Tiêu chuẩn Quốc gia TCVN 8901:2011 - EN 1137:1994

6 45 0
Tiêu chuẩn Quốc gia TCVN 8901:2011 - EN 1137:1994

Đang tải... (xem toàn văn)

Thông tin tài liệu

Tiêu chuẩn Quốc gia TCVN 8901:2011 quy định phương pháp enzym để xác định hàm lượng axit xitric tổng số trong nước rau quả và các sản phẩm có liên quan, ở dạng axit tự do hoặc dạng muối xitrat. Mời các bạn cùng tham khảo nội dung chi tiết.

TIÊU CHUẨN QUỐC GIA TCVN 8901:2011 EN 1137:1994 NƯỚC RAU QUẢ - XÁC ĐỊNH HÀM LƯỢNG AXIT XITRIC (XITRAT) BẰNG ENZYM - PHƯƠNG PHÁP ĐO PHỔ NADH Fruit and vegetable juices - Enzymatic determination of citric acid (citrate) content - NADH spectrometric method Lời nói đầu TCVN 8901:2011 hồn tồn tương đương với EN 1137:1994; TCVN 8901:2011 Ban kỹ thuật tiêu chuẩn quốc gia TCVN/TC/F10 Rau sản phẩm rau biên soạn, Tổng cục Tiêu chuẩn Đo lường Chất lượng thẩm định, Bộ Khoa học Công nghệ công bố NƯỚC RAU QUẢ - XÁC ĐỊNH HÀM LƯỢNG AXIT XITRIC (XITRAT) BẰNG ENZYM PHƯƠNG PHÁP ĐO PHỔ NADH Fruit and vegetable juices - Enzymatic determination of citric acid (citrate) content - NADH spectrometric method Phạm vi áp dụng Tiêu chuẩn quy định phương pháp enzym để xác định hàm lượng axit xitric tổng số nước rau sản phẩm có liên quan, dạng axit tự dạng muối xitrat Tài liệu viện dẫn Các tài liệu viện dẫn sau cần thiết cho việc áp dụng tiêu chuẩn Đối với tài liệu viện dẫn ghi năm công bố áp dụng phiên nêu Đối với tài liệu viện dẫn không ghi năm công bố áp dụng phiên nhất, bao gồm sửa đổi, bổ sung (nếu có) TCVN 4851:1989 (ISO 3696:1987), Nước dùng để phân tích phòng thí nghiệm - Yêu cầu kĩ thuật phương pháp thử ISO 5725:1986* Precision of test methods - Determination of repeatability and reproducibility for a standard test method by inter-laboratory tests (Độ chụm phương pháp thử - Xác định độ lặp lại độ tái lập phương pháp thử thử nghiệm liên phòng) Kí hiệu chữ viết tắt Trong tiêu chuẩn sử dụng kí hiệu chữ viết tắt sau: NAD -Nicotinamit-adenin-dinucleotit; NADH -Nicotinamit-adenin-dinucleotit, dạng khử; CL Xitrat lyaza (EC1) 4.1.3.6); MDH Malat dehydrogenaza (EC1) 1.1.1.37); LDH Lactat dehydrogenaza (EC1) 1.1.1.27); * ISO 5725:1986 hủy, thay ISO 5725 (gồm có phần) biên soạn thành TCVN 6910 (gồm có phần) 1) Ủy ban enzym (EC): Classification System Enzyme Handbook (Sổ tay Hệ thống phân loại enzym), Springer, Berlin 1969 IU đơn vị quốc tế (IU) hoạt độ enzym xúc tác chuyển đổi µmol chất phút 25 oC điều kiện chuẩn; c Nồng độ chất; Nồng độ khối lượng Nguyên tắc Phương pháp dựa chuyển hóa xitrat thành oxaloaxetat enzym Pyruvat tạo thành từ phản ứng khử cacbon oxaloaxetat Sau đó, enzym khử oxaloaxetat pyruvat dạng khử nicotinamit adenin dinucleotit, tiến hành đo phổ Hàm lượng axit xitric tương đương với hàm lượng tổng số NADH đo theo mức độ giảm độ hấp thụ 4.1 Phản ứng Các phản ứng enzym sau xảy pH = 7,8: Thuốc thử 5.1 Yêu cầu chung Chỉ sử dụng thuốc thử loại tinh khiết phân tích nước loại nêu TCVN 4851:1989 (ISO 3696:1987) 5.2 Đệm glyxylglyxin, pH 7,8 Hòa tan 7,13 g glyxylglyxin 70 ml nước, chỉnh đến pH 7,8 khoảng 13 ml natri hydroxit [c(NaOH) = mol/l], thêm 10 ml dung dịch kẽm clorua, ρ(ZnCl2) = 0,8 g/l pha loãng nước đến 100 ml Dung dịch đệm pha bền bốn tuần + oC 5.3 Dung dịch NADH Hòa tan 30 mg muối dinatri -nicotinamit-adenin-dinucleotit dạng khử ( -NADH-Na2) 60 mg natri hydrocacbonat (NaHCO3) ml nước Dung dịch pha bền bốn tuần + oC 5.4 Huyền phù enzym MDL/LDH Trộn 0,1 ml malat dehydrogenaza, (MDH) = mg/ml, khoảng 6000 IU/ml với chất oxaloaxetat, 0,4 ml dung dịch amoni sulfat c[(NH 4)2SO4] = 3,2 mol/l 0,5 ml lactat dehydrogenaza, (LDH) = mg/ml, khoảng 2750 IU/ml với chất pyruvat Huyền phù pha bền năm + oC 5.5 Huyền phù enzym CL Hòa tan 168 mg lyophilisat (5 mg enzym protein) xitrat lyaza (khoảng 1,25 IU/ml với chất xitrat) ml nước đá lạnh Huyền phù pha bền tuần + oC bốn tuần trạng thái đông lạnh Thiết bị, dụng cụ Sử dụng thiết bị, dụng cụ phòng thử nghiệm thông thường cụ thể sau: 6.1 Pipet dùng để thử nghiệm enzym, có chia vạch dọc thân pipet đầu tip phân phối dài, không chia vạch 6.2 Pipet, có độ xác tương đương với 6.1 (thay cho 6.1), ví dụ thay đổi dung tích pipet 6.3 Cuvet, làm thủy tinh nhựa, có chiều dài đường quang 10 mm có độ hấp thụ khơng đáng kể bước sóng 334 nm, 340 nm 365 nm 6.4 Máy đo quang đơn phổ, có đèn thủy ngân màng lọc đo bước sóng 334 nm 365 nm 6.5 Máy đo quang phổ, (bước sóng thay đổi) để đo 340 nm (thay cho 6.4) Cách tiến hành 7.1 Chuẩn bị mẫu thử Đối với sản phẩm thơng thường, khơng xử lí trước việc phân tích theo phương pháp phải thực dựa vào đơn vị thể tích, kết biểu thị theo lít mẫu thử Việc phân tích sản phẩm đặc thực dựa theo thể tích sau pha lỗng đến tỉ trọng tương đối biết Trong trường hợp này, phải đưa tỉ trọng tương đối Dựa lượng mẫu cân đưa hệ số pha loãng phân tích vào phép tính, kết biểu thị theo kilogam sản phẩm Đối với sản phẩm có độ nhớt cao và/hoặc có hàm lượng tế bào cao (ví dụ thịt quả), phép xác định dựa lượng mẫu thử cân theo quy trình thơng thường Pha loãng mẫu để kiểm tra cho nồng độ axit xitric khoảng từ 0,02 g/l đến 0,4 g/l Dung dịch sử dụng cho phép xác định, kể có màu đậm Trộn kĩ nước rau đục pha loãng; nước rau đục nước rau có màu đậm cần phải pha lỗng tiếp để có hàm lượng xitrat yêu cầu 7.2 Tiến hành thử 7.2.1 Yêu cầu chung Phép xác định phải thực điều kiện nhiệt độ không đổi, khoảng từ 20 oC đến 25 oC Có thể sử dụng nhiệt độ khơng đổi khoảng từ 25 oC đến 37 oC, miễn thu kết tương đương NADH có độ hấp thụ cực đại bước sóng 340 nm Khi sử dụng máy đo phổ thay đổi bước sóng, đo bước sóng hấp thụ cực đại Khi sử dụng máy đo quang đơn phổ dùng đèn hóa thủy ngân, đo bước sóng 334 nm 365 nm Không sử dụng pipet vạch để hút dung dịch Các dung dịch enzym, coenzym đệm lấy pipet tự động thích hợp Pipet dùng để thử nghiệm enzym (6.1) dụng cụ tương đương (6.2) phải sử dụng để lấy dung dịch mẫu thử Trong phép xác định sử dụng kit thử phức hợp có bán sẵn thị trường Nếu chất cần xác định có sẵn dạng tinh khiết thích hợp, dùng để pha dung dịch chuẩn 7.2.2 Dung dịch mẫu trắng Dùng pipet lấy 1,00 ml dung dịch đệm (5.2), 0,1 ml dung dịch NADH (5.3), 2,00 ml nước 0,02 ml huyền phù enzym MDH/LDH (5.4) cho vào cuvet Trộn, đọc độ hấp thụ (A1)Mẫu trắng dung dịch so với khơng khí (khơng có cuvet đường quang) sau khoảng 7.2.3 Dung dịch mẫu thử Dùng pipet lấy 1,00 ml dung dịch đệm (5.2), 0,1 ml dung dịch NADH (5.3), 0,20 ml mẫu thử, 1,80 ml nước 0,02 ml huyền phù enzym MDH/LDH (5.4) cho vào cuvet Trộn, đọc độ hấp thụ (A1)Mẫu dung dịch so với khơng khí (khơng có cuvet đường quang) sau khoảng Nếu giá trị hấp thụ ban đầu cao (A1 > 1,000) thực phép xác định mới, 7.2.2 sử dụng nồng độ giảm xuống NADH Phép đo ảnh hưởng đến kết phép thử, dải nồng độ mẫu thử phải giảm xuống Nếu nồng độ xitrat dung dịch mẫu thử nhỏ 0,02 g/l, thể tích mẫu lấy vào cuvet tăng lên đến khoảng 2,0 ml Trong trường hợp này, thể tích nước thêm vào phải giảm tương ứng cho cuvet chứa mẫu trắng cuvet chứa mẫu thử có tổng thể tích Thể tích dung dịch mẫu thử (V2) tính kết (xem Điều 8) phải thay đổi tương ứng 7.2.4 Phản ứng enzym định lượng Tiến hành phản ứng cách thêm 0,02 ml huyền phù enzym CL (5.5) vào dung dịch 7.2.2 7.2.3 Trộn sau phản ứng xảy hoàn tồn (khoảng đến 10 min) đọc độ hấp thụ (A2) dung dịch so với không khí (khơng có cuvet đường quang) Đọc độ hấp thụ sau để kiểm tra phản ứng kết thúc hay chưa Tính kết Tùy theo phản ứng, tính hàm lượng NADH sử dụng (và chênh lệch độ hấp thụ, ΔA) tỉ lệ tuyến tính với nồng độ axit xitric ΔA = (A2 - A1)Mẫu - (A2 - A1)Mẫu trắng Việc tính nồng độ chất dung dịch pha loãng cách đo độ hấp thụ dựa định luật Beer-Lambert Hàm lượng axit xitric, ρ, tính gam lít mẫu thử (g/l) tính theo cơng thức sau: M V1 F V2 1000 A đó: M khối lượng phân tử axit xitric (dạng khan) M = 192,1 g/mol, tính gam mol (g/mol); V1 tổng thể tích dung dịch cuvet, tính mililit (ml); V2 thể tích dung dịch mẫu thử thêm vào cuvet, tính mililit (ml); F hệ số pha loãng dung dịch mẫu thử; chiều dài đường quang cuvet, tính centimet (cm); ε hệ số hấp thụ NADH; bước sóng 340 nm, ε = 6,3 [l × mmol-1 × cm-1]; bước sóng 365 nm, ε = 3,4 [l × mmol -1 × cm-1]; bước sóng 334 nm, ε = 6,18 [l × mmol-1 × cm-1] Nếu khơng thay đổi thể tích 7.2.3 tính nồng độ sau: 3,016 F A Khi sử dụng kit thử phức hợp có bán sẵn thị trường, hệ số 3,016 công thức nêu thay đổi phụ thuộc vào tổng thể tích thử nghiệm (V 1) Trong phần tính kết quả, cần tính đến hệ số pha lỗng mối tương quan giá trị với thể tích khối lượng Nếu sản phẩm cô đặc pha lỗng đến nồng độ đơn ghi lại tỉ trọng tương đối mẫu nồng độ đơn Ghi lại nồng độ axit xitric tính gam lít đến hai chữ số thập phân Độ chụm Chi tiết phép thử liên phòng thử nghiệm độ chụm phương pháp đưa Phụ lục A Các giá trị thu từ phép thử liên phòng khơng áp dụng cho dải nồng độ chất khác với dải nồng độ chất nêu Phụ lục A 9.1 Độ lặp lại Chênh lệch tuyệt đối hai kết thử riêng rẽ thu sử dụng phương pháp, tiến hành vật liệu thử giống hệt nhau, người thực hiện, sử dụng thiết bị, khoảng thời gian ngắn, không % trường hợp vượt giá trị độ lặp lại r Giá trị độ lặp lại: r = 0,095 + 0,025 đó: g/l hàm lượng đo được, tính theo giá trị trung bình hai kết thử riêng rẽ 9.2 Độ tái lập Chênh lệch tuyệt đối hai kết thử riêng rẽ thu sử dụng phương pháp, tiến hành thử vật liệu giống thử hệt nhau, phòng thử nghiệm khác nhau, người khác thực hiện, sử dụng thiết bị khác nhau, không % trường hợp vượt giá trị độ tái lập R Giá trị độ tái lập: R = 0,130 + 0,054 đó: g/l hàm lượng đo được, tính theo giá trị trung bình hai kết thử riêng rẽ 10 Báo cáo thử nghiệm Báo cáo thử nghiệm phải ghi rõ: - thông tin cần thiết để nhận biết đầy đủ mẫu thử (loại mẫu, nguồn gốc mẫu, tên gọi); - viện dẫn tiêu chuẩn này; - ngày phương pháp lấy mẫu, biết; - ngày nhận mẫu; - ngày thử nghiệm; - kết thử đơn vị biểu thị kết quả; - độ lặp lại, kiểm tra; - điểm ngoại lệ quan sát thực phép thử; - thao tác không quy định phương pháp tùy chọn mà ảnh hưởng đến kết PHỤ LỤC A (Tham khảo) Kết thống kê phép thử liên phòng thử nghiệm Theo ISO 5725:1986, thông số sau xác định phép thử liên phòng thử nghiệm (xem Thư mục tài liệu tham khảo) Phép thử tiến hành Viện Max von Pettenkofer (Max von Pettenkofer Institute) thuộc Cơ quan Y tế liên bang (Federal Health Office), Food Chemistry Department, Berlin, BRD Năm tiến hành thử nghiệm: 1983 Số lượng phòng thử nghiệm tham gia: 20 Số lượng mẫu thử: Bảng A.1 Mẫu A B C D 16 17 15 16 80 87 75 81 2,56 5,74 8,58 10,15 0,0528 0,092 0,0956 0,1267 Độ lệch chuẩn tương đối lặp lại (RSDr) (%) 2,06 1,61 1,11 1,25 Giới hạn lặp lại (r) (g/l) 0,15 0,26 0,27 0,35 0,0933 0,151 0,2325 0,2214 Độ lệch chuẩn tương đối tái lập (RSDR) (%) 3,64 2,63 2,71 2,18 Giới hạn tái lập (R) (g/l) 0,26 0,42 0,65 0,62 Số lượng phòng thử nghiệm lại sau trừ ngoại lệ Số lượng ngoại lệ (phòng thử nghiệm) Số lượng kết chấp nhận Giá trị trung bình ( x ) (g/l) Độ lệch chuẩn lặp lại (sr) (g/l) Độ lệch chuẩn tái lập (sR) (g/l) CHÚ THÍCH: Giữa r, R x có mối quan hệ tuyến tính Tên mẫu: A - nectar mơ, B - dung dịch chuẩn, C - nectar nho Hy Lạp đen, D - nước cam THƯ MỤC TÀI LIỆU THAM KHẢO [1] Untersuchung von Lebensmitteln: Bestimmung von Citronensäure (Citrat) in Fruchtsäften: L31.00-14, 1984-11 [Food Analysis ; Determination of citric acid (citrate) in fruit juices: L31.00-14, 1984-11] - In: Amtliche Sammlung von Untersuchungsverfahren nach § 35 LMBG: Vetfahren zur Probenahme und Untersuchung von Lebensmitteln, Thbakerzeugnissen, kosmetischen Mitteln und Bedarfsffegenständen/ Bundesgesundheitsamt [In: Collection of official methods under article 35 of the German Federal Foods Act: Methods of sampling and analysis of foods, tobacco products, cosmetics and commodity goods/ Federal Health Office] - Loseblattausgabe, Stand 31.12.1991, Bd.l.[Loose-leaf edition, as of 1991-12-31, Vol.1.] - Berlin, Köln: Beuth Verlag GmbH [2] Determination of citric acid: Enzymatic method: No 22, 1985 - In: Analyses[Collection]/International Federation of Fruit Juice Producers - Loose-leaf edition, as of 1989 - Zug: Swiss Fruit Union ... dinatri -nicotinamit-adenin-dinucleotit dạng khử ( -NADH-Na2) 60 mg natri hydrocacbonat (NaHCO3) ml nước Dung dịch pha bền bốn tuần + oC 5.4 Huyền phù enzym MDL/LDH Trộn 0,1 ml malat dehydrogenaza,... rõ: - thông tin cần thiết để nhận biết đầy đủ mẫu thử (loại mẫu, nguồn gốc mẫu, tên gọi); - viện dẫn tiêu chuẩn này; - ngày phương pháp lấy mẫu, biết; - ngày nhận mẫu; - ngày thử nghiệm; - kết... lệch chuẩn lặp lại (sr) (g/l) Độ lệch chuẩn tái lập (sR) (g/l) CHÚ THÍCH: Giữa r, R x có mối quan hệ tuyến tính Tên mẫu: A - nectar mơ, B - dung dịch chuẩn, C - nectar nho Hy Lạp en, D - nước

Ngày đăng: 07/02/2020, 19:16

Tài liệu cùng người dùng

  • Đang cập nhật ...

Tài liệu liên quan