ĐẠI HỌC QUỐC GIA HÀ NỘI TRƯỜNG ĐẠI HỌC KHOA HỌC TỰ NHIÊN - - Lê Thùy Ngân ĐÁNH GIÁ HÀM LƯỢNG CROCIN VÀ MỘT SỐ CHỈ TIÊU AN TOÀN THỰC PHẨM CỦA DỊCH CHIẾT TỪ HẠT DÀNH DÀNH (GARDENIA JASMINOIDES J ELLIS) LUẬN VĂN THẠC SĨ KHOA HỌC Hà Nội – 2018 ĐẠI HỌC QUỐC GIA HÀ NỘI TRƯỜNG ĐẠI HỌC KHOA HỌC TỰ NHIÊN - - Lê Thùy Ngân ĐÁNH GIÁ HÀM LƯỢNG CROCIN VÀ MỘT SỐ CHỈ TIÊU AN TOÀN THỰC PHẨM CỦA DỊCH CHIẾT TỪ HẠT DÀNH DÀNH (Gardennia jasminoides J Ellis) Chuyên ngành: Sinh học thực nghiệm Mã số: 60 42 30 LUẬN VĂN THẠC SĨ KHOA HỌC NGƯỜI HƯỚNG DẪN KHOA HỌC: TS Phạm Thị Lương Hằng PGS.TS Nguyễn Lai Thành Hà Nội – 2018 LỜI CẢM ƠN Để hồn thành đề tài luận văn thạc sĩ cách hoàn chỉnh, bên cạnh nỗ lực cố gắng thân có hướng dẫn nhiệt tình q thầy cơ, động viên ủng hộ gia đình bạn bè suốt thời gian học tập nghiên cứu thực luận văn thạc sĩ Tôi xin chân thành bày tỏ lòng biết ơn đến TS Phạm Thị Lương Hằng, PGS TS Nguyễn Lai Thành người hết lòng giúp đỡ tạo điều kiện tốt cho tơi hồn thành luận văn Bên cạnh đó, tơi xin gửi lời cảm ơn đến ThS Bùi Thị Vân Khánh bạn Kiều Trung Kiên nhiệt tình hỗ trợ tơi q trình thực thí nghiệm đề tài luận văn Tơi xin chân thành bày tỏ lòng biết ơn đến tồn thể q thầy khoa Sinh học khoa sau đại học trường Đại học Khoa học Tự nhiên, Đại học Quốc gia Hà Nội tận tình truyền đạt kiến thức quý báu tạo điều kiện thuận lợi cho tơi suốt q trình học tập nghiên cứu thực đề tài luận văn Tôi xin chân thành bày tỏ lòng biết ơn đến cán bộ, học viên, sinh viên Phòng Thí nghiệm trọng điểm công nghệ Enzym protein, người giúp đỡ nhiều để thực luận văn Cuối cùng, xin chân thành cảm ơn đến gia đình, anh chị bạn bè hỗ trợ cho tơi nhiều suốt q trình học tập, nghiên cứu thực đề tài luận văn thạc sĩ cách hoàn chỉnh Hà Nội, ngày tháng 11 năm 2018 Học viên Lê Thùy Ngân BẢNG CHỮ VIẾT TẮT Kí hiệu Tên Tiếng Anh Tên Tiếng Việt DPPH 1,1- diphenyl-1-picrylhydrazyl 1,1- diphenyl-1-picrylhydrazyl HPLC IC50 LC-MS High-performance liquid chromatography Sắc ký lỏng hiệu cao The half maximal inhibitory Nồng độ ức chế 50% đối tượng thử concentration nghiệm Liquid chromatography-mass spectrometry LC50 Lethal concentration 50% LD50 Lethal dose 50% Sắc ký lỏng kết hợp khối phổ Nồng độ gây chết 50% đối tượng thử nghiệm Liều gây chết 50% đối tượng thử nghiệm Organization for Economic Co- Tổ chức Hợp tác Phát triển Kinh operation and Developme tế UV Ultraviolet Tia cực tím MeOH Methanol Methanol EtOH Ethanol Ethanol OECD DANH MỤC HÌNH VẼ Hình 1: Hoa dành dành (Gardenia jasminoides J.Ellis) Hình 2: Cơng thức cấu tạo Tartrazine (E102) 11 Hình 3: Cơng thức cấu tạo Sunset Yellow FCF (E110) 11 Hình 4: Một số nguồn nguyên liệu tự nhiên làm phẩm màu thực phẩm 12 Hình 5: Quả dành dành làm nguyên liệu tách chiết 17 Hình 6: Hiệu suất trình chiết hạt dành dành 24 Hình 7: Sắc ký đồ HPLC dịch chiết dành dành bước sóng 212 nm, 254 nm 440 nm 25 Hình 8: Phổ hấp thụ dịch chiết dành dành bước sóng từ 200-800 nm 26 Hình 9: Sắc ký đồ mẫu chuẩn crocin bước sóng 212 nm, 254 nm 440 nm 26 Hình 10: Sắc kí đồ LC-MS mẫu crocin tham chiếu (A) dịch chiết (B) bước sóng 440 nm 28 Hình 11: Phổ UV crocin mẫu tham chiếu mẫu thử nghiệm 28 Hình 12: Phổ khối ESI trạng thái ion âm đỉnh (P1) dịch chiết 30 Hình 13: Phổ khối ESI trạng thái ion âm đỉnh P3 dịch chiết 30 Hình 14: Sắc ký đồ HPLC mẫu chuẩn crocin hàm lượng 5µg 31 Hình 15: Sắc ký đồ HPLC dịch chiết dành dành hàm lượng 20µg 32 Hình 16: Đường chuẩn mẫu chuẩn crocin 33 Hình 17: Hoạt tính chống oxi hóa dịch chiết dành dành so với axit ascorbic 36 Hình 18: Biểu đồ thể tỷ lệ phôi chết phơi nhiễm với dịch chiết dành dành 37 Hình 19: Hình ảnh dị dạng phôi cá ngựa vằn thời điểm 72h phơi nhiễm với dịch chiết dành dành nồng độ 1g/L 39 Hình 20: Độ hòa tan bột chế phẩm màu dành dành nước 40 Hình 21: Ảnh hưởng độ pH đến độ bền màu dịch chiết dành dành 41 Hình 22: Ảnh hưởng nhiệt độ đến độ bền màu dịch chiết dành dành 41 Hình 23: Ảnh hưởng thời gian bảo quản đến độ bền màu bột dành dành 42 DANH MỤC BẢNG Bảng 1: Crocin dẫn xuất thu từ dành dành G jasminoides Bảng 2: Một số hợp chất iridoid iridoid glycoside từ dành dành G jasminoides Bảng 3: Chất phụ gia tạo màu tổng hợp phép sử dụng cho thực phẩm (Cục Quản lý Thực phẩm Dược phẩm Hoa Kỳ - FDA) 11 Bảng 4: Một số loại phẩm màu tự nhiên thông dụng 13 Bảng 5: Số khối hợp chất tương ứng với đỉnh P1-P4 29 Bảng 6: Diện tích đỉnh P1-P4 sắc ký đồ HPLC mẫu chuẩn bước sóng 440 nm 32 Bảng 7: Diện tích đỉnh sắc ký đồ dịch chiết (bước sóng 440 nm) hàm lượng crocin mẫu dịch chiết 34 Bảng 8: Kết đánh giá tiêu vi sinh vật dịch chiết dành dành 43 Bảng 9: Kết đánh giá tiêu kim loại nặng dịch chiết dành dành 43 MỤC LỤC MỞ ĐẦU CHƯƠNG 1: TỔNG QUAN 1.1 Đặc điểm sinh học dành dành Gardenia jasminoides J.Ellis 1.1.1 Đặc điểm hình thái 1.1.2 Phân bố địa lý 1.1.3 Phân loại học 1.2 Thành phần hóa học hoạt tính sinh học hạt dành dành 1.2.1 Thành phần hóa học 1.2.2 Một số hoạt tính sinh học hợp chất từ hạt dành dành G jasminoides 1.3 Nghiên cứu ứng dụng dịch chiết từ hạt dành dành làm phẩm màu thực phẩm 1.4 Một số phẩm màu thực phẩm sử dụng 1.4.1 Tầm quan trọng sử dụng phẩm màu thực phẩm đời sống 1.4.2 Phân loại phẩm màu thực phẩm 10 1.4.3 Những ưu điểm phẩm màu tự nhiên 14 1.5 Tiêu chí an tồn chất sử dụng làm phẩm màu thực phẩm 15 CHƯƠNG 2: NGUYÊN LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP 17 2.1 Nguyên liệu 17 2.1.1 Dịch chiết hạt dành dành 17 2.1.2 Động vật thử nghiệm 17 2.2 Hóa chất thiết bị 18 2.3 Phương pháp nghiên cứu 18 2.3.1 Sắc ký lỏng hiệu cao (HPLC) 18 2.3.2 Sắc kí lỏng kết hợp khối phổ (LC-MS) 19 2.3.3 Khảo sát tác dụng chống oxi hoá dịch chiết dành dành 20 2.3.4 Khảo sát tính an tồn chế phẩm màu 21 2.3.5 Khảo sát số tính chất vật lý chế phẩm 22 2.3.6 Xử lý số liệu 22 CHƯƠNG 3: KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 24 3.1 Phân tích hàm lượng crocin dịch chiết từ dành dành 24 3.1.1 Chuẩn bị dịch chiết 24 3.1.2 Phân tích thành phần hoá học dịch chiết HPLC 24 3.1.3 Xác định thành phần crocin LC-MS 27 3.1.4 Xác định hàm lượng crocin dịch chiết dành dành 31 3.2 Khảo sát tác dụng chống oxi hoá dịch chiết dành dành 35 3.3 Khảo sát tính an tồn chế phẩm màu 36 3.3.1 Đánh giá độc tính dịch chiết dành dành chuột 36 3.3.2 Đánh giá ảnh hưởng lên phát triển phôi cá ngựa vằn 37 3.4 Khảo sát số tính chất vật lý chế phẩm màu vàng 39 3.4.1 Độ hòa tan 39 3.4.2 Khả chịu pH 40 3.4.3 Khả chịu nhiệt 41 3.4.4 Độ bền màu thời gian bảo quản 42 3.5 Đánh giá số tiêu an toàn thực phẩm chế phẩm 42 3.5.1 Đánh giá tiêu vi sinh vật 42 3.5.2 Đánh giá tiêu hàm lượng kim loại nặng 43 KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 45 Lê Thùy Ngân – K24 Sinh học thực nghiệm 2018 MỞ ĐẦU Dành dành (Gardenia jasminoides J Ellis) lồi thực vật có nhiều ứng dụng đời sống Quả dành dành sử dụng loại thảo dược y học cổ truyền để điều trị chứng viêm, vàng da, nhức đầu, phù nề, sốt, rối loạn chức gan tăng huyết áp [33] Bên cạnh đó, dịch chiết từ hạt dành dành thường có màu vàng đỏ cam sử dụng làm phẩm màu thực phẩm nước Đông Á sản phẩm mì bánh kẹo [38] Phẩm màu thực phẩm có tác dụng tạo màu sắc đẹp cho đồ ăn, đồ uống, tăng giá trị cảm quan, làm tăng cảm giác ngon miệng Việc thay phẩm màu tổng hợp phẩm màu tự nhiên khơng tạo màu sắc hấp dẫn mà đem lại lợi ích cho sức khỏe người tiêu dùng Các loại phẩm màu tự nhiên, giá trị màu sắc, thân chúng thành phần có hoạt tính sinh học tốt cho thể vitamin, axit hữu cơ, glycozit, protein Ví dụ phẩm màu từ dịch chiết hạt dành dành (Gardenia jasminoides J Ellis) có chứa crocin crocetin, có tác chống oxy hóa, hạ huyết áp, giảm xơ vữa động mạch, kháng viêm, tác dụng bảo vệ thần kinh, tác động tích cực đến giấc ngủ, giảm căng thẳng mệt mỏi thể chất ngăn ngừa thối hóa võng mạc [9] Ở Việt Nam, nhiều loài cẩm, dành dành, đậu biếc sử dụng để nhuộm màu cho ăn truyền thống Tuy nhiên, chất màu tự nhiên từ thường dùng đời sống hàng ngày theo kinh nghiệm dân gian mà chưa đánh giá cách toàn diện thành phần mức độ an toàn người Xuất phát từ thực trạng trên, tiến hành đề tài nghiên cứu “Đánh giá hàm lượng crocin số tiêu an toàn thực phẩm dịch chiết từ hạt dành dành (Gardenia jasminoides J Ellis)” Mục tiêu đề tài nhằm tạo bột phẩm màu vàng có hàm lượng crocin xác định đảm bảo tiêu an toàn thực phẩm Lê Thùy Ngân – K24 Sinh học thực nghiệm 2018 138 Độ bền màu (%) 110 91.5 92.0 94.0 100.0 98.3 5.6 pH 106.5 97.0 83 55 28 00 10 12 Hình 21: Ảnh hưởng độ pH đến độ bền màu dịch chiết dành dành 3.4.3 Khả chịu nhiệt Độ bền màu dịch chiết dành dành khảo sát dải nhiệt độ từ 40 đến 100ºC, kết khả chịu nhiệt dịch chiết dành dành thể Hình 22 Kết cho thấy độ bền màu sắc tố vàng bị giảm nhẹ tương ứng với tăng lên nhiệt độ Độ bền màu sắc tố vàng bị giảm nhiều nhiệt độ 100ºC với mức giảm 11,5% so với nhiệt độ 40ºC độ bền màu giảm 1,7% Tuy nhiên, giảm độ bền màu khơng đáng kể Do đó, kết luận sắc tố vàng dịch chiết dành dành tương đối bền nhiệt độ cao Tính chất cho thấy dịch chiết dành dành có tiềm việc ứng dụng để làm phẩm màu thực phẩm chúng bị biến đổi nhiệt độ suốt trình chế biến thực phẩm, trình chế biến nhiệt độ cao 105 Độ bền màu (%) 98.3 96.6 96.7 98 94.9 90.5 90.3 80˚C 90˚C 90 88.5 83 75 Nhiệt độ 40˚C 50˚C 60˚C 70˚C 100˚C Hình 22: Ảnh hưởng nhiệt độ đến độ bền màu dịch chiết dành dành 41 Lê Thùy Ngân – K24 Sinh học thực nghiệm 2018 3.4.4 Độ bền màu thời gian bảo quản Bột dành dành bảo quản thời gian 12 tháng nhiệt độ 4ºC, kết Độ bền màu (%) khảo sát độ bền màu thể Hình 23 100% 95% 90% 85% 80% 75% 70% 65% 60% 55% 50% 100% 98% 96% Thời gian bảo quản (tháng) 12 Hình 23: Ảnh hưởng thời gian bảo quản đến độ bền màu bột dành dành Độ bền màu bột dành dành sau thời gian bảo quản 0, 12 tháng có chênh lệch nhỏ Sau năm bảo quản điều kiện 4ºC, độ bền màu bột dành dành giữ mức 96%, giảm so với ban đầu 4% Điều cho thấy, bảo quản bột dành dành điều kiện 4ºC thời gian dài mà không làm ảnh hưởng nhiều đến chất lượng màu sắc chúng 3.5 Đánh giá số tiêu an toàn thực phẩm chế phẩm Để đánh giá khả đưa thị trường dạng phẩm màu thực phẩm dịch chiết dành dành với thành phần crocin, mẫu bột màu crocin gửi đến quan Bộ Y tế định có thẩm quyền xác định tiêu an toàn thực phẩm Bất kỳ sản phẩm thực phẩm trước đưa lưu thông thị trường phải cơng bố phù hợp quy định an tồn thực phẩm Vì việc đáp ứng số tiêu chuẩn theo quy định pháp luật thực phẩm điều kiện tiên 3.5.1 Đánh giá tiêu vi sinh vật Như đề cập phía trên, giới hạn ô nhiễm vi sinh vật thực phẩm mức giới hạn tối đa vi sinh vật phép có thực phẩm, tiêu chí nhằm đánh giá mức độ an toàn sinh học sản phẩm thực phẩm trước đưa thị trường Các phương pháp thử nhằm xác định giới hạn ô 42 Lê Thùy Ngân – K24 Sinh học thực nghiệm 2018 nhiễm vi sinh vật đề cập đến tài liệu TCVN 8881:2011, TCVN 7924-2:2008, TCVN 7924-2:2008 Kết đánh giá tiêu vi sinh vật thể bảng Bảng 8: Kết đánh giá tiêu vi sinh vật dịch chiết dành dành STT Tên tiêu Pseudomon as E.coli Coliforms Phương pháp thử TCVN 8881:2011 Kết thử nghiệm Dưới 1,0x101 CFU/g TCVN 7924- Dưới 1,0x101 2:2008 CFU/g TCVN 7924- Dưới 1,0x101 2:2008 CFU/g Kết luận Đạt Đạt Đạt Các thử nghiệm thực Phòng Thí nghiệm Hóa sinh, Trung tâm chứng nhận phù hợp (QUACERT), Tổng cục tiêu chuẩn đo lường chất lượng Tham chiếu quy chuẩn kỹ thuật quốc gia ô nhiễm vi sinh vật thực phẩm nêu QCVN 8-3: 2012/BYT, kết tiêu vi sinh vật giá trị giới hạn giới hạn cho phép 1,0x101 CFU/g Các kết cho thấy sản phẩm phẩm màu tạo đảm bảo tính an tồn 3.5.2 Đánh giá tiêu hàm lượng kim loại nặng Tương tự giới hạn ô nhiễm vi sinh vật giới hạn nhiễm kim loại nặng tiêu chí để đánh giá mức độ an toàn sản phẩm thực phẩm Một số tiêu kim loại chì, cadimi asen xác định kết thử nghiệm dịch chiết dành dành thể bảng Bảng 9: Kết đánh giá tiêu kim loại nặng dịch chiết dành dành STT Tên tiêu Chì Cadimi Phương pháp thử Kết thử nghiệm TCVN Không phát 7602:2007 (LOD 0,02 mg/kg) AOAC Không phát 999.11.2012 (LOD 0,02 mg/kg) 43 Kết luận Đạt Đạt Lê Thùy Ngân – K24 Sinh học thực nghiệm Asen AOAC Không phát 986.15.2012 (LOD 0,5 mg/kg) 2018 Đạt Các thử nghiệm thực Phòng Thí nghiệm Hóa sinh, Trung tâm chứng nhận phù hợp (QUACERT), Tổng cục tiêu chuẩn đo lường chất lượng, kết tham chiếu với QCVN 8-2:2011/BYT quy chuẩn kỹ thuật quốc gia giới hạn ô nhiễm kim loại nặng thực phẩm Giới hạn ô nhiễm kim loại nặng mức tối đa hàm lượng kim loại nặng phép có thực phẩm, cụ thể giới hạn asen 0,5mg/kg, chì 0,02mg/kg, cadimi 0,02mg/kg Kết cho thấy sản phẩm không phát chì, asen hay cadimi Với kết trên, tin tưởng rằng, dịch chiết dành dành hồn tồn đạt điều kiện tiêu chuẩn để đưa vào sản xuất đại trà đưa thị trường dạng phẩm màu thực phẩm 44 Lê Thùy Ngân – K24 Sinh học thực nghiệm 2018 KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ  Kết luận Crocin thành phần tạo màu dịch chiết dành dành chiếm 42,4% so với khối lượng bột dịch chiết, bao gồm crocin-1 với khối lượng phân tử 976 Dalton crocin-2 với khối lượng phân tử 814 Dalton Dịch chiết dành dành có hoạt tính chống oxi hóa với giá trị IC50 0,33 g/L Dịch chiết dành dành khơng gây độc tính chuột mức liều cao 33,0g/kg, lại có ảnh hưởng tăng dần lên phôi cá theo thời gian nồng độ Giá trị LC50 thời điểm 72h dịch chiết dành dành 4,9 g/L; nồng độ không gây dị dạng lên phôi cá ngựa vằn 0,1-1g/L Chế phẩm bột màu vàng từ hạt dành dành có độ hòa tan tốt nước, chịu khoảng pH rộng từ 1-12, bền với nhiệt độ cao lên đến 100ºC có khả giữ màu 96% sau thời gian bảo quản 12 tháng 4ºC Chế phẩm bột màu vàng từ hạt dành dành đảm bảo số tiêu vệ sinh an toàn thực phẩm tiêu vi sinh vật (Pseudomonas, E.coli, Coliforms) giá trị giới hạn cho phép (1,0x101 CFU/g) không phát kim loại nặng (chì, cadimi, asen) chế phẩm  Kiến nghị  Tiếp tục đánh giá số tiêu an toàn thực phẩm khác bột màu vàng từ dịch chiết hạt dành dành nhằm đưa chế phẩm thị trường 45 Lê Thùy Ngân – K24 Sinh học thực nghiệm 2018 TÀI LIỆU THAM KHẢO Tiếng Việt Nguyễn Thị Thanh Thủy, Nguyễn Thị Hiển (2016), "Chiết tách khảo sát độ bền chất màu crocin từ dành dành", Tạp chí Khoa học Nông nghiệp Việt Nam, 14(12), tr 1978-1985 Đào Thị Vui, Giang Thị Sơn, Mai Hải Yến (2001), "Nghiên cứu thành phần hố học thăm dò độc tính cấp dành dành (Gardenia jasminoides)", Tạp chí Dược học, 9, tr 12-14 Tiếng Anh Brand-Williams W., Cuvelier M.-E., and Berset C., (1995), "Use of a free radical method to evaluate antioxidant activity", LWT - Food Science and Technology, 28(1), pp 25-30 Chen J., Shi B., Xiang H., Hou W., Qin X., Tian J., and Du G., (2015), "1H NMR-based metabolic profiling of liver in chronic unpredictable mild stress rats with genipin treatment", Journal of Pharmaceutical and Biomedical Analysis, 115, pp 150-158 Chen S., Zhao X., Yi R., Qian J., Shi Y., and Wang R., (2017), "Anticancer effects of Gardenia jasminoides in HepG2 human hepatoma cells", Biomedical Research, 28(2), pp 716-726 Chen Y., Cheng Y., Tzeng C., Lee Y., Chang Y., Lee S., Tsai C., Chen J., Tzen J.T.C., and Chang S.L., (2014), "Peroxisome proliferator-activated receptor activating hypoglycemic effect of Gardenia jasminoides Ellis aqueous extract and improvement of insulin sensitivity in steroid induced insulin resistant rats", BMC Complementary and Alternative Medicine, 14, pp 30 FAO, (2004), "CURCUMIN", Chemical and Technical Assessment 61st JECFA Fu Y., Liu B., Liu J., Liu Z., Dejie, Liang, Li F., Li D., Cao Y., Zhang X., Zhang N., and Yang Z., (2012), "Geniposide, from Gardenia jasminoides Ellis, inhibits the inflammatory response in the primary mouse macrophages and mouse models", International Immunopharmacology, 14(4), pp 792-798 46 Lê Thùy Ngân – K24 Sinh học thực nghiệm 2018 Gao L and Zhu B.-Y., (2013), "The Accumulation of Crocin and Geniposide and Transcripts of Phytoene Synthase during Maturation of Gardenia jasminoides Fruit", Evidence-Based Complementary and Alternative Medicine, pp 686351 10 H L., L Y., J C., X G., Y M., Y C., P L., and C Z., (2015), "Analysis of volatile ingredients in Gardeniae Fructus and its processed products by GC-MS", J Tradit Chin Med, 40(9), pp 1732-1737 11 Hadizadeh F., Mohajeri S.A., and Seifi M., (2010), "Extraction and Purification of Crocin from Saffron Stigmas Employing a Simple and Efficient Crystallization Method", Pakistan Journal of Biological Sciences, 13, pp 691-698 12 Hausenblas H.A., Heekin K., Mutchie H.L., and Anton S., (2015), "A systematic review of randomized controlled trials examining the effectiveness of saffron (Crocus sativus L.) on psychological and behavioral outcomes", J Integr Med, 13, pp 231-240 13 He W., Gao Y., Yuan F., Bao Y., Liu F., and Dong J., (2010), "Optimization of Supercritical Carbon Dioxide Extraction of Gardenia Fruit Oil and the Analysis of Functional Components", Journal of the American Oil Chemists' Society, 87(9), pp 1071-1079 14 Hong I.K., Jeon H., and Lee S.B., (2015), "Extraction of natural dye from Gardenia and chromaticity analysis according to chi parameter", Journal of Industrial and Engineering Chemistry, 24, pp 326-332 15 nanỗ A.L., (2011), "Chlorophyll: Structural Properties, Health Benefits and Its Occurrence in Virgin Olive Oils ", Academic Food Journal 9(2), pp 26-32 16 Kaji T., Hayashi T., Nsimba M., Kaga K., Ejiri N., and Sakuragawa N., (1991), "Gardenia Fruit Extract Does Not Stimulate the Proliferation of Cultured Vascular Smooth Muscle Cells, A10", Chemical and Pharmaceutical Bulletin, 39(5), pp 1312-1314 17 Khoo H.E., Azlan A., Tang S.T., and Lim S.M., (2017), "Anthocyanidins and anthocyanins: colored pigments as food, pharmaceutical ingredients, and the potential health benefits", Food Nutr Res, 61(1), pp 1361779 18 Kojima K., Shimada T., Nagareda Y., Watanabe M., Ishizaki J., Sai Y., Miyamoto K.-i., and Aburada M., (2011), "Preventive Effect of Geniposide on 47 Lê Thùy Ngân – K24 Sinh học thực nghiệm 2018 Metabolic Disease Status in Spontaneously Obese Type Diabetic Mice and Free Fatty Acid-Treated HepG2 Cells", Biological and Pharmaceutical Bulletin, 34(10), pp 1613-1618 19 Lee J.H., Lee D.U., and Jeong C.S., (2009), "Gardenia jasminoides Ellis ethanol extract and its constituents reduce the risks of gastritis and reverse gastric lesions in rats", Food and Chemical Toxicology, 47(6), pp 1127-1131 20 Lin W.H., Kuo H.H., Ho L.H., Tseng M.L., Siao A.C., Hung C.T., Jeng K.C., and Hou C.W., (2015), "Gardenia jasminoides extracts and gallic acid inhibit lipopolysaccharide-induced inflammation by suppression of JNK2/1 signaling pathways in BV-2 cells", Iranian J Basic Med Sci, 18, pp 555-562 21 Ma T., Li X., Li W., Yang Y., Huang C., Meng X., Zhang L., and Li J., (2015), "Geniposide alleviates inflammation by suppressing MeCP2 in mice with carbon tetrachloride-induced acute liver injury and LPS-treated THP-1 cells", International Immunopharmacology, 29(2), pp 739-747 22 Martins N., Roriz C.L., Morales P., Barros L., and Ferreira I.C.F.R., (2016), "Food colorants: Challenges, opportunities and current desires of agroindustries to ensure consumer expectations and regulatory practices", Trends in Food Science & Technology, 52, pp 1-15 23 Nagata Y., Watanabe T., Nagasaka K., Yamada M., Murai M., Takeuchi S., Murase M., Yazaki T., Murase T., Komatsu K., Kaizuka M., Sano M., Asano K., Ando C., and Taniuchi N., (2016), "Total dosage of gardenia fruit used by patients with mesenteric phlebosclerosis", BMC Complementary and Alternative Medicine, 16(1), pp 207 24 Park E.H., Joo M.H., Kim S.H., and Lim C.J., (2003), "Antiangiogenic activity of Gardenia jasminoides fruit", Phytotherapy Research, 17(8), pp 961-962 25 Sato S., Kitamura H., Chino M., Takei Y., Hiruma M., and Nomura M., (2007), "A 13-week oral dose subchronic toxicity study of gardenia yellow containing geniposide in rats.", Food and Chemical Toxicology, 45(8), pp 1537-1544 26 Sengar G and Sharma H.K., (2014), "Food caramels: a review", J Food Sci Technol, 51(9), pp 1686–1696 48 Lê Thùy Ngân – K24 Sinh học thực nghiệm 2018 27 Song X., Zhang W., Wang T., Jiang H., Zhang Z., Fu Y., Yang Z., Cao Y., and Zhang N., (2014), "Geniposide Plays an Anti-inflammatory Role via Regulating TLR4 and Downstream Signaling Pathways in Lipopolysaccharide-Induced Mastitis in Mice", Inflammation, 37(5), pp 1588-1598 28 Srivastava R., Ahmed H., Dixit R.K., Dharamveer, and Saraf S.A., (2010), "Crocus sativus L.: A comprehensive review", Pharmacognosy Reviews, 4, pp 200-208 29 Stahl W and Sies H., (2005), "Bioactivity and protective effects of natural carotenoids", Biochimica et Biophysica Acta (BBA) - Molecular Basis of Disease, 1740(2), pp 101-107 30 Suzuki Y., Kondo K., Ikeda Y., and Umemura K., (2001), "Antithrombotic Effect of Geniposide and Genipin in the Mouse Thrombosis Model", Planta Med, 67, pp 807-810 31 Tao W., Zhang H., Xue W., Ren L., Xia B., Zhou X., Wu H., Duan J., and Chen G., (2014), "Optimization of Supercritical Fluid Extraction of Oil from the Fruit of Gardenia jasminoides and Its Antidepressant Activity", Molecules, 19, pp 1935019360 32 Thantsin K., (2011), "Natural Colorant from Gardenia jasminoides Ellis (Cape jasmine) ", Universities Research Journal, 4(1), pp 65-74 33 Tseng T.H., Chu C.Y., Huang J.M., Shiow S.J., and Wang C.J., (1995), "Crocetin protects against oxidative damage in rat primary hepatocytes", Cancer Letters, 97(1), pp 61-67 34 Wei-E Z., Yuan Z., Yang L., Yun L., Hong-Na L., Shao-Hui L., Shou-Jun J., Zhi-Qin R., Zhi-Qiang H., and Feng Z., (2016), "Determination of gardenia yellow colorants in soft drink, pastry, instant noodles with ultrasound-assisted extraction by high performance liquid chromatography-electrospray ionization tandem mass spectrum", Journal of Chromatography A, 1446, pp 59-69 35 Wu S., Wang G., Liu Z., Rao J., Lü L., Xu W., Wu S., and Zhang J., (2009), "Effect of geniposide, a hypoglycemic glucoside, on hepatic regulating enzymes in diabetic mice induced by a high-fat diet and streptozotocin", Acta Pharmacologica Sinica, 30(2), pp 202-208 49 Lê Thùy Ngân – K24 Sinh học thực nghiệm 2018 36 Xiao W., Li S., Wang S., and Ho C.-T., (2017), "Chemistry and bioactivity of Gardenia jasminoides", Journal of Food and Drug Analysis, 25(1), pp 43-61 37 Xu G.L., Li G., Ma H.P., Zhong H., Liu F., and Ao G.Z., (2009), "Preventive Effect of Crocin in Inflamed Animals and in LPS-Challenged RAW 264.7 Cells", J Agric Food Chem, 57(18), pp 8325-8330 38 Yamada S., Oshima H., Saito I., and Hayakawa J., (1996), "Adoption of Crocetin as an Indicator Compound for Detection of Gardenia Yellow in Food Products", Analysis of Natural Coloring Matters in Food V, 37, pp 372-377 39 Zhiguo J., Wenxue C., Sixin L., and Qizhen D., (2011), "Preparation of crocin from gardenia yellow pigment by slow rotary countercurrent chromatography", Chinese Journal of Chromatography, 29(033), pp 277-180 50 Lê Thùy Ngân – K24 Sinh học thực nghiệm 2018 PHỤ LỤC Hình PL1: Sắc ký đồ HPLC mẫu chuẩn crocin hàm lượng 5µg 210 mAU Ch4-440nm,4nm (1.00) 200 190 180 170 160 150 140 130 120 110 100 90 80 70 60 50 40 30 20 10 -10 -20 -30 0.0 2.5 5.0 7.5 10.0 12.5 15.0 17.5 20.0 22.5 25.0 27.5 30.0 32.5 35.0 37.5 40.0 42.5 Lê Thùy Ngân – K24 Sinh học thực nghiệm 2018 Hình PL2: Sắc ký đồ HPLC mẫu chuẩn crocin hàm lượng 10µg mAU 275 Ch4-440nm,4nm (1.00) 250 225 200 175 150 125 100 75 50 25 -25 0.0 2.5 5.0 7.5 10.0 12.5 15.0 17.5 20.0 22.5 25.0 27.5 30.0 32.5 35.0 37.5 40.0 42.5 Lê Thùy Ngân – K24 Sinh học thực nghiệm 2018 Hình PL3: Sắc ký đồ HPLC mẫu chuẩn crocin hàm lượng 15µg mAU Ch4-440nm,4nm (1.00) 350 325 300 275 250 225 200 175 150 125 100 75 50 25 -25 -50 0.0 2.5 5.0 7.5 10.0 12.5 15.0 17.5 20.0 22.5 25.0 27.5 30.0 32.5 35.0 37.5 40.0 42.5 Lê Thùy Ngân – K24 Sinh học thực nghiệm 2018 Hình PL4: Sắc ký đồ HPLC mẫu chuẩn crocin hàm lượng 20µg 475 mAU Ch4-440nm,4nm (1.00) 450 425 400 375 350 325 300 275 250 225 200 175 150 125 100 75 50 25 -25 -50 -75 0.0 2.5 5.0 7.5 10.0 12.5 15.0 17.5 20.0 22.5 25.0 27.5 30.0 32.5 35.0 37.5 40.0 42.5 Lê Thùy Ngân – K24 Sinh học thực nghiệm 2018 Hình PL5: Sắc ký đồ HPLC mẫu chuẩn crocin hàm lượng 25µg mAU 600 Ch4-440nm,4nm (1.00) 550 500 450 400 350 300 250 200 150 100 50 -50 0.0 2.5 5.0 7.5 10.0 12.5 15.0 17.5 20.0 22.5 25.0 27.5 30.0 32.5 35.0 37.5 40.0 42.5 ... Lê Thùy Ngân ĐÁNH GIÁ HÀM LƯỢNG CROCIN VÀ MỘT SỐ CHỈ TIÊU AN TOÀN THỰC PHẨM CỦA DỊCH CHIẾT TỪ HẠT DÀNH DÀNH (Gardennia jasminoides J Ellis) Chuyên ngành: Sinh học thực nghiệm Mã số: 60 42 30... độ an toàn người Xuất phát từ thực trạng trên, tiến hành đề tài nghiên cứu Đánh giá hàm lượng crocin số tiêu an toàn thực phẩm dịch chiết từ hạt dành dành (Gardenia jasminoides J Ellis) Mục tiêu. .. đồ dịch chiết (bước sóng 440 nm) hàm lượng crocin mẫu dịch chiết 34 Bảng 8: Kết đánh giá tiêu vi sinh vật dịch chiết dành dành 43 Bảng 9: Kết đánh giá tiêu kim loại nặng dịch chiết dành