ĐẠI HỌC QUỐC GIA HÀ NỘI TRƯỜNG ĐẠI HỌC KHOA HỌC TỰ NHIÊN _ VŨ ĐÌNH QUANG NGHIÊN CỨU MỘT SỐ BIẾN ĐỔI DI TRUYỀN VÀ MỐI LIÊN QUAN VỚI CÁC YẾU TỐ TIÊN LƯỢNG, ĐỊNH HƯỚNG ĐIỀU TRỊ BỆNH NHÂN U NGUYÊN BÀO THẦN KINH LUẬN ÁN TIẾN SĨ SINH HỌC Hà Nội - 2019 ĐẠI HỌC QUỐC GIA HÀ NỘI TRƯỜNG ĐẠI HỌC KHOA HỌC TỰ NHIÊN _ Vũ Đình Quang NGHIÊN CỨU MỘT SỐ BIẾN ĐỔI DI TRUYỀN VÀ MỐI LIÊN QUAN VỚI CÁC YẾU TỐ TIÊN LƯỢNG, ĐỊNH HƯỚNG ĐIỀU TRỊ BỆNH NHÂN U NGUYÊN BÀO THẦN KINH Chuyên ngành: Di truyền học Mã số: 62420121 LUẬN ÁN TIẾN SĨ SINH HỌC NGƯỜI HƯỚNG DẪN KHOA HỌC: PGS TS Nguyễn Thị Hồng Vân TS BS Phùng Tuyết Lan Hà Nội - 2019 LỜI CAM ĐOAN Tơi là: Vũ Đình Quang, nghiên cứu sinh khóa 2013-2018, Trường Đại học Khoa học Tự nhiên, Đại học Quốc gia Hà Nội, chuyên ngành Di truyền học, xin cam đoan: Đây luận án thân trực tiếp thực hướng dẫn PGS TS Nguyễn Thị Hồng Vân TS Phùng Tuyết Lan Cơng trình khơng trùng lặp với nghiên cứu khác công bố Các số liệu thông tin nghiên cứu hồn tồn xác, trung thực khách quan, xác nhận chấp thuận sở nơi nghiên cứu Tơi xin hồn tồn chịu trách nhiệm cam kết Hà Nội, ngày 04 tháng 03 năm 2019 NGƯỜI CAM ĐOAN VŨ ĐÌNH QUANG LỜI CẢM ƠN Lời đầu tiên, muốn gửi lời cảm ơn sâu sắc tới PGS TS Nguyễn Thị Hồng Vân TS BS Phùng Tuyết Lan, hai người thầy khoa học tận tâm hướng dẫn, bảo, động viên suốt năm thực đề tài nghiên cứu Tôi xin gửi lời cảm ơn chân thành đến tất bệnh nhân gia đình bệnh nhân đồng ý tham gia vào nghiên cứu Chính đau đớn, mát em động lực thơi thúc tơi hồn thiện nghiên cứu này, cho em cho bệnh nhân sau em Tôi xin cảm ơn tất đồng nghiệp khoa Di truyền Sinh học Phân tử, nhà thứ hai tôi, bên lúc vui, lúc buồn, thành cơng hay thất bại Tơi xin bày tỏ lịng biết ơn tới thầy giáo, cô giáo cán nghiên cứu Bộ môn Di truyền học, Khoa Sinh học, Trường Đại học Khoa học Tự nhiên, ĐHQGHN tạo điều kiện tốt cho học tập, nghiên cứu khuôn khổ đề tài nghiên cứu Tôi xin cảm ơn đến anh chị, bạn bè đồng nghiệp bệnh viện Nhi Trung ương bệnh viện Đa khoa Quốc tế Vinmec đạt sản phẩm khoa học ngày hôm Tôi xin cảm ơn người bạn thân thiết bên Cuối cùng, xin dành lời cảm ơn tới gia đình mình, tới bố, tới người mẹ khuất, tới người bạn đời yêu thương hai với lo lắng, chăm sóc, sẻ chia tình u lớn lao dành cho Hà Nội, ngày 04 tháng 03 năm 2019 Vũ Đình Quang MỤC LỤC MỞ ĐẦU 11 Chương TỔNG QUAN TÀI LIỆU 15 1.1 Khái quát u nguyên bào thần kinh 15 1.1.1 Tỷ lệ mắc 15 1.1.2 Nguyên nhân hình thành khối u nguyên bào thần kinh 15 1.1.3 Phôi thai học u nguyên bào thần kinh 16 1.1.4 Mô bệnh học u nguyên bào thần kinh 18 1.2 Một số đặc điểm lâm sàng cận lâm sàng u nguyên bào thần kinh 20 1.2.1 Một số đặc điểm lâm sàng bệnh u nguyên bào thần kinh 20 1.2.2 Một số đặc điểm cận lâm sàng bệnh u nguyên bào thần kinh 26 1.3 Các đặc điểm di truyền bệnh u nguyên bào thần kinh .27 1.3.1 Biến đổi số lượng nhiễm sắc thể 27 1.3.2 Biến đổi cấu trúc nhiễm sắc thể 28 1.3.3 Khuếch đại gen MYCN 30 1.3.4 Sự biến đổi biểu gen bệnh u nguyên bào thần kinh 36 1.3.5 U nguyên bào thần kinh di truyền 39 1.3.6 Mơ hình biến đổi di truyền bệnh u ngun bào thần kinh 40 1.4 Các kỹ thuật di truyền sử dụng để phát biến đổi di truyền bệnh u nguyên bào thần kinh 43 1.4.1 Kỹ thuật lai huỳnh quang chỗ 43 1.4.2 Kỹ thuật khuếch đại đa mồi dựa vào phản ứng nối 46 1.4.3 Kỹ thuật lai so sánh hệ gen 49 1.5 Tình hình nghiên cứu bệnh u NBTK Việt Nam 52 Chương VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 55 2.1 Đối tượng nghiên cứu 55 2.1.1 Thời gian địa điểm nghiên cứu 55 2.1.2 Đối tượng nghiên cứu 55 2.1.3 Tiêu chuẩn lựa chọn bệnh nhân 55 2.1.4 Tiêu chuẩn loại trừ bệnh nhân 56 2.1.5 Cỡ mẫu: 56 2.1.6 Thiết kế nghiên cứu 57 2.2 Phương pháp nghiên cứu .57 2.2.1 Thu thập bảo quản mẫu bệnh phẩm 57 2.2.2 Kỹ thuật lai huỳnh quang chỗ 58 2.2.3 Kỹ thuật tách chiết DNA 60 2.2.4 Kỹ thuật MLPA 61 2.2.5 Kỹ thuật lai so sánh hệ gen 63 2.3 Các bước tiến hành nghiên cứu 64 2.3.1 Nghiên cứu số biến đổi di truyền bệnh u nguyên bào thần kinh 64 2.3.2 Nghiên cứu mối liên quan số biến đổi di truyền với số biểu lâm sàng, cận lâm sàng điều trị bệnh nhân 65 2.4 Xử lý số liệu 65 2.5 Đạo đức nghiên cứu .65 2.6 Sơ đồ nghiên cứu 67 Chương KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU VÀ BÀN LUẬN 69 3.1 Phát số bất thường di truyền bệnh nhân nhi mắc u nguyên bào thần kinh 69 3.1.1 Xác định trạng thái khuếch đại gen MYCN kỹ thuật FISH 69 3.1.2 Xác định số biến đổi cấu trúc nhiễm sắc thể kỹ thuật MLPA CGH 76 3.1.3 Quy trình xét nghiệm biến đổi di truyền bệnh nhân u NBTK 93 3.2 Xác định mối liên quan biến đổi di truyền với số yếu tố tiên lượng định hướng điều trị u nguyên bào thần kinh 95 3.2.1 Mối liên quan trạng thái gen MYCN với tuổi chẩn đoán 95 3.2.2 Mối liên quan trạng thái gen MYCN với giới tính 98 3.2.3 Mối liên quan trạng thái gen MYCN với giai đoạn bệnh 99 3.2.4 Mối liên quan trạng thái gen MYCN với số VMA/HVA 103 3.2.5 Mối liên quan trạng thái gen MYCN với số LDH 107 3.2.6 Mối quan hệ trạng thái gen MYCN với trạng thái biệt hóa tế bào 109 3.2.7 Mối quan hệ trạng thái gen MYCN với tiên lượng mô bệnh học 111 3.2.8 Ý nghĩa biến đổi di truyền với điều trị 114 KẾT LUẬN 120 KIẾN NGHỊ VỀ NHỮNG NGHIÊN CỨU TIẾP THEO 121 DANH MỤC CƠNG TRÌNH KHOA HỌC CỦA TÁC GIẢ ĐÃ CÔNG BỐ LIÊN QUAN ĐẾN LUẬN ÁN 122 TÀI LIỆU THAM KHẢO 124 PHỤ LỤC DANH SÁCH BỆNH NHÂN .PL01 PHỤ LỤC KẾT QUẢ MLPA CỦA MỘT SỐ BỆNH NHÂN .PL10 PHỤ LỤC KẾT QUẢ TÁCH DNA CỦA MỘT SỐ BỆNH NHÂN .PL15 DANH MỤC CHỮ VIẾT TẮT Chữ viết tắt BDNF Nghĩa tiếng Anh Nghĩa tiếng Việt Brain-derived neurotrophic Yếu tố tăng trưởng thần kinh factor có nguồn gốc từ não BH CGH Biệt hóa Comparative Genomic Lai so sánh hệ gen Hybridization CNV Copy number variation Thay đổi số lượng DM Double minute Đoạn kép ngắn chất nhiễm sắc EFS Event-free survival Tỷ lệ sống không bệnh FISH Fluorescent in-situ Lai huỳnh quang chỗ Hybridization HSR Homogeneously staining Vùng bắt màu đồng region HVA INRGSS Homo-vanillic Acid Homo-vanillic Acid International Neuroblastoma Hệ thống phân giai đoạn u Risk Group Staging System nguyên bào thần kinh theo nhóm nguy International Neuroblastoma Hệ thống phân giai đoạn u Staging System nguyên bào thần kinh quốc tế LDH Lactate Dehydrogenase Lactate Dehydrogenase LTS Life-threatening symptom Triệu chứng đe dọa sống INSS Nghĩa tiếng Anh Nghĩa tiếng Việt MIBG Meta-iodobenzyl-guanidine Meta-iodobenzyl-guanidine MKI Mitosis karyorrhexis Index Chỉ số nhân chia/nhân tan Multiplex ligation-dependent Khuếch đại đa mồi dựa vào probe amplification phản ứng nối Chữ viết tắt MLPA NBTK NCA NGF Nguyên bào thần kinh Numerical Chromosomal Biến đổi số lượng nhiễm Aberration sắc thể Nerve growth factor Yếu tố tăng trưởng thần kinh NST Nhiễm sắc thể PCR Polymerase chain reaction Phản ứng chuỗi trùng hợp SCA Segmental Chromosomal Biến đổi cấu trúc nhiễm sắc Aberration thể Tyrosine kinase Tyrosine kinase Vanillyl-mandellic Acid Vanillyl-mandellic Acid Trk VMA DANH MỤC BẢNG Bảng Tên Trang Bảng 1.1 Các giai đoạn theo INRGSS 22 Bảng 1.2 Bảng phân loại nhóm nguy u NBTK 23 Bảng 1.3 Bảng phân nhóm điều trị bệnh nhân nguy khơng cao 25 Bảng 1.4 Các đoạn hệ gen khối u NBTK 41 Bảng 3.1 Phân bố trạng thái gen MYCN nghiên cứu 72 Bảng 3.2 Phân bố dạng khuếch đại gen MYCN nghiên cứu 72 Bảng 3.3 So sánh kết nghiên cứu tỷ lệ khuếch đại gen MYCN nghiên cứu với số nghiên cứu công bố 73 Bảng 3.4 Kết phân tích 10 mẫu kỹ thuật MLPA 77 Bảng 3.5 Kết lai so sánh hệ gen bệnh nhân u NBTK 85 Bảng 3.6 Số lượng dạng biến đổi số lượng nhiễm sắc thể tìm 89 Bảng 3.7 Số lượng dạng biến đổi cấu trúc nhiễm sắc thể tìm 90 Bảng 3.8 So sánh kết phát CNV nhiễm sắc thể số 17 kỹ thuật MLPA CGH 92 Phân bố bệnh nhân theo tuổi 95 Bảng 3.10 Phân bố trạng thái gen MYCN theo nhóm tuổi 97 Bảng 3.11 Phân bố trạng thái gen MYCN theo giới tính 99 Bảng 3.9 Bảng 3.12 So sánh kết nghiên cứu phân bố theo đoạn giai đoạn bệnh nghiên cứu với số nghiên cứu công bố 101 Bảng 3.13 Kết HVA niệu 103 Bảng 3.13 Kết VMA niệu 104 Bảng 3.15 Kết số LDH huyết 107 Bảng 3.16 Kết phân tích biệt hoá tế bào 109 TT Họ tên bệnh nhân 16 Nguyễn Nhật N 17 Tuổi chẩn đoán Mã số PXN Trạng thái gen MYCN 4,3 tháng NB150502 Không khuếch đại Nguyễn Đức Long K 17,0 tháng NB150503 Không khuếch đại 18 Nguyễn Thị Tuyết M 34,6 tháng NB150504 Khuếch đại 19 Phạm Tường N 19,2 tháng NB150506P Khuếch đại 20 Bùi Đức H 6,2 tháng NB150602P Khơng khuếch đại 21 Hồng Thị S 9,2 tháng NB150603 Không khuếch đại 22 Nguyễn Phạm Gia H 13,7 tháng NB150604P Không khuếch đại 23 Đinh Hà Trâm A 15,8 tháng NB150605P Không khuếch đại 24 Hồng Văn L 4,1 tháng NB150701P Khơng khuếch đại 25 Phạm Ngọc Minh C 10,3 tháng NB150702P Không khuếch đại 26 Trần Vân H 3,3 tháng NB150703P Không khuếch đại 27 Vũ Thị Kim N 49,5 tháng NB150704P Không khuếch đại 28 Phạm Khởi N 34,9 tháng NB150705 Không khuếch đại 29 Đoàn Thị Thu T 34,4 tháng NB150801P Khuếch đại 30 Ngô Thị Thùy D 9,8 tháng NB150802 Không khuếch đại 31 Đồn Xn N 10,8 tháng NB150803P Khơng khuếch đại 32 Phùng Khắc Tuấn A 30,7 tháng NB150805P Khuếch đại 33 Nguyễn Ngọc Uyển Q 39,6 tháng NB150806 Không khuếch đại PL Biến đổi NST 17 Biến đổi NST TT Họ tên bệnh nhân 34 Nguyễn Hồng P 35 Tuổi chẩn đoán Mã số PXN Trạng thái gen MYCN 1,5 tháng NB150807 Không khuếch đại Vũ Hữu V 29,1 tháng NB150808 Không khuếch đại 36 Lương Thị Khánh N 14,3 tháng NB150901 Không khuếch đại 37 Nguyễn Thị Quỳnh N 14,8 tháng NB150902P Khuếch đại 38 Nguyễn Gia B 3,5 tháng NB150903P Không khuếch đại 39 Lưu Yến N 14,4 tháng NB151001 Không khuếch đại 40 Trần Lê V 27,8 tháng NB151002 Không khuếch đại 41 Nguyễn Đức T 12,8 tháng NB151005 Không khuếch đại 42 Hà Minh Q 1,3 tháng NB151101 Không khuếch đại 43 Nguyễn Minh Q 35,9 tháng NB151102 Không khuếch đại 44 Nguyễn Hồng Q 26,4 tháng NB151103 Không khuếch đại 45 Nguyễn Thị Quỳnh C 9,3 tháng NB151104 Khuếch đại 46 Nguyễn Thị Hải Y 49,7 tháng NB151105 Khơng khuếch đại 47 Bríu H 8,3 tháng NB151106 Khơng khuếch đại 48 Nguyễn Hải Y 7,0 tháng NB151107 Không khuếch đại PL Biến đổi NST 17 Không phát bất thường Không phát bất thường Không phát bất thường Biến đổi NST TT Họ tên bệnh nhân Tuổi chẩn đoán Mã số PXN Trạng thái gen MYCN 49 Nguyễn Hoàng M 18,8 tháng NB151108 Không khuếch đại 50 Đinh Hương G 47,5 tháng NB151201P Không khuếch đại 51 Vũ Thị Q 10,0 tháng NB151202 Không khuếch đại 52 Nguyễn Văn Thế A 26,9 tháng NB151203 Khuếch đại 53 Lê Tuấn A 8,0 tháng NB151204 Không khuếch đại 54 Nguyễn Anh Đ 2,4 tháng NB160101 Không khuếch đại 55 Nguyễn Vinh H 5,1 tháng NB160102 Không khuếch đại 56 Quách Sỹ T 45,2 tháng NB160104 Khuếch đại 57 Trương Ngọc B 56,3 tháng NB160105P Không khuếch đại 58 Đặng Tiến D 3,1 tháng NB160106 Không khuếch đại 59 Nguyễn Bách N 3,5 tháng NB160107P Không khuếch đại 60 Bùi Huy K 61 70,1 tháng NB160202 Không khuếch đại Nguyễn Trọng H 4,0 tháng NB160203 Khuếch đại 62 Nguyễn Hoàng Quỳnh A 2,9 tháng NB160204 Không khuếch đại 64 Đặng Nam S 2,4 tháng NB160301P Không khuếch đại PL Biến đổi NST 17 Không phát bất thường Không phát bất thường Không phát bất thường Biến đổi NST TT Họ tên bệnh nhân Tuổi chẩn đoán Mã số PXN Trạng thái gen MYCN 65 Đào Gia H 66 Trần Mạnh D 14,7 tháng NB160303 Khuếch đại 67 Đậu Anh Kh 4,7 tháng NB160304 Không khuếch đại 68 Trần Thị Hoài B 69 Trần Thành Đ 13,7 tháng NB160401 Không khuếch đại 70 Nguyễn Vy O 6,1 tháng NB160402 Khơng khuếch đại 71 Phí Mạnh Quang A 8,3 tháng NB160403P Không khuếch đại 72 Vũ Phan Bảo C 73 Nguyễn Khánh L 74 Nguyễn Ngọc Thành T 75 Nguyễn Hải N 76 4,7 tháng NB160302P tháng NB160305P Không khuếch đại Không khuếch đại 11,0 tháng NB160404 Không khuếch đại 2,1 tháng NB160405 Không khuếch đại 11,3 tháng NB160501 Không khuếch đại 3,6 tháng NB160502 Không khuếch đại Trần Khôi N 12,8 tháng NB160503 Khuếch đại 77 Vương Nữ Minh N 50,6 tháng NB160505P Không khuếch đại 78 Trần Đức H 1,2 tháng NB160601 Không khuếch đại 79 Nguyễn Bích D 5,7 tháng NB160602 Khơng khuếch đại 80 Trần Nguyễn Vân K 57,8 tháng NB160604 Không khuếch đại 81 Lê Cao V 13,9 tháng NB160801 Khuếch đại 82 Hà Trung H 8,1 tháng NB160802P PL Không khuếch đại Biến đổi NST 17 Biến đổi NST TT Họ tên bệnh nhân Tuổi chẩn đoán Mã số PXN Trạng thái gen MYCN 83 Nguyễn Ngọc Hà T 16,2 tháng NB160803 Không khuếch đại 84 Đặng Chí H 12,4 tháng NB160804 Khuếch đại 85 Nơng Triệu V 14,4 tháng NB160805 Không khuếch đại 86 Nguyễn Băng B 45,7 tháng NB160806 Không khuếch đại 87 Trần Đại P 88 Nguyễn Văn D 89 4,5 tháng NB160807P Không khuếch đại 45,3 tháng NB160810 Không khuếch đại Trần Nhật H 9,9 tháng NB160811 Không khuếch đại 90 Nguyễn Hải N 1,7 tháng NB160813P Không khuếch đại 91 Lê Thị Ngọc Á 8,2 tháng NB160901P Không khuếch đại 92 Trần Thị Thanh H 93 Nguyễn Hữu Hoàng G 94 14,5 tháng NB160902 Không khuếch đại 2,1 tháng NB160903 Không khuếch đại Phạm Hồng Th 41,6 tháng NB160904P Không khuếch đại 95 Lâm Khánh N 1,7 tháng NB160906 Không khuếch đại 96 Hồng Đức C 1,7 tháng NB160907 Khơng khuếch đại 97 Nguyễn Anh Đ 11,5 tháng NB161001P Không khuếch đại 98 Cà Thị H 11,3 tháng NB161002 Không khuếch đại 99 Hồng Ngọc M 1,6 tháng NB161003 Khơng khuếch đại 100 Phan Khánh D 8,3 tháng NB161004P Không khuếch đại PL Biến đổi NST 17 Biến đổi NST TT Họ tên bệnh nhân 101 Trương Nguyễn Hồi A 102 Tuổi chẩn đốn Mã số PXN Trạng thái gen MYCN 8,6 tháng NB161005 Không khuếch đại Hồng Thị Kiều T 36,1 tháng NB161006 Khơng khuếch đại 103 Hồng Gia B 12,9 tháng NB161007 Khơng khuếch đại 104 Nguyễn Hải P 24,3 tháng NB161008 Không khuếch đại 105 Nguyễn Khôi N 54,2 tháng NB161009P Không khuếch đại 106 Trương Đức T 24,9 tháng NB161010P Không khuếch đại 107 Lê Minh P 25,0 tháng NB161101 Không khuếch đại 108 Nguyễn Linh C 47,1 tháng NB161102 Khuếch đại 109 Lê Anh H 36,7 tháng NB161103 Không khuếch đại 110 Đặng Thế N 11,2 tháng NB161105P Khuếch đại 111 Nguyễn Đức A 3,9 tháng NB161201P Không khuếch đại 112 Nguyễn Hồng Anh Q 15,0 tháng NB161202 Khơng khuếch đại 113 Lê Thị Bảo T 34,9 tháng NB161204P Không khuếch đại 114 Phạm Thị Thu H 4,0 tháng NB161205P Không khuếch đại 115 Lê Thành A 4,6 tháng NB170101 Khuếch đại 116 Vũ Quang M 20,5 tháng NB170102 Không khuếch đại PL Biến đổi NST 17 Không phát bất thường Thêm đoạn cánh dài NST số 17 Biến đổi NST TT Họ tên bệnh nhân Tuổi chẩn đoán Mã số PXN Trạng thái gen MYCN 117 Nguyễn Lê Trường G 3,4 tháng NB170103P Không khuếch đại 118 Lê Phương A 4,3 tháng NB170104P Không khuếch đại 119 Trịnh Minh K 13,4 tháng NB170106 Không khuếch đại 120 Đỗ Cao ngọc Á 17,9 tháng NB170107P Không khuếch đại 121 Bùi Minh T 12,3 tháng NB170109P Không khuếch đại 122 Nguyễn Mai A 10,8 tháng NB170201 Không khuếch đại 123 Nguyễn Thị H 124 Vũ Bảo A 15,5 tháng NB170203 Không khuếch đại 125 Bùi Thị Mai Phương T 76,5 tháng NB170204 Không khuếch đại 126 Tạ Mai H 13,4 tháng NB170301 Không khuếch đại 127 Vũ Văn T 18,7 tháng NB170303P Khuếch đại 128 Nguyễn Đỗ Xuân T 2,8 tháng NB170304P Không khuếch đại 129 Trịnh Thị Khánh H 15,5 tháng NB170305 Khuếch đại 130 Tô Thế C 40,7 tháng NB170401P Không khuếch đại 131 Trần Minh H 17,3 tháng NB170403 Không khuếch đại 132 Nguyễn Tuấn H 2,1 tháng NB170404 Không khuếch đại 0,4 tháng NB170202P PL Biến đổi NST 17 Biến đổi NST SCA NCA Không khuếch đại Mất đoạn cánh ngắn NST số 17 Không phát bất thường SCA NCA NCA TT Họ tên bệnh nhân 133 Lê Quý Đ 134 Tuổi chẩn đoán Mã số PXN Trạng thái gen MYCN 4,8 tháng NB170405P Không khuếch đại Nguyễn Văn L 14,6 tháng NB170406P Không khuếch đại 135 Vi Anh K 19,2 tháng NB170501 Khuếch đại 136 Hà Bảo L 38,7 tháng NB170502 Không khuếch đại 137 Nguyễn Văn Q 56,0 tháng NB170503P Không khuếch đại 138 Nguyễn Đức H 12,4 tháng NB170505 Không khuếch đại 139 Trần Khánh L 36,6 tháng NB170506 Khuếch đại 140 Lê Gia H 3,3 tháng NB170507 Không khuếch đại 141 Trần Khánh L 30,3 tháng NB170603 Không khuếch đại Biến đổi NST 17 Biến đổi NST NCA Hà Nội, ngày 15 tháng 05 năm 2018 Cán hướng dẫn PGS TS Nguyễn Thị Hồng Vân Xác nhận bệnh viện TS BS Phùng Tuyết Lan PL PHỤ LỤC KẾT QUẢ MLPA CỦA MỘT SỐ BỆNH NHÂN 2q 17p 17p Tỷ lệ 2p Vị trí đánh dấu đầu dò Phụ lục 2.1 Kết MLPA bệnh nhân NB151005 Hình ảnh kết MLPA bệnh nhân NB151005 phát thấy vị trí đánh dấu dao động xung quanh giá trị bình thường, khơng có xuất vị trí tăng hay giảm tín hiệu nhiễm sắc thể số 17, Do vậy, kết MLPA bệnh nhân khơng phát biến đổi có ý nghĩa lâm sàng nhiễm sắc thể nói PL 10 2q 17p 17p Tỷ lệ 2p Vị trí đánh dấu đầu dò Phụ lục 2.2 Kết MLPA bệnh nhân NB151103 Hình ảnh kết MLPA bệnh nhân NB151103 phát thấy vị trí đánh dấu dao động xung quanh giá trị bình thường, khơng có xuất vị trí tăng hay giảm tín hiệu nhiễm sắc thể số 17, Do vậy, kết MLPA bệnh nhân không phát biến đổi có ý nghĩa lâm sàng nhiễm sắc thể nói PL 11 2q 17p 17p Tỷ lệ 2p Vị trí đánh dấu đầu dị Phụ lục 2.3 Kết MLPA bệnh nhân NB151108 Hình ảnh kết MLPA bệnh nhân NB151108 phát thấy vị trí đánh dấu dao động xung quanh giá trị bình thường, khơng có xuất vị trí tăng hay giảm tín hiệu nhiễm sắc thể số 17, Do vậy, kết MLPA bệnh nhân không phát biến đổi có ý nghĩa lâm sàng nhiễm sắc thể nói PL 12 2q 17p 17p Tỷ lệ 2p Vị trí đánh dấu đầu dị Phụ lục 2.4 Kết MLPA bệnh nhân NB160102 Hình ảnh kết MLPA bệnh nhân NB160102 phát thấy vị trí đánh dấu dao động xung quanh giá trị bình thường, khơng có xuất vị trí tăng hay giảm tín hiệu nhiễm sắc thể số 17, Do vậy, kết MLPA bệnh nhân không phát biến đổi có ý nghĩa lâm sàng nhiễm sắc thể nói PL 13 2q 17p 17p Tỷ lệ 2p Vị trí đánh dấu đầu dị Phụ lục 2.5 Kết MLPA bệnh nhân NB161005 Hình ảnh kết MLPA bệnh nhân NB161005 phát thấy vị trí đánh dấu dao động xung quanh giá trị bình thường, khơng có xuất vị trí tăng hay giảm tín hiệu nhiễm sắc thể số 17, Do vậy, kết MLPA bệnh nhân không phát biến đổi có ý nghĩa lâm sàng nhiễm sắc thể nói PL 14 PHỤ LỤC KẾT QUẢ TÁCH DNA TỔNG SỐ CỦA MỘT SỐ BỆNH NHÂN STT Họ tên Mã số PXN Nồng độ Độ tinh DNA (ng/µl) (A260/A280) Nguyễn Hồng P NB150807 46 1,95 Nguyễn Đức T NB151005 45 1,84 Nguyễn Hồng Q NB151103 65 1,90 Nguyễn Hoàng M NB151108 35 1,95 Nguyễn Anh Đ NB160101 44 1,92 Nguyễn Vinh H NB160102 48 1,87 Vũ Bảo A NB170203 54 1,93 Tạ Mai H NB170301 36 1,86 Trương Nguyễn Hoài A NB161005 48 1,95 10 Hoàng Thị Kiều T NB161006 66 1,85 11 Trịnh Minh K NB170106 150 1,91 12 Nguyễn Mai A NB170201 146 1,92 13 Nguyễn Tuấn H NB170404 152 1,95 14 Nguyễn Đức H NB170505 148 1,89 PL 15 PL 15 ... thần kinh? ?? tiến hành với mục ti? ?u sau: Phát số biến đổi di truyền bệnh nhân nhi mắc bệnh u nguyên bào thần kinh Xác định mối liên quan biến đổi di truyền với số y? ?u tố tiên lượng định hướng đi? ?u. .. cho bệnh u NBTK đặt Xuất phát từ y? ?u c? ?u lâm sàng thực tiễn vậy, đề tài nghiên c? ?u ? ?Nghiên c? ?u số biến đổi di truyền mối liên quan với y? ?u tố tiên lượng, định hướng đi? ?u trị bệnh nhân u nguyên bào. .. U nguyên bào thần kinh di truyền 39 1.3.6 Mơ hình biến đổi di truyền bệnh u nguyên bào thần kinh 40 1.4 Các kỹ thuật di truyền sử dụng để phát biến đổi di truyền bệnh u nguyên bào thần