Đang tải... (xem toàn văn)
Tiêu chuẩn Quốc gia TCVN 10091:2013 quy định phương pháp xác định sự truyền nhiễm các chất kháng khuẩn từ các vật liệu giấy và cáctông và các chi tiết tiếp xúc với thực phẩm. Mời các bạn cùng tham khảo nội dung chi tiết.
TIÊU CHUẨN QUỐC GIA TCVN 10091:2013 EN 1104:2005 GIẤY VÀ CÁCTÔNG TIẾP XÚC VỚI THỰC PHẨM - XÁC ĐỊNH SỰ TRUYỀN NHIỄM CÁC CHẤT KHÁNG KHUẨN Paper and board intended to come into contact with foodstuffs - Determination of the transfer of antimicrobial constituents Lời nói đầu TCVN 10091:2013 hồn toàn tương đương với EN 1104:2005 TCVN 10091:2013 Ban kỹ thuật Tiêu chuẩn quốc gia TCVN/TC6 Giấy sản phẩm giấy biên soạn, Tổng cục Tiêu chuẩn Đo lường Chất lượng đề nghị, Bộ Khoa học Công nghệ cơng bố GIẤY VÀ CÁCTƠNG TIẾP XÚC VỚI THỰC PHẨM - XÁC ĐỊNH SỰ TRUYỀN NHIỄM CÁC CHẤT KHÁNG KHUẨN Paper and board intended to come into contact with foodstuffs - Determination of the transfer of antimicrobial constituents Phạm vi áp dụng Tiêu chuẩn quy định phương pháp xác định truyền nhiễm chất kháng khuẩn từ vật liệu giấy cáctông chi tiết tiếp xúc với thực phẩm Tài liệu viện dẫn Các tài liệu viện dẫn sau cần thiết cho việc áp dụng tiêu chuẩn Đối với tài liệu viện dẫn ghi năm cơng bố áp dụng nêu Đối với tài liệu viện dẫn không ghi năm cơng bố áp dụng phiên nhất, bao gồm sửa đổi TCVN 3649 (ISO 186), Giấy cáctông - Lấy mẫu để xác định chất lượng trung bình Thuật ngữ định nghĩa Trong tiêu chuẩn áp dụng thuật ngữ định nghĩa sau 3.1 Vùng ức chế (inhibition zone) Vùng tạo xung quanh mẫu thử, mẫu thử đặt môi trường dinh dưỡng cấy sinh vật thử nghiệm chọn lọc trước, mà giải phóng chất kháng khuẩn có khả hòa tan nước Nguyên tắc Trộn môi trường dinh dưỡng chuẩn bị với chất cấy thích hợp đổ vào đĩa Petri Mẫu thử đặt môi trường dinh dưỡng bán cứng sau ủ Sau trình ủ kết thúc, xuất vùng ức chế dấu hiệu giải phóng chất kháng khuẩn Phép thử tiến hành với vi khuẩn Bacillus subtilis nấm mốc Aspergillus niger CHÚ THÍCH: Kết dựa quan sát mắt thường Thiết bị, dụng cụ 5.1 Khuôn rập sắt d = 10 mm đến 15 mm tiệt trùng 5.2 Dụng cụ ép Loại phù hợp để ép mẫu thử đặt đĩa thạch (ví dụ, Drygalski spatula) 5.3 Dụng cụ đo diện tích Để xác định đường kính vùng ức chế CHÚ THÍCH: Việc đo đường kính vùng ức chế khơng phải bắt buộc 5.4 Các dụng cụ thí nghiệm vi sinh thông thường Thuốc thử 6.1 Nước Nước cất nước tinh lọc phương pháp trao đổi ion đun sôi (nước khử ion) 6.2 Chất làm ẩm khơng ion Ví dụ polyoxyethylenesorbitane monooleate 6.3 Môi trường dinh dưỡng dùng cho Bacillus subtilis Công thức đặc trưng môi trường dinh dưỡng là: - Chất chiết thịt bò: 3,0 g - Tryptone (peptone casein): 5,0 g - Natri clorua, tinh khiết: 5,0 g - Agar-agar: 12,0 g - Nước: 1000,0 ml CHÚ THÍCH: Bổ sung 10 mg/l MnSO4 vào mơi trường dinh dưỡng cho Bacillus subtilis (6.7.1) hỗ trợ hình thành bào tử Chuẩn bị môi trường dinh dưỡng sau: Hòa tan thành phần nói mơi trường dinh dưỡng chuẩn bị sẵn, có thành phần tương tự vào nước cách đun sôi Mơi trường dinh dưỡng chuẩn bị sẵn có pH (7,2 ± 0,2) nhiệt độ 45 °C Điều chỉnh pH môi trường dinh dưỡng đến (7,2 ± 0,2) yêu cầu dung dịch NaOH có nồng độ xấp xỉ 0,01 M HCI có nồng độ xấp xỉ 0,01 M Chia môi trường dinh dưỡng thành hai phần Pha chế phần 300,0 ml vào bình chứa mơi trường dinh dưỡng bình dung tích 600,0 ml, ví dụ bình Roux đậy bình nút, ví dụ nút Kapsenberg Sử dụng phần lại để chuẩn bị mơi trường chủng làm việc vào ống nghiệm Pha chế phần 10,0 ml vào 15 đến 20 ống nghiệm đậy kín lại nút, ví dụ nút xenluylo Tiệt trùng bình ống nghiệm 15 nhiệt độ (121 ± 1) °C Sau tiệt trùng, đặt ống nghiệm vị trí cho mơi trường dinh dưỡng đơng lại có bề mặt nghiêng Bảo quản bình ống nghiệm nhiệt độ từ °C đến °C thời gian không 14 ngày Làm nguội bình chứa mơi trường dinh dưỡng đến nhiệt độ xấp xỉ 45 °C để chuẩn bị huyền phù cấy cho vi khuẩn Bacillus subtilis (6.7) đơng lại Làm nguội bình đến đơng lại 6.4 Môi trường dinh dưỡng nấm mốc Sabouraud cải biến dùng cho Aspergillus niger Công thức đặc trưng môi trường dinh dưỡng nấm mốc Sabouraud cải biến là: - tryptone (peptone casein): 5,0 g - Peptone (peptone thịt): 5,0 g - D (+) glucose C6H12O6.H2O: 10,0 g - maltose C12H22O11.H2O: 10,0 g - agar-agar: từ 10,0 g đến 15,0 g - nước: 1000,0 ml Chuẩn bị môi trường dinh dưỡng nấm mốc Sabouraud cải biến sau: Hòa tan thành phần nói mơi trường dinh dưỡng chuẩn bị sẵn, có thành phần tương tự vào nước cách đun sôi Môi trường dinh dưỡng chuẩn bị sẵn có pH (5,4 ± 0,1) nhiệt độ 45 °C Điều chỉnh pH môi trường dinh dưỡng đến (5,4 ± 0,1) yêu cầu dung dịch NaOH có nồng độ xấp xỉ 0,01 M HCI có nồng độ xấp xỉ 0,01 M Tiếp tục tiến hành pha chế môi trường dinh dưỡng vào bình mơi trường dinh dưỡng bình bình Roux ống nghiệm, sau tiệt trùng làm nguội mô tả 6.3 6.5 Môi trường dinh dưỡng cho thử nghiệm ức chế với Bacillus subtilis Thành phần môi trường dinh dưỡng cho thử nghiệm ức chế với Bacillus subtilis sau: - Tryptone (peptone casein): 3,45 g; - Peptone (peptone thịt): 3,45 g; - Natri clorua tinh khiết: 5,1 g; - agar-agar: 13,0 g; - Nước: 1000,0 ml Chuẩn bị môi trường dinh dưỡng sau: Hòa tan thành phần nói mơi trường dinh dưỡng chuẩn bị sẵn, có thành phần tương tự vào nước cách đun sôi Môi trường dinh dưỡng chuẩn bị sẵn có pH (6,0 ± 0,1) nhiệt độ 45 °C Điều chỉnh pH môi trường dinh dưỡng đến (6,0 ± 0,1) yêu cầu dung dịch NaOH có nồng độ xấp xỉ 0,01 M HCI có nồng độ xấp xỉ 0,01 M Pha chế phần vào bình mơi trường dinh dưỡng ống nghiệm đậy nút, ví dụ nút Kapsenberg tiệt trùng 15 (121 ± 1) °C Làm nguội bình xuống 60 °C để chuẩn bị môi trường cấy (8.2.2) đông lại 6.6 Dung dịch muối peptone Thành phần dung dịch muối peptone sau: - Peptone (peptone thịt): 1,0 g; - Natri clorua tinh khiết: 8,5 g - Nước: 1000,0 ml Chuẩn bị dung dịch muối peptone sau: Hòa tan thành phần nói vào nước có pH từ đến Pha chế thể tích dung dịch vào ba bình, đậy nút, ví dụ nút Kaspensberg tiệt trùng 15 nhiệt độ (121 ± 1) °C Dung dịch phải sử dụng vòng ngày bảo quản nhiệt độ phòng vòng 14 ngày bảo quản nhiệt độ từ °C đến °C 6.7 Các vi sinh vật thử nghiệm 6.7.1 Quy định chung Các vi sinh vật sau sử dụng: Bacillus subtilis DSM 347 (ATCC 6633) Aspergillus niger DSM 1957 (ATCC 6275) chủng tương ứng khác Vì chủng khác có độ nhạy khác nhau, nên phải có kiểm tra so sánh sử dụng chủng khác với chủng ATCC 6633 ATCC 6275 nêu Các chủng làm việc Bacillus subtilis thu cách cấy vào ống nghiệm (6.3) ủ ngày nhiệt độ 30 °C Sau trình ủ ống nghiệm bảo quản nhiệt độ từ °C đến °C Các chủng làm việc Aspergillus niger thu cách cấy vào ống nghiệm (6.4) ủ ngày nhiệt độ 25 °C Sau trình ủ ống nghiệm bảo quản nhiệt độ từ °C đến °C 6.7.2 Chuẩn bị huyền phù bào tử cấy Bacillus subtilis Cho phần khoảng 15,0 ml mơi trường dinh dưỡng hóa lỏng (6.3) làm nguội đến nhiệt độ xấp xỉ 45 °C vào 10 đĩa Petri (d = 90 mm) tiệt trùng đông lại Môi trường dinh dưỡng bình (6.3) sẵn sàng cho trình cấy Rửa khuẩn lạc khỏi mười ống nghiệm có chứa chủng làm việc Bacillus subtilis (6.7.1) 2,0 ml đến 3,0 ml dung dịch muối peptone tiệt trùng (6.6) Ria cấy dịch rửa lên bề mặt mười đĩa petri (mỗi đĩa cấy từ ống nghiệm riêng) toàn dịch rửa bề mặt bình Roux Ủ ngày nhiệt độ 30 °C Rửa khuẩn lạc khỏi đĩa petri 3,0 ml dung dịch muối peptone (6.6) khỏi bình 30,0 ml dung dịch muối peptone (6.6) Cho dung dịch huyền phù vào bình tiệt trùng phễu tiệt trùng đậy bình nắp tiệt trùng Làm nóng dung dịch, lắc bếp cách thủy nhiệt độ 85 °C 30 để làm chết tế bào sinh dưỡng Sau làm nóng, chuyển huyền phù bào tử vào bình ly tâm tiệt trùng, dung tích 40,0 ml ly tâm 10 10000 g Loại bỏ phần chất lỏng Rửa phần cặn lại 30,0 ml dung dịch muối peptone (6.6) ly tâm lại Rửa lại lần Tạo huyền phù bào tử 20,0 ml dung dịch muối peptone (6.6) Huyền phù bào tử bảo quản không tuần nhiệt độ từ °C đến °C CHÚ THÍCH: Huyền phù bào tử có sẵn dạng thương phẩm 6.7.3 Chuẩn bị huyền phù bào tử cấy Aspergillus niger Cho phần khoảng 15,0 ml môi trường Sabouraud cải biến hóa lỏng (6.4) làm nguội đến nhiệt độ xấp xỉ 45 °C vào đĩa Petri (d= 90 mm), tiệt trùng đông lại Mơi trường dinh dưỡng bình (6.4) sẵn sàng cho trình cấy Cấy chủng Aspergillus niger từ chủng làm việc (6.7.1) vòng cấy vào đĩa Petri Mỗi đĩa Petri cấy từ ống nghiệm riêng Bình cấy từ năm ống nghiệm Ủ từ đến 10 ngày nhiệt độ 25 °C Chuyển bào tử vòng cấy tròn làm ẩm dung dịch muối peptone (6.6) vào ống nghiệm tiệt trùng có chứa 10,0 ml dung dịch muối peptone (6.6) trộn với 0,01 ml chất làm ẩm khơng ion (6.2) đậy kín nút tiệt trùng Lắc kỹ huyền phù trước sử dụng Huyền phù cấy bảo quản không tuần nhiệt độ từ °C đến 8°C 6.7.4 Mật độ bào tử cho phép thử ức chế Pha loãng huyền phù bào tử cho mật độ bào tử môi trường agar là: - Bacillus subtilis: 104 bào tử mililít agar thử; - Aspergillus niger: 105 bào tử mililít agar thử Xác định mật độ bào tử huyền phù cấy cho Bacillus subtilis (6.7.2) phương pháp đếm đĩa thông thường môi trường dinh dưỡng (6.3) Xác định mật độ bào tử huyền phù cấy cho Aspergillus niger (6.7.3) phương pháp đếm đĩa thông thường môi trường dinh dưỡng (6.4) 6.8 Mẫu đối chứng dương 6.8.1 Penicillin, G 0,03 đơn vị Cố sẵn dạng thương phẩm 6.8.2 Dung dịch isothiazolinon Hỗn hợp 5-chloro-2-methyl-4-isothiazolin-3-on 2-methyl-4-isothiazolin-3-on với nồng độ chất hoạt động 2,5 % (pha loãng theo tỷ lệ 1:100) CHÚ THÍCH: Dung dịch có sẵn dạng thương phẩm Lấy mẫu chuẩn bị mẫu thử Mẫu lấy theo TCVN 3649 (ISO 186) Chỉ cầm vào cạnh mẫu Mẫu sau lấy phải cho vào bình đựng tiệt trùng bọc mẫu màng nhơm Lấy mười mẫu cho đơn vị sản phẩm Từ mẫu dập 20 mẫu thử hình tròn khuôn dập tiệt trùng (5.1) với loại vi sinh vật thử nghiệm Chuyển mẫu thử vào bình tiệt trùng Phải dùng kẹp cặp tiệt trùng để lấy mẫu thử Cách tiến hành 8.1 Tiệt trùng Tiệt trùng kẹp cặp, khuôn dập sắt, bình ly tâm (được gói màng nhơm), bình tam giác, ống nghiệm nút xenluylo bình nồi hấp nhiệt độ (121 ± 1) °C 15 Tiệt trùng pipet thủy tinh hộp pipet thiết bị tiệt trùng khí nóng h nhiệt độ (180 ± 1)°C 8.2 Chuẩn bị đĩa phẳng 8.2.1 Quy định chung Chuẩn bị ba đĩa Petri cho phép thử 8.2.2 Bacillus subtilis Hóa lỏng môi trường agar thử tiệt trùng (6.5) Làm nguội đến nhiệt độ thấp 60 °C Bổ sung lượng huyền phù bào tử cấy (6.7.2) cho đạt mật độ 104 bào tử mililít mơi trường agar Phân bố huyền phù cách lắc nhẹ nhàng Cho vào đĩa Petri (d = 90 mm) tiệt trùng lượng xác 15,0 ml môi trường Sử dụng kẹp tiệt trùng trải ba mẫu thử lên mơi trường dinh dưỡng bán rắn Ép nhẹ mẫu thử xuống dụng cụ tiệt trùng thích hợp (5.2), bảo đảm khơng tạo thành lớp đệm khí Mặt tiếp xúc với thực phẩm phải đặt quay xuống Hoặc phải thử hai mặt Với phép phân tích, chuẩn bị đĩa agar môi trường đối chứng âm (mẫu trắng) mẫu thử Chuẩn bị mẫu đối chứng dương Penicilin G 0,03 đơn vị (6.8.1) thấm vào mẫu giấy nhỏ (có sẵn dạng thương phẩm) 8.2.3 Aspergilus niger Chuẩn bị đĩa mô tả 8.2.2, trường hợp với môi trường dinh dưỡng Sabouraud cải biến (6.4) Huyền phù sử dụng agar thử huyền phù cấy cho Aspergillus niger (6.7.3) Mật độ bào tử 105 cho mililít agar thử Với phép phân tích, chuẩn bị đĩa agar môi trường đối chứng âm (mẫu trắng) khơng có mẫu thử Chuẩn bị mẫu đối chứng dương Dung dịch isothiazolinon (hỗn hợp 5-chloro-2-methyl-4isothiazolin-3-on 2-methyl-4-isothiazolin-3-on) (6.8.2) với nồng độ chất hoạt động 2,5 % Dung dịch pha loãng với tỷ lệ 1:100 Từ dung dịch pha loãng dùng pilet lấy 50 l cho vào miếng giấy lọc nhỏ (d = 1,2 cm), mà sử dụng mẫu đối chứng 8.3 Quá trình ủ Các đĩa Petri chuẩn bị theo 8.2.2 8.2.3 bảo quản h tủ lạnh nhiệt độ từ °C đến °C để tạo thuận lợi cho trình khuếch tán sơ Ủ đĩa Petri chuẩn bị theo 8.2.2 8.2.3 nhiệt độ 30 °C 25 °C tương ứng Đặt đĩa vào tủ lạnh thiết bị ủ với nắp đậy đĩa Petri bên để tránh nước ngưng tụ nhỏ giọt lên mẫu thử Đánh giá Đánh giá kết thử nghiệm với vi sinh vật nấm sau ngày ngày ủ tương ứng Đồng thời đánh giá mẫu đối chứng dương CHÚ THÍCH 1: Đánh giá sơ đĩa Petri sau ngày ngày cần thiết Mẫu thử khơng có dấu hiệu diện tích vùng ức chế cho không chứa chất kháng khuẩn hòa tan nước Có dấu hiệu vùng ức chế không thấy phát triển vi sinh vật có dấu hiệu giảm phát triển (nhỏ khoảng 20 %) so với diện tích xung quanh Mẫu thử có vùng ức chế (đối chứng dương) đánh giá Đường kính hình tròn mẫu thử phải đưa CHÚ THÍCH 2: Mẫu thử có phát triển mạnh vi sinh vật đánh giá khơng có vùng ức chế CHÚ THÍCH 3: Trong trường hợp quan tâm, khuyến cáo phải đo vùng ức chế bên mẫu thử kính lúp thước đo, kết đo đường kính mẫu thử CHÚ THÍCH 4: Nếu mẫu đối chứng âm môi trường dinh dưỡng agar thể khơng có phát triển vi sinh vật lặp lại phép thử với huyền phù cấy Nếu mẫu đối chứng dương cho thấy có phát triển vi sinh vật phải lặp lại phép thử 10 Báo cáo thử nghiệm Báo cáo thử nghiệm phải bao gồm thông tin sau: a) Viện dẫn tiêu chuẩn này; b) Ngày địa điểm thử nghiệm; c) Nhận dạng vật liệu thử nghiệm bao gồm đường kính mẫu thử; d) Có truyền chất kháng khuẩn khơng có truyền chất kháng khuẩn; e) Bất kỳ sai khác so với tiêu chuẩn này; f) Tất sai khác so với quy định tiêu chuẩn mà ảnh hưởng đến kết ... kháng khuẩn khơng có truyền chất kháng khuẩn; e) Bất kỳ sai khác so với tiêu chuẩn này; f) Tất sai khác so với quy định tiêu chuẩn mà ảnh hưởng đến kết ... ml Chuẩn bị môi trường dinh dưỡng nấm mốc Sabouraud cải biến sau: Hòa tan thành phần nói mơi trường dinh dưỡng chuẩn bị sẵn, có thành phần tương tự vào nước cách đun sôi Môi trường dinh dưỡng chuẩn. .. Nước: 1000,0 ml Chuẩn bị mơi trường dinh dưỡng sau: Hòa tan thành phần nói mơi trường dinh dưỡng chuẩn bị sẵn, có thành phần tương tự vào nước cách đun sôi Môi trường dinh dưỡng chuẩn bị sẵn có