ kinh phí thực nội dung luận án Để hoàn thành luận án này, nhận giúp đỡ nhiệt tình của: - Các Thầy Cơ giáo, anh chị bạn đồng nghiệp Viện Hóa học hợp chất thiên nhiên - Viện Hàn lâm Khoa học Công nghệ Việt Nam - Các Thầy Cô giáo, anh chị bạn đồng nghiệp Viện Công nghệ Sinh học - Viện Hàn lâm Khoa học Công nghệ Việt Nam - Các Thầy Cô giáo, anh chị bạn đồng nghiệp Học Viện quân Y Tôi xin chân thành cảm ơn đến Học Viện Khoa học Công Nghệ Viện Hàn lâm Khoa học Công nghệ Việt Nam tạo điều kiện giúp đỡ thời gian thực luận án Cuối cùng, xin chân thành cảm ơn gia đình bạn bè cổ vũ, động viên tơi hồn thành luận án Tơi xin trân trọng cảm ơn ! MỞ ĐẦU CHƯƠNG 1: TỔNG QUAN 1.1 Thành phần hóa học tác dụng sinh học chi Paramignya 1.2 Thành phần hóa học tác dụng sinh học chi Morinda 11 1.3 Khái quát phương pháp thử hoạt tính sinh học luận án 23 1.3 Khái qt mơ hình đánh giá tác dụng bảo vệ gan động vật 23 1.3.2 Khái qt mơ hình kháng viêm gan virus B in vitro 26 1.4 Giới thiệu sơ lược đối tượng nghiên cứu .30 1.4.1 Cây Xáo tam phân 30 1.4.2 Cây Nhó đơng 31 CHƯƠNG ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU .33 2.1 Đối tượng nghiên cứu .33 2.2 Phương pháp nghiên cứu 34 2.2.1 Phương pháp phân lập, tinh chế hợp chất 34 2.2.2 Phương pháp xác định cấu trúc hóa học hợp chất 34 2.2.3 Phương pháp đánh giá tác dụng sinh học 35 CHƯƠNG THỰC NGHIỆM VÀ KẾT QUẢ 38 3.1 Đánh giá tác dụng sinh học cao chiết phân đoạn 38 3.2 Phân lập hợp chất từ loài Xáo tam phân .38 3.3 Phân lập hợp chất từ thân rễ lồi Nhó đơng 42 3.4 Đánh giá tác dụng sinh học hợp chất 48 CHƯƠNG THẢO LUẬN KẾT QUẢ 49 4.1 Sàng lọc tác dụng sinh học cao chiết phân đoạn .49 4.1.1 Sàng lọc tác dụng kháng virus viêm gan B in vitro 49 4.1.2 Đánh giá tác dụng bảo vệ gan in vivo cao chiết thân rễ Xáo tam phân 52 4.2 Xác định cấu trúc hóa học hợp chất phân lập từ loài Xáo tam phân 56 4.2.1 Hợp chất PT-1: ostruthin 58 4.2.2 Hợp chất PT-2 (chất mới): ninhvanin .61 4.2.3 Hợp chất PT-3: 6-(2-hydroxyethyl)-2,2-dimethyl-2H-1-benzopyran 64 4.2.4 Hợp chất PT-4: citrusinine-I .65 4.2.5 Hợp chất PT-5 (chất mới): paramitrimerol .67 4.2.6 Hợp chất PT-6: 6-(6-hydroxy-3,7-dimethylocta-2,7-dienyl)-7-hydroxycoumarin 70 4.2.7 Hợp chất PT-7 (chất mới): ninhvanin B .72 4.2.8 Hợp chất PT-8 (chất mới): paratrimerin A 75 4.2.9 Hợp chất PT-9 (chất mới): paratrimerin B .80 4.2.10 Hợp chất PT-10: parabacunoic acid .85 4.3 Xác định cấu trúc hóa học hợp chất phân lập từ lồi Nhó đơng 89 4.3.1 Hợp chất ML-1: Damnacanthal 91 4.3.2 Hợp chất ML-2: Lucidin-ω-methyl ether .92 4.3.3 Hợp chất ML-3: Soranjidiol 94 4.3.4 Hợp chất ML-4: Morindone-5-methyl ether 95 4.3.5 Hợp chất ML-5: Rubiadin .97 4.3.6 Hợp chất ML-6: Rubiadin-3-methyl ether 98 4.3.7 Hợp chất ML-7: Damnacanthol 100 4.3.8 Hợp chất ML-8: Morindone 102 4.3.9 Hợp chất ML-9: 1-hydroxy-2-methyl-6-methoxy anthraquinone 103 4.3.10 Hợp chất ML-10: Morindone-6-methyl ether .105 4.3.11 Hợp chất ML-11: Morindone-6-O-β-Gentiobioside 106 4.3.12 Hợp chất ML-12: Lucidin-3-O-β-Primeveroside 108 4.3.13 Hợp chất ML-13 (chất mới): morinlongoside A 110 4.3.14 Hợp chất ML-14 (chất mới): morinlongoside B 114 4.2.15 Hợp chất ML-15 (chất mới): morinlongoside C 115 4.3.16 Hợp chất ML-16: Geniposidic acid 120 4.3.17 Hợp chất ML-17: 3-O-[β-D-Xylopyranosyl-(1-6)-β-D-glucopyranosyl](3R)-locten-3-ol 121 4.3.18 Hợp chất ML-18: Acteoside 124 4.3.19 Hợp chất ML-19: Cistanoside-E 126 4.3.20 Hợp chất ML-20: Ethyl-β-D-Galatopyranoside 128 4.3.21 Hợp chất ML-21: Isoacteoside 129 4.3.22 Hợp chất ML-22: Quercetin 130 4.4 Đánh giá tác dụng sinh học hợp chất 132 4.4.1 Đánh giá tác dụng kháng virus viêm gan B hợp chất từ Xáo tam phân Nhó đơng 132 4.4.2 Đánh giá tác dụng bảo vệ gan hợp chất ostruthin ninhvanin từ thân rễ Xáo tam phân 135 KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ .140 DANH MỤC HÌNH Hình Cây Xáo tam phân (Ảnh Nguyễn Mạnh Cường) 33 Hình 2 Cây Nhó Đơng (Ảnh Nguyễn Mạnh Cường) 33 Hình Cấu trúc hợp chất phân lập từ thân rễ Xáo tam phân 57 Hình Phổ 1H-NMR hợp chất PT-1 59 Hình Tương tác HMBC hợp chất PT-1 59 Hình 4 Phổ 1H-NMR hợp chất PT-2 62 Hình Phổ HMBC hợp chất PT-2 63 Hình Phổ 1H-NMR hợp chất PT-5 68 Hình Tương tác HMBC NOESY hợp chất PT-5 .68 Hình Tương tác phổ COSY, HMBC, NOESY hợp chất PT-6 70 Hình Phổ 1H-NMR hợp chất PT-7 73 Hình 10 Tương tác COSY, NOESY HMBC hợp chất PT-7 73 Hình 11 Phổ 1H-NMR hợp chất PT-8 76 Hình 12 Tương tác COSY, NOESY HMBC hợp chất PT-8 78 Hình 13 Phổ 1H-NMR hợp chất PT-9 81 Hình 14 Một số tương tác phổ COSY, HMBC NOESY PT-9 82 Hình 15 Phổ1H-NMR hợp chất PT-10 .86 Hình 16 Một số tương tác phổ 2Dcủa hợp chất PT-10 87 Hình 17 Phổ 1H NMR hợp chất ML-13 111 Hình 18 Phổ 1H -NMR hợp chất ML-14 115 Hình 19 phổ 1H-NMRcủa hợp chất D-glucose .116 Hình 20 Phổ tương tác HMBC hợp chất ML-15 .119 Hình 21 Hình ảnh tiêu vi thể tế bào gan độ phóng đại 200X 139 DANH MỤC BẢNG Bảng Kết thử gây độc tế bào HepG2.2.15 49 Bảng Kết đánh giá mức độ biểu HBsAg 50 Bảng 3.Ảnh hưởng cao metanol cao nước lên nồng độ aminotransferase huyết chuột BALB/c bị nhiễm độc paracetamol (n=6) .52 Bảng 4.Ảnh hưởng cao metanol cao nước lên nồng độ cholesterol toàn phần huyết chuột BALB/c bị nhiễm độc paracetamol (n=6) 53 Bảng Khối lượng gan chuột lơ thí nghiệm 54 Bảng Quan sát hình thái trực quan gan chuột lơ thí nghiệm 55 Bảng Số liệu phổ hợp chất PT-1 60 Bảng Số liệu phổ hợp chất PT-2 .63 Bảng Số liệu phổ hợp chất PT-3 65 Bảng 10 Số liệu phổ hợp chất PT-4 66 Bảng 11 Số liệu phổ hợp chất PT-5 69 Bảng 12 Số liệu phổ hợp chất PT-6 71 Bảng 13 Số liệu phổ hợp chất PT-7 73 Bảng 14 Bảng số liệu phổ hợp chất PT-8 78 Bảng 15 So sánh kiện phổ hợp chất PT-8 với hợp chất bisparadin 79 Bảng 16 Số liệu phổ hợp chất PT-9 83 Bảng 17 Số liệu phổ hợp chất PT-10 87 Bảng 18 Số liệu phổ hợp chất ML-1 91 Bảng 19 Số liệu phổ hợp chất ML-2 93 Bảng 20 Số liệu phổ hợp chất ML-3 94 Bảng 21 Số liệu phổ hợp chất ML-4 96 Bảng 22 Số liệu phổ hợp chất ML-5 97 Bảng 23 Số liệu phổ hợp chất ML-6 99 Bảng 24 Số liệu phổ hợp chất ML-7 101 Bảng 25.Số liệu phổ hợp chất ML-8 .102 Bảng 26 Số liệu phổ hợp chất ML-9 104 Bảng 27 Số liệu phổ hợp chất ML-10 105 Bảng 28 Số liệu phổ hợp chất ML-11 106 Bảng 29 Số liệu phổ hợp chất ML-12 108 Bảng 30 Số liệu phổ hợp chất ML-13 112 Bảng 31 Số liệu phổ hợp chất ML-15 117 Bảng 32 Số liệu phổ hợp chất ML-16 120 Bảng 33 Số liệu phổ hợp chất ML-17 122 Bảng 34 Số liệu phổ hợp chất ML-18 125 Bảng 35 Số liệu phổ hợp chất ML-19 127 Bảng 36 Số liệu phổ hợp chất ML-20 128 Bảng 37 Số liệu phổ hợp chất ML-21 129 Bảng 38 Số liệu phổ hợp chất ML-22 131 Bảng 39.Kết thử gây độc tế bào HepG2.2.15 132 Bảng 40 Kết mức độ biểu HBsAg hợp chất 133 Bảng 41 Giá trị IC50 làm giảm mức độ biểu HBsAg mẫu nghiên cứu .134 Bảng 42 Ảnh hưởng hợp chất ostruthin ninhvanin lên nồng độ aminotransferase huyết chuột BALB/c bị nhiễm độc paracetamol (PRA) (n=6) 136 Bảng 43 Ảnh hưởng hợp chất ostruthin ninhvanin lên nồng độ cholesterol toàn phần huyết chuột BALB/c bị nhiễm độc paracetamol (n=6) 137 Bảng 44 Khối lượng gan chuột lơ thí nghiệm 137 Bảng 45.Quan sát hình thái trực quan gan chuột lơ thí nghiệm .138 ... (Paramignya trimera (Oliv. ) Guill .) thân rễ lồi Nhó đông (Morinda longissima Y Z Ruan) 2 ▪ Nghiên cứu thành phần hóa học cao chiết phân đoạn có hoạt tính từ thân rễ hai lồi Xáo tam phân (Paramignya trimera. .. trình nghiên cứu nghiên cứu thành phần hóa học tác dụng sinh học Xáo tam phân C y Nhó đơng có số cơng trình bước đầu đánh giá tác dụng cao chiết thực nghiệm Do đó, việc nghiên cứu sâu thành phần. .. DỤC VÀ ĐÀO TẠO VIỆN HÀN LÂM KHOA HỌC VÀ CÔNG NGHỆ VIỆT NAM HỌC VIỆN KHOA HỌC VÀ CÔNG NGHỆ - Trần Thu Hường NGHIÊN CỨU THÀNH PHẦN HÓA HỌC VÀ TÁC DỤNG SINH HỌC CỦA C Y XÁO TAM PHÂN (PARAMIGNYA