Đang tải... (xem toàn văn)
Tiêu chuẩn Việt Nam TCVN 6507-1:2005 - ISO 6887-1:1999 giới thiệu nội dung về vi sinh vật trong thực phẩm và thức ăn chăn nuôi – chuẩn bị mẫu thử, huyền phù ban đầu và các dung dịch pha loãng thập phân để kiểm tra vi sinh vật - phần 1: các nguyên tắc chung để chuẩn bị huyền phù ban đầu và các dung dịch pha loãng thập phân.
TIÊU CHUẨN VIỆT NAM TCVN 6507-1 : 2005 ISO 6887-1 : 1999 VI SINH VẬT TRONG THỰC PHẨM VÀ THỨC ĂN CHĂN NUÔI – CHUẨN BỊ MẪU THỬ, HUYỀN PHÙ BAN ĐẦU VÀ CÁC DUNG DỊCH PHA LOÃNG THẬP PHÂN ĐỂ KIỂM TRA VI SINH VẬT - PHẦN 1: CÁC NGUYÊN TẮC CHUNG ĐỂ CHUẨN BỊ HUYỀN PHÙ BAN ĐẦU VÀ CÁC DUNG DỊCH PHA LOÃNG THẬP PHÂN Microbiology of food and animal feeding stuffs – Preparation of test samples, initial suspension and decimal dilutions for microbiological examination - Part 1: General rules for the preparation of the initial suspension and decimal dilutions Lời giới thiệu Do tính đa dạng thực phẩm thức ăn chăn nuôi nên phương pháp khơng thích hợp đến chi tiết cho sản phẩm cụ thể Trong trường hợp này, sử dụng phương pháp khác đặc trưng cho sản phẩm, hồn tồn lý kỹ thuật Tuy nhiên, cần cố gắng áp dụng phương pháp Khi tiêu chuẩn sốt xét tiếp cần phải tính đến thông tin liên quan đến phạm vi mà phương pháp đếm đĩa phải tuân theo nguyên nhân gây sai lệch so với phương pháp trường hợp sản phẩm cụ thể Việc hài hòa phương pháp thử khơng thực vài nhóm sản phẩm tồn tiêu chuẩn quốc tế và/hoặc tiêu chuẩn quốc gia mà không phù hợp với tiêu chuẩn Trong trường hợp sẵn có tiêu chuẩn quốc tế cho sản phẩm cần thử nghiệm phải tuân theo tiêu chuẩn Hy vọng tiêu chuẩn sốt xét, chúng phải sửa đổi để phù hợp với tiêu chuẩn này, cho cuối sai lệch với phương pháp đếm đĩa lý kỹ thuật thừa nhận Tiêu chuẩn đưa nguyên tắc chung để chuẩn bị dung dịch huyền phù ban đầu dung dịch pha loãng thập phân để kiểm tra vi sinh vật TCVN 6507-2 (ISO 6887-2) đưa nguyên tắc cụ thể để chuẩn bị mẫu thử huyền phù ban đầu tính đến tính đa dạng thực phẩm thức ăn chăn nuôi áp dụng tiêu chuẩn Đối với số loại sản phẩm, cần phải đặc biệt ý chuẩn bị huyền phù ban đầu trạng thái vật lý sản phẩm (ví dụ sản phẩm khơ, sản phẩm có độ sánh cao) có mặt chất ức chế (như loại gia vị, cá muối), độ axit.v.v VI SINH VẬT TRONG THỰC PHẨM VÀ THỨC ĂN CHĂN NUÔI – CHUẨN BỊ MẪU THỬ, HUYỀN PHÙ BAN ĐẦU VÀ CÁC DUNG DỊCH PHA LOÃNG THẬP PHÂN ĐỂ KIỂM TRA VI SINH VẬT - PHẦN 1: CÁC NGUYÊN TẮC CHUNG ĐỂ CHUẨN BỊ HUYỀN PHÙ BAN ĐẦU VÀ CÁC DUNG DỊCH PHA LOÃNG THẬP PHÂN Microbiology of food and animal feeding stuffs – Preparation of test samples, initial suspension and decimal dilutions for microbiological examination - Part 1: General rules for the preparation of the initial suspension and decimal dilutions Phạm vi áp dụng Tiêu chuẩn đưa nguyên tắc chung để chuẩn bị huyền phù ban đầu dung dịch pha lỗng thập phân điều kiện hiếu khí để kiểm tra vi sinh vật sản phẩm dùng cho người thức ăn chăn nuôi Tiêu chuẩn áp dụng cho trường hợp chung, trừ sản phẩm đề cập TCVN 6507-2 (ISO 6887-2) Tài liệu viện dẫn Các tài liệu viện dẫn sau cần thiết cho việc áp dụng tiêu chuẩn Đối với tài liệu viện dẫn ghi năm ban hành áp dụng phiên nêu Đối với tài liệu viện dẫn không ghi năm ban hành áp dụng phiên nhất, bao gồm sửa đổi TCVN 6404 (ISO 7218), Vi sinh vật thực phẩm thức ăn chăn nuôi Nguyên tắc chung kiểm tra vi sinh vật Thuật ngữ định nghĩa Trong tiêu chuẩn sử dụng thuật ngữ định nghĩa sau đây: 3.1 Huyền phù ban đầu (dung dịch pha loãng ban đầu) [initial suspension (primary dilution)] Huyền phù, dung dịch nhũ tương thu sau cân đong lượng sản phẩm cần kiểm tra (hoặc mẫu lấu từ sản phẩm) trộn với lượng dung dịch pha lỗng lớn gấp chín lần hạt to lắng xuống, có CHÚ THÍCH: Xem điều thích 9.1 3.2 Dung dịch pha loãng thập phân (further decimal dilutions) Các huyền phù dung dịch thu cách trộn thể tích xác định huyền phù ban đầu (3.1) với dịch pha lỗng lớn gấp chín lần cách lặp lại thao tác với độ pha loãng thu dãy dung dịch pha lỗng thập phân thích hợp cho việc cấy môi trường 3.3 Tiêu chuẩn riêng ( specific standard) Là tiêu chuẩn tài liệu hướng dẫn mô tả việc kiểm tra sản phẩm cụ thể (hoặc nhóm sản phẩm) để phát định lượng loại vi sinh vật cụ thể (hoặc nhóm vi sinh vật) Nguyên tắc Chuẩn bị huyền phù ban đầu (3.1) cho thu phân bố vi sinh vật phần mẫu thử đồng tốt Nếu cần, chuẩn bị dung dịch pha loãng thập phân (3.2) cho giảm bớt số lượng vi sinh vật có đơn vị thể tích, để sau ủ quan sát có hay khơng có phát triển chúng (trong ống lọ) định lượng khuẩn lạc (trên đĩa thạch), tiêu chuẩn riêng qui định CHÚ THÍCH: Để giới hạn phạm vi định lượng đến khoảng định, dự đoán số vi sinh vật cao, dung dịch pha lỗng thập phân cần thiết (ít hai độ pha lỗng liên tiếp) để thu số đếm theo cơng thức tính TCVN 6404 (ISO 7218) Dịch pha loãng 5.1 Nguyên liệu Để làm tăng độ tái lập kết quả, nên sử dụng thành phần khơ, mơi trường hồn chỉnh khơ để chuẩn bị dịch pha lỗng Cần tn thủ nghiêm ngặt hướng dẫn nhà sản xuất Các hóa chất sử dụng phải đạt chất lượng phân tích thích hợp để phân tích vi sinh vật Nước sử dụng phải nước cất có chất lượng tương đương [xem TCVN 6404 (ISO 7218)] 5.2 Dịch pha loãng thường dùng 5.2.1 Dịch muối pepton 5.2.1.1 Thành phần Pepton từ casein 1,0 g Natriclorua 8,5 g Nước 000 ml 5.2.1.2 Chuẩn bị Hòa tan thành phần nước, đun nóng cần Chỉnh pH cho sau khử trùng, pH ± 0,2 25 oC, cần 5.2.2 Dung dịch đệm pepton 5.2.2.1 Thành phần Pepton từ mô động vật 10,0 g Natri clorua 5,0 g Dinatri hydro phosphat ngậm 12 phân tử nước (Na 2HPO4.12H2O) 9,0 g Kali dihydro phosphat (KH2PO4) 1,5 g Nước 1000 ml 5.2.2.2 Chuẩn bị Hòa tan thành phần nước, đun nóng cần Chỉnh pH cho sau khử trùng, pH ± 0,2 25 oC, cần 5.3 Dịch pha lỗng dùng cho mục đích đặc biệt Xem tiêu chuẩn riêng phù hợp với sản phẩm có liên quan CHÚ THÍCH: Các nguyên tắc cụ thể, xem TCVN 6507-2 (ISO 6887-2) 5.4 Phân phối khử trùng dịch pha loãng Phân phối dịch pha loãng (5.2 5.3) với lượng cần thiết để chuẩn bị huyền phù ban đầu vào bình (6.4) có dung tích thích hợp Phân phối dịch pha loãng (5.2 5.3) với lượng cần thiết để chuẩn bị dung dịch pha loãng thập phân vào ống nghiệm (6.5) bình (6.4) cho sau khử trùng ống nghiệm bình chứa 9,0 ml Sai số cho phép đo thể tích cuối sau khử trùng khơng vượt q ± 0,2% CHÚ THÍCH: Nếu cần phải đếm vài nhóm vi sinh vật sử dụng mơi trường cấy khác nhau, cần phải phân phối tất dung dịch pha loãng (hoặc số) với lượng nhiều 9,0 ml, kích thước ống nghiệm (6.5) bình (6.4) phải qui định tương ứng Đậy nắp ống nghiệm bình Khử trùng 15 phút nồi hấp áp lực 121oC Thiết bị dụng cụ thủy tinh Sử dụng thiết bị thí nghiệm vi sinh thơng thường [xem TCVN 6404 (ISO 7218)] cụ thể là: 6.1 Thiết bị để khử trùng khơ (lò sấy) thiết bị để khử trùng ướt (nồi hấp áp lực) Xem TCVN 6404 (ISO 7218) 6.2 Thiết bị trộn 6.3 Máy khuấy Xem TCVN 6404 (ISO 7218) 6.4 Bình lọ có nắp vặn, có dung tích thức hợp 6.5 Ống nghiệm, có dung tích thích hợp 6.6 Pipet chia độ xả hết, có dung tích danh định ml 10 ml, chia vạch theo 0,1 ml 0,5 ml tương ứng 6.7 pH mét, đọc đến ± 0,01 đơn vị pH 25oC, đo xác đến ± 0,1 đơn vị pH 6.8 Cân, cân xác đến 0,01 g Lấy mẫu Tiến hành lấy mẫu theo tiêu chuẩn riêng tương ứng với sản phẩm Nếu khơng có tiêu chuẩn riêng, bên có liên quan tự thỏa thuận vấn đề Chuẩn bị mẫu thử Việc chuẩn bị mẫu thử theo tiêu chuẩn riêng phù hợp với sản phẩm tương ứng Nếu khơng có tiêu chuẩn riêng, bên có liên quan tự thỏa thuận vấn đề Cách tiến hành 9.1 Phần mẫu thử huyền phù ban đầu (dung dịch pha loãng ban đầu) Cân lượng m g với sai số cho phép ± 5% đong thể tích V ml với sai số cho phép ± 5% (tối thiểu 10 g 10 ml, trừ có qui định khác), phần mẫu thử đại diện (xem điều 8) cho vào chén đựng vô trùng túi chất dẻo vô trùng Cho lượng dịch pha loãng x m g x V ml Lượng thêm cân đong với sai số cho phép ± 5% CHÚ THÍCH 1: Trong số trường hợp cụ thể, đặc biệt đối sản phẩm có huyền phù ban đầu + q sánh q đặc cần phải tăng thêm dịch pha loãng Điều phải tính đến thao tác và/hoặc phải tính đến phần tính kết CHÚ THÍCH 2: Dung dịch pha lỗng ban đầu định phần giá trị giới hạn phép định lượng, điều phụ thuộc vào kỹ thuật sử dụng (ví dụ, kỹ thuật rót đĩa với ml chất cấy huyền phù 1/10, có giới hạn 10 vi sinh vật gam) Nếu cần, số sản phẩm cụ thể để số đếm thấp giới hạn sử dụng lượng dịch pha loãng nhỏ 1) Cần ý việc cấy huyền phù ban đầu gặp khó khăn khơng cân tỷ lệ chất cấy/môi trường cấy (ức chế phát triển vi sinh vật nồng độ thành phần thực phẩm tăng) Để vi sinh vật không bị tổn thương thay đổi nhiệt độ đột ngột, nhiệt độ dịch pha lỗng suốt q trình thao tác mô tả phải giữ xấp xỉ nhiệt độ phòng, trừ trường hợp sản phẩm cụ thể (xem tiêu chuẩn riêng) Đồng hóa hỗn hợp theo khuyến cáo TCVN 6404 (ISO 7218) Để hạt to lắng xuống 15 phút, cần Có thể sử dụng hệ thống lọc để có kết tương đương Trong trường hợp định lượng bào tử, việc xử lý nhiệt huyền phù ban đầu, ví dụ 10 phút 80 oC cần thực sau chuẩn bị làm nguội nhanh 9.2 Các dung dịch pha loãng thập phân Dùng pipet vô trùng lấy ml huyền phù ban đầu với sai số đo2) ± 5% cho vào ống nghiệm chứa ml dung dịch pha loãng vơ trùng nhiệt độ thích hợp 1) Trong trường hợp thể tích dịch pha lỗng dùng phải ghi lại báo cáo thử nghiệm CHÚ THÍCH: Nếu cần thể tích lớn hơn, thêm thể tích xác định (lớn ml) huyền phù ban đầu với sai số đo ± 5%, vào ống nghiệm chứa thể tích dịch pha lỗng vơ trùng lớn gấp lần Để có độ xác tối ưu, khơng nhúng pipet vào huyền phù ban đầu sâu cm Không để pipet chứa chất cấy tiếp xúc với dịch pha lỗng vơ trùng Trộn kỹ, tốt dùng máy khuấy (6.3) để trộn giây đến 10 giây để thu dung dịch pha loãng 10-2 Nếu cần, lặp lại thao tác sử dụng dung dịch pha loãng 10 -2 dung dịch pha loãng tiếp theo, dùng pipet vơ trùng độ pha loãng để thu dung dịch pha loãng 10 -3, 10-4.v.v thu số lượng vi sinh vật thích hợp (xem điều 4) 9.3 Thời gian tiến hành Thời gian tính từ lúc chuẩn bị xong huyền phù ban đầu chất cấy tiếp xúc với môi trường không vượt 45 phút thời gian kể từ chuẩn bị huyền phù ban đầu (9.1) đến bắt đầu chuẩn bị dung dịch pha lỗng thập phân khơng vượt 30 phút, trừ có qui định khác tiêu chuẩn riêng CHÚ THÍCH: Nếu nhiệt độ phòng phòng thử nghiệm q cao hai khoảng thời gian phải giảm ... hành lấy mẫu theo tiêu chuẩn riêng tương ứng với sản phẩm Nếu khơng có tiêu chuẩn riêng, bên có liên quan tự thỏa thuận vấn đề Chuẩn bị mẫu thử Việc chuẩn bị mẫu thử theo tiêu chuẩn riêng phù hợp... [xem TCVN 6404 (ISO 7218)] cụ thể là: 6.1 Thiết bị để khử trùng khơ (lò sấy) thiết bị để khử trùng ướt (nồi hấp áp lực) Xem TCVN 6404 (ISO 7218) 6.2 Thiết bị trộn 6.3 Máy khuấy Xem TCVN 6404 (ISO. .. THÍCH: Các nguyên tắc cụ thể, xem TCVN 650 7-2 (ISO 688 7-2 ) 5.4 Phân phối khử trùng dịch pha loãng Phân phối dịch pha loãng (5.2 5.3) với lượng cần thiết để chuẩn bị huyền phù ban đầu vào bình