Đang tải... (xem toàn văn)
Đề tài nghiên cứu được tiến hành nhằm đánh giá độ tin cậy và hiệu quả của phương pháp đếm tế bào trong các loại dịch cơ thể bằng máy phân tích huyết học để có thể triển khai thực hiện thường quy, giúp các Bác sĩ lâm sàng có kết quả nhanh và khách quan hơn.
Nghiên cứu Y học Y Học TP Hồ Chí Minh * Tập 15 * Phụ Số * 2011 ỨNG DỤNG MÁY PHÂN TÍCH HUYẾT HỌC TỰ ĐỘNG SYSMEX 4000i TRONG XÉT NGHIỆM TẾ BÀO CÁC DỊCH CƠ THỂ Nguyễn Trường Sơn* TÓM TẮT Đặt vấn đề: Xét nghiệm khảo sát tế bào loại dịch thể công cụ giúp cho Bác sĩ lâm sàng định bệnh ứng dụng từ lâu Phương pháp cổ điển (nhuộm lam đọc kính hiển vi) xét nghiệm thường quy phòng xét nghiệm huyết học, thời gian thực chậm (15- 30 phút), kết đọc phụ thuộc chủ quan người đọc kết quả, đơi khơng đáp ứng cơng tác điều trị Hiện nay, với máy phân tích huyết học tự động (máy Sysmex 4000i) có chức phân tích tế bào dịch thể, cho kết nhanh (khoảng phút), hoàn toàn khách quan, giúp việc chẩn đốn điều trị tốt Vì vậy, tiến hành nghiên cứu đánh giá độ tin cậy hiệu phương pháp đếm tế bào loại dịch thể máy phân tích huyết học để triển khai thực thường quy, giúp Bác sĩ lâm sàng có kết nhanh khách quan Mục tiêu: So sánh kết phân tích dịch phương pháp cổ điển phương pháp chạy máy Sysmex 4000i Phương pháp: Có 120 mẫu dịch lấy từ 120 bệnh nhân, mẫu máu đếm phương pháp cổ điển phương pháp Máy 4000i, tuân thủ nghiêm ngặc quy trình xét nghiệm kết sử lý phương pháp BlandAltman Kết quả: Hệ số tin cậy kết đếm hồng cầu 0,97 số lượng biến thiên đo lường 12% (KTC95%) Hệ số tin cậy kết đo Bạch Cầu 0,988 biến thiên 12,5% Hệ số tin cậy đo bạch cầu đơn nhân 0,81, dao động khoảng 11% Và hệ số tin cậy kết đo bạch cầu đa nhân 0,80, dao dao động khảng 12% Dịch màng bụng 32 mẫu chiếm tỉ lệ 27%, Dịch màng phổi 17 mẫu chiếm tỉ lệ 14%, Dịch màng tim mẫu chiếm tỉ lệ 1%, Dịch não tủy 53 mẫu chiếm tỉ lệ 44%, Sau phúc mạc mẫu chiếm tỉ lệ 1%, Dịch thẩm phân 16 mẫu chiếm tỉ lệ 13% Kết luận: Dùng phương pháp đọc số lượng tế bào số loại dịch máy Sysmex 4000i, thuận lợi phương pháp Cổ điển chẩn đoán điều trị bệnh Bệnh viện Chợ Rẫy Từ khóa: Hệ số tin cậy R, bạch cầu, hồng cầu, đơn nhân, đa nhân, máy 4000i ABSTRACT APPLICATIONS OF AUTOMATED HEMATOLOGY ANALYZER SYSMEX 4000i IN CELL TESTS OF BODY FLUIDS Nguyen Truong Son * Y Hoc TP Ho Chi Minh * Vol 15 - Supplement of No – 2011: 26 - 33 Background: Cells survey test in various body fluids was used as a tool for clinicians to define disease for a long time Classical method (stain body fluid smear and read by microscope) is a common test in laboratory but it takes about 15-30 minute And the result depend on sudjective thinking of hematology technician So sometime it don’t help in treatment Today, automated hematology machine (Sysmex 4000i) can analyse of body fluid with faster result (approximate minute) and completely objective So the diagnostic and treatment are better Thus, we study to value the reliability and effect of this method to use commonly The clinician’ll receive the result more quickly and objective 26 Hội Nghị Khoa Học Kỹ Thuật BV Chợ Rẫy 2011 Y Học TP Hồ Chí Minh * Tập 15 * Phụ Số * 2011 Nghiên cứu Y học Objectives: Comparison of two analytical results by means of classical translationand methods run the Sysmex 4000i * BV Chợ Rẫy; Tác giả liên lạc: Nguyễn Trường Sơn ĐT: 38554137 Email: truongson@choray.vn Methods: There are 120 samples taken from 120 patients with epidemic, each blood sample were counted by means of classical methods and machines 4000i Strict compliance testing process and amazing results are handled by methods BlandAltman Results: The reliability coefficient of red blood count results is 0.97 and the amount of variability of measurements was 12% (CI 95%) Coefficient of reliability of measurement results is 0.988 and the White Bridge of variation was 12.5% Reliability coefficient of mononuclear leukocytes was measured 0.81, fluctuating around 11% And the coefficient of reliability of measurement results is multi-WBC 0.80, range 12% variation in the resistance Translation 32 peritoneal samples accounted for 27% rate, 17 pleural fluid samples accounted for 14% rate, a sample service pericardium proportion of 1%, 53 CSF samples accounted for 44% rate, after accounting for sample peritoneal 1% rate, dialysis services accounted for 16 sample rate of 13% Conclusion: Using a method to read the number of cells in certain types of machine translation using Sysmex 4000i convenient than classical methods in the diagnosis and treatment of patients at Cho Ray Hospital Key words: Reliability coefficient (R), white blood cells, red blood cells, single-multi-kernel, machines 4000i ĐẶT VẤN ĐỀ Mục tiêu cụ thể Xét nghiệm khảo sát tế bào loại dịch thể công cụ giúp cho Bác sĩ lâm sàng định bệnh ứng dụng từ lâu Phương pháp cổ điển (nhuộm lam đọc kính hiển vi) xét nghiệm thường quy phòng xét nghiệm huyết học, thời gian thực chậm (15- 30 phút), kết đọc phụ thuộc chủ quan người đọc kết quả, đơi khơng đáp ứng cơng tác điều trị Hiện nay, với máy phân tích huyết học tự động (máy Sysmex 4000i) có chức phân tích tế bào dịch thể, cho kết nhanh (khoảng phút), hồn tồn khách quan, giúp việc chẩn đốn điều trị tốt Vì vậy, chúng tơi tiến hành nghiên cứu đánh giá độ tin cậy hiệu phương pháp đếm tế bào loại dịch thể máy phân tích huyết học để triển khai thực thường quy, giúp Bác sĩ lâm sàng có kết nhanh khách quan Xác định tuổi, giới tính, loại dịch thể bệnh nhân đến khám điều trị bệnh viện Chợ Rẫy Mục tiêu tổng quát Xác định hệ số tin cậy kết đo bạch cầu, hồng cầu, tỉ lệ % bạch cầu đơn nhân, tỉ lệ % bạch cầu đa nhân dịch phương pháp cổ điển phương pháp chạy máy Sysmex 4000i ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP Dân số mục tiêu: Bệnh nhân chọc dịch nhằm chẩn đoán bệnh từ 24/4/2010 đến ngày 24/6/2010 Bệnh viện Chợ Rẫy Đối tượng: Tất mẫu dịch nảo tủy (DNT), dịch màng bụng (DMB), dịch màng phổi (DMP), dịch thẩm phân (DTP) đạt chuẩn gửi đến phòng xét nghiệm huyết học từ ngày 24/4/2010 đến ngày 24/6/2010 Phương pháp: Cắt ngang mơ tả Mẫu Nghiên cứu: Có 120 mẫu dịch lấy từ 120 bệnh nhân So sánh kết phân tích dịch phương pháp cổ điển phương pháp chạy máy Sysmex 4000i Hội Nghị Khoa Học Kỹ Thuật BV Chợ Rẫy 2011 Tiêu chí chọn mẫu: Tiêu chí đưa vào: 27 Nghiên cứu Y học Y Học TP Hồ Chí Minh * Tập 15 * Phụ Số * 2011 - Dịch phải chứa chai vô trùng chai EDTA Chuẩn bị máy theo quy trình kiểm chuẩn labo - Thể tích: > 1ml Đưa mẫu dịch vào chạy - Không đông Ghi nhận kết - Không để 1h Tiêu chuẩn loại trừ: - Các mẫu dịch không đạt chuẩn Phương pháp tiến hành Lấy mẫu >1ml Bước 1: Nhận xét đại thể: màu sắc độ đục mẫu dịch Bước 2: Lắc chia mẫu dịch làm phần lọ chạy máy Sysmex 4000i lọ phân tích theo phương pháp cổ điển Phương pháp cổ điển: lắc chia mẫu dịch làm phần: đếm tươi bách phân tế bào Đếm tươi Nhỏ 1-2 giọt Xanh Methylen vào mẫu dịch Chuẩn bị buồng đếm Neubauer Lắc dùng pipette hút dịch nhỏ vào buồng đếm Neubauer Để yên phút Đếm tổng tế bào ô lớn buồng đếm kính hiển vi Phương pháp tốn thống kê: Xác định hệ số tin cậy phương pháp sử dụng máy Sysmex 4000i phương pháp cổ điển đo hồng cầu, bạch cầu mẫu nghiên cứu phương pháp BlandAltman(1) Phần mềm sử dụng R 2.12.1, Packages (ResearchMethods, Hmisc, epicalc, psych) Y đức Các bệnh nhân chọc dịch định bác sĩ điều trị Bệnh nhân đồng ý chọc dịch ký cam kết vào hồ sơ sau giải thích bác sĩ điều trị Bệnh nhân quyền từ chối với định chọc dịch, theo dõi điều trị theo phác đồ Bệnh nhân quyền thông tin kết xét nghiệm, tư vấn việc điều trị cần Kết nghiên cứu nhằm mục đích chẩn đốn điều trị cho bệnh nhân xác Thơng tin bệnh nhân giữ bí mật hồn tồn phục vụ mục tiêu nghiên cứu điều trị KẾT QUẢ Bảng 1: Đặc tính mẫu nghiên cứu Tính kết quả: Tế bào/ mm3= số tế bào đếm ô * 10/9 Phân loại tế bào: Ly tâm mẫu dịch tốc độ 2000-3000 vòng/1phút/10phút Đổ dịch phía trên, lấy cặn làm tiêu bản, để khô Nhuộm phủ Giemsa pha với tỉ lệ 1/10 Wright phủ Để vòng phút, rửa nước Phủ lớp dầu soi phân loại tế bào kính hiển vi 28 Tuổi (TB, ĐLC) Tần số 68 52 51 55 Tỉ lệ 57% 43% 1% 7% 2% 42% 46% 2% nhỏ tuổi 48,87(18,3) lớn 91 tuổi Trong 120 bệnh nhân có 68 nam chiếm tỉ lệ 57% 52 nữ chiếm tỉ lệ 43% để khô Phương pháp chạy máy Sysmex: Màu sắc dịch Nam Nữ Ánh hồng Màu đỏ Màu hồng Không màu Màu vàng Vàng Cam Màu sắc dịch, chiếm tỉ lệ từ cao đến thấp 55 mẫu dịch màu vàng chiếm tỉ lệ 46%, 51 mẫu không màu chiếm tỉ lệ 42%, mẫu màu đỏ chiếm tỉ lệ 7%, màu vàng cam mẫu chiếm tỉ lệ Hội Nghị Khoa Học Kỹ Thuật BV Chợ Rẫy 2011 Y Học TP Hồ Chí Minh * Tập 15 * Phụ Số * 2011 Nghiên cứu Y học 2%, màu hồng mẫu chiếm tỉ lệ 2%, màu ánh màng phổi 17 mẫu chiếm tỉ lệ 14%, Dịch màng hồng mẫu chiếm tỉ lệ 1% tim mẫu chiếm tỉ lệ 1%, Dịch não tủy 53 mẫu Dịch mẫu nghiên cứu lấy từ Dịch màng bụng 32 mẫu chiếm tỉ lệ 27%, Dịch chiếm tỉ lệ 44%, Sau phúc mạc mẫu chiếm tỉ lệ 1%, Dịch thẩm phân 16 mẫu chiếm tỉ lệ 13% Biểu đồ 1a: Biểu diễn kết đo hồng cầu PP Cổ điền – PP Máy 4000i Biểu đồ 1b: Biểu diễn kết đo hồng cầu PP Cổ điền – PP Máy 4000i Biểu đồ 2a: Biểu diễn kết đo bạch cầu PP Cổ điền – PP Máy 4000i Biểu đồ 2b: Biểu diễn kết đo bạch cầu PP Cổ điền – PP Máy 4000i Hội Nghị Khoa Học Kỹ Thuật BV Chợ Rẫy 2011 29 Nghiên cứu Y học Y Học TP Hồ Chí Minh * Tập 15 * Phụ Số * 2011 Biểu đồ 3a: Biểu diễn kết đo tỉ lệ % bạch cầu đa nhân PP Cổ điền – PP Máy 4000i Biểu đồ 3a: Biểu diễn kết đo tỉ lệ bạch cầu đa nhân PP Cổ điền – PP Máy 4000i Biểu đồ 4a: Biểu diễn kết đo tỉ lệ % bạch cầu đơn nhân PP Cổ điền – PP Máy 4000i Biểu đồ 4b: Biểu diễn kết đo tỉ lệ % bạch cầu đơn nhân PP Cổ điền – PP Máy 4000i Hệ số tin cậy phương pháp đo lường dịch thể người: Bảng Kết giới hạn tương đồng hệ số biến thiên phương pháp xét nghiệm LoA Hồng cầu Bạch cầu 30 SEM wCV wCV R (95%) -7491,403 – 3119,297 6,392 12,52 0,9615 9443,303 -442,731 – 184,438 6,376 12,49 0.9885 558,448 BC Đơn -40,2935 – nhân 31,2819 BC Đa nhân -31,9516 – 41,8383 13,2461 -5,879 -11,52 0,8139 13,7100 5,546 10,87 0,8015 Ghi : LoA= (Giới hạn tương đồng), SEM=(sai số đo lường chuẩn), wCV=(hệ số biến thiên cá thể 68%), wCV95% =(hệ số biến thiên cá thể KTC 95%) R=(hệ số tin cậy hai phương pháp đo lường: Máy 4000i Cổ điển) Hội Nghị Khoa Học Kỹ Thuật BV Chợ Rẫy 2011 Y Học TP Hồ Chí Minh * Tập 15 * Phụ Số * 2011 Quan sát kết từ bảng biểu đồ cho thấy, số giới hạn tương đồng (LoA) kết xét nghiệm Hồng cầu chênh lệch hai lần đo - thấp lần 7491,403 (mm3) cao kết đo lần 9443,303 (mm3), sai số chuẩn 3119,279 (SEM) Dao động 12,52% (KTC 95%) trị số trung bình số lượng Hồng cầu Kết biểu diễn qua biểu đồ theo phương pháp BlandAltman Hệ số tin cậy kết hai phương pháp đo đáng tin cậy R=0,96, Kết biểu diễn qua biểu đồ theo phương pháp BlandAltman (Biểu đồ 5) Bảng Biểu đồ 6, số giới hạn tương đồng (LoA) kết xét nghiệm Bạch Cầu chênh lệch hai phương pháp đo - thấp Máy 4000i phương pháp Cổ Điển -442,731 tế bào/mm3 – 558,448 tế Nghiên cứu Y học bào/mm3 Dao động khoảng 12,52% (KTC 95%) trị số trung bình số lượng tế bào Kết đếm bạch cầu máy Sysmex 4000i hay phương pháp cổ điển đáng tin cậy (Hệ số tin cậy R=0,988) Kết biểu diễn qua biểu đồ theo phương pháp BlandAltman (Biểu đồ 6) Bảng Biểu đồ 7, số giới hạn tương đồng (LoA) kết xét nghiệm tỉ lệ % bạch cầu đơn nhân chênh lệch hai phương pháp đo - thấp Máy Sysmex 4000i phương pháp Cổ Điển -40,2935% 31,2819 % tế bào Dao động khoảng 11,52 (KTC 95%) trị số trung bình số lượng tế bào Hệ số tin cậy cao 0,82 (R=0,82) Kết biểu diễn qua biểu đồ theo phương pháp BlandAltman (Biểu đồ 7) Biều đồ 5: So sánh kết đếm Hồng Cầu phương pháp biểu đồ BlandAltman Hội Nghị Khoa Học Kỹ Thuật BV Chợ Rẫy 2011 31 Nghiên cứu Y học Y Học TP Hồ Chí Minh * Tập 15 * Phụ Số * 2011 Biểu đồ 6: So sánh kết đếm Bạch Cầu phương pháp biểu đồ BlandAltman Biểu đồ : So sánh kết đếm tỉ lệ % bạch cầu đơn nhân phương pháp biểu đồ BlandAltman 32 Hội Nghị Khoa Học Kỹ Thuật BV Chợ Rẫy 2011 Y Học TP Hồ Chí Minh * Tập 15 * Phụ Số * 2011 Bảng biểu đồ 10, số giới hạn tương đồng (LoA) kết xét nghiệm tỉ lệ % bạch cầu đa nhân chênh lệch hai phương pháp đo - thấp Máy Sysmex 4000i phương pháp Cổ Điển -31,9516% tế bào đến - 41,8383% tế bào Khoảng dao động Nghiên cứu Y học phương pháp 10,87% trị số trung bình (KTC95%) Hệ số tin cậy phương pháp đo 0,8(R= 0,8015) Kết biểu diễn qua biểu đồ số 10 theo phương pháp BlandAltman Biểu đồ 8: So sánh kết đếm tỉ lệ % Bạch Cầu đa nhân phương pháp biểu đồ BlandAltman khoảng 11% (KTC95%) Và hệ số tin cậy KẾT LUẬN kết đo bạch cầu đa nhân 0,80, dao động Sử dụng máy Sysmex 4000i đếm hồng cầu, khảng 12% (KTC 95%) bạch cầu, bạch cầu đơn nhân, bạch cầu đa nhân Dùng phương pháp đọc số lượng tế bào dịch so với kết dùng phương pháp Cổ số loại dịch máy Sysmex 4000i, Điển để đo lường số bệnh nhân hiệu phương pháp Cổ điển chẩn Bệnh viện Chợ Rẫy cho thấy hệ số tin cậy đoán điều trị bệnh Bệnh viện Chợ Rẫy phương pháp cao, kết xét nghiệm TÀI LIỆU THAM KHẢO phương pháp Máy Sysmex 4000i Brazdzionyte, J & Macas, A (2007), "Bland-Altman analysis as thay phương pháp Cổ Điển Hệ số tin cậy an alternative approach for statistical evaluation of agreement kết đếm hồng cầu 0,97 số lượng between two methods for measuring hemodynamics during biến thiên đo lường 12% (KTC95%) acute myocardial infarction.", Medicina (Kaunas) 43 : 208-214 de Keijzer M.H., Van der Meer W (2002) Automated counting Hệ số tin cậy kết đo Bạch Cầu 0,988 of nucleated red blood cells in blood samples of newborns Clin biến thiên 12,5% (KTC95%) Hệ số tin Lab Haem 24, 343–345 cậy đo bạch cầu đơn nhân 0,81, dao động Hội Nghị Khoa Học Kỹ Thuật BV Chợ Rẫy 2011 33 ... xét nghiệm huyết học, thời gian thực chậm (15- 30 phút), kết đọc phụ thuộc chủ quan người đọc kết quả, đơi khơng đáp ứng cơng tác điều trị Hiện nay, với máy phân tích huyết học tự động (máy Sysmex. .. machines 4000i ĐẶT VẤN ĐỀ Mục tiêu cụ thể Xét nghiệm khảo sát tế bào loại dịch thể công cụ giúp cho Bác sĩ lâm sàng định bệnh ứng dụng từ lâu Phương pháp cổ điển (nhuộm lam đọc kính hiển vi) xét nghiệm. .. hiệu phương pháp đếm tế bào loại dịch thể máy phân tích huyết học để triển khai thực thường quy, giúp Bác sĩ lâm sàng có kết nhanh khách quan Xác định tuổi, giới tính, loại dịch thể bệnh nhân đến